DNA和RNA的提取与纯化
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离心管中CsCl起始溶液的密度通常要进行调整,使其与有待研究的 分子或颗粒的密度相对应。 如多数双链线状DNA分子的浮力密度约为1.70g/ml,形成梯度 的CsCl溶液的起始密度应为1.70g/ml
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28
细胞裂解及ＤＮＡ分离过程中，大分子量的细菌染色体 ＤＮＡ容易发生断裂形成相应的线性片段白质的作用中，各有 利弊.
酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10 ％ － 15 ％ 的 水 溶 解 在 酚 相 中 ， 因 而 损 失 了 这 部 分 水 相 中 的 DNA，而氯仿变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶， 不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果 最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿 是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。 也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合使用。
1浓盐法 原理：RNP和DNA在电解溶液中溶解度不同，从而分离。
方法：用1mol/L NaCl抽提，得到的DNP黏液中加入含有 少量辛醇的氯仿一起揺荡，使之乳化，再离心，使蛋白质 凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA 位于上层水相中。 回收水相，用2倍体积95% 乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。
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15
3核酸的纯化 主要根据核酸的性质,使其与细胞内其它成分分离开来, 从中进一步抽提DNA.（杂质的去除）
核酸通过有机溶剂抽提并进行纯化 。污染的RNA通过 RNase消化清除。
在粗提物中加入等体积的氯仿／异戊醇（或酚／氯仿／ 异 戊 醇 ） 轻 轻 颠 倒 混 匀 ， 12000rpm 离 心 5min ， 上 清 液 为 DNA的水溶液，根据需要，还可以重复这一步或用氯仿/异 戊醇颠倒混匀再离心.
一般用SDS、CTAB、溶菌酶和蛋白酶K来裂解细胞。 所用缓冲液一般为TE（TrisC-HCl EDTA）缓冲液。 提取缓冲液：100mmol/L Tris Cl(pH8.0),50mmol/L EDTA (pH8.0),500mmol/L NaCl,10mmol/L α巯基乙醇。 在提取时，将10％SDS加入缓冲液中于65℃预热一定时间。然 后加入到装有样品的离心管中，于65℃保温60－90min。其间 轻轻摇动数次。 4℃下12000rpm离心10min,将上清转入另一离心管中,上清即为 DNA的粗提物。
用溶菌酶或十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）
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26
•纯化质粒DNA 染色体ＤＮＡ分子以高分子量的形式释放，可用高 速度心方法除去得到清裂解液。但仍然会含有相当 数量的片段化的染色体ＤＮＡ分子。因此必须进行 纯化。
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27
1氯化铯密度梯度离心法
铯是55号元素，由Wihelm Bunsen于1855年发现。由于铯原子很 重，CsCl的浓缩液在高速离心数小时后即可形成密度梯度。大分 子物质的浮力密度如与密度梯度中某一位置的CsCl浓度相符，大 分子物质就会准确地漂浮在这一位置上.
7
•质粒DNA 很多微生物细胞内含有质粒DNA,游离于细胞质中,所以被称
为染色体外遗传物质.每种质粒都有复制起始位点,能自我复制. 主要用于构建载体.也要用于分离目的基因和基因表达调控因 子.
•线粒体和叶绿体DNA. 真核生物特有的染色体外遗传物质,分别含有与呼吸作用和
光合作用有关的基因.可用于分离目的基因及构建载体
酚的平衡和饱和 酚的饱和： 因为酚与水有一定的互溶，苯酚用水饱和的目 的是使其在抽提DNA过程中，不致吸收样品中含有DNA的水 分，减少DNA的损失。用Tris 调节其PH值到8.0称为酚的平 衡，其原因是DNA分子在此条件下，比较稳定。
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19
4 沉淀DNA 用无水乙醇（异丙醇）沉淀DNA， 这是实验中最常用的方法 。 具体方法是将上面所提的上清液加入2倍体积的无水乙醇和 0.2-0.4 mol/L的NaCl，颠倒混匀，冰冻30min. 可以观察到絮状 的沉淀,即为DNA，经离心，除去上清液。
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12
2细胞的裂解和DNA的溶解
细胞不裂解,则DNA释放不出来.裂解不完全,得率就低.如果细胞裂 解过于激烈,会导致DNA的断裂.裂解方法因物种而异.
对于原核生物,可用溶菌酶处理.用NaOH,SDS,用煮沸及冰冻,超声 波处理等方法使细胞裂解.
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13
对结构复杂的动植物材料要进行磨样(粉碎)。一般方法是将材料 放入研钵（放在冰中预冷），加入液氮，快速磨碎成粉状。然 后再参照裂解原核生物细胞的方法裂解细胞.
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24
4.苯酚抽提法 苯酚作为蛋白变性剂，同时可抑制DNA 酶的降解作用。 苯酚处理后，蛋白质分子溶于酚相，而DNA 溶于水相， 离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并水相，用 乙醇沉淀DNA.
5.水抽提法 利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐 溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中，使DNA 充分溶解 于水中，离心后收集上清液，在上清中加入NaCl调节至 2.6 mol/L，加入2倍体积的95%乙醇，立即用搅拌法搅出， 然后用不同浓度的乙醇洗涤。空气干燥。
23
2.SDS法 细胞破碎后，加入SDS使细胞膜裂解，并同时使蛋白 质变性，将蛋白质和多糖等杂质与DNA 分开，加入 乙酸钾，可使SDS-蛋白质复合物转变成溶解度更小的 钾盐形式，沉淀更加完全。
3.CTAB法
细胞破碎后，加入CTAB分离缓冲液，将DNA 溶解出来 再经氯仿异戊醇抽提，除去蛋白，得到DNA
第四章 基因工程的主要技术及其原理
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1
第一节 DNA和RNA的提取与纯化
制备纯的高分子量的DNA 是基因工程操作的基础之一
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2
一、DNA提取的基本原理与方法
1. DNA的性质：
化学性质 比较稳定
潜在的反应基团隐藏在中央螺旋内，并经氢键紧密连接。它的 碱基对外侧受磷酸和糖形成的强大环层的保护，这种保护因内 在的碱基堆积力而进一步加强。
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21
5 DNA的溶解和贮存 回收的DNA沉淀在溶解以前须在实验台上敞口放置一段时 间，使残余的乙醇挥发掉（或真空抽干），然后加入适当体 积的TE缓冲液，使DNA溶解。DNA的TE溶液贮存于超低温 冰箱（长时间）或－20℃冰箱。
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22
(二 )DNA提取的几种方法
根据细胞破碎后，分离DNA 与蛋白质所采用的技术策略 不同，可分为以下几种：
生物细胞中大部分DNA集中在细胞核，多以脱氧核糖核蛋白 (DNP)形式存在。而DNP在盐溶液中的溶解度受盐溶液浓度 的显著影响，0.14 mol/L NaCl溶液中最低，仅为水中溶解度 的1%，浓度升高，溶解度增加，到1 mol/L时，比纯水高2倍。 而核糖核蛋白(RNP)在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小， 在0.14 mol/L NaCl的溶解度较大。据此，可分享DNP和RNP.
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3
碱基
核苷酸
核苷
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4
物理性质
高分子质量DNA长而弯曲，仅具有极微的侧向稳定性，因 而容易受到最柔和的流体剪切力的伤害。双链DNA在溶液中随 机卷曲，并由于碱基堆积力和DNA骨架上磷酸基团间的静电排 斥力而变得黏滞。
由吸液，振荡，搅拌所导致的水流对黏滞的盘绕物产生拖 拉力，能切断DNA的双链。DNA分子越长，断裂所需的力越弱。 因此，基因组DNA容易成片段地获得，所需分子质量越大，获 得的难度也相应增加。
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10
一般DNA提取都分为两步，即先是温和或机制裂解细胞及 溶解DNA，接着采用几种化学和酶学方法中的任一种， 以去 除蛋白、RNA及其它的大分子。
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11
1生物材料的准备 选用的材料应该是处于提取DNA得率最高的生长期,或者是
DNA容易提取和含量高的组织.对于细菌,一般取对数生长后期. 对于植物一般取幼嫩的植株,并且暗培养1-2天,甚至黄化苗. 提取动物肝脏DNA应清除胆囊,因其含有多种高活性酶.
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14
正常条件下，由于细胞的区室化隔离，DNA酶，氧化酶等分布于特定 区隔中，不与DNA接触。细胞破碎，则容易导致DA N降解。 因此提取过程中对DNA 的保护显得非常重要。 措施：
（１）利用液氮超低温下研磨，减少损失。
（２）快速加入缓冲液并迅速混匀，对细胞溶浆中DNA进行保护。 加入EDTA和抗氧化剂及PVP等
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25
(三）质粒ＤＮＡ的提取
质粒的提取是基因工程研究中经常性的工作。
有多种从细菌中提纯质粒DNA的方法，无一例外都包括以下
三个步骤：
•培养细菌 氯霉素的加入
•收集和裂解 离心
寄主细胞裂解：可采用非离子型或离子型去污剂，有机溶剂
或碱处理及加热处理等。根据质粒大小、菌株和裂解后用于
纯化质粒DNA的技术，采用不同的方法。
ＤＮＡ则由于其分子量较少，结构紧密，所以仍保持完 整状态。根据此差别进行密度梯度离心纯化。
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29
利用在浓缩的盐溶液中，溴化乙锭（EB)扁平分子在Ｄ ＮＡ碱基对之间的嵌入作用。
染色体ＤＮＡ分子线性片段具有游离的末端而易于解旋， 可结合大量的EB分子。而质粒的共价闭合环状的
此过程目的是用酚和氯仿去除蛋白质。
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16
在提取DNA时有机溶剂的使用
酚和氯仿为非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚 和氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去， 使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度 比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而 与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大， 保留在最下层。
•病毒和噬菌体DNA. 含DNA的病毒和噬菌体的种类很多,能在相应的原核生物
和真核生物宿主细胞内大量增殖.由于此类DNA可被体外包 装,所以主要用于构建基因克隆载体,承载较大片段的外源 DNA,经体外包装,导入受体细胞.此类DNA也编码一些结构 基因,可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料.
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DNA溶液是DNA以水合状态存在，当加入乙醇时，乙醇会夺 去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中， 是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67 ％左右。也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（价格考虑）。
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20
在PH为8左右的DNA溶液中，DNA分子是带负电荷的，加 一定浓度的NaAc或NaCL,使Na离子中和DNA分子上的负电荷, 减少DNA分子之间的同性电荷相斥力, 易于互相聚合而形成 DNA钠盐沉淀。当加入盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形 成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的 盐溶液浓度太高时，其效果也不好，因为过多的盐杂质杂在， 影响DNA的酶切等后续反应。
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18
在抽提DNA时，为了混合均匀，必须振荡容器数次，这时在 混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入 异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫 产生。一般采用氯仿与异戊醇之比为24：1，也可采用酚、 氯仿与异戊醇之比为25：24：1（不必先配制，可在临用前 把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇 有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下 层有机溶剂相维持稳定。
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8
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方 法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及 所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的 DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法， 以获得可 用的DNA大分子。
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9
（一）DNA提取的基本原理
DNA分子是极性分子，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机 溶剂，其钠盐比游离太更易溶于水。 酸性溶液中，DNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
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5
2. 天然DNA的来源和用途
天然DNA包括染色体DNA,病毒DNA(噬菌体 DNA),质粒DNA,线粒体及叶绿体DNA等,可从不 同的生物体中提取.
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6
•染色体DNA.原核和真核生物均含有染色体DNA. 其分子巨大,可长达106kb,小的也有1000kb左右.是生物界
含量最丰富的DNA资源,蕴藏着地球上极大部分的遗传信息. 是分离目的基因和基因表达调控因子的主要材料,也可提供 构建染色体载体和染色体基因整合平台系统之用.
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细胞裂解及ＤＮＡ分离过程中，大分子量的细菌染色体 ＤＮＡ容易发生断裂形成相应的线性片段白质的作用中，各有 利弊.
酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10 ％ － 15 ％ 的 水 溶 解 在 酚 相 中 ， 因 而 损 失 了 这 部 分 水 相 中 的 DNA，而氯仿变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶， 不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果 最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿 是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。 也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合使用。
1浓盐法 原理：RNP和DNA在电解溶液中溶解度不同，从而分离。
方法：用1mol/L NaCl抽提，得到的DNP黏液中加入含有 少量辛醇的氯仿一起揺荡，使之乳化，再离心，使蛋白质 凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA 位于上层水相中。 回收水相，用2倍体积95% 乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。
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3核酸的纯化 主要根据核酸的性质,使其与细胞内其它成分分离开来, 从中进一步抽提DNA.（杂质的去除）
核酸通过有机溶剂抽提并进行纯化 。污染的RNA通过 RNase消化清除。
在粗提物中加入等体积的氯仿／异戊醇（或酚／氯仿／ 异 戊 醇 ） 轻 轻 颠 倒 混 匀 ， 12000rpm 离 心 5min ， 上 清 液 为 DNA的水溶液，根据需要，还可以重复这一步或用氯仿/异 戊醇颠倒混匀再离心.
一般用SDS、CTAB、溶菌酶和蛋白酶K来裂解细胞。 所用缓冲液一般为TE（TrisC-HCl EDTA）缓冲液。 提取缓冲液：100mmol/L Tris Cl(pH8.0),50mmol/L EDTA (pH8.0),500mmol/L NaCl,10mmol/L α巯基乙醇。 在提取时，将10％SDS加入缓冲液中于65℃预热一定时间。然 后加入到装有样品的离心管中，于65℃保温60－90min。其间 轻轻摇动数次。 4℃下12000rpm离心10min,将上清转入另一离心管中,上清即为 DNA的粗提物。
用溶菌酶或十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）
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•纯化质粒DNA 染色体ＤＮＡ分子以高分子量的形式释放，可用高 速度心方法除去得到清裂解液。但仍然会含有相当 数量的片段化的染色体ＤＮＡ分子。因此必须进行 纯化。
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1氯化铯密度梯度离心法
铯是55号元素，由Wihelm Bunsen于1855年发现。由于铯原子很 重，CsCl的浓缩液在高速离心数小时后即可形成密度梯度。大分 子物质的浮力密度如与密度梯度中某一位置的CsCl浓度相符，大 分子物质就会准确地漂浮在这一位置上.
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•质粒DNA 很多微生物细胞内含有质粒DNA,游离于细胞质中,所以被称
为染色体外遗传物质.每种质粒都有复制起始位点,能自我复制. 主要用于构建载体.也要用于分离目的基因和基因表达调控因 子.
•线粒体和叶绿体DNA. 真核生物特有的染色体外遗传物质,分别含有与呼吸作用和
光合作用有关的基因.可用于分离目的基因及构建载体
酚的平衡和饱和 酚的饱和： 因为酚与水有一定的互溶，苯酚用水饱和的目 的是使其在抽提DNA过程中，不致吸收样品中含有DNA的水 分，减少DNA的损失。用Tris 调节其PH值到8.0称为酚的平 衡，其原因是DNA分子在此条件下，比较稳定。
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4 沉淀DNA 用无水乙醇（异丙醇）沉淀DNA， 这是实验中最常用的方法 。 具体方法是将上面所提的上清液加入2倍体积的无水乙醇和 0.2-0.4 mol/L的NaCl，颠倒混匀，冰冻30min. 可以观察到絮状 的沉淀,即为DNA，经离心，除去上清液。
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2细胞的裂解和DNA的溶解
细胞不裂解,则DNA释放不出来.裂解不完全,得率就低.如果细胞裂 解过于激烈,会导致DNA的断裂.裂解方法因物种而异.
对于原核生物,可用溶菌酶处理.用NaOH,SDS,用煮沸及冰冻,超声 波处理等方法使细胞裂解.
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13
对结构复杂的动植物材料要进行磨样(粉碎)。一般方法是将材料 放入研钵（放在冰中预冷），加入液氮，快速磨碎成粉状。然 后再参照裂解原核生物细胞的方法裂解细胞.
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4.苯酚抽提法 苯酚作为蛋白变性剂，同时可抑制DNA 酶的降解作用。 苯酚处理后，蛋白质分子溶于酚相，而DNA 溶于水相， 离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并水相，用 乙醇沉淀DNA.
5.水抽提法 利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐 溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中，使DNA 充分溶解 于水中，离心后收集上清液，在上清中加入NaCl调节至 2.6 mol/L，加入2倍体积的95%乙醇，立即用搅拌法搅出， 然后用不同浓度的乙醇洗涤。空气干燥。
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2.SDS法 细胞破碎后，加入SDS使细胞膜裂解，并同时使蛋白 质变性，将蛋白质和多糖等杂质与DNA 分开，加入 乙酸钾，可使SDS-蛋白质复合物转变成溶解度更小的 钾盐形式，沉淀更加完全。
3.CTAB法
细胞破碎后，加入CTAB分离缓冲液，将DNA 溶解出来 再经氯仿异戊醇抽提，除去蛋白，得到DNA
第四章 基因工程的主要技术及其原理
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第一节 DNA和RNA的提取与纯化
制备纯的高分子量的DNA 是基因工程操作的基础之一
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一、DNA提取的基本原理与方法
1. DNA的性质：
化学性质 比较稳定
潜在的反应基团隐藏在中央螺旋内，并经氢键紧密连接。它的 碱基对外侧受磷酸和糖形成的强大环层的保护，这种保护因内 在的碱基堆积力而进一步加强。
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21
5 DNA的溶解和贮存 回收的DNA沉淀在溶解以前须在实验台上敞口放置一段时 间，使残余的乙醇挥发掉（或真空抽干），然后加入适当体 积的TE缓冲液，使DNA溶解。DNA的TE溶液贮存于超低温 冰箱（长时间）或－20℃冰箱。
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(二 )DNA提取的几种方法
根据细胞破碎后，分离DNA 与蛋白质所采用的技术策略 不同，可分为以下几种：
生物细胞中大部分DNA集中在细胞核，多以脱氧核糖核蛋白 (DNP)形式存在。而DNP在盐溶液中的溶解度受盐溶液浓度 的显著影响，0.14 mol/L NaCl溶液中最低，仅为水中溶解度 的1%，浓度升高，溶解度增加，到1 mol/L时，比纯水高2倍。 而核糖核蛋白(RNP)在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小， 在0.14 mol/L NaCl的溶解度较大。据此，可分享DNP和RNP.
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碱基
核苷酸
核苷
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物理性质
高分子质量DNA长而弯曲，仅具有极微的侧向稳定性，因 而容易受到最柔和的流体剪切力的伤害。双链DNA在溶液中随 机卷曲，并由于碱基堆积力和DNA骨架上磷酸基团间的静电排 斥力而变得黏滞。
由吸液，振荡，搅拌所导致的水流对黏滞的盘绕物产生拖 拉力，能切断DNA的双链。DNA分子越长，断裂所需的力越弱。 因此，基因组DNA容易成片段地获得，所需分子质量越大，获 得的难度也相应增加。
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10
一般DNA提取都分为两步，即先是温和或机制裂解细胞及 溶解DNA，接着采用几种化学和酶学方法中的任一种， 以去 除蛋白、RNA及其它的大分子。
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11
1生物材料的准备 选用的材料应该是处于提取DNA得率最高的生长期,或者是
DNA容易提取和含量高的组织.对于细菌,一般取对数生长后期. 对于植物一般取幼嫩的植株,并且暗培养1-2天,甚至黄化苗. 提取动物肝脏DNA应清除胆囊,因其含有多种高活性酶.
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14
正常条件下，由于细胞的区室化隔离，DNA酶，氧化酶等分布于特定 区隔中，不与DNA接触。细胞破碎，则容易导致DA N降解。 因此提取过程中对DNA 的保护显得非常重要。 措施：
（１）利用液氮超低温下研磨，减少损失。
（２）快速加入缓冲液并迅速混匀，对细胞溶浆中DNA进行保护。 加入EDTA和抗氧化剂及PVP等
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(三）质粒ＤＮＡ的提取
质粒的提取是基因工程研究中经常性的工作。
有多种从细菌中提纯质粒DNA的方法，无一例外都包括以下
三个步骤：
•培养细菌 氯霉素的加入
•收集和裂解 离心
寄主细胞裂解：可采用非离子型或离子型去污剂，有机溶剂
或碱处理及加热处理等。根据质粒大小、菌株和裂解后用于
纯化质粒DNA的技术，采用不同的方法。
ＤＮＡ则由于其分子量较少，结构紧密，所以仍保持完 整状态。根据此差别进行密度梯度离心纯化。
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利用在浓缩的盐溶液中，溴化乙锭（EB)扁平分子在Ｄ ＮＡ碱基对之间的嵌入作用。
染色体ＤＮＡ分子线性片段具有游离的末端而易于解旋， 可结合大量的EB分子。而质粒的共价闭合环状的
此过程目的是用酚和氯仿去除蛋白质。
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在提取DNA时有机溶剂的使用
酚和氯仿为非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚 和氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去， 使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度 比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而 与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大， 保留在最下层。
•病毒和噬菌体DNA. 含DNA的病毒和噬菌体的种类很多,能在相应的原核生物
和真核生物宿主细胞内大量增殖.由于此类DNA可被体外包 装,所以主要用于构建基因克隆载体,承载较大片段的外源 DNA,经体外包装,导入受体细胞.此类DNA也编码一些结构 基因,可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料.
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DNA溶液是DNA以水合状态存在，当加入乙醇时，乙醇会夺 去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中， 是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67 ％左右。也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（价格考虑）。
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20
在PH为8左右的DNA溶液中，DNA分子是带负电荷的，加 一定浓度的NaAc或NaCL,使Na离子中和DNA分子上的负电荷, 减少DNA分子之间的同性电荷相斥力, 易于互相聚合而形成 DNA钠盐沉淀。当加入盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形 成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的 盐溶液浓度太高时，其效果也不好，因为过多的盐杂质杂在， 影响DNA的酶切等后续反应。
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18
在抽提DNA时，为了混合均匀，必须振荡容器数次，这时在 混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入 异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫 产生。一般采用氯仿与异戊醇之比为24：1，也可采用酚、 氯仿与异戊醇之比为25：24：1（不必先配制，可在临用前 把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇 有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下 层有机溶剂相维持稳定。
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不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方 法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及 所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的 DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法， 以获得可 用的DNA大分子。
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（一）DNA提取的基本原理
DNA分子是极性分子，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机 溶剂，其钠盐比游离太更易溶于水。 酸性溶液中，DNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
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2. 天然DNA的来源和用途
天然DNA包括染色体DNA,病毒DNA(噬菌体 DNA),质粒DNA,线粒体及叶绿体DNA等,可从不 同的生物体中提取.
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6
•染色体DNA.原核和真核生物均含有染色体DNA. 其分子巨大,可长达106kb,小的也有1000kb左右.是生物界
含量最丰富的DNA资源,蕴藏着地球上极大部分的遗传信息. 是分离目的基因和基因表达调控因子的主要材料,也可提供 构建染色体载体和染色体基因整合平台系统之用.