实验十五尿液淀粉酶活力测定(Winslow)氏法

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在3730分钟恰好能将01淀粉溶液1m1水解指加入碘液后不再呈兰色或红色的酶量定为一个活力单位
实验十五
尿液淀粉酶活力测定 (Winslow)氏法
原理:

临床上通常用 Winslow 氏法测定尿或血清 中淀粉酶活性。该法对淀粉酶活性单位的 规定是:在 37℃,30分钟,恰好能将0.1% 淀粉溶液 1m1 水解(指加入碘液后不再呈 兰色或红色)的酶量定为一个活力单位。
试剂与器材:


1.0.9%NaC1; 2.0.1%淀粉; 3. 碘化钾一碘溶液( 20KI 和 10g 碘溶于 100m1水中,使用前稀释10倍); 4.移液管; 5.试管; 6.恒温水溶锅。
操作:


1. 取 10 支 试 管 , 按 次 序 记 上 号 码 , 各 加 0.9% NaC11 m1。 2. 用 1m1 移液管 加尿液 1m1 于第 一管, 使其与 0.9%;NaC1混合(若尿液中含淀粉酶过多,应 预先将尿液适当稀释)。用移液管吸取,然后 任其流出。反复三次,使全管混匀。 从第一管吸出1m1到第二管中,混匀。吸出1m1 到第三管……依次类推。到第九管吸出1m1弃之。 这样即可获得分别含 有尿液1/2、1/4、1/8……1/。 512 m1 的不同浓度的尿稀释液,第 10 管不加尿 液作为对照管。

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3. 将 10 支试管置冰水溶中,然后从第 10 管起 依次迅速准确加入 0.1%淀粉液 1m1。迅速摇 匀。立即从冰水浴中取出,置 37℃,并记录 时间。注意保持水浴的温度。 4. 保温 30 分钟后,取出各管,。迅速浸入冰 水浴中冷却。然后向各管中加稀碘液 2 滴摇 匀。观察各管的颜色。各试管中出现黄到兰 的色序。黄色表明无淀粉存在,浅红色到紫 色表明有淀粉的水解中间产物。兰色表明有 淀粉或其初期水解产物存在。

计算:选择黄色管中尿液稀释倍数最大的 一管来计算。假设第 5 管为黄色(从第 6 管 起仍有红色或兰色)。已知第5管内含尿液 为 1/32m1 。即 1/32m1 尿液能在 37℃, 30 分 钟水解0.1%淀粉1 m1。所以,1 m1尿液在 同样条件下可水解0.1%淀粉32 m1。即每1 m1尿液中所含淀粉酶的活性为 32个活力单 位。
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