AS-DNCE染色SOP

责任部门：检验科染色标准操作操作规程审核：肖启国
批准：卿文衡
实施：2011-01-01
1目的
规范氯化醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE）染色的操作，保证操作安全可靠运行，为临床提供准确可靠的结果。

2SOP程序编写依据
依据ISO15189：2003《医学实验室—质量和能力的专用要求》
《氯化醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE）染色液说明书》
《全国临床检验操作规程》（第3版）
3SOP变动程序
本操作程序的变动，可由其使用的工作人员提出，报经专业主管和科主任签字批准，方可变更。

4适用范围
适用于血细胞内氯化醋酸AS-D萘酚酯酶的染色测定，用于辅助诊断。

5. 实验原理
血细胞内的氯化醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE）将氯化醋酸AS-D萘酚水解，产生萘酚AS-D，后者与重氮剂偶联形成有色沉淀物，沉淀物的显色深浅与AS-DNCE活性成正比。

6. 标本采集
6.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。

凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

6.2 标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液
6.3 标本采集要求
6.3.1 高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。

6.3.2 临床上首选穿刺部位为髂后上棘；翻身困难，需多部位穿刺患者可选择髂前上棘为穿刺部位。

小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。

7. 标本储存：滴加固定液盖满血膜（4℃）30秒，水洗待干室温避光保存。

8. 标本运输：室温运输。

9. 标本要求：1.新鲜涂片。

2.若样本采集后不能及时测定，可先用固定液处理，可保存数天。

10.试剂
10.1 试剂名称：氯化醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE）染色试剂
10.2 试剂生产厂家：上海太阳生物技术公司
10.3 试剂组成
责任部门：检验科染色标准操作操作规程审核：肖启国
批准：卿文衡
实施：2011-01-01
试剂1：AS-DNCE染色固定液：含丙酮，甲醛等。

2℃-8℃避光保存，有效期1年。

试剂2：AS-DNCE染色Ⅰ液：含氯化醋酸AS-D萘酚酯钠盐等。

2℃-8℃避光保存，有效期1年。

试剂3：AS-DNCE染色Ⅱ液：含盐酸副品红等。

2℃-8℃避光保存，有效期1年。

试剂4：AS-DNCE染色Ⅲ液：含磷酸盐缓冲液等。

2℃-8℃避光保存，有效期1年。

试剂5：苏木素复染液：含苏木精等。

2℃-8℃避光保存，有效期1年。

11. 操作步骤
11.1 新鲜涂片滴加固定液5-8滴，盖满血膜即可，（4℃）30秒，水洗。

11.2 将Ⅰ液、Ⅱ液置入Ⅲ液中溶解混合成为基质液。

将涂片置入后，37℃放置30分钟，
然后连缸流水冲洗数分钟。

11.3 苏木素复染1～2分钟，水洗待干，镜检。

12. 结果判断
12.1 阴性：胞质内无沉淀物（无色）。

12.2 阳性：胞质内出现红色沉淀物。

13. 临床意义
1.此酶通常存在于中性粒细胞浆内，为粒细胞特异性酯酶，由此可鉴别粒细胞和单核细
胞等。

2.在白血病细胞的亚型分型中的应用：
阳性提示：FAB中的M1、M2、M3、M4可能。

3.鉴别嗜碱性粒细胞与肥大细胞前者阴性，后者阳性。

14. 操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度高。

15. 注意事项：
15.1 基质液配置时可能出现混浊，但不影响染色效果；配置后及时应用，以免失效或
降低阳性强度。

15.2 基质液为一次性使用，可同时放置1-8张涂片（即1-8份样本），配置后不能反
复应用。

15.3 每次操作时均应设阴、阳性对照。