Immunofluorescence
免疫组化和免疫荧光的区别
请问你曾经被ＩＨＣ、ＩCＣ和IF所困扰过吗?作者：北京义翘神州在实验中,有没有一种感觉,就是对免疫组化(ＩHＣ),免疫细胞(ICC)，以及免疫荧光(IF)傻傻分不清,那么今天我们就来讨论一下这三者的区别,先贴图上来以便有个大致的区分。
从图中我们可以看出，免疫检测技术可以根据报告标签的不同，分为免疫化学和免疫荧光两类，而根据样品类型不同,可以分为组织和细胞检测技术。
因此，才会延伸出三个相近的概念。
为了更好的区分这三个概念,我们还可以根据他们的英文词根来分析一下,他们的英文名分别是免疫组织化学Ｉｍｍuｎｏhistoｃｈｅmistry (ＩHＣ)，免疫细胞化学Imｍunocyｔocheｍisｔry (ＩＣC），免疫荧光 Imｍｕnofluｏresｃｅnｃｅ (ＩＦ)。
词根分析:Immuno－指的是免疫技术(例如，抗体和抗原的结合）Histｏ-指的是组织(细胞以及它周围的细胞外基质)Cyｔo-指的是细胞(不包含细胞外的基质)Chｅmistry-在这里指的是化学检测方法（例如,颜色的变化)Fluｏrｅscence-对被激发的荧光团的检测通过对词根的解释，相信你在心中不再迷茫了吧。
这三个应用技术都属于免疫技术,都是将抗原与抗体的结合可视化,即通过一定的方法可以直接看到实验结果。
而常用的方法就是化学显色和荧光显色。
如果报告标签是酶促的,就是免疫化学,如果是荧光的，就是免疫荧光。
其实我们纠结免疫荧光的一个原因还在于免疫荧光的英文名字Iｍmunｏｆluoresｃｅｎce （IF),但若是写成免疫组织荧光(IHＦ)或是免疫细胞荧光(IＣF），那我们是不是就豁然开朗了。
虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛,但绝对不是我自己杜撰的哦，已经有些学者在使用了，规范化应该也只是时间的问题。
可能文字描述还是有些晦涩难懂,那我们就直接上图吧。
先不看下面答案,仅从几张图片,你能明白哪张图代表哪种应用吗?A免疫组织化学：兔EGFR单克隆抗体（1００01-R043-50)—人胎盘B 免疫细胞化学:兔α微管蛋白单克隆抗体抗—MEF1细胞Ｃ免疫荧光组织：兔Cdk５单克隆抗体—鸡脑组织D免疫荧光细胞:兔ＪNK2/ＭAPK9（10745-R0０4-5０）单克隆抗体—人Hela细胞A图和B图是免疫化学（Ｉmmuｎｏcｈｅmｉstry），这种应用是抗体检测目标蛋白,发生了化学反应,然后显色，根据样本类型的不同,又可以分为免疫组织化学（A）和免疫细胞化学(B）。
免疫荧光层析试剂信号弱
免疫荧光层析试剂信号弱免疫荧光层析试剂（immunofluorescence assay reagents）是一种常用的实验工具，用于检测和研究生物样品中特定分子的存在和定量。
然而，有时候我们可能会遇到免疫荧光层析试剂信号弱的情况，这给我们的实验带来了一定的挑战。
信号弱可能是由多种原因造成的。
首先，可能是样品中目标分子的浓度较低。
在样品中，目标分子的浓度越低，与试剂结合的机会就越少，从而导致信号弱。
此外，样品中存在其他干扰物质也可能会影响信号的强度。
这些干扰物质可能与试剂结合，使得试剂与目标分子结合的机会减少，进而导致信号减弱。
另外，试剂的质量也会对信号强度产生影响。
如果试剂的纯度不高或保存不当，可能会导致信号弱。
为了解决信号弱的问题，我们可以采取一些策略。
首先，可以尝试增加目标分子的浓度。
这可以通过对样品进行浓缩或纯化来实现。
其次，我们可以优化试剂的使用条件。
例如，调整试剂的浓度、温度和反应时间等参数，以提高试剂与目标分子的结合效率。
此外，我们还可以尝试使用其他更敏感的检测方法，如放射免疫测定法（radioimmunoassay）或酶联免疫测定法（enzyme-linked immunosorbent assay），以提高信号的强度。
最后，我们还可以选择更高质量的试剂供应商，确保试剂的质量可靠。
除了以上策略，我们还可以通过优化实验步骤来改善信号弱的问题。
首先，我们可以仔细选择样品的处理方法，确保样品中的目标分子不会受到损坏或降解。
其次，我们可以优化固定和染色步骤，确保试剂与目标分子的结合效率最大化。
此外，我们还可以优化显微镜的设置，如调整曝光时间和增益等参数，以提高信号的可见性。
在实验过程中，我们还需注意一些可能导致信号弱的常见错误。
首先，我们应该避免使用过期的试剂，因为过期的试剂可能会导致信号弱。
其次，我们应该避免使用不适当的控制组，以确保我们的实验结果可靠。
此外，我们还应该注意实验条件的一致性，如温度、湿度和pH值等，以减少不确定性因素对信号的影响。
免疫荧光原理
免疫荧光（Immunofluorescence, IF）原理免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。
利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。
紫外光激发荧光物质放射荧光示意图免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育及荧光检测等。
细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片）是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。
这一步关键的是玻片（Slides or Coverslips）的处理以及细胞的活力，有人根据成功经验总结出许多有益的细节或小窍门，非常值得借鉴。
固定和通透步骤最重要的是根据所研究抗原的性质选择适当的固定方法，合适的固定剂和固定程序对于获得好的实验结果是非常重要的。
免疫荧光中的封闭和抗体孵育与其它方法（如ELISA或Western Blot）中的相同步骤是类似的，最重要的区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体，因此必须谨记避光操作，此外抗体浓度的选择可能更加关键。
最后需要注意的是，标记好荧光的细胞片应尽早观察，或者用封片剂封片后在4℃或-20℃避光保存，以免因标记蛋白解离或荧光减弱而影响实验结果。
由于操作步骤比较多，同时在分析结果时无法像WB那样可以根据分子量的大小区分非特异性识别，所以要得到一个完美的免疫荧光实验结果，除了需要高质量的抗体，以及对实验条件进行反复优化外，还必须设立严谨的实验对照。
总之，免疫荧光实验从细胞样品处理、固定、封闭、抗体孵育到最后的封片及观察拍照，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。
基本实验步骤：（1）细胞准备。
11.免疫荧光技术
影响标记的主要因素
温度:温度低，标记时间长，温度高，标记时间
应短。 时间:FITC0-4℃以6-12h为宜，20-25℃以1-2h为
宜，37℃30-45min为宜。
酸碱度:pH低时，标记较慢，pH值偏高（>10）， 抗体易变性，pH值9.0-9.5最为适宜。
第六页，编辑于星期日：十三点 四十一分。
4 荧光寿命 指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生 的荧光随时间而衰退到一定程度所用的时间。
5 荧光的猝灭 指荧光物质的荧光辐射能力在受 到激发光较长时间的照射后会发生减弱的现象。
6 荧光偏振 7
P= FH--FL
P：偏振度； FH--FL
P=0,完全不偏振
P（-1，+1），部分偏振
4．滴加荧光标记二抗37℃ 40分钟。
5．PBS洗涤3×3分钟。 6．0.1％伊文氏兰复染。 7．PBS洗涤3×3分钟。
8．缓冲甘油封片，镜检。
第三十四页，编辑于星期日：十三点 四十一分。
间接染色法
优点：既能检查未知抗原，也能检查未知抗体；
用一种标记的抗球蛋白抗体，能与在种 属上相同的所有动物的抗体结合，检查 各种未知抗原或抗体，敏感性高。
第三十页，编辑于星期日：十三点 四十一分。
二、荧光抗体染色 1） 直接法
1．标本经固定后，PBS洗涤3×3分钟。 2．加荧光素标记的抗体，湿盒内37℃孵育50
分钟。
3．PBS洗涤3×3分钟。
4．0.1％伊文氏兰复染。 5．PBS洗3次，蒸馏水洗2次，每次3分钟，以
除去NaCl结晶。 6．缓冲甘油封片，镜检。
1 发射光谱 指固定激发波长，在不同波长下 所记录到的样品发射荧光的相对强度。
免疫荧光
• Autofluorescence
• • • Biological autofluorescence in mammalian cells due to flavin coenzymes (FAD and FMN: absorption, 450 nm; emission, 515 nm) and reduced pyridine nucleotides (NADH: absorption, 340 nm; emission, 460 nm).
select combinations of fluorochromes that will work together
• • In immunofluorescence, a single wavelength can be used to excite several fluorochromes with different Stokes shifts and thereby produce a variety of fluorescent colors as shown .
• 应用范围：
• 其应用范围极其广泛，可以测定内分泌激素、蛋白质、多 肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、 肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。根据诊断类 别，又可分为传染性疾病、内分泌、肿瘤、药物检测、免 疫学、血型鉴定等。
The two main methods of immunofluorescent labeling are direct and indirect.
Principle of Fluorescence
• 1 When an electron absorbs the energy from a photon of light it becomes “excited” and jumps to a higher, less stable energy level. • 2 The excited state does not last long The electron loses a small amount of energy as heat and the remainder of the extra energy is given off in the form of a phochrome would be a molecule with the following properties
多重免疫组化VS免疫荧光
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique，IF ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
多重免疫组化（mIHC）：主要的技术原理来自TSA技术，TSA即酪酰胺信号放大(Tyramide signal amplification)是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。
该技术可与高性能染料Alexa Fluor®、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。
TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积，与随后加入的Streptavidin—HRP/荧光基团结合，经几次这样的循环放大，可以结合大量的酶分子or 荧光基团，结果使其检测信号得到几何级放大。
mIHC和IP的区别：。
免疫荧光技术（immunofluorescencetechnique）又称荧光抗体技术
免疫荧光技术免疫荧光技术（immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术。
始创于40年代初，1942年coons等多次报道用异氰酸荧光素标记抗体。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
免疫荧光技术包括荧光抗体技术和荧光抗原技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
一、实验的基本原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。
由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。
免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
二、实验方法1、直接法这是荧光抗体技术最简单和基本的方法。
滴加荧光抗体于待检标本片上，经反应和洗涤后在荧光显微镜下观察。
标本中如有相应抗原存在，即与荧光抗体特异结合，在镜下可见有荧光的抗原抗体复合物。
此法的优点是简单、特异。
但其缺点是检查每种抗原均需制备相应的特异性荧光抗体，且敏感性低于间接法。
图一、直接免疫荧光法原理示意图2、间接法根据抗球蛋白试验的原理，用荧光素标记抗球蛋白抗体(简称标记抗抗体)的方法。
检测过程分为两步：第一次，将待测抗体(第一抗体)加在含有已知抗原的标本片上作用一定时间，洗去未结合的抗体。
第二，滴加标记抗抗体。
如果第一步中的抗原抗体已发生结合，此时加入的标记抗抗体就和已固定在抗原上的抗体(一抗)分子结合，形成抗原-抗体-标记抗抗体复合物，并显示特异荧光。
此法的优点是敏感性高于直接法，而且无需制备一种荧光素标记的抗球蛋白抗体，就可用于检测同种动物的多种抗原抗体系统。
荧光抗体稀释液
北京索莱宝科技有限公司
荧光抗体稀释液
货号：A1840
规格：10ml/100ml
保存：-20℃保存，有效期为2年。
短期可2-8℃保存。
产品说明：
本免疫荧光抗体稀释液(Immunofluorescence Staining Antibody Dilution Buffer)可以用于免疫荧光实验时荧光标记抗体的稀释和配制。
产品添加了抗体保护剂、稳定剂等成分，有效增加了稀释后荧光抗体的稳定性。
用此稀释液稀释后的抗体可在2-8℃环境下稳定保存半年。
使用方法：
按照荧光抗体推荐效价（或个人优化条件），将适量抗体加入抗体稀释液即可。
例如，效价为1：1000时，可将1ul抗体加入到1ml抗体稀释液中，充分混匀后即可使用。
抗体最好现用现稀释，稀释后的抗体可2-8℃保存。
注意事项：
如需抗体回收再利用，建议在2-8℃进行抗体的结合反应，以减缓抗体效价的衰减速度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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免疫荧光技术常见问题及分析
免疫荧光技术常见问题及分析免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
主要是利用荧光标记的抗体与待测抗原间反应进行抗原或者半抗原物质定位的技术。
本文总结了免疫荧光技术常见的问题及解析。
1、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项?参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。
我的经验是：(1)选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkeyanti-rat-Tex-Red(红)。
(2)我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。
抗体浓度、孵育时间要仔细摸索，我感觉一抗4度孵育过夜比较好，背景比较清晰。
(3)我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。
(4)封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey血清。
(5)其余步骤同一般免疫荧光单标操作。
2、问：用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白，两者操作过程有哪些不同?参考见解：只是固定方法不同。
细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。
3、问：本人拟做Brdu标记神经干细胞免疫荧光，二抗为FITC标记，想请教各位大侠：(1)抗体分装和荧光显微镜观察时是否一定要在暗室中进行?(2)封片时是否用甘油缓冲液即可，还是用甘油和0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液等量混合封片?(3)免疫酶染色中的3%过氧化氢及2N盐酸是否还需要用?参考见解：(1)你的二抗是用FITC标记的，为避免荧光分解，分装及荧光显微镜观察时均要避光;(2)封片最好用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液，后者能使玻片透明;(3)关于免疫酶染色，如果是用过氧化物酶做标记，就必须用3%H2O2以去除内源性过氧化物酶;2N盐酸需要使用，目的是使DNA变性，让Brdu抗体能够充分地与已经掺入的Brdu 结合。
细胞免疫荧光步骤
细胞免疫荧光步骤
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位
细胞爬片免疫荧光实验步骤
第一天：
1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min，PBS浸洗玻片3次，每次3min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS配制)室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；
4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；
5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；
第二天：
6. 加荧光二抗：PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；
8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。
if和ihc法 -回复
if和ihc法-回复什么是IF和IHC法？IF和IHC法是免疫荧光和免疫组化染色（Immunofluorescence and Immunohistochemistry）的简称。
这两种方法是用于检测细胞或组织中特定蛋白质的表达和定位的常用技术。
IF法利用特异性抗体与标记荧光分子结合，通过显微镜观察样品中标记物的荧光信号，从而得知目标蛋白质在细胞或组织中的分布。
IHC法则采用特异性抗体与酶或染色剂结合，通过显微镜观察样品中染色剂的着色反应，从而获得目标蛋白质的表达和定位信息。
IF和IHC法的基本原理无论是IF法还是IHC法，基本原理都是相似的，即利用抗体的高度特异性与结构蛋白质的特定抗原相结合。
IF法中，抗体与荧光标记物结合后，可通过荧光显微镜观察到标记物的发光信号。
而IHC法中，抗体与染色剂或酶结合后，通过酶的催化作用或染色剂的化学反应，使标记物在显微镜下呈现特定的着色反应。
IF和IHC法的操作步骤1. 标本制备：IF和IHC的前提是有合适的标本供检测。
对于IF法，可以使用细胞培养物或切片后的组织标本；而IHC法则是使用组织切片标本。
标本制备的关键是要保持标本完整性和抗原的清晰显示。
2. 抗体染色：首先需要选择适当的抗体，具有高度的特异性和亲和力。
将标本与抗体孵育，使其结合，形成抗原-抗体复合物。
在IF法中，需要使用荧光标记的二抗与抗体结合，形成荧光复合物；而在IHC法中，使用的是酶标记的二抗或直接染色剂与抗体结合。
3. 形象处理：这一步骤是为了增强抗原-抗体复合物的信号，减少非特异结合和背景噪声。
对于IF法，通常使用荧光增强剂和抗褪色剂；而IHC 法，则需使用过氧化物酶和底物进行染色增强。
4. 显微镜观察：使用荧光显微镜观察IF法样本的荧光信号，或使用普通显微镜观察IHC法样本的染色反应。
这些信号可以给出目标蛋白质在细胞或组织中的定位信息。
IF和IHC法在研究和临床应用中的意义IF和IHC法在生物医学研究和临床实践中具有广泛应用。
抗体免疫荧光染色 pcr
抗体免疫荧光染色 pcr
抗体免疫荧光染色（Antibody Immunofluorescence Staining）和聚合酶链式反应（PCR）是两种不同的生物学技术，它们在研究和诊断领域中都有广泛的应用。
抗体免疫荧光染色是一种用于检测和定位细胞或组织中特定蛋白质的技术。
该技术利用特异性抗体与目标蛋白质结合，然后通过荧光染料标记的二抗来可视化抗体-蛋白质结合的位置。
这种技术可以用于研究蛋白质的表达、分布和功能，以及在细胞和组织水平上进行诊断。
PCR 则是一种用于扩增特定核酸序列的技术。
它通过在体外进行一系列的温度循环，使目标核酸序列在短时间内大量复制。
PCR 可以用于基因克隆、基因分型、基因表达分析等领域，也在分子诊断和遗传学研究中发挥着重要作用。
抗体免疫荧光染色和 PCR 可以结合使用，以实现更全面的分析。
例如，在细胞或组织中进行抗体免疫荧光染色后，可以通过 PCR 对同一样本中的特定核酸序列进行分析，从而提供有关细胞或组织的分子信息。
这两种技术在生物学研究和临床诊断中都具有重要的应用价值。
它们各自具有独特的优势，可以为研究人员提供不同层面的信息，帮助我们更好地理解生物过程和疾病机制。
细胞免疫荧光的方法
细胞免疫荧光的方法细胞免疫荧光（Cellular Immunofluorescence）是一种广泛应用于生物医学研究中的技术方法，用于观察和定位特定分子在细胞或组织中的表达和分布情况。
以下是根据我自己的实践记录总结的细胞免疫荧光方法。
首先，实验前准备是非常重要的。
首先，我们需要选择和制备一系列必要的试剂和抗体来进行实验。
我们需要选择一个适合我们研究目的的抗体，例如，我们想要研究细胞表面蛋白的表达情况，那么我们需要选择一个能够特异性结合这一蛋白的抗体。
此外，还需要选择适当的细胞系或组织样本，以及相应的细胞培养基和背景消除液等试剂。
接下来是细胞的准备。
首先，将细胞转移到培养皿中并培养到适当的密度。
然后将细胞用磷酸盐缓冲液或PBS进行洗涤，以去除培养基中的杂质，如细胞培养基成分和浸泡在细胞上的血清蛋白。
洗涤后，将细胞固定在培养皿中，通常使用4%的甲醛进行固定。
固定时间的选择要根据实验需求和细胞类型进行调整。
然后是抗体处理步骤。
首先，为了阻断非特异性结合，需要将细胞孔洞填充剂（例如牛血清蛋白或BSA）加入固定的细胞中，然后进行孔洞结构的形成。
之后，加入待测试的一抗（主抗体）溶液，通常是在适当的稀释比例下与背景消除液混合。
一抗与细胞孔洞结合，形成主抗体-抗原复合物。
然后是显微镜下观察与组织成像。
将处理后的细胞放置在玻片上，并加入适当的封片液。
然后，使用荧光显微镜观察样本。
根据实验需要选择适当的荧光滤光片和荧光染料，以确保对目标分子进行准确而明确的检测和成像。
最后是图片分析和数据处理。
使用图像分析软件对显微镜图像进行处理和分析，以获得所需的数据。
可以使用相关技术对细胞中目标分子的表达强度、分布和定位进行定量和定位分析。
总结起来，细胞免疫荧光是一种重要的技术方法，可用于研究细胞中的特定分子的表达和分布。
通过正确的实验前准备、细胞处理和显微镜观察，以及准确的图像分析和数据处理，可以获得可靠的实验结果。
然而，在进行细胞免疫荧光实验时，还需要注意选择适当的抗体和试剂，并根据实验需求和特定细胞类型进行适当的优化和调整。
细胞免疫荧光(immunofluorescence)操作步骤
细胞免疫荧光（immunofluorescence）操作步骤
1.细胞爬片；
2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；
3.PBS漂洗5min；
4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)；
5.PBS漂洗2次，每次5min；
6.1%BSA封闭30min；
7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；
8.PBS漂洗2次，每次5min；
9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h；
10.PBS漂洗2次，每次5min；
11.5ug/ml DAPI染色2min；
12.抗淬灭封片剂封片。
抗淬灭封片剂:
2.5% DABCO (w/v)
50mM Tris(pH8.0)
90%甘油
【注意事项】
大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：
1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。
本文到此结束，谢谢大家!。
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Sayeed Ismail Khatib Lecturer Microbபைடு நூலகம்ology & Immunology Ibn Sina National College for Medical Studies
Introduction:
Immunofluorescence is the labeling of antibodies or antigens with fluorescent dyes. This technique is sometimes used to make viral plaques more readily visible to the human eye. Immunofluorescent labeled tissue sections are studied using a fluorescence microscope. Fluorescein is a dye which emits greenish fluorescence under UV light. It can be tagged to immunoglobulin molecules.
Indirect immunofluorescence of iron-regulated cell wall mannoprotein FIT1 of S. cerevisiae
Confocal image to detect phosphorylated AKT (green) in cardiomyocytes infected with adenovirus
There are two ways of doing IF staining Direct immunofluorescence Indirect immunofluorescence Direct immunofluorescence Ag is fixed on the slide Fluorescein labeled Ab’s are layered over it Slide is washed to remove unattached Ab’s Examined under UV light in an fluorescent microscope The site where the Ab attaches to its specific Ag will show apple green fluorescence Use: Direct detection of Pathogens or their Ag’s in tissues or in pathological samples
1.
Direct immunofluorescence
2.
Indirect immunofluorescence:
Indirect test is a double-layer technique The unlabelled antibody is applied directly to the tissue substrate Treated with a fluorochrome-conjugated anti-immunoglobulin serum
Immunofluorescence image of Cryptosporidium parvum oocysts
Concentrated groundwater methanotrophic bacteria on 0.2 m m filter labeled with fluorescent antibodies.
Advantage
Because
over direct IF
several fluorescent antiimmunoglobulins can bind to each antibody present in the first layer, the fluorescence is brighter than the direct test. It is also more time-efficient since it is only one signal labelled reagent, the antiimmunoglobulin, is prepared during the lengthy conjugation process