维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)

2009.10-12
医药学院生物化学实验课件
实验注意ห้องสมุดไป่ตู้项
滴定过程要迅速,一般不应超过2 滴定用染料应1 1.滴定过程要迅速 ,一般不应超过2min, 滴定用染料应1ml之间 否则应改变样品量或将提取液适当稀释； 之间, 4ml之间,否则应改变样品量或将提取液适当稀释； 整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化； 2.整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化； 在处理各种样品时，如遇有泡沫产生， 3.在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇 消除； 消除； 测定样液时，需做空白对照， 4.测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体 积。 5.样品提取液应避免阳光直射。
2009.10-12 医药学院生物化学实验课件
结果计算
式中： 为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数； 式中： VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数； 为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数 VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数； 为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数； 为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数 C为样品提取液的总毫升数； 为样品提取液的总毫升数； 为样品提取液的总毫升数 D为滴定时所取的样品提取液毫升数； 为滴定时所取的样品提取液毫升数； 为滴定时所取的样品提取液毫升数 T为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数 染料能氧化抗坏血酸毫克数; 为 染料能氧化抗坏血酸毫克数 W为待测样品的重量（g）。 为待测样品的重量（ ）。 为待测样品的重量
的定量测定(2,6-二氯 实验十一 维C的定量测定 的定量测定 二氯 酚靛酚滴定法) 酚靛酚滴定法
中国海洋大学医药学院
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实验目的
掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理 和方法
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实验原理
维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛 酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。 在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。 因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品 中的维生素C被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚， 溶液变为淡红色，即为终点。 如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量 与样品中所含有维生素C的量成正比。
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2.滴定 滴定
1) 标准液的滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml 于100ml锥形瓶中，加9ml1%草酸溶液，用2，6-二氯 靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。有所用 2，6-二氯靛酚的体积算出1ml染料相当于多少毫克抗 坏血酸。 2) 样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分 别放入两个100ml锥形瓶中，滴定方法同上(另取10ml 1%草酸作空白对照滴定)。
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思考题
1. 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定 含量的优 二氯酚靛酚滴定法测定Vc含量的优 二氯酚靛酚滴定法测定 缺点? 缺点 2. 此实验测定误差的可能来源 此实验测定误差的可能来源?
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实验步骤
1.样品中抗坏血酸的提取： 样品中抗坏血酸的提取： 样品中抗坏血酸的提取 将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。然后称取 20g，加入20ml 2%草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤， 滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次，合并滤液， 滤液总体积定容至50ml。
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O C HO HO H HO C O C C C CH2OH
Cl
+O
Cl
N
OH H OH
+ Cl
还原型抗坏血酸
O C O O 氧化型脱氢 H 抗坏血酸 HO C O C C
2，6－二氯酚靛酚（红色） 二氯酚靛酚（红色）
O Cl
N
O
蓝色)
Cl
+
O Cl
N H
还原型2 二氯酚靛酚（无色） OH 还原型2，6－二氯酚靛酚（无色）
C CH2OH
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实验仪器
新鲜水果 吸管 容量瓶 滴定装置 锥形瓶 研钵 漏斗
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实验试剂
1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。 2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。 3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并 稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度 此溶液浓度 0.1mg/ml. 4、0.1%2，6-二氯靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有 104mg碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶 物，贮于棕色瓶中，冷藏。