孕马血清促性腺激素的生物学测定
PMSG在肉牛生产中的应用
２ Ｐ Ｇ在 肉牛 生产 和繁 殖上 的应 用 ＭＳ
骡的受胎率来生产高效的Ｐ Ｇ （ ＭＳ 表１） 。
表１ 驴 、马怀不同胎体Ｂ９周血中Ｐ Ｇ －１ Ｊ ＇， ＇ ＭＳ 效价均值
单位 ：小鼠单位／ 泡的发育成熟排卵及黄体生成。对于公牛 ，主要用于治 ｍＬ
疗弱精、死精和性欲不强。
素 溶于 ５ ０ 生理 盐 水 中 ，一 次 性肌 肉注 射 ，如 １ ｄ 双胎的效果等。 —１ ｍＬ ０
内不发情 ，可再注１ ，同时 ，配合用亚硒酸钠维生素 参考文献 次
液３ ｍＬ头 ，效果更佳［ 。 ０ ／ ．
对发情 间隔不足 １ ｄ 或超过２ ｄ ７ ４ 不规则的母牛 ，除 因发情未观察到漏配和卵巢囊肿外 ，主要是由于雌激素 分泌过多引起 。可采取放置Ｃ Ｄ Ｉ Ｒ，抑制雌激素分泌或 肌肉注射Ｐ Ｇ，１ ２ ｄ ＭＳ ８— ３ 可出现发情” 。 对由于夏季 高温 ，母牛营养不 良 ，运 动不足 ，矿 物质 、维 生素缺乏造成 的卵泡成熟度 差 ，卵子受精能 力 弱 ，排 卵迟缓等 卵巢机能 障碍 ，可经子宫颈 内注射
应用外源激 素刺激 ，可促进育成 牛生殖 系统的发 育 ，促 使
Ⅲ
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育成牛发情。如肌 肉注射Ｐ Ｇ １ ０ ＭＳ ０ ０—１５ ０Ｕ ｄ ０ １，４
于卵巢和睾丸的靶细胞受体 ，特异性极强。
Ｆ Ｈ 用于 雌 性动 物 卵巢 ，促进 泡 的发 育成 熟 排 Ｓ 作 月
一一一 ０３３ ．
０ 椰 （ ７ 舭 跏 ７ ●
卵及黄体生成 。对于雄 性动物 ，主要作 用于 睾丸的 曲
实验三、孕马血清促性腺激素效价的生物学测定
PMSG 或实验三、孕马血清促性腺激素效价的生物学测定（FSH的生物测定法）一、实验目的测定PMS（或FSH的活性，掌握该激素的简易效价测定方法。
二、实验原理FSH为垂体促性腺激素，作用于即将达到性成熟年龄的雌性小白鼠，可促进卵巢上的卵泡发育，分泌雌激素。
在雌激素的作用下，又可促进子宫、卵巢及整个生殖器官的发育、增大。
PMSC 因为也含有FSH,因此具有与FSH相同的生物学作用，也能促进性成熟前的小白鼠子宫发育增大。
PMSC在机体内的作用期比FSH长，因此在测试效价过程中，PMS刮作一次注射，而FSH 需经多次注射。
三、实验材料1实验动物健康无伤残的18-23日龄（即将达到性成熟日龄）、体重9-13g的同源雌性小白鼠。
各测试组实验鼠出生日龄相差不得越过三天，体重相差不得超过2g。
2、测定样品PMSG（或FSH、生理盐水。
3、测定器具1ml注射器、4号针头、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管、吸耳球、酒精棉球、剪刀、镊子、搪瓷盘、解剖板、鼠罐和青霉素瓶（稀释瓶）。
四、测试方法1、测试组的确定为了测得精确效价，应先将各测试样品浓度组距加大进行粗测，从而确定样品的大致效价范围，再将测试样品浓度组距减少，以测得样品较为精确的效价，可按下表选择确定测试组。
①PMSG测试组的确定每0.1mlPMSG按下表加入不同量的生理盐水，稀释成不同浓度作为各测试组。
PMSGe释浓度换算小白鼠单位每mIPMSG中加入生理盐水量稀释液中PMSG^度PMSGJ、白鼠单位（Mu/ml）111/1260151/1680191/20100231/24120271/28140311/32160351/36180391/4020047 1/48 2401 / 343 1/44 2202 / 3②FSH 测试组的确定FSH 是瓶装粉剂，故在配制不同浓度的测试组之前，需用一定量的生理盐水稀释成溶液， 测出每ml 溶液中的效价值后，即可换算出该瓶装内FSH 的效价值。
母猪早期妊娠诊断的方法
母猪早期妊娠诊断的方法作者：暂无来源：《江西饲料》 2017年第5期妊娠诊断是母猪繁殖管理上的一项重要内容。
配种后，越早确定妊娠对生产越有利，可以及时补配，防止空怀。
这对于保胎，缩短胎次间隔，提高繁殖力和经济效益具有重要意义。
一般情况下，母猪妊娠后性情温驯，喜安静、贪睡、食量增加、容易上膘，皮毛光亮和阴户收缩。
一般来说母猪配种后，过一个发情周期没有发情表现说明已妊娠，到第二个发情期仍不发情就能确定是妊娠了。
近年来较成熟、简便，并具有实际应用价值的早期妊娠诊断技术主要有以下几个：1 母猪早期妊娠诊断方法1.1 超声诊断法超声诊断法是利用超声波的物理特性，将其和动物组织结构的声学特点密切结合的一种物理学诊断法。
其原理是利用孕体对超声波的反射来探知胚胎的存在、胎动、胎儿心音和胎儿脉搏等情况来进行妊娠诊断。
目前用于妊娠诊断的超声诊断仪主要有A型、B型和D型。
1.1.1 B型超声诊断仪B型超声诊断仪可通过探查胎体、胎水、胎心搏动及胎盘等来判断妊娠阶段、胎儿数、胎儿性别及胎儿状态等。
具有时间早、速度快、准确率高等优点，但价格昂贵、体积大，只适用于大型猪场定期检查。
1.1.2 多普勒超声诊断仪（D型）该仪器可通过测定胎儿和母体血流量、胎动等做较早期诊断。
有实验证明，利用北京产SCD-Ⅱ型兽用超声多普勒仪对配种后15~60d母猪检测，认为51~60d准确率可达100%。
1.1.3 A型超声诊断仪这种仪器体积较小，如手电筒大，操作简便，几秒钟便可得出结果，适合基层猪场使用。
据报道，这种仪器准确率在75%~80%。
试验表明，用美国产PREG－TONEⅡPLUS仪对177头次母猪进行检测，结果表明，母猪配种后，随着妊娠时间增长，诊断准确率逐渐提高，18~20d时，总准确率和阳性准确率分别为61.54%和62.50%，而在30d时分别提高到82.5%和80.00%，75d 时都达到95.65%。
1.2 激素反应观察法1.2.1 孕马血清促性腺激素（PMSG）法母猪妊娠后有许多功能性黄体，抑制卵巢上卵泡发育。
孕马血清促性腺激素
北京华越洋生物提供 QQ:1733351176孕马血清促性腺激素（PMSG ）PMSG 也是一种糖蛋白激素，其特点是含糖量高，约占41～45%，而且唾液酸含量多，因而形成了PMSG 的酸性特点，故在血液中的半衰期可长达40—120小时。
PMSG 分子与垂体促性腺激素一样，也是由α和β亚单位组成，而β亚单位是表现其活性的主要部分。
其分子量为53000。
由于分子不够稳定，高温、酸、碱条件都易引起失效，同时对它的分离提纯工作也较其他糖蛋白激素困难，但是目前通过研究其肽链的编码DNA ，已经推出其α、β两亚基的氨基酸顺序。
1.PMSG 具有类似FSH 和LH 的双重活性，但以FSH 的作用为主，因此有着明显的促卵泡发育的作用，同时有一定的促排卵和黄体形成的功能。
2.对雄性动物具有促使精细管发育和性细胞分化的功能。
关于PMSG 对妊娠母马本身的确切功能和生物学特性．至今还了解不够，尚待深入研究论证。
(四)孕马血清促性腺激素的应用PMSG 是一种经济实用的促性腺激素。
在生产上常用以代替较昂贵的FSH 而广泛应用于动物的诱发发情、超数排卵或增加排卵率(如提高双羔率)；对卵巢发育不全或雄性生精能力衰退等也都可收到一定疗效。
其应用方法和常用剂量列于表2—4。
应该提出的是，在实践中进行诱发发情或超数排卵处理时，发现动物个体对PMSG 的反应性差异很大，有的个体甚至没有反应。
其原因比较复杂，是否与个体生理状态不同，或者不同个体产生不同程度的免疫性反应所致，尚有待进一步探讨。
关于PMSG 与PG 或hCG 等其他激素合用，在胚胎移植中作超排处理的方法、剂量详见有关章节。
(五)孕马全血、孕马血清制备或提取孕马血清促性腺激素的方法编码 品名 规格 单位 北京华越洋生物WX01-1000 孕马血清促性腺激素（PMSG ）1000IU 瓶 北京华越洋生物WX01-5000孕马血清促性腺激素（PMSG ） 5000IU 瓶北京华越洋生物提供QQ:17333511761.孕马全血的制备取500ml玻璃瓶，加入硼砂10g、硫代硫酸钠5g及蒸馏水30ml，在蒸锅中灭菌。
动物繁殖学相关复习内容名词解释1
动物繁殖学相关复习内容名词解释1___睾丸下降：指家畜等哺乳动物雄性个体在出生前后，睾丸从腹腔内经腹股沟管降入阴囊内的生理过程。
2___适配年龄：指种畜适于开始配种繁殖的年龄。
3___母畜的诱发发情：利用外源性生殖激素使不发情或发情不正常的母畜出现正常发情，也叫催情。
4___同期发情：让一群母畜同步发情5___超数排卵：使母畜在一次发情中超常规地发育更多的卵泡，增加排卵数——提高多胎率、生产用于移植的胚胎6___精子发生：指精子在睾丸内产生的全过程，也叫精子生成。
7___精子发生周期：指精细管上皮细胞出现的精子发生序列，即由A1型精原细胞分裂开始，直至精子细胞变成精子这一过程所需的时间。
8enter精细管上皮周期：在曲精细管同一部位或横断面上出现两次相同细胞群的时间间隔。
9___精细管上皮波：精细管上皮波是指在同一时间内生精细胞群沿着曲精细管的纵长排列的状态。
10___射精量：是指公畜一次射出精液的多少，以毫升数表示。
11___精子密度：指单位容积的精液内所含有的精子数目，通常用亿/ml表示。
12___精子活力：指精子运动的能力。
13___精子活率：指在显微镜视野内呈直线前进运动的精子数占精子总数的百分比，但有时也可与“精子活力”通用。
14___精子的“冷休克”（cold shock）：是指精子在缺乏抗冷保护的条件下，受到急剧降温造成的低温打击后，不可逆地丧失正常活动力或生活力的现象。
15___自发性排卵指发育成熟的卵泡自然地发生破裂而排出卵子的哺乳动物排卵类型。
16___诱发性排卵（也称刺激性排卵）指只有受到交配刺激或外源性排卵激素的刺激才发生排卵的哺乳动物排卵类型。
17___发情周期：从一次发情的开始（或结束）到下一次发情的开始（或结束）所间隔的时间。
18___液态精液：指未经冷冻而处于液体状态的精液，包括原精液（新采出的未经稀释的精液）、常温保存的稀释精液和低温保存的稀释精液。
19___冷冻精液：是在超低温条件下进行冻结和保存的固态精液。
反向间接血凝法检测孕马血清中ECG PMSG活性的探讨
２．２直肠探测妊娠日期定为４０—１２０ ｄ，不同天数的大 鼠效价见表２。
表２妊娠１３期与ＥＣＧ／ＰＭＳＧ大鼠效价关系（ＩＵ，ｍＬ）
收稿日期：２００５—０９—２０ 作者简介：陈萸芳（１９２７一），女，研究员。从事各种马血 清生物制品提取及孕１血清促性腺激素的 纯化及质量检测．
万方数据
黑龙江动物繁殖第１４卷第１期２００６年 ＲＩＨＡ法判定标准及结果：以红血球凝集强弱分 级，用“一”、“＋”符号代表。 阴性：一：血球沉于孔底呈点状，周围光滑。＋一：血 球沉于孔底．或中心有白色小点，或周闱不光滑。＋：ＪｆＩＬ 球在孔底沉积面积较大，周围有散在少量凝集。 阳性：２＋：红血球呈薄层凝集，面积较小，边缘 较松散，一般以２＋开始为阳性反应．但本试验中 以２＋ｙ－０为＜２０ ＩＵ／ｍ１．，故以３＋为阳性起点。３＋：红血 球呈薄层凝集．面积比２＋大。４＋：红ＩｌＩＬ球平铺布满整个 孔底，全凝集。５＋及６＋：红血球呈强凝集或皱缩成团， 或随样ｌ铺逐孔稀释度增高仍布满整个孔底。
２
将ＲＩＨＡ判断强弱分级以一至６＋表示，３＋以下是 低效价绀，未达４０ ＩＵ／ｍＬ采血指标。 由表３可见，强凝集５２个样（阳性组），平均６４－４ ＩＵ／ｍＬ，其中８个样与大鼠测定的结果不符合；一至２＋ 者（阴性组）共２２匹马，平均１３．９ ＩＵ／ｍＬ，仅１个样品２ 种方法结果不符合。
３分析与讨论
３．１
注：符号ａ为二种测定万法结果不符合。
本次实验结果说明．ＥＣＧ／ＰＭＳＧ抗体致敏的羊醛 化红血球特异性较强，“｛血样中抗原效价不足时，红血 球凝集为２＋以下的弱反应，反之则增加至６＋。从３＋以 上界定为阳性，以此判断采血界限，得到效价较高的孕 马血清原料。 ３．３可以认为反向问接血凝测ＥＣＧ／ＰＭＳＧ效价的优 点是：（１）敏感性高，只需微量抗体和抗原；（２）迅速，１～
家畜繁殖学实验中马绒毛膜促性腺激素效价测定方法的改进
2.1原理 双抗体夹心法的原理是将特异性抗体结合到固
相载体上形成固相抗体,然后使待测抗原与过量的固 相抗体结合形成免疫复合物，在特定温度下孵育一定 时间后洗涤拍干再加入过量的酶标记抗体，与免疫复 合物中的抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复 合物，加入反应底物显色，根据显色程度计算样品中 抗原的含量。 2.2步骤
间接竞争法的原理是将一定量的抗原包被于聚 苯乙烯微孔板中,加入无关蛋白载体封闭未结合位点, 加入标准品或样品，然后加入酶标二抗（如羊抗鼠免 疫球蛋白）,检测与包被在固相载体上的抗原发生免疫 反应的受检抗体，经孵育和洗涤后,加底物显色。优点 是只变换包被的抗原，便可用同一种酶标抗体建立检
214
现代农业科技2021年第12期
包被:用包被液0.05 mol/L碳酸盐缓冲液（pH值 9.6）稀释抗原至工作液浓度为1~10 滋g/mL，每孔加 100 滋L，4益过夜;次日弃去孔内溶液,用洗涤液洗涤 3次，每次3min，于干净吸水纸上拍干。加样:加一定 浓度稀释的待检样品（同时做空白对照、阴性对照孔 及阳性对照）100 滋L于上述已包被反应孔中,37益温 育1 h,用洗涤液洗涤3次，每次3 min，于干净吸水纸 上拍干。加酶标抗体:于各反应涤3次, 每次3min，于干净吸水纸上拍干。加底物液显色:于 各反应孔中加入现配的3,3,,5,5,-四甲基联苯胺底 物溶液100 滋L,37益温育30 min0终止显色反应:于各 反应孔加入终止液（2 mol/L硫酸溶液）50 滋Lo测定吸 光度渊OD）值:加完终止液之后5 min内将酶标板放在 酶标仪上，测定波长450 nm时的OD值,输出到Excel 中。以标准品浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，生成 标准曲线和直线回归方程,根据公式计算未知样品的 eCG浓度。 3间接竞争法 3.1 原理
孕马血清促性腺激素PMSG的主要作用和功能
孕马血清促性腺激素PMSG的主要作用和功能孕马血清促性腺激素PMSG也称为马绒毛膜促性腺激素。
主要来自妊娠母马子宫内膜杯状细胞。
主要存在于血清中，妊娠后40天左右开始出现，60天达高峰，维持到120天后逐步下降，170天全部消失。
孕马血清促性腺激素PMSG已知在妊娠马属动物(驴、斑马等)都有产生，所以有人称为马属动物绒毛膜促性腺激素(eCG)。
PMSG激素在马以外的物种中有大约4天的生物活性半衰期。
延长的生物活性可以引起卵巢刺激和排卵。
然而，单独使用PMSG通常会导致囊性卵巢疾病，因为不受限制的卵巢刺激和糖分子降低激素的清除率。
由于循环半衰期延长，PMSG比其他垂体激素更有可能被使用。
PMSG仅具有促黄体生成激素样活性，但在其他动物类中，PMSG具有FSH和LH样活性。
孕马血清促性腺激素(PMSG)品种间差异较大。
孕马血清为糖蛋白激素，主要作用和功能有：1、具有与FSH相似的生理功能，促进卵泡发育和黄体形成，可引起母畜超数排卵。
2、对公畜，PMSG促使睾丸的精细管发育和性细胞分化。
在动物繁殖生产和临床上，PMSG常用做FSH的代替品，用于治疗母畜卵巢静止、机能衰退，还可用于超数排卵。
猪的诱导发情常用剂量为750~1000单位；对公畜可治疗性欲不强和生精机能减退。
生产中多与人绒毛膜促性腺激素（hCG）配合使用。
艾美捷代理的孕马血清促性腺激素PMSG是一个复杂的糖蛋白，是从怀孕母马的血清中获得。
这个大小为43-63kDa的蛋白能够补充和替代雄性和雌性体内的促卵泡激素和脑垂体前叶的间隙细胞刺激素。
因此，PMSG –Intervet能刺激雌性卵泡的发育。
孕马血清采集分离操作示范
旨在 研究孕 马 血清采集 与分 离 的有效 血 液渗 透压 ，也不 会破坏 红 细胞导 致
方 法 ，为 提 取 高效 价 、较 高 纯 度 的 发生溶血 。 （２）在 ３８℃水浴箱 内促 使
ＰＭＳＧ成 品 提 供 原 材 料 。
接 血 瓶 中血 液 进 行 均 匀 受 热 ，析 出 不
要 对准母 马妊 娠天 数进行 了解 ．对马
１．２．５ 对采 过 血 的马 进 行 血球
号 及 妊 娠 天 数 进 行 记 录 。
还 输
摘 要 ：孕 马 血 清促 性 腺 激 素 （ＰＭＳＧ） 也 叫 马 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 ．是 从 怀 孕
ｌ＿２．２ 试 血 采 集摸 排好 妊娠 马 匹颈静 脉 血液
孕 马 保 定 之 后 对 颈 部 皮 肤 利 用
注 意 事 项 ：对 采 集 过 血 的 马 匹 须
治疗雄 性生精 能 力衰退 或者 卵 巢发 育 ７５％酒精棉球檫拭与碘伏进行 消毒 ，找 立 即做 血球还 输能 降低损 伤 马匹血 球
不全等 疾病 中也 达到显 著效 果 。本试 准 颈 动 脉 血 管 ，用 采 血 针 头 插 入 ，将 细胞 的程度 ，减少 孕马 死亡率 ，提 升
血清 一加 防腐 剂 、取 样检 测 、无菌试 次观 察 ，直 到 开始 析 出血 清时 取 出 ；
验一人库一 马匹休息一 进入下次采血 。 自水浴 箱 中将离心 瓶取 出之 后放 置 于
１．２ 具 体操 作 方 法
离 心 机 中 ，分 离 速 度 为 每 分 钟 ４ｏ０ｏ
１．２．１ 孕 马 检查
验 旨在 研 究 孕 马 血 清 采 集 与 分 离的 有 胶管 的一 端与针 头链 接 ，另一 端伸 入 采 血 次 数 与 采 血 量 ，提 高 马 匹 免 疫 力 、
实验二PMSG生物效价测定
药品与试剂
PMSG（孕马血清促性腺激素）
01
购自某生物科技公司，规格为1000IU/支，用生理盐水稀释至所
需浓度。
生理盐水
02
用于稀释PMSG和注射使用。
乙醇
03
用于消毒实验器具和动物皮肤。
实验方法与步骤
动物处理
药品注射
观察记录
数据处理
实验前对小鼠进行适应性饲 养，保持环境安静、温度适 宜、自由摄食和饮水。实验
深入了解PMSG
通过生物效价的测定，可以进一步了 解PMSG的生理作用、药代动力学特 性以及与其他生物活性物质的相互作 用。
实验原理
生物效价定义
生物效价是指某一生物活性物质与标准品或参照物质相比 较，在特定生物系统中引起相同生物效应的相对能力。
PMSG生物效价测定方法
本实验采用小鼠超排卵实验方法，通过给小鼠注射不同剂 量的PMSG，观察并记录小鼠的排卵数和黄体数，进而计 算PMSG的生物效价。
生物效价。
03 实验结果与分析
CHAPTER
数据处理与统计方法
数据清洗
统计分析
去除异常值、重复数据等，保证数据 质量。
采用t检验、方差分析等统计方法，比 较不同处理组间的差异显著性。
数据转换
对数据进行标准化或归一化处理，消 除量纲影响。
结果展示与解读
01
02
03
表格展示
将实验数据整理成表格， 包括处理组、对照组、平 均值、标准差等关键信息。
实验二pmsg生物效价测定
目录
CONTENTS
• 引言 • 实验材料与方法 • 实验结果与分析 • 实验结论与意义 • 实验注意事项与改进建议
01 引言
孕马血清标准
孕马血清标准
孕马血清（PMSG）是一种常用的动物用促性腺激素，用于促进动物排卵和改善繁殖性能。
孕马血清的标准因生产厂家和用途而异，但通常会根据其促性腺激素的含量、纯度、生物活性、安全性等方面进行规定。
一般来说，孕马血清中促性腺激素的含量越高，其促排卵效果越好。
同时，孕马血清的纯度也很重要，高纯度的产品可以减少杂质和其他激素的干扰，提高使用效果。
此外，孕马血清的生物活性也是评价其质量的重要指标，活性越高，促排卵效果越好。
在安全性方面，孕马血清应符合相关法规和标准，如无菌、无热原、无有害微生物等。
此外，孕马血清的使用剂量和注射时间应根据具体情况而定，一般建议在兽医指导下使用。
总之，孕马血清的标准是多方面的，包括促性腺激素含量、纯度、生物活性、安全性等。
选择符合标准的孕马血清产品可以提高动物的繁殖性能和生产效益。
六种商品化血促性素的活性成分含量检测和生物学活性分析
DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.05.007收稿日期：2023-03-17作者简介：张洪（1982-），硕士，兽医师，研究方向为生殖激素的开发与应用；宋星星（1996-），博士，研究方向为动物生殖内分泌。
#为同等贡献作者*珣通信作者：李，博士，副教授，研究方向为动物生殖内分泌六种商品化血促性素的活性成分含量检测和生物学活性分析张洪1#宋星星2#韩一啸1汪澎1潘华柱1张佳妮2李珣2*(1吉力生物科技有限公司,浙江宁波315000;2广西大学动物科学技术学院,广西南宁530004)摘要:为了筛选高效诱导母畜发情和排卵的血促性素产品,对6种常见的商品化血促性素产品的活性成分含量及生物学活性进行了对比分析。
采用BCA 蛋白定量试剂盒、SDS-PAGE 凝胶电泳和PMSG ELISA 试剂盒检测6种血促性素的蛋白浓度和PMSG 含量。
通过体内试验探究6种血促性素的生物学活性,将84只7周龄雌性SD 大鼠随机分为对照组(生理盐水)和6种血促性素试验组(即A 、B 、C 、D 、E 、F 组),每组12只,单次皮下给药后,每天2次阴道涂片,连续2周,记录各组大鼠发情周期。
在注射后第72h 对大鼠进行剖检,摘除卵巢并称重,计算卵巢指数。
将卵巢制成石蜡切片,HE 染色后观察卵巢形态变化。
与同类产品相比,F 组血促性素的蛋白浓度、PMSG 的含量显著高于其他组(<0.05)。
与对照组相比,6种血促性素均能使大鼠达到同期发情的效果并能显著延长其发情期时间(<0.05)。
与对照组和同类产品相比,F 组小鼠的卵巢指数和卵泡成熟率最高(<0.05)。
结果表明,活性成分含量最高的血促性素,其蛋白浓度达到0.67mg/mL 、PMSG 含量达到665.56IU/mL ,促进雌鼠发情、卵巢增重和卵泡发育的效果和活性最好。
关键词:血促性素;SD 大鼠;同期发情;卵泡发育中图分类号:S828;S814.4文献标识码:A文章编号:1673-4645(2023)05-0034-06开放科学(资源服务)标识码(OSID ),扫一扫,了解文章更多内容Determination of the Active Ingredient Content and Analysis of the Biological Ac⁃tivity of 6Commercial HemogonadotropinsZHANG Hong 1#,SONG Xingxing 2#,HAN Yixiao 1,WANG Peng 1,PAN Huazhu 1,ZHANG Jiani 2,LI Xun 2*（1Jally biotechnology Co.,Ltd.,Ningbo 315000,China;2College of Animal Science and Technology,GuangxiUniversity,Nanning 530004,China ）Abstract:In order to screen effective blood hemogonadotropins products for efficiant induction of estrus and ovulation in maternal ani-mals,the active ingredients contents and biological activities of 6common commercial hemogonadotropins were comparatively ana -lyzed.BCA protein quantification kit,SDS-PAGE gel electrophoresis and PMSG ELISA kit were used to detect the protein concentration随着我国畜牧业养殖规模的扩大和饲养技术的日益提升，血促性素的需求量也逐步递增。
马凡氏综合征孕期如何检查
马凡氏综合征孕期如何检查马凡氏综合征（Down's syndrome），也被称为21-三体综合征，是一种遗传性疾病，是由于胎儿在受精过程中染色体21三体的异常增加而引起的一系列身体和智力发育异常的疾病。
孕期的马凡氏综合征检查是非常重要的，可以帮助家长及时做出决策，保障胎儿健康。
本文将详细介绍马凡氏综合征孕期的检查方法。
孕期马凡氏综合征检查主要分为两种类型：筛查和诊断。
筛查主要是通过各种方法初步筛选出高风险群体，然后再进行进一步的诊断性检查，确认诊断。
1. 筛查方法：常见的筛查方法有血清学检查、超声波检查和无创产前基因检测。
（1）血清学检查：血清学检查是通过孕妇血液中的两个物质的浓度、组合、比例等进行分析，来判断胎儿是否有马凡氏综合征的风险。
其中最常用的方法是双试验，即结合孕妇的年龄和孕妇血清中的胎儿唐氏综合征标志物，如游离β人绒毛膜促性腺激素(free β-hCG)和孕妇血浆妊娠相关纤维蛋白原(AFP)。
此外还可以通过测定孕妇血中游离雌三醇(α-fetoprotein, AFP)、孕妇一段管否定结合区域(hCG)等来进行综合评估。
（2）超声波检查：超声波检查是检查胎儿形态结构的常用方法，通过评估孕妇子宫内胎儿的大小，形态，心脏，颅内、腹部、四肢等器官的结构以及羊水中的黄体激素水平，来初步判断胎儿是否存在马凡氏综合征的异常征兆。
超声波检查可以进行多次，以及结合其他检查手段进行综合分析。
（3）无创产前基因检测：无创产前基因检测是采用孕妇的血液样本中分离出的胎儿游离DNA来进行分析，从而检测胎儿是否有染色体异常。
这种方法具有高准确性和低风险，可以在孕早期（通常是10到14周）进行，可以检测出孕妇体内是否存在多个染色体异常的情况，不仅仅针对马凡氏综合征。
2. 诊断方法：如果胎儿高风险筛查结果显示存在马凡氏综合征的可能性，进一步的诊断需要进行更为精确的检查，这些检查方法包括绒毛膜活检、羊水穿刺以及胎儿染色体SNP等。
孕马血清促性腺激素的生物学测定
实验五孕马血清促性腺激素的生物学测定一.实验特点实验类型：设计型实验实验类别：专业基础课计划学时：4学时每组人数： 4～5人二．实验目的要求生物学测定法是根据一些动物的靶器官和靶组织对激素反应程度来测定激素含量的方法，是最早应用于激素测定的经典方法，能够直接反应激素的生物活性，也称作激素的生物学效价，其它的测定方法往往以此种方法加以验证。
要求学生通过孕马血清促性腺激素的活性测定，掌握激素的生物学测定方法。
三．实验原理PMSG的生物学测定法是以即将达到性成熟或摘除垂体的小鼠或大鼠，注射含有待测激素样品后，观察其子宫或卵巢增重及卵泡发育等变化。
凡是引起确定的生理变化的最低有效剂量，即相当于一个效价单位（如小鼠单位或大鼠单位）。
母马在妊娠的40天，PMSG开始出现，增长至70天达到顶峰，持续到120天，每升血液中可达7万国际单位以上，然后开始下降，大约在170天时降到几乎测不出的程度。
PMSG 能促进动物卵巢机能，进而引起子宫增生和生长的变化。
以性未成熟的小白鼠子宫增大程度为测定活性的根据，来测定该激素引起小白鼠子宫阳性反应的最低浓度，来进行计算预测定的PMSG样品的活性。
即为能引起未成熟的小白鼠子宫增大一倍PMSG的量称之一个小白鼠单位。
四．实验动物和器材1.同品系20～21日龄，体重10～12g性未成熟的雌性健康小白鼠25只（每一实验教学组）。
2.含PMSG血清样品或稀释的PMSG和灭菌生理盐水。
3.5ml注射器5只，5号小针头5只，试管架1个，1ml、2ml、5ml、10ml吸量管各一支，吸耳球一个，10 ml试管5支，20ml试管二支，剪子，镊子。
五．实验内容步骤1.将25只小白鼠随机分为5组，每组5只，其中4组为实验组，另一组做为对照组。
2.取灭菌后的试管4支，分别加人生理盐水11、2、4、6ml，吸取1ml样品血清或PMSG稀释液加人到第一支试管中，充分混匀。
再取此试管的稀释血清在其他三支试管中各加入2ml，混匀后其血清浓度分别为1/12，1/24，1/36 和1/48。
【doc】孕马血清促性腺激素（PMSG）生物测定方法—小鼠卵巢增重法...
孕马血清促性腺激素（PMSG）生物测定方法—小鼠卵巢增重法...孕马血清促性腺激素(PMSG)生物测定方法～小鼠卵巢增重法和子宫增重法的探讨李湛君柯若伦(中国药品生物制品捡定所100050)l95表文探讨了用小鼠卵鞋增重法和.,显子言增重洼测定孕马血清促性隙激素(PYlSG)生物效价的可厅洼影响田袁及最洼窑验条件.实验墙果证明小鼠卵巢和子宫增重法在一定剂量范围内,剂量的对数弓反应存在直线关系,涮主P~ISG嫂升与太鼠印巢增重甚结接近,小鼠珀幕增重击与1j,鼠子宫增重法比转,前者优于者.孕马血清促性腺激素(PMSG)是FSH和LH的混合物.但以FSH为主,其生物测定方法主要依据FSH和LH的活性.PMSG第二次国际标准品效价协作标定中共采用十二种生物测定方法"I}日本药局方(翦十一改正),英国药典(1988)以大鼠卵巢增重法作为法定方法.我所于1980年首次建立PMSG国家标准品时,也采用此法.由于太鼠来源困难价格高,因此考虑用小鼠.小鼠卵巢增重法或子宫增重浩国内外均曾有报导".我们就效价测定中最佳实验条件,如给药次数,摘取小鼠卵巢或子宫时间等进行了探讨,对比陌种方法优劣,井与大鼠卵巢增重法的生物效价测定结果进行比较.一,材料与方法动物:小自鼠:昆明种,雌性,体重10～12g,本所繁殖场.大白鼠:雌性,体重d0～60g,北医实验动物中心.标准品PMSG第二次国家参考标准品(s2),效价llOOlU/amp.样品:PMSG冻千样品,本所制备(T);PMSG冻干制剂,日本商品(r),PMSG冻干原料,外购(T).方法小鼠卵巢增重法:雌幼小白鼠,体重10～12g,均匀分组,每组10～15只,剂量范围选择在最小剂量能产生卵巢增重,最大剂量增重不达极限溶液以生理盐水或05%CMC配制, 剂距l:0.5.每只小鼠颈部皮下一次注射0.2 ml,给药后一定时间用乙醚麻醉处死,摘取卵巢,剥离干净,吸干组织液,用精密天秤(精确至05rag)称重.小鼠子宫增重法:方法同上,但剂距用l:0.6(或l:0.7),最后摘取子宫称重.大鼠卵奠增重法:按文献,实验设计为(2?2)法或(3?3)法.效价测定结果均按中国药典(1985)量反应平行线测定法(2.2或3.3)进行可靠性测验;可靠性测验通过者计算效价和平均可信限率.=,结果与讨论1.剂量与反应关系,直线性测验小鼠卵巢增重法和小鼠子宫增重法,每次实验设4～6个剂量组,以对数剂量与反应关系作图,进行直线性翅!I验并计算精密度指数值(^=S/b)及回归直线的斜率b值.表1及图1,图2为小鼠卵巢法和小鼠子宫法多次实验结果:经直线性测验,PMSG在一定剂量范围内,对数剂量与反应的直线回归项有非常显着意义(P<0.01),二次曲线回归项及偏离回归项均无显着意义(P>D一05),即直线关系成立.比较二种方法的^值,比较,●;:fI■●ll●,..●196巷壁堑盘查表1小鼠卵簟法和小鼠子宫法PMSG对散剂量～反应直线性涓验避过的涓定结果实验方浩小鼠卵巢珐小鼠子宫法.剂量图l小鼠卵巢法对数瓤量～反应曲线纵坐标:器官重(rag)/小鼠重(g)横坐标IU/只接近,说明二种方法有相近的精密度.小鼠子宫法虽其b值大,反应对剂量的灵敏度高,但反应对其它各种影响因子的敏感性亦高,标准差亦大,故值亦不小.小鼠子宫法直线关系成立的剂量范I目较窄,并受季节等客观条件影响,剂量范围变化比小鼠卵巢法大(图2),因此用小鼠子宫增重法时,最好先作预实验,并且剂距不宜太大.2.相同实验条件下,一次路药与多次给药的比较文献"'测定PMSG效价均用大鼠卵巢增重法,但给药方法不同,前者为一次给药,而后者为连续三天三次给药.我们在相同实验条件下,比较了一次给药与三次给药(每天一次连续三天)方法的优劣,并作它们两个回归系巨2小鼠于宫甚对数剂量～反应曲线[实验1(4月份),x实验2(5月份)▲实验8(6月份)纵坐标:器官重(rag)/小鼠重(g)横坐标tv/只数间的显着性铡验.三次给药时,将PMSG溶于0,5CMC溶液中,一次配成,4℃保存.表2结果表明:小鼠卵巢增重法三次给药比一次给药的精密度指数小,b大,并且b～b间差异有显着性意义,即三次给药的方法不仅回归直线的斜率较大,反应对剂量的灵敏度较高,而且精密度也较好,标准差较小,故小鼠卵巢增重法三次给药优于一次给药.小鼠子宫增重法一次给药与三次给药比较,虽b—b间差异无显着性意义,但值小,即精密度较好,故一次给药的小鼠子宫增重法可能较好.表2PMSG--攻耸药与三次给药结果比较～～∞'帅一一乳只一Ⅲ∞∞围如范量.剂数n一实一.■lI^.●●●3.最佳子宫或卵巢摘取时间的选择小鼠卵巢和小鼠子宫增重法分别给3～4组剂量,在给药后不同时间摘取卵巢或子宫称重,比较给药后第二天(24小时),三,四,五,六天的组织增重情况精密度,回归直线的斜率等.表3说明:小鼠卵巢增重法,给药后第四,五天回归直线的斜率b值较大,精密度指数较小.并且多数情况下第四天b值最大,^ 值最小,第五天次之}而第二,三,六天的回-197?归直线常不成立,个别成立者也是b值最小, 值最大,井与第四天b值问差异常有显着性意义.故认为小鼠卵巢增重法反应高峰在第四天,其反应对齐量的灵敏度最高,标准差最小,精密度最好,摘取卵巢的最佳时同为给药后第四天(72小时).小鼠子宫增重法给药后第四,五天回归直线的斜率b值最大,精密度指数^值最小,而第三,六天b值小,值大,因此选择给药后第四天(72小时)摘取子宫为佳表5耋旨pMSG后不商时间摘取卵巢或子宫的比较宴峻方法编号小鼠卵巢法小鼠子宫浩!摘取组织天数第二天l第三天l簿四天I第五天li,0?230.98P<0.0,5O?44lO?62P~0*050,580.530.6;O.P>0.05第三天0.320.52P>O.02第四天J0.3.1:0.27第五天lo.弛.o.50}P<O.05第二天OoO0ld8?33P<O?Oi;第三天0.072.i9P<o.053第四天Io.45o.37j第五天o.31Io.3gP>O.05第六天0.18l0.78P<0.06第三天J0.51.1.36P>O.05第四天I3.O010.184第五天1.210.d2P>o.o.第六天l0.i;1i.2,5P>O.05第三天J1.3010.d6P>O.05【第四暑I2.30【0.29{5第五天2.i;1J0.23P>O.05第六天l1.15l0.25P>O.054小鼠法与大鼠卵巢法效价锢!I定结果比较.以小鼠9口巢法和小鼠子宫法分别溯定三个PMSG样品的生物效价,并与大鼠卵巢增重法的测定结果进行比较.表4说明小鼠卵巢和小鼠子宫增重怯与大鼠卵巢增重法测定的效价一般比较接近,个别实验有相差较多的,与大鼠法的效价比值, 小鼠卵巢法是0.84—1.05,小鼠子宫法是1.18 ^一1.26,虽与大鼠法间的差异均无显着性意l98如义,但结果偏高:从平均可信限率及精密度指数上都可看出.小鼠法的辐密度均不如大鼠卵趟晶买殓方浩TT￡药物{}析杂志巢法,但我们考虑可通过严格控制动物质量,增加物数等措施加以改进.表4PMsG样品生物效价测定结果'～…一'1_●___..__________-__..●___-_____',.'-__,__-q-一敬数摇.鼠242.{J凳蔷'(213.4—292.J,臣202.7卵巢甚(136.4—298.4)一鼠285.5F宦法9(I95.2～425.3)x鼠642.5}巢一(624.6～1373.3)一677.9卵矍法.(639.～8I7.3)小鼠774.8予喜法4(611.5～885.2)走鼠858?4._翼法'(770.0～580.9)出鼠1084.8F富珐i<925.2—1216.0注;可靠恤f黔均通过【;j犬鼠卵巢法比值'23.9～5I.2:0.14～0.18i2.6～30.810.I2～0.23小鼠卵巢增重法直线关系成立的剂量范围较宽,并比较稳定.易选择剂量进行教价测定;而小鼠子宫增重法呈直线关系的剂量范围较窄,受客观条件影响变化较大,进行效价测定时剂量不易掌握,影响成功率,并且测定结果波动较大.敦价比值偏高,故认为小鼠卵巢法优于小鼠子宫涪虽然我们所测的样品较少,积累的数据有限,但实验结果初步证明小鼠卵巢法有一定的可行性,在特定条件下,可代替大鼠进行效价测定,但尚需进一步完善并积累数据进行考核.关■词:孕马血清促性腺激素;生物测定}小鼠卵巢增重珐:鼠子宫增重弦1.00I参考文献'[1]DRBangham&PatriclaAIWoodward.●Bu]lW1dH|thOrg,85:76I,1956[2]日年菇局方(第十一改正)[8]TheBritishPharmaeopeIa.1988[4]V0nHTrolldenlet:ZbJPharm,120(10):100S.1981[5]吕垒根等l上海畜牧兽医通讯,3(3)l127,I983(本文于l989年6月11日修改回,●●1O(4).1990?199? PreliminaryStudiesintotheBioassayMethodofSerumGonadotrophin(PMSG)MouseOvarianWeightMethod andMouseUterineWeightMethodLiZhan-junKeRuo—lun(Ⅳnti.M』Institute/.rtheControlo/PharmaceuticalottdBiologicalProductsBei]in9)Thispaperi'tlqul'resintothebioassaymethodsofmollseovarianweightMOWanduterine mou5eweightMUWforestimationofpMSG.Thefeasibility,accuracyofthemethodsand theexperimentalconditionsaFeinvestigated.ResultsofthetestsbythewayofMOW artdMUWdemonstratedthatinacertaindoserangethereislinearrelationshipexisting betWeenthelogarithmofdoseaⅡdthereaction.SomesamplesofPMSGaTeestimated hYthemethodsme12tiOI1edahoveandals0byratovarianweightmethod.TheresultB sho,nosigⅡillcant0lifferencesamoⅡgthemHoweve~,MOWseemstobethemethod. Keywords:PMSG.Bioassay;Mouseovarianweightmethod;MouseuterineweightI【l】1Lld荧光法测定聚肌胞含量的研究张培培(中国药品生物河品检定所l000503本文建立了测定聚肌Jj白含量的新方法～荧光洼.用正交实验选择出缓冲蔽的盐(Nac】)浓度为0.5r,反应温度为室温(20℃),反应时INlO分钟为最佳测定条件,含量在2～l2g/ml范围内呈良好的线性关系.变异系数(n=5)小于 5.本文提供的方法简便,快速和实用,比现有的剥定方法专一性更强,有一定的应坍价值.聚肌胞是由单链聚肌苷酸和聚胞苷酸聚合而成的双链多聚核昔酸.是一种免疫增强荆,具有抗病毒的功能"-.』临床用于单纯性疱疹性角膜炎,痘疹性i21腔炎,带状痘疹等I.聚肌胞含量测定目前国内多采用地依酚法….该法是根据样品中核糖含量来确定聚肌胞含量, 其专属性较差,不能区分样品中单链和双链聚核苷酸,并受蛋白质,杂糖干扰..本文试用荧光法测定聚肌胞含量,该法能专一地与双链聚肌胞结合,为聚肌胞含量的测定建立了快。
家畜繁殖学第6讲
前列腺素由子宫进入绵羊卵巢的逆流机制 （记忆）
（五）类似物及其临床应用
15甲基PGF2、-乙基-13- PGF2、PGF1甲酯 氯前列烯醇（cloprostenol）又称情配素
（estrumate），最初由英国帝国化学公司（ICI） 生产，故商品编号为ICI80996。
ICI公司还生产了两种氟前列烯醇 （fluoprostenol），商品编号分别为ICI-81008 和ICI-79939（记忆）
-和-亚基。-亚基激素特异性，与-亚基结合表现其生物 学活性。
分子量:(电泳法）为53000，（还原和烷基化）23000 糖基：中性己糖，包括半乳糖（20.2%）、N-乙酰葡萄
糖胺（18.3%）、唾液酸（9.4%）、甘露糖（6.2%）、N-乙酰 半乳糖胺（3.6%）、岩藻糖（2.4%）等。
水溶液中呈酸性，等电点pH为1.8～2.4 分子不稳定，高温和酸、碱条件以及蛋白质分解酶均可使 其丧失生物学活性。此外，冷冻干燥和反复冻熔可降低其生物学 活性
马对子宫收缩引起的副作用（疼痛）比较敏感，所
以ICI-81008比较适合用于马，故又名配马素
（equimate）。ICI-80996促子宫收缩作用与天然
PGF2相当，比较适合于牛。ICI-79939由于促子宫 收缩作用太强（是天然PGF2的10倍），副作用大， 故现已停止使用
溶解黄体的活性以ICI80996和ICI79939最高，
由胎盘产生的促性腺激素,叫胎盘 激素(NB:考试)（记忆）
PMSG主要存在于孕马血清中，妊娠40天开始出 现，60天达到高峰，持续到120天，尔后下降， 170天消失，由马属动物的子宫内膜杯状结构所 分泌。(记忆）
（二）化学特性
与垂体GTH类似，含糖量（占41%～45%）很高的糖蛋白 质激素。
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实验五孕马血清促性腺激素的生物学测定
一.实验特点
实验类型：设计型实验实验类别：专业基础课
计划学时：4学时每组人数：4～5人
二．实验目的要求
生物学测定法是根据一些动物的靶器官和靶组织对激素反应程度来测定激素含量的方法，是最早应用于激素测定的经典方法，能够直接反应激素的生物活性，也称作激素的生物学效价，其它的测定方法往往以此种方法加以验证。
要求学生通过孕马血清促性腺激素的活性测定，掌握激素的生物学测定方法。
三．实验原理
PMSG的生物学测定法是以即将达到性成熟或摘除垂体的小鼠或大鼠，注射含有待测激素样品后，观察其子宫或卵巢增重及卵泡发育等变化。
凡是引起确定的生理变化的最低有效剂量，即相当于一个效价单位（如小鼠单位或大鼠单位）。
母马在妊娠的40天，PMSG开始出现，增长至70天达到顶峰，持续到120天，每升血液中可达7万国际单位以上，然后开始下降，大约在170天时降到几乎测不出的程度。
PMSG能促进动物卵巢机能，进而引起子宫增生和生长的变化。
以性未成熟的小白鼠子宫增大程度为测定活性的根据，来测定该激素引起小白鼠子宫阳性反应的最低浓度，来进行计算预测定的PMSG样品的活性。
即为能引起未成熟的小白鼠子宫增大一倍PMSG的量称之一个小白鼠单位。
四．实验动物和器材
1.同品系20～21日龄，体重10～12g性未成熟的雌性健康小白鼠25只（每一实验教学组）。
2.含PMSG血清样品或稀释的PMSG和灭菌生理盐水。
3.5ml注射器5只，5号小针头5只，试管架1个，1ml、2ml、5ml、10ml吸量管各一支，吸
耳球一个，10ml试管5支，20ml试管二支，剪子，镊子。
五．实验内容步骤
1.将25只小白鼠随机分为5组，每组5只，其中4组为实验组，另一组做为对照组。
2.取灭菌后的试管4支，分别加人生理盐水11、2、4、6ml，吸取1ml样品血清或
PMSG稀释液加人到第一支试管中，充分混匀。
再取此试管的稀释血清在其他三支试管中各加入2ml，混匀后其血清浓度分别为1/12，1/24，1/36和1/48。
3.用4种浓度的稀释血清各注射小白鼠5只，每只小白鼠腹部皮下注射0.2ml。
要求注射
部位准确，不得外漏，各组小鼠不得混串。
4.另外5只小白鼠按相同剂量注射生理盐水，作为对照组。
5.注射后按常规饲养，待72小时后剖检，并与对照组相比较观察子宫增大情况，每组若
有3只或3只以上的小白鼠子宫呈阳性反应（增大一倍以上），则认为该组浓度为阳性组。
6.将最低的有效浓度血清分母乘5，所得的数值即为每ml血清样品中含有促性腺激素的
小白鼠单位。
六．实验结果
1．所有实验组均为阴性
2．所有实验组均为阳性
第一种情况说明稀释倍数低了，第二种情况稀释倍数高了。
剖检后小白鼠子宫变化记录
七．实验报告要求
认真完成实验报告，写出实验过程和所测得的实验结果并加以分析。