芪蓟补肾止血颗粒对肾性血尿幼鼠治疗效果及血清 IL-6、TNF-α、MCP-1水平影响

芪蓟补肾止血颗粒对肾性血尿幼鼠治疗效果及血清 IL-6、TNF-α、MCP-1水平影响
发表时间：2020-10-15T05:16:23.758Z 来源：《中国结合医学杂志》2020年7期作者：张天照秦曼通讯作者[导读] 目的：探讨芪蓟补肾止血颗粒对肾性血尿幼鼠的治疗效果以及血清IL-6、TNF-α、MCP-1的表达影响。

黑龙江省中医医院儿科二/小儿肾病科 150036【摘要】目的：探讨芪蓟补肾止血颗粒对肾性血尿幼鼠的治疗效果以及血清IL-6、TNF-α、MCP-1的表达影响。

方法：48只幼鼠随机分成4组，即空白组、模型组、血尿胶囊组和芪蓟组，每组12只。

幼鼠通过BSA+CCL4+LPS方案造模，造模成功后予相应药物干预2周，检
测各组幼鼠尿红细胞计数、24h尿蛋白定量、血清TNF-α、血清IL-6及血清MCP-1的水平。

结果：实验结束时各组幼鼠无死亡，空白组幼鼠一般状态尚可，实验过程中体重逐渐增长；模型组幼鼠精神萎靡、皮毛光泽暗、活泼性下降、进食水量减少，药物干预组上述状态略好于模型组。

与空白组对比，其他3组体重明显降低，尿红细胞计数明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），药物干预的两组体重、尿红细胞计数优于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05），芪蓟组体重、尿红细胞计数优于血尿胶囊组，差异有统计学意义（P＜0.05），模型组、血尿胶囊组、芪蓟组IL-6、TNF-α、MCP-1水平升高，与空白组对比，差异有统计学意义（P＜0.05），血尿胶囊组上述指标有所下降，与模型组对比，差异有统计学意义（P＜0.05），芪蓟组上述指标进一步下降，与血尿胶囊组对比，差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论：芪蓟补肾止血颗粒能够有效降低肾性血尿幼鼠尿红细胞数，降低其IL-6、TNF-α、MCP-1水平。

【关键词】肾性血尿；幼鼠；芪蓟补肾止血颗粒；IL-6；TNF-α；MCP-1 Abstract：Objective：To investigate the therapeutic effect of Qiji Bushen Zhixue Granule on young rats with renal hematuria and the expression of serum IL-6，TNF - α and MCP-1. Methods：48 young rats were randomly divided into four groups，namely blank group，model group，Xueniao capsule group and Qiji group，with 12 rats in each group. The model was established by BSA + CCl4 + LPS regimen. After successful modeling，the rats were intervened with corresponding drugs for 2 weeks. The urine red blood cell count，24-hour urine protein quantity，serum TNF - α，serum IL-6 and serum MCP-1 levels were detected. Results：at the end of the experiment，there was no death in each group，the general state of the blank group was fair，and the weight gradually increased during the experiment；in the model group，the spirit was depressed，the fur was dark，the activity was decreased，and the water consumption was reduced. The above-mentioned state in the drug intervention group was slightly better than that in the model group. Compared with the blank group，the weight of the other three groups was significantly decreased，and the urine red blood cell count was significantly increased（P < 0.05）. The body weight and urine red blood cell count of the two groups after drug intervention were better than those of the model group（P < 0.05）. The body weight and urine red blood cell count of the Astragalus group were better than those of the Xueniao capsule group（P < 0.05）Compared with the blank group，the levels of IL-6，TNF - α and MCP-1 in the urine capsule group and Qiji group were increased，and the difference was statistically significant（P < 0.05）. The above indexes in the Xueniao capsule group decreased，compared with the model group，the difference was statistically significant（P < 0.05）. The above indexes in the Qiji group were further decreased，and the difference was statistically significant（P < 0.05）. Conclusion：Qiji Bushen Zhixue Granule can effectively reduce the number of red blood cells in urine of young rats with renal hematuria，and reduce the levels of IL-6，TNF - α and MCP-1. Key words：renal hematuria；young rats；Qiji Bushen Zhixue Granule；IL-6；TNF - α；MCP-1
肾性血尿是慢性肾脏疾病（chronic kidney disease，CKD）最基本的、有时候甚至是唯一的临床特征，其发病率高，病程冗长，病人常无明显症状体征[1]。

目前西医学对于肾小球性血尿，暂无针对性治疗[2]。

随着中西医结合临床研究的不断开展，中医对肾性血尿的研究治疗亦逐渐深入，为血尿的治疗提供新思路和方法[3]。

基于此，本研究通过观察芪蓟补肾止血颗粒对肾性血尿幼鼠尿红细胞计数、血清IL-6、TNF-α、MCP-1水平影响，探索芪蓟补肾止血颗粒对肾性血尿幼鼠的疗效及机制。

1.实验材料
1.1 实验动物与分组
健康4周龄Wister幼鼠72只，体重（220.35±10.97）g，购自黑龙江中医药大学动物研究所。

用复合饲料（黑龙江中医药大学实验中心生产）分笼饲养。

实验室温度控制在 20~25℃，湿度 50%~60%，氨浓度低于20ppm。

实验室每天定时通风，垫料及饲养笼 3 天更换 1 次并消毒。

所有幼鼠适应性喂养3d，随机分为空白组、模型组、血尿胶囊组和芪蓟组，每组12只。

1.2实验药品及器材
芪蓟组成为该方药物组成为黄芪、山药、枸杞、大蓟、小蓟、白茅根、侧柏叶、山栀子、龙骨、牡蛎、海螵蛸、茜草、蒲黄、赤芍、茯苓、白术十六味，由我院药局制备，血尿胶囊（厂家：北京亚东生物制药有限公司，规格：0.35g，国药准字：H20063206）牛血清白蛋白（BSA）购自上海昱民生物技术有限公司；脂多糖（LPS）购自北京麒麟宏伟科技有限公司；四氯化碳（CCl4）购自天津科密欧化学试剂公司；血清IL-6、TNF-α、MCP-1试剂盒均购自中国人民解放军科技开发中心，全自动生化仪及尿液分析仪由我院检验科提供，其他基础实验器材如注射器、固定台等由实验室提供。

1.3 模型制备
幼鼠分组后记为第1周，除空白组外，其余各组采用BSA+CCL4+LPS方案造模[4]：免疫原BSA（400 mg/kg隔天灌胃，持续6周）；CCL4皮下注射（蓖麻油0.5 ml+ CCL4 0.01 ml，每周1次，9周后停药），LPS分别于第6、8周以0.05 mg尾静脉注射），观察至第12周，尿红细胞位相检查畸形红细胞＞75%为造模成功。

1.4给药方法
造模成功后开始给药，剂量按照实验动物与人用量方法换算［幼鼠平均用量（g）=儿童生药量（g/kg）×幼鼠体重（kg）×折算系数（6）]。

依据前期研究，芪蓟补肾止血颗粒浓度为1.3g/mL；血尿胶囊约1.75mg/d；所有药物以不超过2mL生理盐水制成混悬液灌胃，空白组及模型组予以2mL生理盐水灌胃，灌胃给药2周。

1.5 检测指标
各组于给药结束后测量体重，并化验尿红细胞计数：操作方法为：提前 24 小时取幼鼠分别置于细网代谢笼中，禁食不禁水，收集 24小时尿液，注意尿液中不要混入粪便及垫料等。

24 小时后将代谢笼内尿液收集至尿管中，送我院检验科备查。

收集尿液后将幼鼠以10%水合氯醛3.5mL/kg麻醉，暴露腹主动脉并取血，分离血清，检测血清白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1，MCP-1）水平，操作严格依据试剂盒上指示进行。

1.6 统计学方法
计数资料采用样本数（百分比）表示，差异性采用卡方检验，计量资料采用均数±标准差表示，统计采用t检验，采用SPSS22.0统计软件对所得结果进行处理，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1各组幼鼠体重及尿红细胞个数
本次实验结束时各组幼鼠无死亡，空白组幼鼠一般状态尚可，实验过程中体重逐渐增长；模型组幼鼠精神萎靡、皮毛光泽暗、活泼性下降、进食水量减少，药物干预组上述状态略好于模型组。

与空白组对比，模型组、血尿胶囊组、芪蓟组体重明显降低，尿红细胞计数明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），药物干预的两组体重、尿红细胞计数优于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05），芪蓟组体重、尿红细胞计数优于血尿胶囊组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1：
表1：各组幼鼠体重、尿红细胞沉渣结果
注：与空白组比较，*p＜0.05；与模型组比较，△p＜0.05，与血尿胶囊组比较，□P＜0.05
3 讨论
肾性血尿是由肾小球病变所引起的血尿，临床多见于急慢性肾小球肾炎、IgA肾病等，病情复杂，难以痊愈，因此如何防治肾性血尿已成为当前医学界的难点。

近年来研究发现[5]，肾性血尿与肾脏的持续炎症存在密切联系，肾小管间质细胞活化、炎性细胞浸润及血管活性物质等途径均能导致肾脏生长因子和细胞因子如IL-6、TNF-α等增多，损伤肾脏。

MCP-1为一种可溶性碱性蛋白质，几乎所有细胞和组织经适当刺激后均能产生[6]，且MCP-1在单核细胞趋化以及促肾脏纤维化过程中扮演着十分重要的角色[7]。

降低MCP-1水平，可降肾脏氧化应激的水平，缓解肾脏细胞损伤[8]。

祖国医学将本病称之为“溺血”“溲血”等，总属“血尿”范畴。

肾性血尿的根本原因在于脾肾亏虚，失于固摄。

因此本研究选用补肾健脾，凉血止血之芪蓟补肾止血颗粒[9]。

本次实验结束时各组幼鼠无死亡，空白组幼鼠一般状态尚可，实验过程中体重逐渐增长；模型组幼鼠精神萎靡、皮毛光泽暗、活泼性下降、进食水量减少，药物干预组上述状态略好于模型组。

与空白组对比，模型组、血尿胶囊组、芪蓟组体重明显降低，尿红细胞计数明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），药物干预的两组体重、尿红细胞计数优于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05），芪蓟组体重、尿红细胞计数优于血尿胶囊组，差异有统计学意义（P＜0.05），模型组、血尿胶囊组、芪蓟组IL-6、TNF-
α、MCP-1水平升高，与空白组对比，差异有统计学意义（P＜0.05），血尿胶囊组上述指标有所下降，与模型组对比，差异有统计学意义（P＜0.05），芪蓟组上述指标进一步下降，与血尿胶囊组对比，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，芪蓟补肾止血颗粒能够有效降低肾性血尿幼鼠尿红细胞数，降低其IL-6、TNF-α、MCP-1水平。

参考文献：
[1]陈银凤，朱晓玲，王永钧，林宜，孙琳，胡一舟，杨汝春，汤绚丽，张华琴，王军，俞东容.肾性血尿中医分型与尿液炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1表达和肾脏免疫病理的相关性研究[J].中国中西医结合肾病杂志，2016，17（12）：1053-1056.
[2]龙春莉，苏朝东，谢永祥，蓝芳，刘少会，谢丽萍.尿血消1号对湿热型肾性血尿幼鼠血清TNF-α、IL-6及尿红细胞的影响[J].时珍国医国药，2017，28（12）：2900-2902.
[3]蓝芳，谢丽萍，谢永祥，李景玉，史伟.尿血消1号对湿热型慢性肾小球肾炎血尿患者中医证候积分、白介素-6及尿红细胞的影响[J].光明中医，2019，34（06）：868-870.
[4]蓝芳，刘少会，谢永祥，苏朝东，史伟，谢丽萍.尿血消1号对湿热型肾性血尿幼鼠氧化应激的影响[J].中国中西医结合肾病杂志，2020，21（01）：17-20.
[5]王海燕.肾脏病学，第3版[M].北京：人民卫生出版社，2008.1538.
[6]魏兰，刘立桥，白静，张文贤，刘伯英，刘彤，王艳，郭晓艳，康亚洁.MCP-1、TLR-4及尿蛋白定量与原发性IgA肾病病理损伤的相关性研究[J].解放军医药杂志，2019，31（01）：40-44.
[7]赵塔娜，蔡栋梁，苑露丹.黄葵胶囊对阿霉素肾病幼鼠肾组织MCP-1表达及对肾组织病理损伤的影响[J].中国实验诊断学，2020，24（04）：667-670.
[8]崔明春.肾病综合征患者血浆脂联素和单核细胞趋化蛋白-1的关系[J].世界最新医学信息文摘，2017，17（51）：59.
[9]韩金旭，赵刚.赵刚应用攻补兼施法治疗肾性血尿经验[J].实用中医内科杂志，2020，34（05）：138-141.
课题来源：黑龙江省中医药科研项目，编号2HY10-W42。