分解纤维素霉菌的分离,纯化与鉴定

式 中 葡 萄糖 量— — 从 标 准 曲线 上 查 得 的 葡 萄糖 值 （ ｇ’— — ｒ ）ｎ ａ 进 行 鉴定 。 。 酶 液 稀 释倍 数 。 １６５天 然 纤 维 素 酶 活 力 测 定 称 取 １ 秸 秆 纤 维 素 置 于 ５ Ｌ ．． ｇ ０ｍ １ ． 活 力 测 定 ６酶 带塞 的三角瓶中，加入稀释酶液 ８ Ｌ ｐ ４８ 、．ｍ ｌ ｍ ，Ｈ ． ０１ ｏｌ柠檬酸 缓冲 ５ １６１标 准 曲线 的绘 制 本研 究采 用 ｏ ．． ５ 液 ３ Ｌ 蒸馏 水 ４ Ｌ 摇匀 ，０ ｍ ， ｍ ， ５ ℃水浴锅中酶解 ２ ｈ 过滤 ， Ｄ Ｓ法 ４， 按 Ｎ ３５ 二硝 基水 杨酸 比色定 糖法 （ Ｎ 测定 ０ ，－ Ｄ Ｓ） ． ０ 酶 解 液 中还 原 糖 含 量 ， ９支 比色 管 ， 别 。 ０ 糖量ｍｇ）５ ２ 测 定 还 原 糖 。 取 分 １ １ ０ 葡 ５ ０ ． 萄 （ ０
糖、 乳糖 、 芽 糖 、 糖 、 子 糖 、 麦 蔗 棉 木糖 、 拉 伯糖 ， 进 行 明胶 液 化 、 阿 并
淀粉 水 解 、 — Ｖ Ｐ测 定 、 哚 试验 、 吲 Ｈ Ｏ 酶试 验 、 酸盐 的微 量 发 酵 管 ， 硝
酶 力 算式 活计 公 ：
蔫蓑 墓
＝ｇ 卜 （ｍ ｈ ｍ Ｌ ／
Ｏ ６ｍ ／ Ｌ ‘ａ ｄ２ ６ （ ｇ Ｌ ’ ， ｓｅｔ ｅ ． ． （ ｇ ）ｈ ｎ ７ ８ｍ ／ ）ｄ ｒ ｐｃ ｖｌ ３ ｍ ｍ ｅ ｉ ｙ 关键 词 ： 纤维素 酶 ； 滤纸 ； 酶活 力； 维素分 解 菌 纤
中图 分 类 号 ：Ｑ ５ ． Ｔ ３ ２２
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Ｋｅ ｒ ｓ ｅｌｌ ｅ ｆｌｅ ａ ｅ ； ｎ ｙ ｃｉｉｙ ｃ ｌｕｏ ｅ ｄ ｃ ｍｐ ｓｎ ｕｎ ｕｓ ｙ ｗｏ ｄ ：ｅ ｌ ａ ；ｉ ｒｐ ｐ ｒ ｅ ｚ ｍｅ ａ ｔｖｔ； ｅｌｌｓ － ｅ ｏ ｏ ｉ ｇｆ ｇ ｕｓ ｔ
文 献 标 识 码 ： Ａ
文章 编 号 ：０ ６ ４ １ （ ０ ０ １— １４ ０ １０ — ３ ｌ２ １ ）６０ ４ — ２
０ 引 言
表 １ 葡 萄 糖 标 准 溶 液 光 密 度测 定 结 果
纤 维 素 是 所 有植 物 的主 要 组 分 ，构成 了植 物 干 物 质 的 Ｌ ～ ／， ／２ ３ ３ 项目 空 白 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ 世 界 上 纤 维 素 的 年产 量 估 计 可 达 ４ ｌ １ｔＰｅｒ Ｂ ｇｉｅ １９ ）因 含 糖 总 量 （ ｘ ０ ０（ｉｒ ｅｕｎ ，９ ０ ， ｅ ｍ曲 Ｏ Ｏ２ ． ０４ － ０６ ． ０８ ． １０ ． １ １４ ． ２ ． １６ ． ｍＬ） ０２ ０４ － Ｏ６ ． Ｏ８ ＿ １Ｏ ． １ １４ ． ２ － １ ． ６ 而 ， 维 素是 世 界 上 最 丰 富 而 又 不 断新 生 的资 源 。 纤 有取 之不 尽 ， 之 葡 萄糖 液 （ ０ 用 不 竭 的特 点 。 而 ， 种 资 源 的 大部 分现 在 是 作 为 废 物 而被 抛 弃 掉 。 蒸 馏 水（ ２０ １８ １６ ｌ １ １Ｏ Ｏ８ ０６ ０４ 然 这 ｍＬ） ． ． ４ ＿ ． ２ ． ． ． ． ＮＳ试 剂 （ ｍＬ） １５ ． １ ． ５ １ ． ５ １５ ． １ ． ５ １５ ． １ ． ５ １ ． ５ １ ． ５ 在 自然 界 中 ， 些 “ 物 ” 通 过 纤 维 素 分 解 菌 ， 能 产 生 纤 维 素 酶 Ｄ 这 废 是 即 加 热 沸水浴中加热 ５ ｎ ｍｉ 的 微 生物 将 其 自然 分 解 的 。在 我 国纤 维 素 资 源 极 为丰 富 ， 每年 仅 农 冷 却 立 即用 流 水 冷 却 作 物秸 秆 产 量 就 高 达 ７Ｏ ｌｓ，约相 当于 我 国 北 方 草 原 年 打 草 量 的 ． Ｏｔ ｘ 定容 至 ２ ｍ ５Ｌ ５ Ｏ多 倍 ， 大部 分地 分没 有 得 到 充 分 利 用 。 在 农 村 ， 秆 主 要 用作 蒸馏水定容 绝 秸 Ｏ． Ｏ Ｏ１ ０３ ８ ０５ Ｏ７ ０９ １１ ４ ＿ｌ ．２ ．１ ．２ ．１ １３ １５ －２ ．３ 燃料、 畜禽饮料与积肥 ， 不仅利用率低 ， 还对环境造成 污染… 。因此 ， 光 密 度 （ Ｄ） 合 理 开 发 和 科 学 利 用 农 作 物 秸 秆 这 一 丰 富 的 可 再 生 资 源 是 各 国 政 零 后 ， 定 各 管 光 密度 值 ． 测 以葡 萄 糖 浓 度 为 横 坐 标 ， 密度 值 为 纵 坐 光 府 及 广 大 科 技 工 作 者 十 分 关 注 的 问题 。但 是 纤 维 素 很 难 被 分解 利 标， 得标 准 曲线 （ １ 。 图 ） 用 ， 何 将 纤 维 素 转化 为能 直 接 利 用 的资 源 和 能 源 是 摆 在 人 们 面 前 如 １ ． 纸 分解 度 的观 察 在 试 管 中加 入 酶 液 ８ｍＬ 再 加 入 ｐ ． ２滤 ６ ， Ｈ 的 一 个难 题 。 用 微 生 物 产 生 的 纤维 素酶 将 其 转 化 为人 类 所 需 的 能 利 ４４柠檬酸缓冲液 ２ｍ ， ． Ｌ 摇匀后加入滤纸条（ ｃ ｘ ｃ 和 几滴二甲 １ｍ ６ｍ） 源 、 品 和 化 工 原 料具 有重 要 的 现 实 意 义 。 年来 ， 食 近 对秸 秆 类 纤 维 素 苯 ， 于 ５℃恒 温 水 浴 中静 置 反 应 ２ 稍 加 震 动 ， 察 其 酶 活 力 置 ０ ４ｈ后 观 物 质 的利 用主 要采 用 生 物 法 ， 利 用 微 生 物 将 纤 维 素 、 纤 维 素 降 既 半 的 分解 强 度 ＋滤 纸 边缘 膨 胀 ； ＋滤 纸 整 齐膨 胀 并 下 弯 ｉ ＋ ） 纸 ｆ） （ ） ＋ ＋滤 ｆ ＋ 解 并 转 化 为茵 体 蛋 白 的方 法 。 因 此 ， 离 和 筛 选 高 酶 活 的菌 种 显 得 分 不定形 ； ＋ ＋滤纸全成糊状． 滤纸不到 ２ （ ＋） ＋ 若 ４ｈ全部分解 ， 则记下达 尤为 重 要 。 本研 究 在 广 泛 搜 集 试材 的 基 础 上 ， 分离 筛 选 到 一 株 酶 活 到 全部 被 分解 的 时 间 ． 力 高 的纤 维 素 分解 菌 。 １ ．Ｃ ． ３ ＭＣ酶 活 力 测 定 移 取 酶 液 ０５ｍＬ于 试 管 中 ， 入 含 质 ６ ． 加 １ 材 料 和 方 法 量浓 度 为 ０ ｇｃ ～Ｎ ． Ｍｃ ａ的柠檬 酸 缓 ； ５ 中液 （Ｈ ４４ ００ ｌ ）． ｐ ．、 ． ｍｏＬ１ ５ ／ ５ １１样 品来 源 样 品分别为富含纤 维素分解茵 的玉米地土壤 、 ． ｍ ， 后 在 ５ ￣水 浴 锅准 确 作 用 ３ ｉ ， 即按 Ｄ Ｓ法 测 定糖 。 Ｌ然 ０Ｃ ０ｍ ｎ后 立 Ｎ 牛粪 和 酒 糟 。 １２培养基 ① 分离平板培养基 ； ＿ ②液体培养基 。 １ ． 纸 纤 维 素 的 制 备 将 滤 纸 剪 成 １ｍ 宽 ，ｃ 长 的 滤 纸 条 。 ３滤 ｃ ６ｍ 式 中 ： 萄糖 量 — — 从 标 ； 线 上查 得 的 葡 萄糖 值 （ ｇ 葡 隹曲 ｒ ） ａ １ ． 株 的分 离 、纯 化 采 用 稀 释 涂 布 平 板 法 进 行 菌 种 的分 离 ４菌 １６４滤 纸糖 化 力 测 定 移 取 稀 释 酶 液 ４ｎ ．． ｒ Ｌ于试 管 中 ，加 入 柠
Ｆｏ ｈｅ ｅｓｒｉ ｓ ｔｅ ｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｆｄｅ ｏ ｏ ｉ ｏ ｆｆｌｅ ａ ｒ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｆＣＭＣ ｎ ｙ ｃｉｉｙ Ｆ ｒｔ ｓ ｔａｎ ，ｈ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓｏ ｃ ｍｐ ｓｔ ｎ ｏ ｔｒｐ ｐｅ ， ｅｅ ｍｉａｉ ｓ ｏ ｉ ｉ ｏ ｅ ｚ ｍｅ ａ ｔ ｔ ， ＰＡ ｎｄ ｎ ｔｒ ｌｃ ｌ ｌｓ ｃｉｉｙｗｅｅ ｄ ｎ ． ｖ ａ ａｕ ａ ｅｌ ａ ｅａ ｔ ｔ ｒ ｏ ｅ ｕ ｖ
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马 丹 丹 Ｍ ａＤａ ｄ ｎ ｎ ａ
（ 昌大学 科技 学院 ， 昌 ３ ０ １ ） 南 南 ３ ０ ２
Ｓ ｈｏ ｆ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏｙ Ｎａ ｃａ ｇＵ ｉ ｒｉ Ｎ ｎｈ ｎ ３ ０ ２ Ｃ ｉａ ｃ ｏｌ ｉｎ ｅａ ｄＴ ｃ ｎ ｌ ， ｎ ｈ ｎ ｎｖ ｓｙ， ａ ｃ ａｇ３ ０ １ ， ｈｎ ） ｏＳ ｇ ｅ ｔ
Ｔ ｅｒｓｌ ｈ ｗ ｄｔａ：１ｈ ｗ ｓｔｅｆｓ ｒｔａ ｅｆｔｒｐ ｐ ｒｗ ｓｄｃ ｍｐ ｓｄ ｂ ｎ ｌｃ ｔ ｉ，ｎ ｈ ｌ ｒｐ ｐ ｒ ｓ ｈ ｎ ｅ ｎｏｐｓｅｄ ｒ ｇ ｈ ｅｕｔ ｓｏ ｅ ｈｔ（） ａ ａｔ ｈ ｔｈ ｌ ａ ｅ ａ ｅｏ ｏｅ ｙｏ ｅｂａｋｓ ａｎ ａｄ ｔｅｆｔ ａ ｅ ｃ ａ ｇ ｄｉｔ ａｔ ｕ ｎ ｓ ｈ ｅ ｔ ｉｅ ｒ ｉｅ Ｗａ ｉ ｌ ｓ ｈ ｎｆ ２ｈ（ Ｃ ｎｙ ｅａｔ ｉ ，Ｐ ｎ ａ ｒｌ ｅ ｕ ｓ ｃ ｖ ｙｏ ｔｅ ｔ ｉ ｗ ｒ ｈｇ ｅ ｖ ｔ ｉ ， ａｈ ｄ２ ８ ｍ ／ Ｌ ‘０ｒ ｎ ｅ ａ ｒ１ ． ） Ｍ Ｃ ｅ ｚｍ ｃ ｖ ｙ Ｆ Ａ ａ ｄｎ ｔ ａ ｃｌ ｌ ｅａｔ ｉ ｆ ｈ ｒ ｎ ｅ ｉ ｓ ｉ ｆ ｅｓ ａ ｓｒ ｃ ｅ ． ４ ｆ ｇ ）３ ｉ， ｓｔ ｏ ２ ｉｔ ｕ ｌｏ ｉ ｔ ｓ ａ ｅ ｈ ｔ ｎｉ ｒｎ ｅ ８ ｍ ａ
摘要： 以滤 纸纤 维素 为碳 源 ， 我院青 苑和 南区草地 的土壤 中分 别分 离 １ 能分 解纤 维素的真 菌 菌株 。分 别对其 进行 了滤 纸分 解度 、 甲基 从 株 羧 纤 维素酶 活力 （Ｍ Ｃ ｓ）滤 纸糖 化力 （Ｐ ） ｃ ａｅ 、 Ｆ Ａ 和天 然纤维 素酶 活 力的测定 ， 果表 明： 一 种黑 色霉 菌对 滤纸 的分解 能 力最 强 ， 结 ① 不到 １ ２小时 滤纸全 戍糊状； ②同时羧 甲基纤维素酶活力、 滤纸糖化力和天然纤维素酶活力也最高， 分别为 ２ ６（ｇ ｍ） ０ｍｉ ０２（ｇ ｍ】 ． ８ ， １３ ｎ、． ｍ ， ｌ ５ ｍ ８ ． ２ ７ｍ ， １ｄ ｈ和 ２ （ ｇ ｍ ） 。 ．
酶 力算 式 活计 公 ： ＿ 詹 中 ＿ 砺
＝ ｇ ）ｍ】 ［／ ’ ｉ （ｍ ３ ｎ ｍ Ｌｏ
和纯 化 。
檬 酸 （． ｍｏ１） 磷 酸 氢 二 钠 （ ． ｍｏ ） 冲 液 （Ｈ ４８ １ｍ 然 ０１ ｌ 一 ０２ ｉ 缓 ｌ ｐ ．） Ｌ， １５茵 落的观察和菌 的鉴定 对细菌进行革兰 氏染 色，显微镜 后 加 入 一 张 （ｃ ３ｃ ） 纸 ， 入 ５ ℃水 浴 锅 准 确 作 用 １ ． １ｍｘ ｍ 滤 放 Ｏ ｈ后 ， 立 观察 培 养 不 同时 间 的 细 菌 形态 。 纯 化 培 养 的 细菌 分别 接 种 于葡 萄 即用 Ｄ Ｓ法测 定 糖 。 将 Ｎ
・１ ４・ ４
价 值 工程
分解 纤 维 素霉 菌 的分 离 ， 纯化 与鉴 定
Ｉ ｏ ａｔｏ ａ ｄ ｒ ｅ ｉ ｆａ Ｃｅｌ ｏ ｅ －Ｄｅ ｏ ｓ ｌ ｉ ｎ ｎ Ｓｃ ｅ ｎ ｎｇ ｏ ｌｕｌ ｓ － ｃ ｍｐｏｓｎｇ Ｆｕｎｇ ｓ Ｓ ｒ ｉ ｉ ｕ ｔ ａｎ