嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的克隆与表达
嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因表达载体的构建与蛋白特性分析
Ｔｈｓ ｅ ｅ ｒｈ ｃ ｕｄｐ ｏ ｉｅａｆｕ ｄ ｔ ｎ ｆｒｔｅｓ ｂ ｅ ｕ ｎ ｅ ｅｒｈ ｏ ｒ ｔｉ ｅ ｐ ｅ ｓ ｎ ａ ｄ ｂｏ ｇｃｌ ｈ ｒ ｃｅｉ ｉ ｆ ａａ ｉ ｒ ｓａ ｃ ｏ ｌ ｒ ｖ ｎ ａｉ ｏ ｈ ｕ ｓ ｑ ｅ ｔ ｓａ ｃ ｆ ｏ ｅ ｘ ｒｓ ｉ ｎ ｉｌ ｉ ａ ａｔ ｒ ｔ ｓｏ ｇ ｌ ｄ ｏ ｏ ｒ ｐ ｎ ｏ ｏ ａｃ ｓｃ ｐ ｃ
Ｄｅ ｇ ｏ ｇｙ ｎ Ｈ ｎ ａｎ ， ｅＳｏ Ｈ ｎｇ ， ｅＬａｎ ｉ Ｈ ｈｕ
（ ｅ ａ ｔ ｎ ｆ Ｃ ｉ ｉ ｌ ａ ｏａ ｏ ｙ， ｆ ｌ ｔ ｓ ｉ ｌ ｆ Ｃ ｅ ｇ ｕ Ｕ ｉｅｓｔ Ｓ ｃ ｕ ｎ ６ ０ ８ ， ｈ ｎ ） Ｄ ｐ ｒｍｅ ｔ ｌ ｃ ｂ ｒ ｔｒ Ａｆ ｉ ａｅ Ｈｏｐ ｔ ｈ ｎ ｄ ｎ ｖ ｒｉ ｏ ｎ ａ Ｌ ｉ ｄ ａ ｏ ｙ， ｉｈ ａ １ ０ １ Ｃ ｉ ａ
邓 红艳 ， 贺 松 ， 兰 辉 赫
（ 成都 大学 附属 医院检 验 科 ， 四川 ６ ０ ８ ） １ ０ １
摘 要 ： 的 构 建 嗜 酸 乳 杆 菌 半 乳 糖 苷 酶 基 因 表 达 载 体 并 分 析 其 表 达 蛋 白 的 特 性 和 结 构 。 方 法 从 嗜 酸 乳 杆 菌 目 ＡＴ Ｃ ３ ６中克 隆 ｌ Ｚ基 因 并 构 建表 达 载体 ｐ Ｃ ４５ ａ ｃ ＭＧ３ｅｌｃ 并对 构 建 后 的表 达 载 体 进 行 鉴 定和 表 达 蛋 白进 行 二 维 与 三 维 结 构 分 ６— Ｚ， ａ
・
２１ ２ ９ ・
国际检验 医学杂志 ２１ 年 １ 月第 ３ ０１ １ ２卷第 ｌ ９期
Ｉｔ ａ ｄＮ ｖｍｂｒ ０１Ｖ １ ２Ｎ ．９ ｎ ＪＬｂＭｅ， ｏｅ ｅ ２１，ｏ． ，ｏ １ ３
嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶基因克隆及其pMG36e表达载体的构建
堡鱼塾王些》：至Ｑ！Ｑ垂笪呈！堂笪至Ｑ塑
嗜酸乳杆菌的哑油酸异构酶基因克隆及其 ｐＭＧ３６ｅ表达载体的构建
郎建华赵国芬李志刚郑婷包秋华
摘要：以嗜酸乳杆茵基因组为模板，对亚油酸异构酶基因进行ＰＣＲ，ＰＣＲ产物克隆到ｐＭＤ一１９Ｔ
质粒中，经茵落ＰＣＲ、酶切分析和ＤＮＡ测序鉴定克隆成功后，亚克隆入乳酸茵表达质粒ｐＭＧ３６ｅ，构建 乳酸茵表达载体ｐＭＧ３６ｅ—ＬＡＩ并转化到大肠杆菌ＤＨ５０ｔ中，经茵落ＰＣＲ和酶切分析初步证明表达载
下游引物Ｐ２： ５ｔ—ＡＡＡＧＣＡ’ｒＧＣ７ＩＴＡＧＡＣＴＡＡＡＴｌＴＧＣＴｒＣ一３７。（下戈Ⅱ 线为Ｓｐｈ Ｉ酶切位点）。 １．２实验方法 １．２．１嗜酸乳杆菌总ＤＮＡ的提取
用ＣＡＴＢ法提取。 １．２．２嗜酸乳杆菌ＬＡＩ基因的ＰＣＲ扩增
ＰＣＲ反应条件：９４℃预变性３ ｍｉｎ，循环条件为： ９４℃变性３０ ｓ，４７℃退火４５ ｓ，７２℃延伸２ ｒａｉｎ；循环 ３０轮后，７２℃保温６ ｍｉｎ并终止反应。 １．２．３ ＬＡＩ基因ＰＣＲ产物的克隆及鉴定
克隆菌落ＰＣＲ结果见图２。图２中１、３，４号泳道均
得到一条长约１．８ ｋｂ的特异性条带，与预期的相同；
提取其质粒Ｓｐｈ ｌ、ＳａｌＩ双酶切后，电泳检测结果见
图３。图３中２、３号均为阳－件克隆质粒（ｐＭＤ一１９ｒｒ— ＬＡＩ）经过双酶切后，得到约１．８ ｋｂ和２．７ ｋｂ左右的
片段，与我们插入的片段（１ ７７６ ｂｐ）和质粒ｐＭＤ－１９Ｔ
嗜酸乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）为本实验 室从益生菌酸奶发酵剂中分离出的菌株。Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ １０９，为内蒙古农业大学分子生物实验室保存，用于 质粒ｐＭＧ３６ｅ及其衍生质粒的保存。Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭｌ０９ （ｐＭＧ３６ｅ）为内蒙古农业大学乳品楼生物实验室赠送ｊ １．１．２培养基
嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化及酶学性质研究
ｐ 为 ６ ０ 最适反 应 温度为 ３ Ｈ ．， Ｏ℃。在 ｐ ～８ 间 ， Ｈ６ 之 亚油酸异 构酶 可保持较 高活力 ， 出此 范 围， 活 超 酶
力 明显 下降 ； 酶对 高温敏 感 ，Ｏ℃保 温 ２ｈ 酶 活 力 即变得很 低 ； 油 酸异 构酶 受底 物 Ｌ 的抑 制 ， 该 ５ ， 亚 Ａ 酶
Ｉｏｌｔ ｎ ａ ｄ ｐ ｒ ｉａ ｉｎ ｏ ｉｏｌａ ｅ ｉ ｍｅ ａ ｅ ｆ ｍ ａ ｔｂａ ｉｕ ｃｄ ｐ ｉ ｓ ｓ ａ ｉ ｎ ｕ ｉｃ ｔ ｆＩ ｅ ｔ ｓ ｏ ｆ ｏ ｎ ｏ ｒ ｓ ｒ Ｏ Ｌ ｃｏ ｃ ｌ ｓ ａ ｉｏ ｈｌ ｌ ｕ ａ ｄ ｉ ｚ ｍ ｏ ｏ ｙ ｃ ａｒ ｃ ｅ ｉｔｃ ｎ ｔ ｅｎ ｙ ｓ ｌ ｇ ｈ ａ ｔ ｒｓ ｉ ｓ
ｉｅ ｙ ｔ ｅ ｓ ｂ ｔａ ｅ（ ｔ ｄｂ ｈ ｕ ｓｒ ｔ ＬＡ） ｈ ｐ ｉ ｌｃ ｎ ｅ ｔａ ｉｎ ｏ Ａ ｏ ｈ ｎ ｙ ｓ１ ５ ／ ，ｔ ｅｏ ｔ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｆＬ ｆｒｔ ｅｅ ｚ ｍｅｗａ ． ×１ ～ｇ ｍＬ，ｌ ｍａ ｏ ０ ｉ —
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嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶基因克隆及其pMG36e表达载体的构建
抗 动脉 粥样硬化 、 降低 胆 固醇 、 氧化 、 肥 、 进生 亚油 酸异构酶 。 目前 ， 抗 减 促 有些菌 种的亚油 酸异构酶 已被 长 、 和免疫 反应副作用等优点 。 缓
分 离纯化 。然而 ， 这些 菌种 有些 是厌 氧 的 ， 利于进 不
质粒 中， 经茵 落 Ｐ Ｒ、 Ｃ 酶切 分析 和 Ｄ Ａ测序 鉴定 克隆成功后 ， Ｎ 亚克隆入乳 酸菌表达质粒 ｐ ３ｅ 构 建 ＭＧ ６ ，
乳酸 菌表 达栽 体 ｐ ３ ｅ Ｌ Ｉ ＭＧ ６ — Ａ 并转化 到大肠杆 菌 Ｄ ５ Ｈｃ ￣中，经 菌落 Ｐ Ｒ和酶切 分析初 步证 明表达载 Ｃ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｅｍｐ ｏ ｉ ｈ ｅ ｏｎ ｃ ＤＮＡ ｆＬ ｃｏ ａ ｉｌ ｓ ａ ｉ ｏ ｈ ｌ ｓ ｓｒ ｉ ｓｔ ｅ ｌ ｔ ｆ Ｐ ｓｒ ｃ ： ｌ ｙｎｇ ｔ ｅ ｇ ｎ ｒｉ ｏ ａ ｔｂ ｃｌｕ ｃ ｄ ｐ ｉｕ ｔａｎ ａ ｈｅ ｔｍｐ ａｅ ｏ ＣＲ， ｅ ｔ ｎ ｈ ｓ ｂ ｌ ｎ ｎ ｈ ｕ ｃ ｏ ｉ ｇ ｔ ｅ ＰＣＲ ｒ ｄ ｃ ｎ ｏ ｔ ｅ ｐ ｐ ｏ ｕ ｔｉ ｔ ｈ ＭＤ一１ Ｔ ｖ ｃｏ ．ｗｅ ｓ ｃ ｓ ｆ ｌｙ ｆｎ ｓ ｅ ｈ ｎ ｏ ｕ ｌ ａ ｅ ａ ａｙ ｉ ９ ｅ ｔｒ ｕ ｅ ｓｕ ｌ ｉｈ ｄ ｔ ｅ ｅ ｄ ｎ ｃ ｅ ｓ ｎ ｌｓｓ ｉ ａ ｄ ｔ ｅ ｃｏ ｉ ｇ ｐｒ ｃ ｄ ｒ ｆｅ ｅ ｕｅ ｃ ｎ ｈ ｏ ｉ ｇ ｒ ｇｏ ｎ ｈ ｌ ｎ ｎ ｏ ｅ ｕ ｅ ａ ｒ ｓ ｑ ｎ ｉ ｇ ｔ ｅ ｃ ｄ ｎ ｅ ｉｎ．Ｆ ｒｈ ｒ ｒ ， ｕ ｈ ｂ ｖ ｔ ｕ ｔ ｅ ｍｏ ｅ ｗｅ ｃ ｔｔ ｅ ａ ｏ ｅ ＰＣＲ ｒ ｄ ｐｏ— ｕｃ ｎ ｔａ ｄ ｐＭＧ３ ｅ ｗｉ ｈｅ ｓ ｍｅ ｒ ｓｒｃｉ ｎ ｅ ｚ ｍｅ ６ ｔ ｔ ａ ｅ ｔｉ ｔ ｎ ｙ ，ｗｉｈ ｔｅ ｐ ｐ ｓ ｆｇ ｔｉ ｇ ｔ ｎ ｉ ｅ ｒｎ ｔａｎ ｏ ｈ ｏ ｔ ｈ ｕｒ ｏ ｅ ｏ ｅｔｎ ｈｅ ｅ ｇ ｎ ｅ ｉ ｇ ｓｒ ｉ ｆ Ｌａ ｔｂａ ｉｌ ｃｏ ｃ ｌ ＭＧ ３ ｕｓ １ ６３ ｐＭＧ３ —Ｌ ．Ｔ ｏ ｓｒ ｃ ｉｎ ｏ ｈ ｓｎ ｗ ｅ ｏ ６ｅ ＡＩ ｈｅ ｃ ｎ ｔｕ ｔｏ ｆｔ ｉ ｅ ｒ ｃ ｍｂｉ ｎ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｖ ｃ ｏ ｌ ａ ｎａ ｔｅ ｐ ｅ ｓｏ ｅ ｔｒｗｉ ｌｙ ｌ ｔ ｅ ｂ ｓ ｆｔ ｅ ｓｕｄ ｎ ｏ ｔ ｉｉ ａ ｇ ｎ ｉ ｈ ａ ｔｖ ｉ ｏ ｅ ｃ ａ ｉ ｓ ｍｅ ａ ｅ ａ ｄ ｄ ｖ ｌｐ ｎ ｈｅ ｎ ｗ ｈ ａ ｅ ｏ ｈ ｔ ｙ ｏ ｂ ａｎ ｎｇ ｌｒ ｅ ａ ｄ ｈ ｇ ｃ ｉｅ ｌｎ ｌｎｉ ｃ ｄ ｉｏ ｒ ｓ ｎ ｅ ｅｏ ｉ ｇ ｔ ｅ ｍｉｒ ｂ ａ ｃ ｌｇ ｃ ｌａ ｅ ｔ ｃ ｏ ｉ ｌｅ ｏ ｏ ｉａ ｇ ｎ ． Ｋｅ ｒ ｙ ｗｏ ｄｓ：ｉｏ ｅ ｉ ｃ ｄ ｉｏ ｒ ｓ ｇ ｎ ｌ ｎｎ Ｌ ｃｏ ａ ｉ ｕ ｅｄ ｐ ｉｕ ｌｎ ｌｎ ｅ ａ ｉ ｓ ｍｅ ａ ｅ；ｅ ｅ ｃｏ ｉｇ； ａ ｔ ｈ ｃｌ ｓａ ｉ ｏ ｈ ｌ ｓ ｌ
培养条件对嗜酸乳杆菌发酵产亚油酸异构酶的影响
１ 材 料 与 方 法
１１ 实 验 材 料 ．
１１１菌种 ．．
嗜酸 乳杆 菌 突变株 Ｌ ｃ ａ． ｌ Ｎｂ ，宁波 大学 食品生
物技术实验室保存．
１１ 试 剂 ．． ２
共轭亚油酸标准品（ 纯度 ９ ． ） ｉ ａ ９ ％ ，ｓ ｍ 公司； ０ ｇ 亚油酸 ， 化学纯 ， 上海来泽精细化学品厂 ； 溶菌酶 ， 生化试剂 ，上海源聚生物科技有限公司；正 己烷 ， 色谱纯 ，杭州双林化工试剂厂．
角瓶１ ，摇 床转 速 １０ｒ ｎ ，经发 酵培 养条 件优 化后 其 产量 比优化 前提 高 了 ３ ．％． ０ － ～ ｍｉ ８８ 关键词 ：嗜 酸 乳 杆 菌 ；亚 油酸 异构 酶 ；培 养 条 件
中图分 类号 ：Ｑ ５ ＋ ５ ８． ９ 文献 标识 码 ：Ａ
共轭 亚 油酸（ ｏｊｇｔｄＬｎ ｌｃＡｃｄ，Ｃ Ａ Ｃ ｎｕ ａ ｉｏ ｉ ｉｓ Ｌ ） ｅ ｅ
ｐ Ｈ为 ６０ ．．
１ 方 法 ＿ ３
式 中 ：Ｘ为ＣＬ 浓 度 ， Ｙ为峰 面 积．呈线 性 关系 的 Ａ
ＣＡ Ｌ 浓度范围为 ０ ５ ｇ Ｌ ． ～１ ｍ ‘ ～ ｍ
１ ． 酶 活 力 测 定 ＿５ ３
１． － １产酶培 养 ３
将活化 ｌ ｈ ２ 得到的种子液按 ４ （ ／ ） ％ ＶＶ 的比例接 种于装有 １０ Ｌ ｆ培养基的 ２ ０ Ｌ ０ ｍ ￣＇ ， ／ ４ ｋ ５ ｍ 三角瓶中， 再加入 ０ ６ ． ％的Ｌ 乳化液 ，设 ３组平行样品 ，经 ０ Ａ ３ ℃ 、１０ ｍ ｎ 振荡培养 １ ｈ ０ ２ ｉ ｒ ８ ，测定酶活．
株经化学诱变获得的高产亚油酸异构酶突变株（ 编
号为Ｌ ｃ ｂ ） ａ． １ Ｎ 为发酵试验菌株 ， 对产亚油酸异构酶
亚油酸异构酶在原核生物中的异源表达
亚油酸异构酶在原核生物中的异源表达反10,顺12-共轭亚油酸（t10,c12-CLA）具有抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、减少细胞内脂质积累、调节免疫等生物学功能,作为一种新型食品功能因子在食品和药品行业表现出巨大的市场潜力。
来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶（PAI）能够高效专一地催化亚油酸（LA）异构化为t10,c12-CLA,PAI已在多种宿主中表达,但是异源表达的PAI存在表达量低,酶活力不高的问题,尤其在大肠杆菌中,PAI形成了大量无生理活性的包涵体,严重影响了PAI的应用。
因此,为了解决PAI异源表达的问题,本文采用基因工程手段在大肠杆菌宿主中构建了PAI的促溶表达菌株,研究了载体关键原件启动子和融合标签对PAI 可溶性表达的影响,得到了一株高产可溶性PAI的重组大肠杆菌,并对融合蛋白MBP-PAI进行了分离纯化和酶学性质研究,为解决PAI在大肠杆菌异源表达过程中可溶性蛋白量低的问题提供了新的解决思路。
同时,本文还首次尝试通过枯草芽孢杆菌分泌表达异源蛋白PAI。
研究结果如下:（1）利用同源重组的方法在大肠杆菌中成功构建了含有不同启动子T7、CspA、trc和不同融合标签（His）<sub>6</sub>、Fh8、MBP的重组菌株:E.coli BL21（DE3）（pET24a-Fpai）、E.coli BL21（DE3）（pET24a-Mpai）、E.coli BL21（pCold-Hpai）、E.coli BL21（pCold-Fpai）、E.coli BL21（pCold-Mpai）、E.coli JM109（pTrc-Hpai）、E.coli JM109（pTrc-Fpai）、E.coli JM109（pTrc-Mpai）。
（2）对比研究了融合标签和启动子对目的蛋白PAI表达总量、PAI可溶性表达水平和粗酶液相对酶活的影响。
在PAI表达总量方面:与（His）<sub>6</sub>标签相比,融合标签MBP提高了目的蛋白的表达总量,而由于Fh8基因的密码子偏好性与宿主差异较大,Fh8标签严重影响了目的蛋白的表达,因此无法分析其规律;启动子同样影响了PAI的表达总量,启动子越强,PAI表达总量越高,即T7控制下的PAI表达总量最高,其次是CspA,最次是trc。
嗜酸乳杆菌发酵法制备亚油酸异构酶的研究
粕， 加入一定量助表面潘陛剂和去离子水 ， ３ ￣ ０ 在 ５Ｃ ４ ℃
取率 （ ５ ％）高得 多。 约 １ １ ９ ］
【】 １ 李学琴 ， ， ｏ 魏玲 孟宪锋 ， 超声波在反胶束体 系萃取 大豆蛋白质 等．
的应用研究［ ． Ｊ食品研究与开发 ，０ ６ ２ （ ） ９ ２ 】 ２０ ，７ ７ ： — １ １
采用 Ａ Ｔ助表 面活 性剂屏 辛烷 的 反胶 束体 系 ， Ｏ／ 可 以进行葵花粕蛋 白的萃取 。试验结果证明在其它条
件㈣不变 ，５ｏ ０ｏ超声辅助 下 ， Ｏ ／ 烷反胶束 ３ Ｃ Ｃ Ａ Ｔ异辛
体 系增 溶水量 Ｗ０ 一般在 ３ — ０ 间时 ，葵 花粕蛋 白 ０５ 之
最高萃取率可达 ８．％。 ８ ９
出版社。９ ４ １ ０ １４ １ ９ ：６ — ６
【 赵俊 庭 ， ７ 】 姿源功 ． 反胶束 萃取 技术 同时分 离植 物蛋 白和油 利用
脂［ ． 品科学， ９ ， （ ） ３ ４ Ｊ食 】 １ ７１ ８ ： — ６ ９ ８ ４ 【 程世 贤， 风， 良容 ， 反胶 团提取 大豆 中的蛋 白质和豆油 ８ 】 黄小 罗 等． ［ ． 品科学， ０ ， （ ）４ — ６ Ｊ食 】 ２ ２ ３９：４４ ０ ２ ［ 王立 新， ９ 】 倪元颖， 安效卓． 葵花蛋 白的提取及在食 品 中的应 用［． Ｊ 】 食品工业科技， ９ ， ７ １ １ ２ ：－ ９ ２ １
１ ９ ， ４１ ８ ９ ７ ７ ：８ ４
由表 １ 可知 ，未 添加助表 面活性 剂 ，体 系 ｗ。 为
连接反应体系单位反应体系中产物的...
河南工业大学硕士学位论文嗜酸乳杆菌共轭亚油酸异构酶基因的表达研究姓名：***申请学位级别：硕士专业：农产品加工及贮藏工程指导教师：***20070501图３·３嗜酸乳杆菌ＡＳＩ．１８５４共轭亚油酸异构酶基［］ＰＣＲ扩增结果ａ：标准核酸分子量（Ｄ２０００）；ｂ、ｃ：目的基因ＰｃＲ扩增产物３．１３质粒ｐＥＴ３０ａ（＋）的抽取按２．２．２．３中提取质粒的方法抽提ｐＥＴ３０ａ（＋）质粒后，以Ｏ．７％琼脂糖凝胶进行电泳，结果见图３－４。
质粒是细菌中能够自行独立复制的双链环状ＤＮＡ分子，一般以超螺旋结构存在于细菌中。
在抽提过程中，由于抽提操作会使部分双链环状ＤＮＡ分子的超螺旋结构部分或全部被破坏，从而使超螺旋结构会出现开环结构或线性结构。
因为质粒所处的结构状态不同，在凝胶中电泳所受的阻力也不同，其中，开环结构所受阻力最大，超螺旋结构所受阻力最小，线性结构受阻力则处于开环和超螺旋两种结构之间。
因此，在ｐＥＴ３０ａ（＋１质粒的电泳结果中出现了三条亮带，从上到下依次是开环结构、线性结构和超螺旋结构质粒。
图３－４试剂盒法抽质粒ｐＥＴ３０ａ（＋）日ｇ泳结果ａ：标准核酸分子量（）。
－－ＤＮＡ／ＨｉｎｄＩＩＩ）；ｂ，ｃ，ｄ、ｅ：ｐＥＴ３０ａ（＋）质粒ＤＮ＾３．１．４重组质粒的选取分别将ＰＣＲ扩增后的基因和纯化后的ｐＥＴ３０ａ（＋）质粒用ＮｄｅＩ和ＳａｌＩ两种核酸内切酶进行酶切后，用Ｉ＂４ＤＮＡＬｉｇａｓｅ进行连接。
将连接产物转入大肠杆菌ＥｃｏｉｌＤＨ５ｉｆ，感受态细胞，在含５０ｐｇ／ｍＬ卡那霉素的固体培养基中选择阳性克隆。
次日固体培养基中只生长了一个大小适中的单一菌落，挑取此菌落接种于３ｍＬ液体ＬＢ培养基中，３７℃，２２０ｒ／ｍｉｎ振荡过夜。
次日小量手抽提重组质粒，并且用Ｏ．７％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，以空ｐＥＴ３０ａ（＋）质粒为对照进行重组子的初步筛选。
结果如图３－５。
在重组质粒与空质粒对照电泳图中可以明显地看出，ｃ泳道中重组质粒的分子量比ｂ泳道中的空质粒片段大，初步判断重组质粒很可能为阳性转化子。
嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的研究
嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的研究
曹健;王月囡;王红军;王育军;于海东
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2007(028)001
【摘要】亚油酸异构酶能催化亚油酸转化为具有生理活性的共轭亚油酸.有关该酶活力的测定方法在国内外不同的文献中差别较大,尚没有统一的方法.本文对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的测定方法进行了研究,以期为该酶分离纯化过程中酶活力的测定提供参考.通过单因素试验和正交试验,确定了该酶的最佳酶反应条件为:粗酶液添加量0.10ml,亚油酸0.70ml,Tween-80 2.00ml,反应温度37℃,反应时间3h.【总页数】4页(P155-158)
【作者】曹健;王月囡;王红军;王育军;于海东
【作者单位】河南工业大学生物工程学院,河南,郑州,450052;河南工业大学生物工程学院,河南,郑州,450052;河南工业大学生物工程学院,河南,郑州,450052;河南工业大学生物工程学院,河南,郑州,450052;河南工业大学生物工程学院,河南,郑
州,450052
【正文语种】中文
【中图分类】Q558.9
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瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达
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嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的基因表达调控机制分析
嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的基因表达调控机制分析
陈士华;吴兴泉;张慧;曹健
【期刊名称】《中国粮油学报》
【年(卷),期】2010(025)011
【摘要】对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的启动子区进行了定位,证明该基因为单顺反子结构.分析该酶的代谢途径证明亚油酸异构酶单独处于一条分支途径,无其他的酶与之协同作用.分析四种乳酸菌亚油酸异构酶基因的上游调控区,发现了12个保守位点,可能在亚油酸诱导基因表达调控中起重要作用.确定该蛋白N端无信号肽存在,但在N端25(27)～42位存在跨膜区,取向略微倾向于由外向内.证明嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的密码子偏好性与大肠杆菌的存在一定差异,可能影响亚油酸异构酶基因的表达,并提出了改造方案.
【总页数】4页(P62-65)
【作者】陈士华;吴兴泉;张慧;曹健
【作者单位】河南工业大学,郑州,450001;河南工业大学,郑州,450001;河南工业大学,郑州,450001;中原工学院,郑州,450007
【正文语种】中文
【中图分类】Q71
【相关文献】
1.嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因的克隆与序列分析 [J], 董理;曹健;王育军;王红军
2.嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因表达载体的构建与蛋白特性分析 [J], 邓红艳;贺松;赫兰辉
3.组蛋白乙酰化修饰调控NF-κB驱动的PNPLA3基因表达的机制初探 [J], 许晓;陈芸芝;徐芬;梁华
4.微小RNA-21调控同源性磷酸酶-张力蛋白基因表达在子痫前期发病中的作用机制 [J], 杨慧丽;杨俊娟;李新敏
5.ADPGK-AS1调控miR-1301-3p基因表达影响胃癌细胞增殖和凋亡的机制研究[J], 周鉴基;王山;王太洪
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嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的克隆与表达
嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的克隆与表达曹健;董理;王育军【期刊名称】《华南理工大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2007(035)011【摘要】利用分子生物学方法对嗜酸乳杆菌AS1.1854菌株的亚油酸异构酶基因进行克隆与表达.培养菌体后提取总DNA,用PCR法扩增其亚油酸异构酶基因,再将其克隆到pET30a载体上,转入到大肠杆菌BL21株中表达,在低温下诱导表达出重组蛋白,并用Ni2+金属鳌合层析对重组蛋白进行分离和纯化.通过实验,得到了亚油酸异构酶的基因,成功转入到载体中,表达出了可溶性的重组蛋白,并对其进行了纯化.实验表明,在原核细胞中可以表达出可溶性重组亚油酸异构酶,以200 mmol/L的咪唑洗脱液进行洗脱可以获得目标蛋白.【总页数】5页(P110-114)【作者】曹健;董理;王育军【作者单位】河南工业大学,生物工程学院,河南,郑州,450052;河南工业大学,生物工程学院,河南,郑州,450052;河南工业大学,生物工程学院,河南,郑州,450052【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达 [J], 刘晓华;李慧美;柯颖笑;张凯强;李响敏;李欣;付金衡;李海星2.嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的基因表达调控机制分析 [J], 陈士华;吴兴泉;张慧;曹健3.嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因定向进化研究 [J], 黄亮;宋鹏;尹艳丽;刘娜;陈亮4.嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因的克隆与序列分析 [J], 董理;曹健;王育军;王红军5.嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶基因克隆及其pMG36e表达载体的构建 [J], 郎建华;赵国芬;李志刚;郑婷;包秋华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达
植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达
顾斌涛;郭建军;曾静;聂俊辉;王通;袁林
【期刊名称】《中国饲料》
【年(卷),期】2024()7
【摘要】植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。
结果表明:重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。
重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0~4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。
植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。
上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。
【总页数】5页(P20-23)
【作者】顾斌涛;郭建军;曾静;聂俊辉;王通;袁林
【作者单位】江西省科学院微生物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S816.3
【相关文献】
1.枯草芽孢杆菌植酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其对酶热稳定性的影响
2.嗜酸乳杆菌推定的β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的功能性表达
3.植酸酶基因在家蚕-杆状病毒表达系统中的表达及其酶学特性
4.耐热植酸酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学特性
5.来源于Penicillium sp.C1的水产用中性植酸酶基因在毕赤酵母中的表达及性质研究
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亚油酸异构酶高产菌株的诱变选育及其催化性能的研究
亚油酸异构酶高产菌株的诱变选育及其催化性能的研究共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)具有抗肿瘤、增强机体免疫力、减肥等多项重要的生理功能。
CLA的合成方法主要有化学合成法以及生物合成法。
与化学合成法相比,生物合成法特异性强、产物中的活性异构体含量高。
而如何获得高产亚油酸异构酶的菌株是生物法生产CLA的基础。
本论文以嗜酸乳杆菌作为出发菌株,对其进行ARTP诱变处理,筛选出亚油酸异构酶高产菌株并优化了其产酶条件;研究了突变株的产酶动力学,构建出产酶动力学模型;探讨了影响亚油酸异构酶催化性能的催化体系、反应条件等因素,并对反应条件进行了优化。
通过ARTP诱变处理筛选出一株亚油酸异构酶高产菌株B-5,酶活达到964.4 U/m L,是原始菌株的2.26倍。
研究了碳源、氮源、碳氮比、培养基初始p H、培养时间、培养温度等因素对产酶的影响,并通过响应面实验对产酶条件进行了优化。
最佳碳源为2%的葡萄糖,最佳氮源为2%的牛肉膏,当碳氮比为1:1.5,培养时间为36 h,培养温度为36.4℃,初始p H为5.6时,突变菌株酶活达到1214.1 U/m L,是原始菌株的2.84倍。
对突变株产酶动力学进行分析,研究了突变株生长、基质消耗以及亚油酸异构酶合成的动态变化规律。
用数学拟合的方法构建了突变株的产酶动力学模型,得到了细胞生长动力学方程、基质消耗动力学方程以及亚油酸异构酶合成动力学方程。
使用Origin8.6对其进行非线性拟合,发现这3个方程的预测值和实际观测值误差较小,拟合效果良好,模型能够较好的反映出细胞生长、底物消耗以及亚油酸异构酶积累的变化规律。
研究了磷酸盐反应体系、柠檬酸盐反应体系以及醋酸盐反应体系、反应体系p H、反应温度、时间以及底物浓度等因素对亚油酸异构酶转化LA为CLA的影响。
通过单因素实验,确定了各因素的最佳水平,并利用响应面软件进行了实验设计,得到最佳反应条件为:底物LA浓度为15 mg/m L、反应温度为37℃、反应体系p H为5.0。
嗜酸乳杆菌推定的β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的功能性表达
嗜酸乳杆菌推定的β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的功能性表达潘渠;胡福泉;陈恬;邱岳;王广科;李晋川【期刊名称】《成都医学院学报》【年(卷),期】2009(4)2【摘要】目的在大肠杆菌中诱导表达以嗜酸乳杆菌克隆β-半乳糖苷酶基因lacZ,为研究其酶学特性做准备.方法从嗜酸乳杆菌ATCC 4356中克隆lacZ基因,并构建表达载体pET22b-lacZ-H、pQE31-H-lacZ和pQE31-lacZ,然后在大肠杆菌中诱导表达,并测定表达产物的β-半乳糖苷酶活性.结果无标签的重组嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶LacZ获得了功能性表达,表达量可达2.28 kU/L.而融合His-Tag的重组嗜酸乳杆菌LacZ却失去了β-半乳糖苷酶活性,即使复性也不能恢复.结论克隆表达的成功为该酶的酶学性质研究和可能的应用打下了基础.【总页数】5页(P86-90)【作者】潘渠;胡福泉;陈恬;邱岳;王广科;李晋川【作者单位】成都医学院病原教研室,成都,610083;第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆,400038;第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆,400038;成都医学院病原教研室,成都,610083;成都医学院病原教研室,成都,610083;成都医学院病原教研室,成都,610083;成都医学院病原教研室,成都,610083【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究 [J], 龚月生;刘锦妮;王晶;杨明明;袁新宇2.咖啡豆α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌JM83中可溶性表达、纯化及活性检测 [J], 崔玉;杨军;詹林盛3.扬奇青霉α-半乳糖苷酶agl1基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究 [J], 张波;陈轶群;李志民;李一航;曹云鹤4.α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究 [J], 刁文涛;向凌云;宁萌;王雪妍;马焕;冯菲;陈国参;周伏忠5.德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的非融合表达 [J], 汪川;张朝武;余倩;刘衡川;裴晓方因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
嗜酸乳杆菌细菌素的分离纯化及表面活性剂对其活性的影响1)
嗜酸乳杆菌细菌素的分离纯化及表面活性剂对其活性的影响1)张帅;王金凤;马永强【期刊名称】《中国林副特产》【年(卷),期】2012(000)005【摘要】从本研究室保藏的一株来自于凯菲尔粒的嗜酸乳杆菌培养基质中分离出具有抑菌活性的蛋白组分———细菌素，对该嗜酸乳杆菌所产生的细菌素的分离方法及表面活性剂对其抑菌活性的影响作用进行了研究。
结果表明，嗜酸乳杆菌在添加了油酸的 MRS 培养基中培养16h 后达到产细菌素高峰；对细菌素分离纯化研究包括三个步骤：硫酸铵沉淀、离子交换色谱(IEC)和疏水作用色谱(HIC)。
不同类型的表面活性剂对细菌素的抑菌活性具有不同的影响。
% Bacteriocin which is a kind of protein with antibacterial activity is produced from L actobacillus acidophilus ,and the strain is isolated from kefir grain preserved in the lab .The separation method about bacteriocin and the influence of the different surfactants on the antibacterial activity of bacteriocin is stud -ied .The results show that L actobacillus acidophilus is cultured in MRS medium addind oleic acid after 16h culture ,a peak of the bacteriocin-producing is reached .And The purification method about bacterio-cin includes three operations ,which separately are ammonium sulfate precipitation ,ion exchange chroma-tography(IEC)and Hydrophobic Interaction Chromatography . The different kinds of surfactants may have the different effects on the antibacterial activity of bacteriocin .【总页数】3页(P1-3)【作者】张帅;王金凤;马永强【作者单位】哈尔滨商业大学食品工程学院,哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,哈尔滨 150076【正文语种】中文【相关文献】1.嗜酸乳杆菌细菌素对鲜乳保质期的影响及防腐技术体系的建立 [J], 王莹;赵瑞香;马艳艳;梁新红2.乳酸菌细菌素plantaricin JK的异源表达、分离纯化及抗菌活性 [J], 蒋晗;刘娇;郦萍;顾青3.嗜酸乳杆菌产细菌素的分离纯化研究 [J], 陈静;何连芳;张玉苍4.草鱼肠道细菌素的分离纯化及活性研究 [J], 俞春红;彭宽;史玉婷;孙科军;陈韬5.具有广谱抑菌特性的嗜酸乳杆菌细菌素活性研究 [J], 孙华迪;蔡丽丽;陈晓静;冉军舰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析
嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析吴京;王文文;熊蓉露;吴振;潘道东;曾小群;郭宇星【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2018(039)004【摘要】分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用.为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体pET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Trans etta(DE3)内表达,使用Dabcyl-QALPTTGEE(Edans)探究其酶活特性.结果发现:嗜酸乳杆菌ATCC4356 SrtA(Lap-SrtAΔN48)分子质量为20 kDa左右;Mg2+、Zn2+、Mn2+可提高Lap-SrtAΔN48的转肽能力;Ca2+不会影响SrtAΔN48的活性,明显区别于致病菌;且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性.进一步通过蛋白质同源建模分析发现Lap-SrtA由8 条中心β桶状结构互相折叠而成,属于经典的分选酶结构,Lap-SrtA的活性位点为His137、Cys198、Arg205.【总页数】6页(P76-81)【作者】吴京;王文文;熊蓉露;吴振;潘道东;曾小群;郭宇星【作者单位】宁波大学浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室,浙江宁波315211;宁波大学浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室,浙江宁波315211;宁波大学浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室,浙江宁波315211;宁波大学浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室,浙江宁波315211;宁波大学浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室,浙江宁波315211;南京师范大学金陵女子学院,江苏南京 210097;宁波大学浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室,浙江宁波 315211;南京师范大学金陵女子学院,江苏南京 210097【正文语种】中文【中图分类】Q814.1【相关文献】1.鳗源嗜水气单胞菌主要粘附素基因克隆表达及产物粘附功能分析 [J], 庄培德;杨金先;吴学敏;龚晖;林天龙2.重叠PCR法构建嗜酸乳杆菌分选酶A基因外源打靶片段 [J], 何嘉怡;王文文;吴京;潘道东;吴振;曾小群3.条斑紫菜PyMGST3基因克隆、表达及功能分析 [J], 佟少明;陈禹先;张晶;侯和胜4.中国明对虾FBA基因克隆及其在白斑综合征病毒感染中的表达及功能分析 [J], 史晓丽;孟宪红;孔杰;栾生;罗坤;曹宝祥;曹家旺;陈宝龙5.嗜酸乳杆菌的亚油酸异构酶基因克隆及其pMG36e表达载体的构建 [J], 郎建华;赵国芬;李志刚;郑婷;包秋华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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（０６ Ｙ Ｘ ０ ）河南省教 育厅 高等学校创新人 才培养工 ２０ Ｋ Ｃ ０８ ；
程（ 豫教高［０ ５ １６号） ２０ ］２ 资助项 目 作者简介 ： 曹健 （９ ９ ） 女 ， １６ 一 ， 博士 ， 教授 ， 主要 从事食 品微
对 活性 异构体 进行分 离 ．
一
些 微生 物细胞 产生 的共轭 亚油 酸异构 酶可 以
亚油酸 的酶法 工业 化生产 提供 了参 考 ．
特异性 地催 化 亚 油 酸 转 化 为 活 性 共 轭 亚 油 酸 的 反
应． 因此 ， 利用 生物法 制备共 轭 亚油酸 已成 为今 后共
轭 亚油 酸工业 合成 的发展趋 势 ．
倍 受关 注 ．目前 ， 伊 氏乳 杆 菌 （ ｚ ｔｂｃ ｌ ｅ一 罗 １ｗｏａｉｕ ｒｕ ｌｓ
收稿 日期 ： ０ ６１ —８ ２０ －１０
基金项 目：河 南 省 杰 出 青 年 科 学 基 金 资 助 项 目 （４２０ １０ ）河南省 高校杰 出科 研人 才创 新工 程项 目 ０ １０ ０８０ ；
Ｎ ｎ金属 鳌合层 析对 重组蛋 白进行 分 离和 纯化． ｉ 通过 实验 ， 到 了亚 油酸 异构 酶 的基 因， 得
成 功转入 到载体 中， 达 出了可溶 性 的重组蛋 白， 对其进 行 了纯化． 表 并 实验 表 明 ， 原核 细 在 胞 中可以表达 出可溶 性重组 亚 油酸异构 酶 ， ２０ｍ ｏ Ｌ的咪 唑洗 脱液 进行 洗脱 可 以获 以 ０ ｍｌ ／
酸异构 酶蛋 白， 并对 其进行 了纯化 ， 为早 日实 现共 轭
生理 活性 ， 抗癌 、 粥状 动脉 硬化 、 如 抗 降低胆 固醇 、 抗 氧化 、 肥 、 进生 长等 工 业上通 常采 用碱异 构 减 促 剖．
化法利 用亚油 酸获 得共 轭 亚油 酸 ， 得产 物 是 多种 所
异构体 的混合 物 ， 要 进 一 步采 用 分 子蒸 馏 等 手段 需
（ ｓｈｒ ｈａｃｌ Ｂ２１ ｐ Ｔ ０ Ｅ ｃｅ ｃｉ ｏｉ Ｉ ，Ｅ ３ ａ质 粒 载 体 为 复 旦 大 ｉ ）
学 遗传学 研究 所惠赠 ．
１２ 培养基 ．
培养基 主要 为脱脂 乳培养基 、 Ｓ Ｄ Ｍａ—００ ＭＲ （ ｅ ｎＲ ｇ一 ｓ—ｈｒｅＡ ａ） ａＳａｐ ｇｒ培养基和 Ｌｆ －ｅａｉＬ ） ｕ ａＢ￣ｎ（ Ｂ 培养基． ｉ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
称． 在各 种 异构 体 中 ， 只有 顺 ９反 １ （９ ｔ１１： ） １ ｃ ，ｌ—８ ２
和反 ｌ ０顺 ｌ （ｌ ， １—８ ２ 两种 异构 体 具 有 多种 ２ ｔ０ ｃ ２１ ： ）
究． 随着 嗜 酸乳杆 菌 （．ｃ ｏｈｌ ） Ｃ Ｍ 菌株基 因 Ｌａｉ ｐｉｓ Ｎ Ｆ ｄ ｕ 组全序 列 的测 定 ， 嗜酸 乳杆 菌 亚 油 酸异 构 酶 的性 为 质研究 提供 了更便 利 的条 件． 本 文 中对 嗜酸 乳杆 菌 Ａ １１５ 油 酸 异构 酶 Ｓ ．８４亚 基 因进 行 了克隆 和表 达 ， 到 了可 溶性 的重组 亚 油 得
１ 材 料 与 方 法
１ １ 菌 种 与 载体 ．
嗜酸乳杆 菌（ｚ ｔ ａｉｕ ｃ ｏｈｌ ） Ｓ ． ８４ １ｗｏ ｃ ｌ ａｉ ｐ ｉ ｓ Ａ １ １５ ， ｂ ｌｓ ｄ ｕ
购于 中国科学 院微 生 物所 菌 种保 藏 中心 ． 大肠 杆 菌
在 已发 现 的各 种 具 有 上述 转 化 能力 的微 生物 中 ， 酸菌 以其 食用 安 全 、 于 培养 等 优 点 ， 年来 乳 易 近
ｔ Ｅ 、 物 乳 杆 菌 （ ． ｌｎａｕ Ｊ 短 双歧 杆 菌 ｅ ６ 植 ｄ） ］ Ｌ ｐａ ｔｒｍ） 、
（ ｉｄ ｂｃ ｒ ｍ ｂｅｅ Ｌ 、 酸 乳 球 菌 （ ａｔｃｃｌ Ｂ ｏａｔ ｉ ｒ ）８ 乳 ｆ ｅｕ ｖ Ｊ Ｌ ｃ ｏｃ ｏ ｌ ￣
ｌ ｔ ）９、 疱 丙 酸 杆 菌 （ ｒ ｉ ｉ ｃ ｒ ｍ 口— ａｉ ［ 疮 ｃｓ ｊ Ｐｏ ｏ ｂ ｔ ｉ ｐ ｎ ａ ｅｕ ｃ ｌｓ Ｄ］ ｉ ） Ｏ和其 他 一 些 菌 株 的 亚 油 酸 异构 酶 已经 被 研 ｅ
得 目标 蛋 白．
关键 词 ： 酸乳杆 茵 ；亚 油酸异构 酶 ；基 因克隆 ；重组蛋 白；纯化 嗜 中 图分类号 ：Ｑ ８ ７６ 文献标 识码 ： Ａ
共 轭亚油 酸 （ Ｌ 是 一类 在第 ９与第 １ Ｃ Ａ） １位 、 第 ｌ ０与第 ｌ 或第 １ 与第 ｌ ２位 １ ３位 碳原 子 处含 有 顺 式 或反式 共轭 双键 的各 种 十 八 碳 二 烯 酸 异 构 体 的 通
Ｖ０１ ３ Ｎ ０． １ ．５ １ Ｎ ｏ ｅ ｂ ｒ ２０ ７ ｖ ｍ ｅ ０
（ ｔｒｌ ｃ ｎｅＥ ｉｏ ） Ｎａ ａ Ｓｉ ｃ ｄｔ ｎ ｕ ｅ ｉ
文章编号 ： ００５５ （０７ １－１００ １０－ Ｘ ２０ ）１０１— ６ ５
嗜 酸 乳 杆 菌亚 油 酸异 构 酶基 因的克 隆 与表达 术
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华 南 理 工 大 学 学 报 （自 然 科 学 版 ）
第３ 卷 第 １ ５ １期
２０ ０ ７年 １ 月 １
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｏ ｔ ｏ ｒ ａ ｆ Ｓ ｕ ｈ Ｃｈｉ ａ Ｕｎ ｖ ｒｉ ｆＴｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｎ ｉ ｅ ｓｔ ｏ ｃ ｎ ｌ ｇ ｙ
曹 健 董 理 王育军
（ 河南 工业 大学 生物工程学 院， 河南 郑州 ４ ０ ５ ） ５０ ２
摘
要 ： 用分子 生物 学方 法对嗜酸 乳 杆 茵 Ａ １ １５ 利 Ｓ ．８４茵株 的亚 油酸 异构 酶基 因进行 克
隆与表达 ． 养 茵体后 提 取 总 Ｄ Ａ， Ｐ Ｒ 法扩 增 其 亚 油酸 异构 酶 基 因， 培 Ｎ 用 Ｃ 再将 其 克 隆 到 ｐ Ｔ ０ 载体 上 ， 入 到 大肠 杆 茵 Ｂ ２ Ｅ ３ａ 转 Ｌ １株 中表 达 ， 低 温 下诱 导表 达 出重组 蛋 白， 用 在 并