实验二细菌单染与复染

实验二 细菌简单染色法 革兰氏染色法
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一、目的要求
1．巩固油镜的使用பைடு நூலகம்法； 2．学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细
菌的简单染色法；
3．学习、掌握细菌的革兰氏染色法； 4．建立“无菌操作”的概念，学习其技术。
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二、实验原理
简单染色法：是利用单一染料对细菌进行 染色的方法，常用碱性染料。只能观察微 生物的大小、形状、和细胞排列状况，但 不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。
2对一株未知菌进行革兰氏染色时，
怎样才能确证你的结论正确？
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G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽 聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍 保留初染时的紫色。
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三、实验材料
变形杆菌、表皮葡萄球菌 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲
苯、擦镜纸、吸水纸等。 革兰氏染色液一套
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四、实验步骤
1．简单染色 载玻片——中心加半滴水——无菌操作取菌——涂布于 水中使均匀并成薄膜状——干燥——火焰固定——染色 （1~2min）——水洗——干燥——镜检
2.革兰氏（Gram）染色 涂片——干燥——固定——结晶紫初染（1~2min） ——水洗——碘液媒染1min——水洗——95%酒精脱色
（约20－30秒）——立即水洗——番红复染约2分钟— —水洗——干燥——镜检
（混合涂片染色）
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革兰氏染色结果及细菌分类
细菌细胞结构
革兰氏染 色阴性
复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有：
革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等。
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革兰氏染色
丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构
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G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质， 故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质， 增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和 碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。
Left: 单菌染色结果 (G+或 G-)
Right: 混合菌染色结果 (G+和 G-)
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五、实验结果
文字记录所观察到的革兰氏染色 结果的差别，判断是G－/ G＋。
绘图描述各菌形态（可在一个视 野中）。
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六、问题与讨论
1革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚？ 实验关键步骤？