钝齿棒杆菌CD945丙酮酸羧化酶基因的克隆、序列分析及表达

钝齿棒杆菌CD945丙酮酸羧化酶基因的克隆、序列分析及表
达
王绛;刘阳剑;王宇;张英姿;余志华;丁久元
【期刊名称】《微生物学报》
【年(卷),期】2003(043)002
【摘要】以钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)突变株CD945的基因组为模板,运用PCR方法,扩增出丙酮酸羧化酶的基因片段.核苷酸序列分析结果表明,该
片段全长3657bp,以GTG为起始密码子,编码一个ORF.该ORF的核酸序列与Corynebacterium glutamicum, Mycobacterium smegmatis以及Saccharomyces cerevisiae的丙酮酸羧化酶结构基因相比,相似性分别为98.22%、62.41%和49.61%.由ORF推导出的氨基酸序列与上述属种的丙酮酸羧化酶相比,
同源性分别是99.30%、64.65%和44.04%.经证实对于酶的催化活性至关重要的
一些保守区域,如ATP和生物素的结合位点等,在该氨基酸序列中都存在.将该基因
片段转化钝齿棒杆菌(C. crenatum) CD945,利用CTAB处理细胞和苹果酸脱氢酶
偶联测定相结合的方法,进行酶活力的分析,结果表明,重组子与供体菌相比,丙酮酸羧化酶的活力提高5倍.
【总页数】6页(P214-219)
【作者】王绛;刘阳剑;王宇;张英姿;余志华;丁久元
【作者单位】中国科学院微生物研究所微生物生物技术中心,北京,100080;中国科
学院微生物研究所微生物生物技术中心,北京,100080;中国科学院微生物研究所微
生物生物技术中心,北京,100080;中国科学院微生物研究所微生物生物技术中心,北
京,100080;中国科学院微生物研究所微生物生物技术中心,北京,100080;中国科学院微生物研究所微生物生物技术中心,北京,100080
【正文语种】中文
【中图分类】Q786
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