标本中未知细菌的分离和鉴定
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±
＋
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甲型副伤寒
伤寒杆菌
致病菌
＋
－
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痢疾杆菌
以下实验选两种菌落做
(四)涂片镜检（选作）
根据菌落特点及溶血情况，取溶血菌落进行革兰氏 染色 镜下可见：球形，葡萄串状，G+
（五）生化反应
触酶试验：金葡阳性
生化管：甘露醇（原理及现象同葡萄糖，金黄色葡萄球
菌使培养基由紫色变黄色，阳性）
金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验（血浆没 购买到）
穿刺培养：动力实验（不做，示教）
无动力
有动力
（六）药物敏感实验
抑菌圈
青 抑菌圈 （mm）
庆
菌
环
肠道杆菌生化反应的结果判定参考
葡萄糖 乳糖 动力
± － ＋ ＋
H2S
－ － ＋ ＋
尿素
－ － ＋ －
艾希菌属 克雷伯菌属 变形杆菌 乙型副伤寒
⊕产酸产 ⊕ 气 ⊕ ⊕ ⊕ ＋产酸 ± －
非致病菌
⊕
＋
－
非致病菌： 分解乳糖，PH下降，菌落显红色 如大肠杆菌 致病菌： 不分解乳糖，PH不下降，菌落显无色 如痢疾杆菌、伤寒杆菌
大肠杆菌：发酵乳糖
红色菌落
以上为第一次实验，其结果做为 操作考试成绩
（三）分离、扩增细菌（不做）
目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌 方法:
• 斜面培养基 • 液体培养基（最常用） • 平板培养基
一、脓汁标本中未知病原菌 的分离鉴定
脓汁标本检验流程示意图
脓
汁
革兰氏染色，镜检
血平板琼脂
观察菌落形态及一）标本：含菌棉拭子 （二）分离方法： • 将棉拭子轻按血琼脂平板，然后用划线 分离法分离，37℃培养24h。
菌落圆形、直径约2mm、
凸起、表面光滑、润湿、
多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可被血浆 中的协同因子激活为凝血酶，使含有枸橼酸纳获肝 素抗凝剂的兔或人血浆中的纤维蛋白原变成不溶性 的纤维蛋白，导致血浆凝固。非致病性葡萄球菌一 般不产生此酶。
血浆凝固酶玻片凝集试验
生理盐水 血清
（六）药物敏感实验
抑菌圈
青霉素 抑菌圈 （mm）
庆大霉素
菌必治
以下实验选两种菌落做
(四)涂片镜检（选做）
Granm’s staining 镜下可见：杆形，散在排列状，G－
（五）生化管
乳糖生化管：发酵乳糖反应 葡萄糖生化管：发酵葡萄糖反应 H2S反应管：如菌种（乙型副伤寒沙门菌、变形杆菌）产生 H2S，则与管内Pb发生反应，产生黑色的PbS，从而使菌落 变黑 尿素生化管：变形杆菌 • 具有尿素酶，迅速分解尿素，PH升高
实验九-十
标本中未知细菌的分离和鉴定
实验目的
掌握脓汁标本中未知细菌的鉴别 掌握粪便标本中未知细菌的鉴别
实验步骤
标本采集 分离培养 扩增 染色，观察镜下形态结构特征 生化反应检测 血清学实验 药物（抗生素）敏感实验
实验内容
一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定
二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定
环丙沙星
（七）实验结果和意义
上报结果，辅助诊断疾病
上报药物敏感实验结果，辅助治疗
二、粪便标本中未知细菌的鉴别
（一）标本：含菌棉拭子
（二）划线分离 • 平板：SS平板 • 划线分离法：培养24h，大肠杆菌菌落红色，变形杆菌菌 落无色透明
SS平板：肠道杆菌致病性鉴别 SS平板培养：
边缘整齐。 •金黄色葡萄球菌呈金黄 色，白色葡萄球菌呈白色 •金黄色葡萄球菌菌落周 围有透明溶血环
白色葡萄球菌与金黄色葡萄球菌溶血素比较
白色葡萄球菌：白色色素，无溶血环
以上为第一次实验，其结果做为操作 考试成绩
（三）分离、扩增细菌 （不做，第一次的量已够）
目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌 方法: • 斜面培养基 • 液体培养基（最常用） • 平板培养基
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甲型副伤寒
伤寒杆菌
致病菌
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痢疾杆菌
以下实验选两种菌落做
(四)涂片镜检（选作）
根据菌落特点及溶血情况，取溶血菌落进行革兰氏 染色 镜下可见：球形，葡萄串状，G+
（五）生化反应
触酶试验：金葡阳性
生化管：甘露醇（原理及现象同葡萄糖，金黄色葡萄球
菌使培养基由紫色变黄色，阳性）
金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验（血浆没 购买到）
穿刺培养：动力实验（不做，示教）
无动力
有动力
（六）药物敏感实验
抑菌圈
青 抑菌圈 （mm）
庆
菌
环
肠道杆菌生化反应的结果判定参考
葡萄糖 乳糖 动力
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H2S
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尿素
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艾希菌属 克雷伯菌属 变形杆菌 乙型副伤寒
⊕产酸产 ⊕ 气 ⊕ ⊕ ⊕ ＋产酸 ± －
非致病菌
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非致病菌： 分解乳糖，PH下降，菌落显红色 如大肠杆菌 致病菌： 不分解乳糖，PH不下降，菌落显无色 如痢疾杆菌、伤寒杆菌
大肠杆菌：发酵乳糖
红色菌落
以上为第一次实验，其结果做为 操作考试成绩
（三）分离、扩增细菌（不做）
目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌 方法:
• 斜面培养基 • 液体培养基（最常用） • 平板培养基
一、脓汁标本中未知病原菌 的分离鉴定
脓汁标本检验流程示意图
脓
汁
革兰氏染色，镜检
血平板琼脂
观察菌落形态及一）标本：含菌棉拭子 （二）分离方法： • 将棉拭子轻按血琼脂平板，然后用划线 分离法分离，37℃培养24h。
菌落圆形、直径约2mm、
凸起、表面光滑、润湿、
多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可被血浆 中的协同因子激活为凝血酶，使含有枸橼酸纳获肝 素抗凝剂的兔或人血浆中的纤维蛋白原变成不溶性 的纤维蛋白，导致血浆凝固。非致病性葡萄球菌一 般不产生此酶。
血浆凝固酶玻片凝集试验
生理盐水 血清
（六）药物敏感实验
抑菌圈
青霉素 抑菌圈 （mm）
庆大霉素
菌必治
以下实验选两种菌落做
(四)涂片镜检（选做）
Granm’s staining 镜下可见：杆形，散在排列状，G－
（五）生化管
乳糖生化管：发酵乳糖反应 葡萄糖生化管：发酵葡萄糖反应 H2S反应管：如菌种（乙型副伤寒沙门菌、变形杆菌）产生 H2S，则与管内Pb发生反应，产生黑色的PbS，从而使菌落 变黑 尿素生化管：变形杆菌 • 具有尿素酶，迅速分解尿素，PH升高
实验九-十
标本中未知细菌的分离和鉴定
实验目的
掌握脓汁标本中未知细菌的鉴别 掌握粪便标本中未知细菌的鉴别
实验步骤
标本采集 分离培养 扩增 染色，观察镜下形态结构特征 生化反应检测 血清学实验 药物（抗生素）敏感实验
实验内容
一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定
二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定
环丙沙星
（七）实验结果和意义
上报结果，辅助诊断疾病
上报药物敏感实验结果，辅助治疗
二、粪便标本中未知细菌的鉴别
（一）标本：含菌棉拭子
（二）划线分离 • 平板：SS平板 • 划线分离法：培养24h，大肠杆菌菌落红色，变形杆菌菌 落无色透明
SS平板：肠道杆菌致病性鉴别 SS平板培养：
边缘整齐。 •金黄色葡萄球菌呈金黄 色，白色葡萄球菌呈白色 •金黄色葡萄球菌菌落周 围有透明溶血环
白色葡萄球菌与金黄色葡萄球菌溶血素比较
白色葡萄球菌：白色色素，无溶血环
以上为第一次实验，其结果做为操作 考试成绩
（三）分离、扩增细菌 （不做，第一次的量已够）
目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌 方法: • 斜面培养基 • 液体培养基（最常用） • 平板培养基