男性不育实验诊断方法及临床应用
男性不育实验诊断的现状及意义
男性不育实验诊断的现状及意义暨南大学医学院附属深圳市人民医院（518020，深圳）刘瑜何林世界卫生组织(WHO)对男性不育的定义是：夫妇同居一年以上，未用任何避孕措施，由于男性方面的原因造成女方不孕者。
来自WHO的统计数据表明，世界范围内,男性不育症发生率约占育龄夫妇的15%，这一结果存在明显的地区差异。
有报道显示近年来我国男性不育的发病率呈上升趋势，约占育龄夫妇的10~12%左右。
随着环境污染和性传播疾病等一系列致病因素的存在和加强，不育症发病率将继续递增。
一、男性不育症实验诊断现状男性不育是一个较为复杂的临床综合症。
长期以来人类对男性生殖活动的研究进展缓慢，最近二十年来男性不育症病因诊断技术才真正获得突飞猛进，目前已深入至分子水平。
鉴于男性不育诊断的复杂性，为了提高诊断准确性、改善治疗效果、降低诊治费用，WHO于1978年成立了不育诊断与治疗专题组，制定不育（孕）夫妇检查的标准程序。
先后有25个国家、33个中心参加了研究。
通过对9000多对夫妇的诊治体会，于1993年总结出版了《不育夫妇标准检查与诊断手册》。
2000年又出版了《WHO不育男性检查诊断和处理标准手册》，进一步阐述和规范了男科临床、辅助生殖与实验诊断在男性不育诊断、治疗中的关系与作用。
在不孕不育病因诊断过程中，实验室检查是必要的组成部分，虽然体外受精与配子移植治疗不育已广为应用，但是这些方法都离不开实验室技术。
WHO于1980年出版了《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》，至1999年共出版了四版。
该手册引入了可用于男科实验诊断的最新研究成果，并对各项检测指标方法学进行了规范。
男性不育症结束了过去长期停留在病史、体检和精液常规检查等较低水平的诊断方式，随着精液计算机辅助分析、精子功能检测、精液免疫生化检验、细胞遗传学检查及分子生物学等诊断技术的完善和新技术的问世，男性不育症病因、发病机理得以更全面更深入地认识。
上述诊断技术中尤以精液免疫生化检验发展得最快最成熟，具有十分重要的诊断价值。
(完整版)男性不育诊疗指南
男性不育诊疗指南[概述]一、男性不育的定义世界卫生组织（WHO）规定,夫妇同居1年以上，未采用任何避孕措施,由于男方因素造成女方不孕者，称为男性不育。
男性不育症不是一种独立的疾病，而是由某一种或很多疾病与因素造成的结果.二、病因根据疾病和因素干扰或影响生殖环节的不同，分为睾丸前、睾丸和睾丸后三个环节（表 1）。
表 1 男子不育按生殖环节的病因分类睾丸前病因睾丸性病因睾丸后病因一、下丘脑病变Kallmann氏综合症选择性LH缺陷症选择性FSH缺陷症先天性低促性腺激素综合症二、垂体病变垂体功能不全高催乳素血症三、外源性或内源性激素水平异常雌激素/雄激素过多糖皮质激素过多甲状腺机能亢进或减退一、先天性异常Klinefelter氏综合症Y染色体缺陷纤毛不动综合症隐睾二、感染性（睾丸炎）三、理化因素及环境因素、发热、化疗、放疗、药物、饮食四、全身性疾病五、损伤、手术六、血管因素、精索静脉曲张、睾丸扭转七、免疫性八、特发性不育一、勃起功能和射精功能障碍二、精子运输障碍1、输精管、附睾、精囊发育异常2、尿道上裂、尿道下裂3、后天性输精管道损伤、炎症三、附性腺疾病前列腺炎四、精子活动力或功能障碍五、免疫性六、附睾疾病七、特发性三、诊断分类根据WHO男性不育诊断程序表，男性不育病因诊断可分为16类：1、性功能障碍：包括勃起功能障碍和射精功能障碍及性频率太少或性交时应用润滑剂等其它性问题造成不育。
2、性功能正常，根据精子和精浆检查异常来确定诊断者:(1）男性免疫性不育（2)不明原因不育（3）单纯精浆异常3、具有肯定病因而使精液质量异常的男性不育病因分类（1）医源性因素（2）全身性原因（3)先天性异常(4）后天性睾丸损害(5)精索静脉曲张（6）男性附属性腺感染不育（7)内分泌原因4、其它:表现为精液质量异常,但没有肯定病因的男性不育.(1）特发性少精子症（2)特发性弱精子症（3）特发性畸形精子症(4）梗阻性无精子症（5）特发性无精子症［诊断要点]一、病史与体检1、病史：全面了解家族史、生育史、性生活史和其它对生育可能造成影响的因素。
精子形态学分析在男性不育诊治中的应用
切 相关 ， 精 子 Ｄ 而 ＮＡ 异 常 的 很 难 和 透 明 带 结 合 ， 致 男 性 导 生育力的下降 。 精 子 形 态 与 精 子 活 力 和 活 率 密 切 相 关 ， 有 形 态 正 常 只 的 精 子 达 到 一 定 比 例 时 ， 能 保 证 精 子 正 常 的 运 动 活 力 和 才
全不育 。
近 年 来 ， 子 形 态 与精 子 Ｄ 精 ＮＡ 的 相 关 性 研 究 越 来 越 受 到 人 们 的关 注 ， 静 波 等 ＿ 在 采 用 吖 啶 橙 染 色 方 法 （ ０Ｔ） 孙 ７ Ａ 检 测 精 子 ＤＮ 时发 现 ， 子 ＤＮＡ 的 损 伤 程 度 与 异 常 精 子 Ａ 精
质 ， 而 影 响 到 正 常 形 态 的精 子 ， 成 恶 性 循 环 ， 终 导 致 从 形 最 精 子 膜 破 坏 、 子 死 亡 等 ， 而 导 致 精 卵 难 以 结 合 ， 生 育 精 进 使 力 下降 。 ３ 精 子 形 态 与辅 助 生 殖 精 子形 态 分 析 在 男 性 不 育 症 的诊 断 和 治 疗 中 发 挥 着 越
ｃ ｉ梯 度 离 心 法 。谢 文 燕 ［ 认 为 Ｐ ｒｏ ｏｌ ２ ］ ｅｃ ｎ梯 度 离 心 联 合 上 游 法 优 于 直 接 上 游 法 。优 选 出 的 精 子 可 以更 好 地 为 临 床 服
务。
不同的精子形态 分析 方法 具有 不 同的参考 值 ， 目前 计 算 机 辅 助 精 子 分 析 技 术 （ ＡＳ 检 测 软 件 已 应 运 而 生 ， 使 Ｃ Ａ） 这 精 子 形 态 学 的 分 析 更 准 确 ， 复 性 更 好 。 随着 染 色 技 术 的 重 发 展 和 畸 形 精 子 分 类 体 系 的 形 成 ， 子 形 态 学 分 析 体 系 将 精
染色体异常男性不育实验诊断分析
查 。重 点 检查 双 侧睾 丸位 置 、 积 和质 地 、 体 附睾 、 输
断价值 。染 色体 核型分 析 是诊 断 由于染色体 畸变 引
起 不育 症 的一种 比较 常用 的检查 方法 。国内 的临床
精管和精索静脉的情况 。其 中睾丸体积测量 ：５ ５名 患者 临床 检查 均采 用 Ｐａｅ睾丸模 型 比拟 法测 定 睾 ｒｄｒ
丸体 积 。
资 料显示 ， 有染 色体 检查 指征 的个体 中 ， 常核 型 具 异 的检 出率 为 ２ ２ ．７～１ ．％Ｉ 。国外 资 料显 示 【 ： ５５ １ Ｊ 正 Ｊ 常群 体 的染 色 体 异 常 检 出率 为 ０ ５ 而 在 男 性 不 ． ％， 育 患者 中 ， 约 ６ 大 ％的 不 育 男 性 发 现存 在 染 色 体 核 型异常 ， 精 子 症 患 者 异 常 核 型 发 生 率 为 １ 无 ０—
苏 木素 一 红 （ Ｅ 染色 ， 伊 Ｈ ） 油镜镜 检 （ ０ ）观察 Ｓ ×１ ０ ， ０
一
性不育 ５ 例患者 ， ５ 做染色体异常男性不育实验诊断 分 析 ， 道如 下 。 报
１ 资料 与方法
１０个生 精细 胞和 ／ ０ 或支 持 细胞进行 分 析 。
． ， ・ ０
③遗传学检查 ： 取外周血细胞常规培养制备染 色体 ， 通光 学显 微 镜 下 行 染 色体 核 型 分 析 。做遗 普
１２１ 病 史 采 集 ．．
通 过 《 性 不 育病 史 询 问 表》 男 详
细采 集病 史 ， 括结 婚 时间 、 成熟 、 生活状 况 、 包 性 性 避
孕措 施 、 既往 生育 或 受 孕情 况 、 既往 病 、 尿 系感 染 泌 史 、 伤 、 族 和遗 传 病 史 ， 外 家 以及 以往 药 物史 和 手 术 史等 。
男性不育患者的细胞遗传学分析及荧光原位杂交分析
４ ５ Ｏ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｏ ｆ ａｌ ｍ ｅ ｉ ｎ ｆ ｅ ｒ ｔ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ．Ｄ ｕ ａ ｌ － ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｉ ｎ ｓ ｉ ｔ ｕ ｈ ｙ ｂ ｒ ｉ ｄ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ （ Ｄ － Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ ）ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｅ ｓ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｓ ｅ ｘ －
ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｏ ｓ ｏ ｍｅ ｓ ｐ ｅ ｃｉ ｆ ｉ ｃ ｐ ｒ ｏ ｂ ｅ ｓ ｗ ａｓ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍｅ ｄ ｉ ｎ ２ ０ ａｓ ｃ ｅ ｓ ｏ ｆ ４ ７． Ｘ Ｘ Ｙ．Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ：Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ
ａｓ ｃ ｅｓ （ ０． ２ ） ．Ｏ ｆ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ６ ７ ． ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｘ ￣ ｃ ｒｏ ｈ ｍ ｏ ｅｍ ｓ ｅ ａ ｎｏ ｂ ｒ ｍ ａ ｌ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｂ ｙ Ｄ － Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ ，ｏ ｎ ｅ ｏ ｆ ２ ０ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｏ ｆ ｋ ａ ｒ ｙ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ４ ７ ，
瞰
男性 不 育患 者 的细 胞遗传 学分析 及 荧光原 位杂 交分 析
朱 燕 英 ， 刘 永 章 ， 陶 志 华 ， 戴 美 洁
（ １ ． 温卅Ｉ 医学院第一附属 医院 实验诊断 中心 ，浙江 温卅Ｉ ３ ２ ５ ０ ０ ０； ２ ． 温Ｊ Ｊ Ｊ Ｉ Ｉ 医学院 生命科 学院 ，浙江 温
Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈｉ Ｐ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ ｍ ａ １ ｅ ｉ ｎ ｆ ｅ ｒｔ ｉ １ ｉ ｔ Ｙ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ
不育男性精浆_精子乳酸脱氢酶活性检测及其临床意义
中国优生与遗传杂志 2011 年第 19 卷第 9 期
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不育男性精浆 /精子乳酸脱氢酶活性检测及其临床意义
刘雅峰，欧建平，钟依平，徐艳文，苗本郁，李 洁，周灿权 （ 中山大学附属第一医院生殖医学中心，广州 510080）
摘 要： 目的 探讨精浆及精子中乳酸脱氢酶同工酶 X （ LDH － X） 活性与男性不育的关系。方法 采用聚丙烯酰胺
3. 精浆及精子 LDH － X 活性检测 采用聚丙烯酰胺凝 胶电泳后进行全谱酶染色，分光光度法测定 LDH － X 活性， 见参考文献［3］。
4. 统计学处理 应用 SPSS11. 0 软件完成统计操作，两 组间均值比较采用 t 检验。
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中国优生与遗传杂志 2011 年第 19 卷第 9 期
凝胶电泳、全谱酶联染色等方法检测精浆、精子中的 LDH － X 活性并计算其比值； 按照 WHO 人类精液实验室手册要求对
精液进行常规分析。结果 83 例不育组精浆 LDH － X 活性 （ 826. 0 ± 47. 3U / L） 与 40 例生育组 LDH － X 活性 （ 614. 0 ± 22. 1U / L） 比较有统计学差异 （ P ＜ 0. 01 ） ，同时其精子 LDH － X 的活性 （ 8. 40 ± 3. 50mU /106 ） 则小于生育组 （ 15. 8 ± 10. 8mU /106 ） ，差异也具有统计学意义。不育组、生育组精浆 / 全精子中 LDH － X 的比值比较差异具有显著性 （ P ＜ 0. 01） 。
男性不育实验诊断检测项目基本内容及意义
男性不育实验诊断检测项目基本内容及意义暨南大学医学院附属深圳市人民医院（518020，深圳）刘瑜何林随着基础研究的深入，与男性不育相关实验检测项目愈来愈多，内容涉及形态学、免疫学、生物化学及分子生物学等多学科领域。
在这些繁冗的检测项目中究竟哪些最具诊断价值以及如何正确运用这些检测项目来进行不育症的病因学诊断，是长期困扰男性不育实验诊断临床应用的技术难题。
现将当今较为成熟、有良好应用价值并获得国际专家学者广泛认可的实验检测指标介绍如下：一、静止性生殖道感染检测指标精液中的泌尿生殖道上皮细胞、前列腺细胞、生精细胞和白细胞形态在湿片状态下是无法区分开的，它们统称为圆细胞（Round cells）。
只有通过特殊检查才能将白细胞与其他类型圆细胞区别开，从而达到判断感染是否存在的目的。
精液白细胞过氧化物酶(Leukocyte Peroxidase)染色、精液白细胞群(Leukocyte subpopulations)定量和精浆弹性蛋白酶(Elastase)定量是目前用于精液感染性检测的常用指标。
其中前二者是WHO推荐指标，后者是近几年被国内外学者广泛研究认可的检测指标。
精液白细胞过氧化物酶染色、精液白细胞群定量主要用于判断白细胞精子症，精液白细胞数大于1×106/ml即可确诊。
但二者在诊断准确性上是有差别的。
过氧化物酶染色只能检测到精液中分泌过氧化物酶的中性粒细胞，不能检出精液中所有白细胞，故假阴性率高。
而白细胞群定量是迄今为止最准确可靠的白细胞精子症检测方法，可检测出精液中所有类型白细胞。
精浆弹性蛋白酶定量检测的是白细胞抗炎效应复合物。
精液中弹性蛋白酶浓度与白细胞量不一定总是成正比。
有研究表明，精液弹性蛋白酶浓度与精液中白细胞（过氧化物酶法检测）呈良好相关性。
精液白细胞浓度>1×106/ml时，精浆弹性蛋白酶浓度均>1000ng/ml。
但当精液白细胞浓度<1×106/ml时，亦有一些标本精浆弹性蛋白酶浓度>1000ng/ml[1]。
男性不育症患者的血清抑制素B水平的研究分析
男性不育症患者的血清抑制素B水平的研究分析摘要：目的分析男性不育症患者测定血清抑制素B水平的临床意义及价值。
方法择取我院在2016年7月至2017年7月间接诊的53例不育症患者组成A 组，另按患者疾病情况将其分为A1组（非梗阻性29例）、A2组（梗阻性24例），另择取我院同期55例已正常生育的男性组成B组，分别对各组男性进行血清抑制素B水平的检测，比较各组血清抑制素B水平。
结果A组患者与B组健康男性比较，A组血清抑制素B水平明显较低，差异具有统计学意义（P<0.05）；A1组与A2组比较，A1组血清抑制素B水平明显低于A2组（P<0.05）。
结论血清抑制素B水平检测可以作为男性不育症患者鉴别诊断的一项重要指标，值得临床推广应用。
关键词；不育症；血清抑制素B水平；研究分析男性不育症是一种临床常见的男性生殖功能障碍，根据生育能力分为绝对不育（无精子症）和相对不育（精子数量少或精子活力低等），按性器官病变部位可分为睾丸前性、睾丸性和睾丸后性。
男性不育的原因比较复杂，临床应予以高度重视。
抑制素B是一种糖蛋白激素，在男性体内主要由睾丸支持细胞分泌。
因其可以较为准确的评价男性睾丸的生精功能，因此，现已成为男科临床检测的重要指标之一[1]。
此次我院检测了53例男性不育症患者的血清抑制素B水平，并与同期55例已正常生育的男性血清抑制素B水平进行了比较，进一步的研究了血清抑制素B水平在男性不育症临床诊断中的应用价值，现报道如下。
1资料与方法1.1一般资料：择取我院在2016年7月至2017年7月间接诊的53例男性不育症患者组成A组，该组全部患者婚后性生活正常并未采取有效避孕措施，同时排除了女性不孕可能。
入选患者中无精子症37例、少精子症11例、弱精子症4例、精液参数正常1例。
按疾病类性将A组患者分为A1组，29例非梗阻性患者，患者年龄24岁到49岁不等，平均年龄（32.1±1.3）岁；A2组，24例梗阻性患者，患者年龄23岁到47岁不等，平均年龄（31.83±1.6）岁。
男性不育症的实验室诊断新进展
可 以生 育 。这 样 的分 析 主 观 性 很 大 ， 且 对 生 育 力 而 的 判 断 很 不 准 确 。 目 前 对 精 液 常 规 分 析 多 行 Ｃ Ａ， 判 的参 数更 细更 广 。Ｃ Ａ 是 利 用 录 象机 ＡＳ 评 ＡＳ 或摄 象 机 和计 算 机 视 屏 技 术 产 生 的新 技 术 ， 通 过 可 录象机 或摄 象 机 与显 微 镜 连 接 ， 定 和 跟 踪 个 体 精 确
使对 男性 不 育 机 制 的认 识 更加 深 刻 、 面 ， 为男 性 全 亦 不育 的诊 断和 治疗 打 开 了新 的一 页 。
１ 精 液 常规 分析
术 、 克 隆抗 体 的免 疫 细胞 化 学技 术 、 式 细胞 仪等 单 流 也 常 被使 用 ， 因其 需特 定 的 仪器 设 备 ， 对 检测 人 但 且 员 的要求 较 高 ， 其 难 以常 规 开展 。 使 生精 细 胞 的检 查 主要 用 于 诊 断无 精 子症 ， 区 以 分 阻塞 性 无精 子 症 和 非 阻 塞 性 无 精 子 症 ， 可 判 断 亦 非 阻 塞性 无 精 子症 病 人 的 生精 细胞 阻滞 阶 段 。非 阻
计 算 机技 术 等 的 迅 速 发 展 ， 男 性 不 育症 的 诊 断 手 对 段也 日新 月异 ， 的诊 断技 术 如荧 光 原 位 杂交 、 学 新 化 发光 分 析 、 疫组 织 细 胞 化 学 、 酸 分 子 杂 交 、 种 免 核 各 Ｐ Ｒ技 术等 ， 的仪 器 设 备 如 计 算 机 辅 助 精 液 分 析 Ｃ 新
子细胞 的活动 ， 并将所获得的电子信号输入计算机 ，
通过 分 析 给 出各 种 参 数 ， 而对 精 子 密 度 、 率 、 从 活 活
生殖激素的测定及临床应用
生殖激素的测定及临床应用生殖激素在人类的生殖健康和疾病中起到了非常重要的作用。
因此，测定生殖激素的水平在临床医学中是非常必要的。
本文将介绍一些常用的生殖激素的检测方法，并讨论生殖激素在不同临床情况下的应用。
生殖激素的检测方法生殖激素包括促性腺激素、雌激素和睾酮等。
测定这些激素的水平需要采用不同的检测方法。
1. 促性腺激素 (FSH) 和 luteinizing hormone (LH)促性腺激素 (FSH) 和 luteinizing hormone (LH) 是人类卵巢和睾丸的最重要的激素，参与了调控排卵和生殖的过程。
测定这两种激素的水平可以为确诊某些疾病提供帮助，包括不孕症和多囊卵巢综合症。
测定FSH和LH的方法通常是通过血液检测，通过检测患者血液中这两种激素的浓度来确定其水平。
这可以在诊所或实验室中进行。
2. 雌激素雌激素是一种在女性体内产生的激素，参与了调控月经周期、性诱导和生殖功能。
测定血液中雌激素的水平可以为确定多种疾病，如骨质疏松症和多囊卵巢综合症等提供帮助。
测定血液中雌激素的水平也可以帮助女性评估其生殖健康。
测定血液中雌激素的方法主要包括酶联免疫分析 (ELISA) 和放射免疫分析 (RIA) 等方法。
3. 睾酮睾酮是一种在男性体内产生的激素，参与了男性性特征和生殖功能的发展。
测定血液中睾酮的水平可以帮助确定男性性功能障碍和不育症。
测定血液中睾酮的方法包括质谱分析和酶免疫分析等。
生殖激素在临床应用中的作用在临床应用中，生殖激素的水平通常与某些疾病的诊断、治疗和预后有关。
以下是一些最常见的应用场景。
1. 不孕症不孕症在男性和女性中都非常常见。
测定血液中FSH和LH的水平可以帮助确定不孕症的病因。
例如，女性血液中FSH和LH的水平显著增加，可能表明她们正经历更年期或卵巢功能失调。
2. 多囊卵巢综合症多囊卵巢综合症是一种常见的生殖障碍疾病，可能导致月经紊乱、不孕、面部毛发增多等症状。
测定血液中FSH，LH和雌激素的水平可以帮助确诊此疾病。
精子形态在男性不育诊断中的临床应用
精子形态分析在男性不育诊断中的临床应用闫小梅，王希平，叶丽燕（江门市五邑中医院 检验科，广东 江门 529000）摘要：目的 探讨精子形态染色技术在男性不育诊断中的临床应用。
方法 已生育健康男性精液标本对照组40例、不孕组男性患者精液200例，精液经处理后涂片,用WHO 推荐的改良巴氏染色法对精子进行形态染色,计数正常及异常形态精子,并计算精子正常形态的百分率和多重精子缺陷指数。
结果 对照组精液标本中精子正常形态率为40.85%,不孕组精子正常形态率为10.53%,显著低于对照组,两组相比有极显著性差异（P<0.01）。
结论 精子形态染色在临床男性不育的诊断中占有重要地位。
精子形态学染色对男性不育患者的诊治有很大帮助,有助于临床为不孕患者选择助孕方式,为有不良孕产史夫妇查找病因,作为临床诊治的依据。
关键词：改良巴氏染色法；精子形态学；男性不孕 中图分类号：R 675.3 文献标识码：B 1677年VAN LEEUWENHOEK 首先描绘并报导了人类精子形态，1930年Gary 首次提出人精子形态在精子穿透宫颈粘液过程中起重要作用，这一报道揭开了精子形态学研究的序幕后，开展了精子形态学的研究。
1 材料和方法1.1观察对象22-45岁男性精液。
生育组40例，不育组200例。
1.2试剂染液：(1)市售染剂Diff-QlIik 精子快速染色试剂盒购自广州友宁公司；(2)实验室自配。
固定液:无水乙醇与乙醚按1:1比例混合。
乙醇，苏木精，酸性乙醇，Scott 溶液，橙黄G6，EA-50，存入棕黑色瓶中使用。
1.3方法1.3.1染色方法 待精液液化后，将精液滴于洁净玻片上，推成薄片。
(1)参照试剂盒说明书进行；(2)自然干燥后，固定液固定5-15min。
依次浸入乙醇，苏木精染液，酸性乙醇，Scott 溶液，乙醇，橙黄G6，乙醇， EA-36染液，乙醇，最后油镜下观察。
计数200个精子，按下列标准对精子形态进行分类，并分别记录其结果。
浅析男性不育症精液的临床检验
浅析男性不育症精液的临床检验（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）男性不育症同其他疾病的诊断一样，临床检验仍然是男性不育症诊断的重要内容，从中可以得到很多信息和资料，以有助于诊断、治疗的选择和预后的估价。
根据目前男科学的情况，应作出极大努力来提高男科学的诊断水平。
这些检验方法归纳起来可分下列几类。
1精液常规分析和CASA精液常规分析对大部分男科学实验室和医院检验室来说是了解男性生育力的主要检测项目，也具有一定的实用价值，但以下几方面值得引起注意。
1.1要严格规定禁欲时间严格的禁欲时间是精液常规分析资料有无参考价值和资料有无可比价值的重要先决条件。
因禁欲时间的长短不但能影响精子的数量，而且也会影响精子的活动力及精子的其他参数的精确性。
一般规定为3~5天，笔者认为作为精确的科学资料或要衡量治疗的效果，则应更严格，如规定禁欲时间为5天。
但有不少情况是根本不考虑这一因素，或禁欲时间相差甚大。
1.2要注意精液标本的采集精液标本采集完整与否会明显影响精液标本分析的结果，因此精液标本的采集一定要严格，医生要给病员必要的说明和方法指导，提倡手淫法采精，采精宜在实验室内进行，并要有一良好的采精环境。
标本收集瓶不仅应消毒，而且大小应有一定规格，瓶口不宜太小。
1.3精液常规分析要有严格的操作方法和认真的工作态度精液常规分析不是一个很难掌握的技术，但不严格操作和不认真的工作态度，所测结果会很不正确，有时甚至可把精子数完全正常的精液标本误诊为无精子症。
1.4要科学评价精液分析结果精液常规分析结果有两种情况：一种是完全正常；另一种是精液常规结果呈现或轻或重、或多或少的异常。
要科学地分析和评价这些结果，不能由于精液常规正常便得出该男子具有生育能力的结论，因为精液常规所能反映的参数是有限的，这时应继续采用更先进的检测方法以发现可能存在的异常，这实际上涉及到所谓的原因不明性男性不育症。
D__文件编辑_男性不育症实验诊断病例讨论(2005深圳)
问题：该男病人可供进一步选择的检测项目？
可供选择的检测项目
精子核蛋白组型转换 精浆弹性蛋白酶（感染性检测） 精子膜表面抗体
检测结果
精子核蛋白组型转换：44%（<30%） 精浆弹性蛋白酶：28ng/ml（<290ng/ml） 精子膜表面抗体：3%（<10%）
对核蛋白组型转换异常的正确理解：
部份病人可以通过治疗纠正。
分析
常用的检测项目： 精液乳酸脱氢酶X同工酶（LDH-X） 精子低渗膨胀试验 精浆弹性蛋白酶（感染性检测） 可供选择的检测项目： 精子膜表面抗体（MAR）
检测结果
精浆LDH-X: 109 U/L(248-1376U/L); 精子LDH-X: 1.48 mU/106精子(10.96-32.36 mU/106精子) ; 精浆/精子LDH-X: 0.64 (0.21-0.56 ); 精子低渗膨胀试验(HOS): 56% (>60%) 精浆弹性蛋白酶: 55.8 ng/ml (<290ng/ml); MAR: 2% (<10%)
无论进行任何检测项目的精液分析,精液 标本的留取始终是最基本和最关键的因素之一。 它直接关系到病因分析的正确性.
病例5
某男，32岁，长期低精液量。体检：第二性 征正常，双侧睾丸、附睾、阴茎、输精管均无明 显异常。染色体核型分析未发现异常, 血激素检 测正常.精液检测结果如下： 精液量: 1.6ml, 不凝固, pH6.6, 精子密度49.2 ×106/ml. 问题: 分析此低精液量病因需要检测哪些精液指标？
若弱精因素共同作所致。
病例8
许某，男，36岁，多年不育，睾丸、附睾、 阴茎、输精管、精索均无明显异常。多次检测精 液为少弱精子症。职业货车司机，长期习穿紧身 裤，2004年4月11日CASA检测结果如下： 精液量3.3ml, 液化时间30min, pH7.4,精子密 度:8.9×106/ml, a级精子5.4%, b级精子5.3%, c级 精子2.7%.
男性免疫性不育的检验结果分析
清 Ａｓ ：静 脉 采 血 ２ Ａｂ ｍＬ，置 ３ ℃ 温 箱 中温 育 ，及 时 ７
分离 血 清 。精 浆 Ａｓ ：精 液 １ ０ ｃ ｍｉ，离 心 ５～ Ａｂ ５ ０ ｍ／ ｎ １ ｍｉ ，分 离 精 浆 。Ａｓ ０ ｎ Ａｂ试 剂 ：采 用 福 建 三 明 蓝 波 生
物技术公司生产的 ＡＡ ｓ ｂ试剂 盒 。④ 解 脲 支 原 体 （ ＵＵ） 及细 菌培 养 ＵＵ 采用 珠 海 黑 马 生 物 工 程 有 限公 司 生 产
１ ２ 方 法 。① 精 液 收 集 ：禁 欲 ３ ｄ ． ～５ ，用 ０ ５ ． ％碘 伏 （ 效 碘 ） 毒 剂 消毒 龟 头 及 阴 茎后 ，用 生 理 盐 水 棉 签 有 消
沾干 ，手 淫法 留取 全 份 精 液 于 洁 净 干 燥 的容 器 中 ，置
２ ．５ Ｐ＜０ ０ ） １ ２ ％（ ． ５ ，其 它 原 因引 起 的 Ａｓ ｂ（ － 率 为 Ａ ４）
１ ．７ （ ０ １ ％ Ｐ＜ ０ ０ ） ．５ 。
２ ３ Ａｓ ． Ａｂ（ 与 Ａｓ ｂ 一） 液参 数 比较 ：见 表 １ ＋） Ａ （ 精 。
于 ３ ℃ 温 箱 中孵 育 ３ ｍｉ。 ② 精 液 常规 分 析 ３ ７ ０ ｎ 。③ 血
表 １ Ａ Ａ （ 与 Ａ Ａ （ 患 者 精 液 参 数 比较 （ ±Ｓ ｓ ｂ ＋） ｓ ｂ 一） ）
染是 导 致 男性 免 疫性 不 育 的 主要 原 因 。 关 键 词 男 性 免 疫 性 不 育 抗 精 子 抗 体 解脲 支 原 体
由于 血 液 中或 精 浆 中存 在 的 抗 精 子 抗 体 （ ｓ ） Ａ Ａｂ ， 通 过凝 集 、补 体 固 定 制 动 精 子 ，引 起 精 子 活 力 降 低 、
男科实验室诊疗常规
前言随着男科学领域的快速发展和国际交流的广泛、深入，对男科实验室诊断的标准化的共识日益增强，从而促使《男科实验室诊断指南》的编写，目的在于进一步规范目前男科实验室检测方法，以达到更好的标准；提高精液分析及其他相关分析的质量，使不同实验室的分析结果具有可比性，从而满足研究人员和临床医生的需要，并可减少重复检查给病人带来的沉重经济负担。
男科实验室诊断的分类男科实验室诊断以精液、血液分析为主，必要时可以采集分泌物镜检或培养来诊断。
男科实验室诊断包括男性不育症、性功能障碍、前列腺疾病、性传播疾病等的实验室诊断。
男性不育症实验室诊断项目一般可分为：①精液常规分析，一般包括精液量、pH值、液化时间、精液粘稠度、精子密度、精子活动力等的分析，也可包括精子存活率和精子形态学分析，但需临床医生特别注明，因为精子存活率和精子形态学分析均需要特殊的染色方法；②精浆生化指标的检测，目前常用的指标为精浆α葡糖苷酶、酸性磷酸酶和果糖的检测，它们可分别反映附睾、前列腺和精囊腺的分泌功能，有些实验室也开展了精浆锌和肉毒碱水平的检测，认为它们可分别反映前列腺和附睾的功能；③精液白细胞和生精细胞的检测；④抗精子抗体的检测；⑤精液培养及精子功能的检测，目前男科学实验室开展较少，其检测意义尚不明确。
性功能障碍的实验室诊断主要为生殖激素的测定。
前列腺疾病的实验室诊断主要包括前列腺按摩液的检测和前列腺特异性抗原的检测。
性传播疾病的实验室诊断主要包括淋病双球菌、支原体、衣原体等的检测。
遗传性疾病的实验室诊断主要为染色体的核型分析和各种特异性基因的检测。
要保证男科实验室检测结果的准确，以及不同实验室检测结果具有可比性，质量保证亦是男科实验室诊断的重要环节。
质量保证主要包括各种样本的正确采集和处理，以及相关的质量控制措施。
第一节男性不育症的实验室诊断一精液样本的采集要使精液分析为临床提供可靠的结果，精液的采集必须按标准化程序进行。
通常，精液采集需要注意以下几点：1 受检者采集精液前，实验室工作人员需要给受检者提供清晰的书面或口头指导，需要询问禁欲时间和受检目的，同时提供留样容器，并嘱咐留样时的注意事项。
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灰度CASA的特点
精子识别: 根据成像灰度识别精子,易将精液杂质误 识别为精子,需要人工干预帮助识别。
荧光CASA的特点
识别原理：
荧光色素与活精子（双链DNA）结合 后出现绿色荧光反应，而与死精子（单链 DNA）结合时则呈橙色荧光。除精子和极 少数非精子细胞外，精液中的其他细胞和 颗粒碎片均不发荧光。
临床意义:
精浆柠檬酸来自前列腺，其作用是 络合钙离子，通过与钙离子结合，而调 节精浆钙离子浓度，并影响射精后精液 液化过程的功能。
前列腺分泌功能指标:精浆酸性磷酸酶
临床意义：
前列腺炎患者精浆酸性磷酸酶含量降低, 前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤者其含量 增高。
前列腺分泌功能指标:精浆锌
临床意义:
① 锌缺乏可引起性腺发育不良或性腺功能 减退。 ② 锌可调节雄激素代谢，锌含量降低时可 促进睾酮转变为双氢睾酮。
精子形态学分类标准(Kruger & menkfeld)
精子形态学计算举例
计数的精子数： 200 正常精子数： 78 正常精子百分比：（78/200×100%） 39% 缺陷精子数：（200-78） 122（61%） 头部缺陷精子数： 110（55%） 中段缺陷精子数： 18（9%） 尾部缺陷精子数： 16（8%） 缺陷总数：（110+18+16） 144 畸形精子指数(TZI) = (缺陷总数/ 缺陷精子数) =1.18 精子畸形指数(SDI) = (缺陷总数/所数精子总数) =0.72
人类射出的精液中，活性氧类物质是由中段带 有多残留细胞质的异常或不成熟精子精子和白 细胞产生的。 精浆中有抗氧化物清除剂和酶，某些病人的这 些物质可能不足。
在制备辅助受孕的精子时去除精浆，有可能使 精子更易受到氧化损害。
约40%不育门诊的男性患者和97%脊髓受到损伤 的男性，在他们的精液中存在可测浓度的ROS。
男性不育症现代实验诊断技术
精液计算机辅助分析 精子功能检测 精液免疫生化检验 细胞遗传学检查 分子生物学
尤以精液免疫生化检验发展得最快, 具有十分重要的诊断价值。
2.男性不育常用实验诊断指标 方法学及临床意义
精子质量
精子发生
精液在生殖管 道中的运输
生精功能评价指标： 血激素：FSH、LH、
临床意义：
活性氧类是氧的代谢产物，包括超氧阴离子、 过氧化氢、氢氧根、过氧化氢和一氧化氮。过 量存在可诱发细胞脂质、蛋白质和DNA的氧化 损伤而造成病理性损伤。
许多细胞具有酶性抗氧化剂系统（超氧化物歧 化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶）或 非酶性抗氧化剂系统（尿酸、维生素C、维生 素E）。当这些防御机制受制时，细胞功能将 受到影响。
精浆果糖
精浆锌、柠檬酸、ACP
感染性检测 精浆中性α葡糖苷酶
精液在生殖管道中运输检测指标
附睾分泌功能指标:精浆中性α-葡糖苷酶
Seminal plasma neutral alpha- glucosidase WHO推荐检测方法：Cooper法（PNPG法）
临床意义：
中性α-葡糖苷酶作为附睾分泌功能指标较左 旋肉毒碱和甘油磷酸胆碱更特异更灵敏。 结合精浆果糖、激素和睾丸其他指标,对远端 输精管阻塞有较好的诊断价值。
核蛋白组型转换缺陷或异常可引起男 性不育或胚胎早期夭折流产,其机理为:
① 使精子DNA不稳定，易受损伤而不能受孕; ② 一旦受精,由于核蛋白组型异常, 精子核不 能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合; ③ 胚胎不能正常发育,造成胚胎夭折而流产。
苯胺蓝染色
精子悬液活性氧类物质
Reactive oxygen species, ROS
背景知识:
精液圆细胞(rouud cell)： 生殖道上皮细胞、生精细胞和白细胞 统称之。
正常精液： 圆细胞数<5×106/ml; 白细胞数<1×106/ml。
病体原分离培养（四步法）：
精液白细胞过氧化物酶染色(正甲苯胺法)
精液白细胞群酶免组化定量检测图谱
精浆弹性蛋白酶研究进展
经ROC分析： 判定生殖道感染临界值(Cut-off): >290ng/ml 灵敏度：79.5% 特异性：74.4% (欧洲泌尿外科学会:Cut-off >690ng/ml) 292例不育病人，34% elastase>290ng/ml； 20例正常生育者，5% elastase>290ng/ml； 264例非白细胞精子症者,25% elastase>290ng/ml 60例阳性者经Norfloxacine治疗后: 25%<290ng/ml.
精子核蛋白组型转换
Spermatozoan Nucleoprotein Transition
临床意义:
正常情况下精子细胞阶段, 组蛋白将逐渐 被鱼精蛋白所取代。 鱼精蛋白能中和DNA电荷, 并能抑制RNA 的合成,也即抑制了基因表达。 受精前精子基因在鱼精蛋白特殊保护下,紧 密浓集,无任何DNA转录作用,无疑有重要生理 意义.
精子膜表面抗体检测的方法(WHO推荐)
混合凝集反应（mixedagglutination reaction,MAR）
特点：免疫性不育过筛试验，检测IgG型抗体。
免疫珠试验 (immunobead test, IBT)
特点：特异性较MAR更高,可进行IgG、IgA、IgM 抗体分型。
间接免疫珠试验
前列腺分泌功能指标（WHO推荐）
精浆柠檬酸定量（酶法）
（Seminal plasma citric acid ）
精浆酸性磷酸酶定量（PNPP法）
（Seminal plasma acid phosphatase ）
精浆锌定量（5-Br-PAPS法）
（Seminal plasma zinc ）
前列腺分泌功能指标:精浆柠檬酸
可选用下列任一标本组合方式进行AsAb检测： ①男配偶活动精子＋女配偶血清或宫颈粘液 ②供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检精浆 ③供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检宫颈粘液 ④供体活动精子(抗精子抗体阴性)＋待检血清
男性免疫性不育的确诊
a) MAR与IBT试验结果并非经常一致。
b) 男性免疫性不育的确证需要在MAR或IBT阳性 基础上附加其他试验，附加试验可以是前者的 重复试验、精子-宫颈粘液接触试验、精子-宫 颈粘液毛细管试验。 c) MAR: ≥10%为可疑，>50%有确定临床意义。 I BT: ≥20%为可疑, >50%有确定临床意义。
计算机辅助精子分析
Computer aided of semen analysis，CASA
CASA较人工方法具有以下优点： 高精确性； 提供精子动力学的量化数据。 根据识别精子原理分类,CASA分为: 灰度识别 荧光识别 比色识别 (880nm)
灰度CASA的特点
精子活力分级:
a级: 快速前向运动 (VAP≥26µm/s) b级: 中速前向运动 (16≤VAP<26µm/s) c级: 慢速前向运动 (6≤VAP<16µm/s) d级: 极慢或不动 (0≤VAP<6µm/s) 灰度CASA无法检测出“精子成活率”，需 进一 步作活体染色（如：HOS，伊红染色） 同一精液标本a+b+c值低于实际“精子成活率”。
不育男性
病因学诊断 治疗或偿试治疗 考虑ART助孕 选择最适ART助孕方式 辅助生殖技术 男科学
实验诊断
男性不育症诊疗标准化
实验诊断标准化 临床诊疗标准化
男性不育症实验诊断标准化的意义
保障诊断的准确性 实现诊疗(研究)数据共享
男性不育症实验诊断标准化的内容
检测指标标准化 检测方法标准化 检测质量合乎标准 病因分析标准化
检测方法：化学发光法
精子形态学染色
SpermMorphology Staining
吉姆萨染色------评价不同类型白细胞比评价精子更好 (改良)巴氏染色------经典方法 肖尔(Shorr)染色------常规精子形态分析 勃-利二氏(Bryan-Leishman)染色------适用于鉴定未成 熟生殖细胞和未成熟生殖细胞与白细胞的鉴别 Diff-Quik染色-------精子形态学分析
三种感染性检测方法比较
检测方法
过氧化物酶染色
被检测物质
分泌POX的 中性粒细胞 所有白细胞 检测粒细胞 抗炎效应物
优点
简单 快速 准确
不 足
检测效能低
酶免组化定量 弹性蛋白酶
操作稍复杂
准确 无明显不足 易批量检
精子质量评价
抗精子抗体
anti-sperm antibody (AsAb) ⑴血清AsAb检测指标的局限性 a) 男性特有的血睾屏障对精子施行封闭式保护; b) 精子抗原的复杂性给诊断试剂的制备带来困难. ⑵ 精子膜表面抗体（包被抗体）检测的意义 ① 避免精子膜内抗原释放,反应具特异性; ② 检测活力精子,更具临床意义.
临床意义:
测定精液 LDH-X并结合激素水平测定，可作为评 价生精上皮状态指标。精液 LDH-X活性低下，提 示精子分化受到损害或抑制。
可评价精子膜的完整程度 。不育组LDH-X可通过 膜破损处大量外漏到精浆。精浆/精子LDH-X: 生 育组=0.528;精液常规正常不育组=0.88;精液常规 不正常的不育组=2.85;少精症组=4.01;各不育组与 生育组间均有显著性差异。
精囊分泌功能指标:精浆果糖
Seminal plasma fructose WHO推荐检测方法：吲哚法或酶法
临床意义：
精囊分泌的果糖是精子能量的主要来源。 先天性精囊缺如果糖测定为阴性。 精囊炎、不完全射精或射精过频，果糖含量降低。 用于鉴别单纯性输精管阻塞所致的无精症（果糖含 量正常）和输精管、精囊发育不良引起的无精症。