1生物学实验常用技术

生物学实验常用技术一、分子方面

1、基因工程

1)PCR

(Polymerase Chain Reaction)

(二楼PCR仪器全部会用)

2)RT-PCR;Q-PCR

3)琼脂糖凝胶电泳;胶回收

4)酶切/链接

5)转化

6)固体/液体LB培养基配制

(高压蒸汽灭菌锅使用方法) 7)质粒大/小抽原理及步骤

(手提、溶液I、II、III作用)

8)基因组DNA抽提

9)RNA提取; 2、蛋白质工程

1)蛋白收集

(蛋白裂解液+PMSF;

1×Loading 裂解(推荐))

2)SDS-PAGE(电泳胶的配制)

2)考马斯亮蓝染色,银染

3)Western blot

4)蛋白定量常用的方法及原理,

以及熟练操作Bradford法蛋

白定量

(TRIZOL法原理、注意事项及步骤)

二、细胞方面

1)细胞培养、传代

2)细胞冻存与复苏

冻存液配制: (1)DMSO:血清=1:9(推荐)

(2)DMSO:培养基:血清=1:3:6 均可

DMSO为细胞专用型;现用现配,效果最好;冻存时细胞在-80℃中不要超过一周,最好在24-48h内放入液氮罐中保存。

3)细胞培养基配制(过滤除菌)、胰酶配制(过滤除菌),PBS配制(灭菌);(不同培养基的区别;谷氨酰胺(提供氮源),2周补充一次)

4)转染

5)MTT原理及操作(检测细胞存活率或死亡率)

6)碱性磷酸酶实验(ALP,检测细胞分化)

(5、6 需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用)

7)Hoechst染色

8)结晶紫染色(不推荐)

9)苏木精/伊红染色

(9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮)

10)荧光显微镜的使用

11)激光共聚焦显微镜样品制备(细胞固定,染色,洗脱)

(7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据)

12)流式细胞仪样品制备(包括:转染效率与细胞凋亡染色标记)以及仪器操作(需学会FlowJo软件分析流式结果)

三、动物实验

1)小鼠的定制:

常见的小鼠:

ICR小鼠(正常),9元/只

BalB/C小鼠(正常),30元/只

SD大鼠(正常),30元/只

裸鼠(免疫缺陷小鼠),80元/只

NOD SCID小鼠(免疫三缺陷),250元/只

其中前四种就是常用的,最后一种以后可能会用到。

浙江中医药大学:小鼠品系齐全,可提供以上小鼠静脉注射,提供体内原位成瘤手术;杭州师范大学:NOD SCID品系小鼠没有,不提供裸鼠静脉注射,不提供体内原位成瘤手术。

2)小鼠成瘤(熟练皮下成瘤操作);

3)肿瘤测量(游标卡尺测量;IVIS测量(推荐,前体要构建Luc细胞系))

4)慢病毒转染构建稳转Luc癌细胞系

5)小鼠的腹腔注射、瘤内注射以及ICR小鼠的尾静脉注射

6)小鼠尾部与眼球取血

7)小动物活体成像仪的原理及使用方法

8)小鼠解剖及组织固定

电镜样品:2、5%戊二醛固定;

免疫组化:10%的福尔马林或4%的多聚甲醛固定

9)组织电镜样品的制备及TEM的使用

(每个样品400,额外每张TEM照片5元)

10)免疫组织切片样品的制备

(蜡块制备25元;HE染色15元/片;TUNEL:200元/片;免疫组化:45元/片(抗体自备))

11)免疫组织切片的观察(荧光显微镜与正置光学显微镜使用切换)