微生物不确定度评定

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食品中菌落总数的测定和不确定度分析

食品中菌落总数的测定和不确定度分析菌落总数是指在特定培养条件下，一定量的样品中培养出的所有菌落的总数。

它可以反映食品样品的微生物污染程度，是食品安全检测中常用的指标之一。

食品中菌落总数的测定方法一般采用平板计数法，但在测定过程中会受到不确定度的影响。

一、菌落总数测定方法1.取样：取适量食品样品，根据国家标准要求在不同的质量级别下取样不同的量。

2. 制备培养基和平板：按照相应的食品行业标准的要求制备好培养基，并按照制备方法制备好平板。

3. 滴接法：将样品滴于平板上，在平板上均匀涂布后置于恒温箱中培养一定时间，然后计算出每个平板上所培养出的菌落数量。

测量结果不可避免地存在误差，因此测量结果带有一定的不确定度。

菌落总数的不确定度主要涉及到两个方面：1.实验误差：包括人为误差、器材误差、操作方法等影响因素。

在实验过程中要尽可能地减少这些误差。

2.样品变异性：同一批食品样品中，不同样品可能存在微生物数量的差异，导致菌落总数的测量结果具有不确定性。

三、不确定度的分析和评估不确定度的分析和评估是检验结果可靠性的重要指标。

按照ISO/IEC 17025标准要求，制定有效的不确定度评估方案，定期进行实验验证，以确保菌落总数测定结果的可靠性。

1.不确定度的计算：应按照GB/T 16161等国家标准制定的方法进行测量误差和样品变异性的计算，并进行不确定度组成的分析和评估。

2.评估结果的有效性：对于不确定度的评估结果应进行合理的统计分析，确定合适的置信度，以提高菌落总数测定结果的可靠度和准确性。

3.改进措施：对于不确定度评估结果存在较大误差的情况，应采取相应的改进措施，以提高测量结果的准确度和可靠性。

四、总结。

食品中菌落总数检测的不确定度评定

分析检测食品中菌落总数检测的不确定度评定刘　黎，徐清溪，肖常国，郑　惠（青岛市黄岛区市场监督管理局，山东青岛 266500）摘　要：本文对标准方法《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》（GB/T 4789.2—2022）的测量不确定度进行了分析与评定。

根据方法的原理和操作步骤建立了相应的数学模型，找出了不确定度的主要来源，计算了每个测量不确定度分量，并对总的不确定度进行了合成。

评价结果表明，培养基、培养温度和时间等是影响测试结果的主要因素，因此相关操作人员需要在试验中注意对各种因素的控制，提高检测结果的准确性。

关键词：不确定度评定；菌落总数；食品Evaluation of Uncertainty in the Detection of Aerobic BacterialCount in FoodLIU Li, XU Qingxi, XIAO Changguo, ZHENG Hui(Qingdao Huangdao District Market Supervision and Administration Bureau, Qingdao 266500, China)Abstract: In this paper, the uncertainty of the determination of the total bacterial count in food by the method of GB/T 4789.2—2022 was analyzed and evaluated. According to the principle and operation steps of the method, a corresponding mathematical model was established to identify the main sources of uncertainty, calculate each measurement uncertainty component, and synthesize the total uncertainty. The evaluation results indicate that culture medium, culture temperature, and time are the main factors that aﬀect the test results. Therefore, relevant operators need to pay attention to controlling various factors in the experiment to improve the accuracy of the test results.Keywords: uncertainty; aerobic plate count; food测量不确定度是评定实验室检测水平的重要指标，常用来表征实验室数据的可靠性，以及评定不同实验室数据间的可比性[1]。

水质检测中菌落总数测定的不确定度评定

水质检测中菌落总数测定的不确定度评定摘要：目的：为了减少实验误差，提高检测的精确度，评定水质检测中菌落总数的不确定度，确定水样的置信区间。

方法：对于某一水样，根据GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》和CCBLAC/AG05附录规定的方法进行检测，采用对数的平均值评定菌落总数的不确定度。

结果：该水样本次检测结果的置信区间为（1400—1700）CFU/ml。

结论：根据本次检测结果的置信区间说明，当菌落总数的离散程度高时，应该采用对数平均值评定菌落总数的不确定度。

关键词：菌落总数；不确定度由于测量值不可避免地会偏离准确值，因此研究不确定度变得有意义，通过不确定度表示被测量真值所处的量程范围。

在近些年来，不确定度在理化检测相对比较成熟，集中。

然而在微生物检测方面对于不确定度的评定相对较少。

因此针对在水质检测中关于微生物检测以生活饮用水为例评定菌落总数的不确定度，同时采用平均值和对数平均值的方法评定菌落总数的不确定度，比较得出结论。

1、原理与方法1.1、测试原理：不确定度定义为表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相联系的参数。

不确定度包括合并标准不确定度和扩展不确定度，通常情况下，不确定度采用扩展不确定度表示。

根据CCBLAC/AG05附录规定进行菌落总数测试要求：每个样品都包含可计算得出数目的微生物；在实验室由不同人员按照规定的测试方法进行一段时间的测试[1]，测试样品是均匀的，每个样品均做平行样，必须由同一测试人员进行操作。

根据GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》定义，菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48小时，所得1ml水样所含菌落的总数[2]。

1.2、测试方法：根据中华人民共和国国家标准GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》进行测试。

对于生活饮用水，菌落总数在适宜计数的范围内，应该以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样和培养基充分混匀，每次检测做一个平行样对照，同时一个平皿倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

食品中菌落总数的测定和不确定度分析

食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中的微生物污染是导致食品质量问题的重要原因之一。

食品中菌落总数是评价食品卫生状况的指标之一，它可以反映食品中的微生物污染程度。

准确测定食品中的菌落总数并分析其不确定度，对于保证食品安全和卫生具有重要意义。

二、理论基础菌落总数是指在一定条件下生长发育的微生物形成的菌落的总数。

通常使用平皿计数法来测定食品中的菌落总数，该方法主要包括以下几个步骤：1、样品制备：将食品样品精确称重，并加入合适的培养基中。

2、培养：将加入样品的培养基倒入培养皿中，倒平并让其凝固。

3、孵育：将培养皿放入恒温箱中，在适宜的温度条件下孵育一定时间。

4、计数：取出培养皿，使用显微镜观察并计数菌落的数量。

不确定度是测量结果与所测量实际值之间的偏差的度量，通常用标准偏差表示。

计算不确定度需要考虑到样品制备、培养、孵育过程中的误差以及人为误差等因素。

三、实验方法2、制备菌落计数平皿：将无菌琼脂糖培养基熔化，并冷却到45-50℃左右，加入适量的样品，充分混合后倒入培养皿中。

3、培养和孵育：将培养皿倒平，并在无菌条件下放置一段时间，直到琼脂糖凝固。

4、计数：将培养好的平皿放置在显微镜下，使用透明计数器或格子计数器对菌落进行计数，并记录结果。

四、结果分析根据平皿计数法所测得的菌落总数结果，计算菌落总数的平均值、标准偏差和不确定度。

标准偏差的计算公式为：s = \sqrt{\frac{\Sigma(x_i-\overline{x})^2}{n-1}}x_i为单次测量结果，\overline{x}为平均值，n为测量次数，\Sigma表示求和。

不确定度的计算公式为：U = k \times sU为不确定度，k为覆盖因子，可以参考标准不确定度表格进行选择。

五、结论通过实验测定了食品中的菌落总数，并对测量结果进行了不确定度分析。

根据实验结果，可以评估食品中的微生物污染程度，为食品安全和卫生提供科学依据。

测定结果的不确定度分析可以评价测量结果的可靠性，并为后续食品质量控制提供参考。

能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定

设备。１．２方法
００５７７４／１＝０．００５７７４。
合成相对标准不确定度为：１．２．１检测依据。食品中微生物学能力验证计划参试指导书，４ｕＪ．ｔ（ｒ）＂＋＂ｉｒｍａ（Ｄ）＂＋ｔｑｔｒｔｌ（Ｋ）＂＋ｔｑｔｔ￣（ＶＧＢ４７８９．２ —２０ｌＯ《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数ｌ＿ｏ０Ｏ９６Ｏ６测定》。实验测得菌落总数对数平均值为ｌｇｘ＝５．２４８８，则检测结果的合成１．２．２实验过程。在无菌的环境下打开西林瓶，将３ｍＬ的稀释溶液加人到西林瓶中溶解，稀释溶液一共有４０ｍＬ。等待溶解完成后，将溶解不确定度为：鞠ｉ — 吣０５０４２
２结果３讨论
一
般测量不确定度的地点为理化性的实验室，虽然相关专家已经提出了测量不确定度的实验要求，但是在具体的实验以及检测工作中，并没有落实下来。通过本次实验可以有效地对自邑力验证进行检测，本次其中，样品菌落的总数为Ｙ，稀释倍数记为Ｋ，在检测稀释度的平的实验中，为了避免实验样品中的琼脂的表面有以弥漫的生长方式生板上检测的聚落数量记为ｘ，在—定的稀释度下的样品的体积记为Ｖ。长出的菌落，因此在琼脂的表面覆盖了一层培养基，另外还进行了直接２．３判定。由于重复１０次检测的菌落总数结果相差较大，因此对倾注法作为对比陛的实验。在琼脂的外部的培养基呈固体状时，对平板根据—定的培养条件进行培养。结合实验结果来观测这两种检测结果取对数后，再计算检测结果对数值的样本标准偏差。按Ａ类进行翻转，评定，根据贝塞尔公式，得到检测结果对数值的样本标准偏差。对比实验可以发现，两种实验的实验结果相差不多，因此本次的实验效

微生物检验中菌落总数的不确定度如何评定

微生物检验中菌落总数的不确定度如何评定在ISO/IEC17025《校准和检测实验室能力的通用要求》中明确指
出实验室出具的检测报告应包含有关评定校准或测试结果的不确定度说明，故对测量结果进行不确定度的评定成为检测实验室的重要内容。

下面是yjbys 小编为大家带来的关于微生物检验中菌落总数的不确定度如
何评定的知识，欢迎阅读。

1 .检验方法
依据GB 4789.2-2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中要求以无菌操作取检样25 g(ml)剪碎放于含有225 ml 灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液中，经振摇或研磨做成1︰10 的均匀稀释样液，按照标准要求制备10 倍系列稀释样品匀液。

根据污染情况的估计，选择2～3 个稀释度，每个稀释度作2 个平皿，每个平皿注入培养
基约15~20 ml，并转动培养皿使混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48 h±2 h。

计数后以同稀释度的各平板平均菌落总数报告。

2. 数学模型
设菌落总数为A，检测结果为X，则A=X CFU/g(ml)。

3 .计算不确定度
3.1 在微生物检验中，样品中细菌分布的均匀性和重复测量带来的不确定度是影响检验结果准确度的主要原因，而B 类不确定度分量对合成不确定度影响较少。

按GB 4789.2-2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中方法，同一样品每个稀释度作两个平衡样，因此可以采用合并样本标准差求检测结果的不确定度见表1。

3.2 从检验结果可知，如直接用贝塞尔公式计算合并样本标准。

关于微生物菌种纯度、活度、方法不确定度的问题说明

微生物问题汇总1、标准菌株纯度和活性作为实验室应该怎么验证？关于微生物菌种这类的标准还没有，每位专家、检验员都有自己的理解。

但是可以明确一下，对于定量试验中的对照菌种，比如总数、霉菌和酵母、乳酸菌、金葡等，必须进行活度的测定，而其他定性试验的菌种，只需进行纯度的验证即可。

首先，对于商品话的的菌种冻存管来说，纯度是没必要验证的，因为随菌附的菌种证明材料就是很好的证实。

而对于野生菌株来说，需要对纯度进行验证，建议采用平板分离纯化，挑取完全单菌落，进行生化试验确证，可保证菌种的纯度。

其次，对于活度的监控需要从菌株保存的一开始就要进行监控，最简单的是刚开始买回来的菌株，活化之后保存10管，一个月之后分别接种10管中的菌，若10管全部存活，则活度为100%。

活度一般应大于90%。

你下面说的这些均是对培养基的验证方法。

也可以侧面反映菌落活性的大小，采用复合验收程序的培养基，对菌种的活性进行验证，仅仅是针对特定的一管菌。

并不是计算活度的方法。

若要准确的计算活性，必须制备已知浓度的菌悬液，涂布平板，进行培养，计算真实浓度和理论浓度差异。

一般记录纯度和存活度就好了。

①目标菌纯度，先活化菌株，在进行平板计数法，选择菌落数最少的平板上的菌全部进行生化鉴定。

②目标菌活性，在做培养基验证时，根据G值来观察，G值越大，说明其活性越好。

③非目标菌纯度，需要验证吗？例如表皮葡萄球菌。

我认为非目标菌只是用来和目标菌进行菌落形态进行对比的，没有必要验证。

如果需要验证，是否可以在营养平板或者TSA平板上进行划线，观察菌落形态是否一致，或有无杂菌。

④非目标菌活性验证，是否可以用该菌的工作菌悬液在TSA 或者营养平板上划16条线，根据G值判断，G值越大，说明其活性越好？2、非常规项目质量控制计划如何做？此部分的控制，建议采用人为污染样品，对方法的灵敏性和稳定性进行验证，从而达到质控的目的。

①蜡样芽胞杆菌：对蜡样芽胞杆菌标准菌株活化，然后对菌悬液做平板计数（定量确定各个稀释度的菌浓度），选择适当浓度的菌悬液的稀释度作为工作菌悬液，然后吸取1ml污染阴性样品为阳性，在按照蜡样芽胞杆菌的国标方法检验，对添加量和检验结果进行比对。

微生物测量不确定度评估报告

0.3069
7
9800
3.991 -0.604
0.3648
8
64000
4.806
0.211
0.0445
9
70000
4.845
0.250
0.0625
10
140000
5.146
0.551
0.3036
平均值 53180
4.595
1.3006
1.2 合成标准不确定度：
u(lg x) S (lg x)
n
2
3
12000
15000
4.079
4.176
4.128 0.00461
4
3200
3600
3.505
3.556
3.530 0.00135
5
4600
4800
3.663
3.681
3.672 0.00016
6
9700
11000
3.987
4.041
4.014 0.00146
求和 0.01665
1.2 样本标准差
k 2.57
U95 k u(lg x) 2.57 0.0372 0.096 1.5 以区间形式表示 lg x j 如下表 1.6 根据 lg x j 计算每一样品的细菌总数所在区间范围
lg x
4.475
lg x 0.096 4.379 4.571
3.914
3.818 4.010
4.128
4.032 4.224
x2 j 。由于是六次不同时间的独立检测，因此采用合并样本方差进行计算。
1.1 检测和计算结果如下
序
检测结果
检测结果对数值

食品中两类致病微生物检测结果不确定度评定

582020/12中国食品工业安全与检测SAFETY AND TESTING肖炜伊犁州检验检测认证研究院新疆伊犁 835000食品中两类致病微生物检测结果不确定度评定用外行话说，不确定度额定值是指不可靠的程度，主要用来表示实验测量结果的可行性程度。

它可以用来测试参与实验的人员、适用的测量仪器和设备、以及具体的实验环境条件等因素对测量能力的水平进行量化。

1实验材料与实验方法1.1材料实验食品从2018年至2019年随机抽检的236批蛋糕和肉制品中抽取。

实验中涉及的食物主要有火腿、烤鸡、蛋糕等不同种类。

[1]BP 计数琼脂:用北京路桥有限公司提供的培养基按照说明书配制培养液，将配制好的培养液倒在平板上。

脑心提取肉汤(BHI)、兔血浆、小斜营养琼脂均由北京路桥有限公司提供，直接用于实验。

生理盐水缓冲液由伊犁州产品质量检验所食品室配制而成。

1.2检测方法1.2.1分析培养基增菌技术目前，在我国食品微生物检测过程中，主要采用选择性培养基和显色培养基两种技术来实现培养基的生长[2]。

值得注意的是，虽然选择性培养基常用于区分不同类型的细菌，但检测结果不能用于准确识别细菌类型，只有通过分型鉴定等方式才能确定是否有相应菌株的存在。

1.2.2沙门氏菌检验在食品病原微生物实验室检测过程中，微生物检测能力的高低直接影响检测结果的可靠性和准确性，是检测质量控制的关键[3-4]。

长期以来，中国食品药品检验所等机构一直以实验室比对计划的形式开展沙门氏菌检测能力验证活动。

在具体的验证过程中，盲样检测过程主要采用《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》（GB4789.4-2016）。

1.2.3金黄色葡萄球菌检验在食品微生物检测过程中，日常采用《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB4789.10-2016)作为检测方法，包括预富集培养、分离培养、菌落形态观察、血浆凝固酶实验等多个实验步骤。

然而，在传统的检测过程中，检测的具体摘要：不确定度评定是测量不确定度的缩写，包括综合标准不确定度、A 类标准不确定度和标准不确定度等多个不确定度。

食品中菌落总数测定不确定度的评定

食品中菌落总数测定不确定度的评定食品中的菌落总数对于食品卫生的保障非常重要。

因此，对菌落总数测定的不确定度评定也非常重要，可以在一定程度上保证食品卫生检测的准确性和可靠性，保障公众的身体健康。

菌落总数的测定是通过培养基培养菌落来计算的。

由于培养基有各种各样的配方，并且不同的微生物会在不同的条件下生长，所以在进行菌落总数测定时需要注意许多方面来减少误差并尽可能准确地评价不确定度。

首先，需要确定测定的样品量和培养基的配制量和浓度。

样品越多，菌落总数测定的误差就越小，但是样品过多也会导致不必要的浪费。

因此，需要根据样品的特性和颗粒大小等因素来确定合适的样品量。

同时，培养基的配制量和浓度也需要根据不同的样品进行调整，以确保微生物可以在培养基上生长，但是过多的培养基浪费资源，还可能导致微生物过度生长，从而使计数不准确。

其次，需要注意培养时间和培养条件的统一。

微生物的生长速率和生长环境会对计数结果产生很大的影响。

放置时间过短会使一些微生物没有完全生长，放置时间过长则会使微生物长成无法计算的复杂形状，所以需要选择一个合适的时间。

同时，温度和湿度等环境条件也需要统一，否则华氏度和摄氏度的转换、相对湿度的变化等因素会造成计数结果的差异。

此外，确保样品的统一性也非常重要。

食品中的微生物来源可能有多种，如果样品采集不统一，就可能导致测定结果出现偏差。

因此，在采集样品时需要注意合理的采样位置和方式，并保证每次采样时拿到的样品是尽可能相同的。

最后，为了评估测定结果的不确定度，需要计算各种误差源的不确定度并进行合并。

不确定度的评价应基于国际标准，比如GUM方法，以确保评价的一致性。

综上所述，菌落总数测定的不确定度评定非常重要，需要考虑到多种因素。

通过减少误差并尽可能准确地评价不确定度，可以提高检测结果的准确性和可靠性，更好地保障食品中的微生物质量和公众的身体健康。

不确定度评定还需要考虑到实验设备和人工误差造成的不确定度。

实验设备的不确定度需要根据不同设备的精度等级来确定，以确保实验设备的准确性。

大肠菌群平板计数法检测结果不确定度的评定

152 食品安全导刊 2017年8月Tlogy科技科技文苑大肠菌群是一组存在于肠道中的与粪便污染有关的细菌，通常用来作为评价食品卫生状况的指示菌。

食品中大肠菌群数量的高低与受粪便污染的程度相关，大肠菌群也可以预示食品中存在肠道致病菌的可能性。

由测量所得的测得值只是被测量的估计值，测量过程中的随机效应及系统效应会导致测量不确定度[1]。

对大肠菌群检测结果的测量不确定度进行评定，能以充分完整的信息表示检测结果，提高大肠菌群检测结果的可信度。

1　不确定度评定方法采用《GB 4789.3-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》[2]中第二法平板法进行检测，主要检测步骤如下：样品制备—10倍梯度稀释—选取2～3个合适稀释度的样品匀液接种—倾注VRBA 平板—计数典型和可疑菌落数—接种BGLB 肉汤—报告结果。

本文对奶粉样品进行大肠菌群人工污染后进行10次重复测定，以此结果为依据，分析不确定度各分量的来源和大小，并参照JJF1059.1-2012《测量结果不确定度的评定与表示》做不确定度评定。

2　各不确定度分量的评定2.1　样品制备过程中引入的不确定度样品制备过程中，可能引入不确定度的因素有样品称量、量筒量取稀释液、均质器均质等。

用均质器进行拍击均质，拍击时间和拍击速度是固定的，可以忽略由此产生的不确定度。

电子天平精度0.1 g，样品称样量25.0 g，检定证书规定的最大允许误差为±0.5 g。

则天平称量的标准不确定度μ（ｍ样）为：用250 mL 量出式量筒量取225 mL 稀释液，制成1︰10的样品匀液。

量筒按JJG196-2006常用玻璃量器的容量允差为±2.0 mL [3]，则量筒量取的标准不确定度μ（ｖ样）为：因此，电子天平和量筒的相对标准不确定度U rel （m 样）和U rel （v 样）分别为：则样品制备过程中产生的相对标准不确定度为：大肠菌群平板计数法检测结果不确定度的评定□ 徐武俊　吕腾飞　李仕祥　刘伟平　江西出入境检验检疫局综合技术中心摘　要：通过对《GB 4789.3-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法平板法中不确定度来源进行分析和计算，得出检测结果的不确定度为U=0.057 54，k=2.26，主要影响因素是样品制备、样品稀释、加样和重复检测，其中重复检测对检测结果不确定度的贡献最大。

菌落总数测定的不确定度评定

菌落总数测定的不确定度评定摘要目的:是为了评定食品中菌落总数测定的不确定度,确定细菌菌落数置信区间。

方法根据GB4789.2-2016对待检食品样品中菌落总数进行计算,计算检验结果的不确定度与样品菌落总数置信空间。

结果测定:结果显示1号样品菌落置信区间为4500～6900CFU/g,2号为3300～5100CFU/g,3号为3700～5700CFU/g,4号为4000～6100CFU/g,5号为3200～4900CFU/g。

所取样品各种不确定度为1.1547 、0.0049、0.0046、0.0089。

结论:检验样本中菌落总数测定的不确定度的评定是一种比较科学的方法,在同类样品菌落总数的检验中进行不确定度评定尤为适合。

关健词:菌落总数;不确定度;评定前言菌落总数即菌落形成单位数。

其检测结果通常以单位重量的菌落数(CFU/g)表示。

测量不确定度是评定测量水平的指标,是判定测量结果的依据,因此,正确评定测量不确定度对客观分析测量结果具有重要意义。

食品中菌落总数含量是衡量食品质量好坏的重要指标之一,因此对其进行测量不确定度的评定也是很重要的。

本文依据GB4789.2-2016《食品微生物学检验菌落总数测定》和JJF1059-1999《测定不确定度评定与表示》[1]来建立该不确定度评定方法,还探讨了其各种不确定度的分量来源。

1材料与方法1.1材料取5份样品，在实验室条件下制备食品样品的均匀液样,采用平板计数琼脂进行培养。

1.2检测方法每份样品分别25g+225mL高温灭菌过的生理盐水中，制成0.1稀释液，吸取1mL该稀释液,然后加入9mL高温灭菌过的生理盐水中,混匀制成0.01的稀释样,以此类推进行10倍递增的稀释。

分别吸取1mL上述制备好的稀释液于无菌培养皿中,倾入15mL降温至46℃的平板计数（PCA）琼脂,混匀，同时制备空白对照样。

待培养基凝固后将培养皿翻转放入36℃的恒温培养箱中培养48小时。

1.3菌落计算与不确定度评定选择稀释度为30～300的平皿菌落，按照GB4789.2-2016操作要求记录下每个平皿的菌落数[2]。

牛乳菌落总数测定的不确定度评定

牛乳菌落总数测定的不确定度评定井丽娟，王云霞，李翠枝，吕志勇，刘丽君*（内蒙古伊利实业集团股份有限公司质量管理部，内蒙古呼和浩特 010110）摘要：对牛乳样品菌落总数的测定结果进行不确定度评定，为检测过程的质量控制提供科学依据。

依据GB 4789.2—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》检测牛乳样品的菌落总数，按照 JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》分析该检测结果不确定度的来源并建立数学模型，然后分别对引入的不确定度分量进行评定，最终合成菌落总数测定的不确定度。

结果表明：牛乳样品菌落总数测定结果的扩展不确定度为0.043 4，结果对数值取值区间为[3.924，4.010]，该样品的菌落总数为8 395～10 233 CFU /mL 。

本方法能够有效评定牛乳菌落总数的不确定度。

关键词：牛乳；菌落总数；不确定度；微生物；食品安全Uncertainty Evaluation for the Determination of Aerobic Plate Count in MilkJING Lijuan, WANG Yunxia, LI Cuizhi, LÜ Zhiyong, LIU Lijun *(Quality Management Department, Inner Mongolia Yili Industrial Group Co. Ltd., Hohhot010110, China)Abstract: In order to provide a scientiﬁc rationale for the quality control in the determination of aerobic plate count (APC) in milk, the measurement uncertainty was estimated. According to the national standard of China (GB 4789.2—2016), APC in samples was detected. The sources of uncertainty were analyzed according to Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement (JJF 1059.1—2012) and a mathematical model for uncertainty evaluation was established. The introduced uncertainty components were evaluated and finally the total combined uncertainty was established by combination of individual components. The results showed that the extended uncertainty for APC quantification in milk samples was 0.043 4. The logarithm of APC was [3.924, 4.010], and from this, APC was calculated to be 8 395–10 233 CFU /mL. In conclusion, this procedure can effectively assess the measurement uncertainty in the determination of APC in milk.Keywords: milk; aerobic plate count; uncertainty; microbiology; food safety DOI:10.15922/ki.jdst.2021.02.005中图分类号：TS252.7 文献标志码：A 文章编号：1671-5187（2021）02-0021-05引文格式：井丽娟, 王云霞, 李翠枝, 等. 牛乳菌落总数测定的不确定度评定[J]. 乳业科学与技术, 2021, 44(2): 21-25. DOI:10.15922/ki.jdst.2021.02.005. JING Lijuan, WANG Yunxia, LI Cuizhi, et al. Uncertainty evaluation for the determination of aerobic plate count in milk[J]. Journal of Dairy Science and Technology, 2021, 44(2): 21-25. DOI:10.15922/ki.jdst.2021.02.005. 收稿日期：2020-11-29基金项目：“十三五”国家重点研发计划重点专项（2017YFE0110800）第一作者简介：井丽娟（1986—）（ORCID: 0000-0001-9659-5309），女，工程师，硕士，研究方向为生物化学与分子生物学。

微生物法测定婴幼儿乳粉叶酸含量的不确定度评估

目前叶酸的测定方法主要有微生物法、高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法、荧光法、电化学法和免疫法等 [6]，其中微生物检验法是应用最广泛、灵敏度较强的方法，该法是多个国家和地区测定食品中叶酸含量的官方指定方法。由于微生物法操作较烦琐，涉及菌种的培养生长、标准溶液的配制、样品的称量、提取和稀释等步骤，且微生物生长不确定性强，影响因素较大，因此测定该方法的不确定度有利于准确对婴幼儿乳粉等食品中叶酸含量指标的准确判定。
分析检测
微生物法测定婴幼儿乳粉叶酸含量的不确定度评估
肖剑，梁美丹 *，张明明，尹玮璐，蒋佳希
（广州市食品检验所，广东广州 510410）
摘要：根据 GB 5009.211—2014《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》的要求对婴幼儿乳粉中叶酸含量进行测定，依据 CNAS-CL01-G003：2018、JJF1059.1—2012 和 GB/Z 22553—2010 对影响检验结果的因素进行评估、分析。结果表明，婴幼儿乳粉样本中叶酸含量为（138.7±19.0） µg/100 g（P=95%，k=2）。经评估得到叶酸的不确定度主要受标准曲线拟合及标准物质称量和稀释的影响。因此，对于非生物影响可定期校准仪器设备，对于生物因素影响，则需建立详细的标准化操作流程，保证试验条件的一致性。
根据叶酸标准品证书的浓度，计算出需称量的标准品的质量，利用十万分之一天平精准称量叶酸标准品 2.03 mg，用氢氧化钠乙醇溶液溶解并定容至 100 mL 容量
本研究参照 CNAS-CL01-G003：2018、JJF1059.1—2012 和 GB/Z 22553—2010 相关标准和规范要求，按照食品安全国

微生物不确定度评定

微生物分析之量测不确定度评估1、引言：由于微生物检测的特殊性，因此该例只讨论了单一样品重复测定菌落总数不确定度的评估。

2、技术说明：该技术说明简单描述了菌落总数测定过程以及单一样品重复测试与其他所依赖的参数的关系。

测定过程；检样做成几个适当倍数的稀释液选择2—3个适宜稀释度，各以1ml分别加入灭菌平皿内每皿内加入适量营养琼脂（36±1°C、48±2h）菌落计数报告计算；做平板菌落计数时，用肉眼观察，在记下平板的菌落数后，求出稀释度的各平板平均菌落总数。

3、不确定度来源和量化；校准（1ml移液管）：根据标准查到A级1ml±0.007 ml移液管的不确定度(假设三角形分布)0.007 ml/√6=0.0028 ml由于该例是同一样品单一重复测试的结果，而由于培养引起的不确定度因素在此忽略。

由于微生物的称量是粗称，故由称量引起的不确定度在此也忽略。

由稀释起的不确定度分量与计数相比在此贡献较小故也忽略。

稀释和培养称量一个样品经过微生物测试后得到下列结果：3.3×1049.8×10³3.0×105 2.0×105 6.5×1049.6×10³5.0×1048.8×1049.0×10³3.5×105由微生物学的角度来看，这些结果的差异性并不大。

然而将这些数值平均后发现会产生以105为单位之不合理偏差。

算术平均值及log平均值所表示出的不同结果如表1所列：表 1由以上数值可得到开log后的平均值等于4.7225 具体计算如表2所列；表 2n (xi-x)2使用公式S=[ ∑]1/2 (1)i=1 (n-1)3.35166S=√ =0.610310-1查表得知于95%信赖区间时t=2.26。

此微生物测试以log的方式表示，2.26×0.6其结果= 4.7225±= 4.7225±0.4361√10这说此结果分布于4.2864及5.1586之间。

食品中大肠菌群微生物不确定度

食品中大肠菌群MPN 法结果不确定度的评定卢春凤邢荣花史方河南出入境检验检疫局技术中心安阳分中心 455000摘要：通过分析影响食品中大肠菌群多管发酵法结果的不确定度来源，建立一种简单的大肠菌群多管发酵法不确定度评定方法。

结果表明，影响食品中大肠菌群多管发酵法结果不确定度的主要因素为取样量的不确定度、稀释倍数的不确定度、加样体积的不确定度、月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤和煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管产气比例产生的不确定度，其中后两者产生的不确定度所占分量比较大。

关键词：食品；大肠菌群；MPN 法；不确定度 1 检验方法依据《GB 4789.3-2010 食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》中第一法大肠菌群MPN 法进行检验，流程如下：25g 样品+225ml 无菌生理盐水+1ml 稀释过的大肠埃希氏菌液 — 10倍系列稀释 — LST 肉汤36o C 培养48h — BGLB 肉汤36o C 培养48h — 计数产气数，查MPN 表报告结果。

2 各分量的不确定度2.1样品制备称量过程中引入的不确定度（A 类）无菌条件下用精度为0.1g 的电子天平称取样品25.0g ，用250ml 的量筒量取225ml 无菌生理盐水加入，根据电子天平检定证书给出的最大允差为0.1，量筒按JJG196-2006常用玻璃量器的容量允差为5ml ，由于按级使用的数字式仪表、测量仪器最大允差误差导致的不确定度属于矩形（均匀）分布，则天平和玻璃容器的标准不确定度分别为： μ（m 样）=31.0g =0.0577gμ（v 样）=30.2m l =1.1547ml相应地它们的相对不确定度分别为： U (m 样)=样样）μ（m m =25gg0577.0=0.0023U (v 样)=样样）μ（v v =225ml g1547.1=0.0051 则该步产生的相对标准不确定度：U (取样)= 22m 样样＋V U U =220051.00023.0＋=0.0056 2.2样品稀释过程中引入的不确定度（A 类）样品10倍系列梯度稀释采用1ml 和10ml 量出式分度吸量管进行。

微生物检定法测定乙酰螺旋霉素片含量的不确定度评定

微生物检定法测定乙酰螺旋霉素片含量的不确定度评定宋玉霞;田妮娜【摘要】目的对《中国药典》(2015年版)微生物检定法测定乙酰螺旋霉素片含量的不确定度进行评定.方法采用二剂量法,通过数学模型对乙酰螺旋霉素的含量测定进行分析,以找出不确定度因素,并进行评定.结果评定结果在置信水平为95％时,包含因子K=2,扩展不确定度:U=K×uc(x)=2×2.8％=6％,本品含乙酰螺旋霉素为(98.4±6)％.结论建立的不确定度评定法适用于微生物鉴定法测定药品中有效成分含量的不确定度分析.评定方法清晰合理,简便准确,适合微生物检定法的不确定度评定.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2017(015)034【总页数】2页(P17-18)【关键词】微生物检定法;乙酰螺旋霉素片含量;不确定度【作者】宋玉霞;田妮娜【作者单位】河西学院,甘肃张掖 734000;兰州市食品药品检验所,甘肃兰州730000【正文语种】中文【中图分类】R978.1乙酰螺旋霉素片是一种广谱抗菌药，可有效抵御由金黄色葡萄球菌、肺炎球菌等引起的感染。

目前报道的其含量测定的方法有紫外分光光度法[1]、管碟法（《中国药典》2005年版）以及比浊法[2]等，但是这些方法存在专属性差、测量结果误差大、操作复杂、耗费时间长等缺点，《中国药典》（2015年版）[3]采用微生物检定法测定其含量。

不确定度是一种表征合理赋予被测量值的分散性，与测量结果相关联的参数[4]。

微生物测定的不确定度主要考虑的是A类评估，相对而言，B类评估的因素较少[5]。

郜振华[6]等对乙酰螺旋霉素片含量测定的不确定度进行评定，但是只对供试品及标准品制备过程，以及微生物鉴定和结果重复性所带来的不确定度进行评定，不确定度分量并不够细化。

为了在测量结果的表达和质量评定等方面更为准确，本实验根据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》对微生物检定法测定乙酰螺旋霉素片含量的不确定度进行了测量和评定，为评价该方法的准确性和可靠性提供依据。

抗生素微生物检定法测定注射用磷霉素钠含量的不确定度分析

抗生素微生物检定法测定注射用磷霉素钠含量的不确定度分析安贤兰;阚朋甲;王宇【摘要】Objective To explore the evaluation method of uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection by using the microbial assay of antibiotics.Methods The source and size of the uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection were evaluated by the method of antibiotic microbiological assay.Results Total synthesis uncertainty u total =100.5% ×urel total=2.5%,according to the confidence probabilityP=0.96,K=1.95,extended uncertainty U=1.95×utotal=4.9%. Fosfomycin Sodium for Injection content determination result was(100.5±4.9)%.Conclusion In the analysis and evaluation of uncertainty,it should be possible to make a close investigation of al sources of uncertainty,so as to prevent the occurrence of omissions.%目的：探讨注射用磷霉素钠含量采用抗生素微生物检定法鉴定的不确定度评定方法。

不确定度评定：微生物检验中菌落总数(实例)

在ISO/IEC17025《校准和检测实验室能力的通用要求》中明确指出实验室出具的检测报告应包含有关评定校准或测试结果的不确定度说明，故对测量结果进行不确定度的评定成为检测实验室的重要内容。

1 .检验方法依据 GB 4789.2-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中要求以无菌操作取检样25 g（ml）剪碎放于含有225 ml灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液中，经振摇或研磨做成1︰10的均匀稀释样液，按照标准要求制备10倍系列稀释样品匀液。

根据污染情况的估计，选择2～3个稀释度，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入培养基约15~20 ml，并转动培养皿使混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48 h±2 h。

计数后以同稀释度的各平板平均菌落总数报告。

2. 数学模型设菌落总数为A，检测结果为X，则A=X CFU/g（ml）。

3 .计算不确定度3.1在微生物检验中，样品中细菌分布的均匀性和重复测量带来的不确定度是影响检验结果准确度的主要原因，而B类不确定度分量对合成不确定度影响较少。

按GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中方法，同一样品每个稀释度作两个平衡样，因此可以采用合并样本标准差求检测结果的不确定度见表1。

3.2从检验结果可知，如直接用贝塞尔公式计算合并样本标准差，由于数据的散发性较大，计算出的合并样本标准差很大，当样本均值较小时其不确定度则会过大，此时可以对上述数据取对数后，计算出样本检验结果对数值的均值和残差，将中间计算结果见表2。

根据贝赛尔公式，可计算出检测结果对数值的合并样本标准差：取置信水平P＝95%，自由度ν＝19，查t分布表得：分布于X±0.043之间。

当检测结果以平衡样结果平均值表示时，相对于对数值的取值再取反对数得其取值区间。

这个取值区间适合于任何一次检测。

3.3例1：3#样品，对数值的平均值为2.708，取值区间为2.665～2.751，取反对数得平衡样平均值的取值区间为462～564 cfu/g（ml），菌落总数的取值区间为460～560 cfu/g（ml）。