烟草黑胫病菌培养特性的研究

烟草黑胫病菌培养特性的研究
摘要研究了采自攀西地区的烟草黑胫病菌在不同培养基、不同温度及不同pH值等条件下培养特性。

结果表明：烟草黑胫病菌最适合在燕麦培养基上生长，菌丝生长快。

菌丝在20～36 ℃都能生长，28 ℃生长最佳。

在不同pH值的培养基培养下，菌丝最适合在pH值为5.5的培养基上生长。

Abstract Phytophthora parasitica var.nicotianae was cultivated under the conditions of different cultural media，pH value and temperature，then observed its growth status and morphological characteristics.The results showed that oatmeal agar was most suitable for the growth of the strains of P.Nicotianae.The hyphae can grow at 20～36℃，the temperature of 28 ℃and the pH value of 5.5 were the best for the growth of the strains of P.Nicotianae.
Key words Phytophthora parasitica var.nicotianae；cultural characteristics；temperature
烟草黑胫病是世界烟草生产中危害最严重的病害之一，同时也是中国烟草主要病害，中国平均每年因该病给烟草生产造成的损失达1亿元以上[1]。

烟草黑胫病菌可以为害包括烤烟、晾烟、晒烟、香料烟、白肋烟等所有栽培烟草，破坏性极强，大田侵染后常造成烟株成片凋萎死亡，而且烟株一旦发病，往往都是整株死亡。

研究表明，不同地理来源的烟草黑胫病菌的培养性状存在较大差异。

因此，研究烟草黑胫病菌的培养性状对掌握病原菌的生长繁殖规律以及病害的防治具有重要的指导意义。

对烟草黑胫病菌的培养性状，国外都有研究并对相关特性进行了描述记录。

郑小波等[2]曾对其做过一些研究报道。

为此，笔者对攀西地区特殊气候的烟草黑胫病菌的若干培养性状进行了研究，以期进一步了解烟草黑胫病菌的培养特性，为烟草黑胫病菌的相关研究和综合治理提供决策依据。

1 材料与方法
1.1 试验材料
烟草黑胫病菌供试菌株，包括HS、RH、HD菌株，HS采自于西昌黄水，RH采自于攀枝花仁和，HD采自于西昌会东，并由西昌学院植物病理实验室参照王革等[3]的方法分离和保存备用。

供试培养基为燕麦培养基（OA）、马铃薯培养基（PDA）、玉米培养基（CMA）、番茄汁培养基（TJA）和烟草汁培养基（TLA）[4-6]。

1.2 试验方法
1.2.1 不同培养基对烟草黑胫病菌菌丝生长的影响。

将上述5种培养基经121 ℃高压灭菌20 min后，分别倒入无菌培养皿（直径9 cm）中，然后将事先在燕麦培养基上培养5 d后且生长好的几个菌株的菌落用直径为5 mm的灭菌打
孔器打孔后取边缘菌饼，再用接种铲分别接种于5种平板培养基中央，置于28 ℃恒温黑暗条件下培养，各个培养基设3次重复，从第2天起，每天观察测量1次菌落直径并做好记录，直到菌丝长满培养皿为止。

1.2.2 不同温度对烟草黑胫病菌菌丝生长的影响。

将生长最好的菌丝用直径为5 mm的灭菌打孔器在菌落边缘打取菌饼，然后用接种铲分别接种于OA平板中央，每处理设3次重复，分别放于20、24、28、32、36 ℃的恒温黑暗的条件下培养，5 d后测量并记录菌落直径。

1.2.3 不同pH值对烟草黑胫病菌菌丝生长的影响。

将生长良好的菌丝分别接种在pH值为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5的OA平板培养基中央上，置于28 ℃恒温黑暗条件下培养，每处理设3次重复，5 d后测量并记录菌落直径。

2 结果与分析
2.1 不同培养基对烟草黑胫病菌菌丝生长的影响
烟草黑胫病菌培养5 d后菌丝直径试验结果表明，3个菌株在5种不同培养基上生长速度快慢顺序依次是OA培养基、CMA培养基，在TJA培养基、TLA 培养基和PDA培养基上生长较慢。

其中在OA培养基上病菌生长速度最快，而且生长的菌丝最丰厚、浓密（表1）。

2.2 不同温度对烟草黑胫病菌菌丝生长的影响
3个菌株在以下几种不同温度下的菌丝生长速率研究结果表明，当温度为28 ℃时，供试菌株菌丝生长最快；供试烟草黑胫病菌丝在20～36 ℃情况下都能生长，28 ℃生长最佳。

菌株生长以HD菌株长势最好，其次是RH菌株，生长最差的是HS菌株，这说明不同温度对菌丝生长影响差异较大（图1）。

2.3 不同pH值对烟草黑胫病菌菌丝生长的影响
在不同pH值下，菌株培养5 d后菌落平均直径存在显著差异。

从表2可以看出，3个菌株（HS、RH、HD）在pH值为5.0和pH值为7.5的情况下存在显著差异，菌株在pH值为5.5的培养基培养条件下生长明显比在pH值为7.5的培养基培养条件下生长要快，表明烟草黑胫病菌更适合在偏酸性条件下培养且适合生长在pH值为5.5的培养基上。

烟草黑胫病菌菌丝在pH值为5.0～7.5时都能生长，但在pH值5.5时菌丝生长速度较快，当pH值超过5.5时，随着pH值的升高，菌丝的生长速度将逐渐变小，当pH值达到7.5时，菌丝生长缓慢，仅微量生长。

3 结论与讨论
从试验提供的5种供试培养基来看，烟草黑胫病菌在燕麦培养基上生长最好，菌落生长快，马铃薯培养基（PDA）和番茄汁培养基（TJA）上生长最差，说明菌株对培养基的要求存在差异，可能是病菌长期进化致使生理机能在一定程
度上对营养有选择性的结果。

烟草黑胫病菌菌丝在20～36 ℃都能生长，最适生长温度28 ℃，最高生长温度36 ℃；供试3个菌株间生长差异显著，以HD菌株生长最好，RH菌株次之，HS菌株生长最差；此研究结果与马国胜等[7]研究结果基本一致。

在不同pH 值中，烟草黑胫病菌更适合在偏酸性条件下培养且适合生长在pH值为5.5的培养基上，在偏碱性pH值为7.5的培养条件下生长较缓慢，此研究结果与李梅云等[8]人研究结果基本一致。

研究结果初步认为，攀西地区作为全国的老烟区，10年来地球的生态环境、耕作制度和栽培管理等方面的变化没有导致烟草黑胫病菌的培养性状发生较大变异，即烟草黑胫病菌的培养性状是较为稳定的。

4 参考文献
[1] 马志国，高智谋，陈娟.烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技，2003（3）：35-42.
[2] 郑小波，陆家云.烟草疫霉两个变种的划分及疫霉届几个生物学性状的研究[J].南京农业大学学报，1989，12（2）：46-52.
[3] 王革，郑小波，陆家云，等.云南省烟草黑胫病的交配型及分布[J].南京农业大学学报，1997，20（1）：31-34.
[4] 方中达.植病研究方法[M].北京：中国农业出版社，1998.
[5] 周志成.烟草黑胫病产孢性状的研究[J].湖南农业科学，2005（2）：61.
[6] 郑小波.疫霉菌及其研究技术[M].北京：中国农业出版社，1997：15-25.
[7] 马国胜，高智谋.烟草黑胫病菌培养性状的研究[J].中国农业科学，2007，40（3）：512-517.
[8] 李梅云，卢秀萍，李永平.烟草黑胫病菌培养特性研究[J].植物保护，32（6）：71.。