精选结核分枝杆菌资料

• 检查方法
1.显微镜检查
1）直接涂片：用萋－尼氏法染色，若镜检找 到抗酸性杆菌，通常应报告：“找到抗酸性杆 菌”，需进一步分离培养鉴定。
2）浓缩集菌涂片：如标本中菌量少，杂菌和 杂质多时，用离心沉淀法将菌浓缩聚集，再取 沉淀物涂片作抗酸染色检查
荧光染料金胺O染色，在荧光下菌体呈橘黄色。
萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌体染成红色。
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菜花样菌落
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• 2、分离培养
TB菌接种前处理－液化和处理杂菌
紫外线、酒精的抵抗力弱。
(如在水中煮沸1分钟，阳光曝晒2～3小时， 75%酒精内数分钟即死亡。)
最简单的方法是直接焚烧带有病菌的痰纸。
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• 致病物质（未发现产生内毒素、外毒素、侵袭性酶）
1.脂质－脂质占菌体干重的20～40%，占胞壁干重的60%。
①磷脂：能刺激单核细胞增生，并可抑制蛋白酶的分 解作用，使病灶形成干酷样坏死。
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• 致病物质
2.荚膜－主要为多糖，少量脂质和蛋白质。 ①粘附和入侵
②分解物质提供营养③防止有害物质入侵
3.蛋白质－TB菌菌体内都含有数种蛋白质，其中重要的蛋
白质是结核菌素。结核茵素与蜡质D结合，能引起较强 的迟发型变态反应。其他蛋白质可引起机体产生相应的 抗体，但无保护作用。
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T-SPOT-TB—定义
以结核特异的混合抗原A和混 合抗原B（分别为ESAT-6和 CFP-10的部分多肽片断）刺 激结核杆菌感染者外周血单 核细胞中存在结核特异的活 化T淋巴细胞分泌γ干扰素， 从而应用ELISPOT方法检测 对结核杆菌反应的效应T细胞 数量，对结核杆菌感染进行 辅助诊断。
• 1.肺结核，飞沫传播为最常见方式 • 原发性肺结核 • 血行播散型肺结核 • 浸润型肺结核 • 慢性纤维空洞型肺结核 • 结核性胸膜炎
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肺结核实验室诊断
• 结核菌检查： • 痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。 • 直接厚涂片阳性率优于薄涂片
• 无痰或儿童不会咳嗽，可采用清晨的胃洗 液找结核菌，成人亦可通过纤支镜刷片或 涮洗液查找结核菌
4%NaOH、6%H2SO4、胰酶 15-20min 培养基选择—罗氏培养基
鉴别培养基(PNB、T2H、NAP) 仪器培养—Bacte460、BacT/ALERT3D 液体培养基
培养时间—长 一般6-8周
• 鉴定
1.染色性
2.菌落特征
3.生长速度
4.色素产生
5.生化试验
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器官，其中以肺结核最常见。可分原发感染和继发感染。
•免疫性
TB菌的感染率很高，发病率却较低，这表明人体感染结核杆
菌可获得一定的抗结核免疫力，这种免疫称为有菌免疫或传
染性免疫。TB菌的免疫原rRNA和变应原结核菌素诱发机体
产1生0/8/由2019T淋巴细胞介导细胞结免核分疫枝杆反菌应。
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导致的疾病
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选题？
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1.结核的现状
结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO 统计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年有约 200万人死于结核。
我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核
感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的
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• 培养特性
专性需氧菌，3%－5%的CO2能促进生长。最适ph 6.5～ 6.8 ，最适温度为37℃，低于30℃难生长，营养要求高，在 含有蛋黄、马钤薯、甘油和天门冬素等的固体培养基上才能 生长，且生长缓慢。
固体培养基---典型菌落为干燥、坚硬、表面呈颗粒状、 乳酪色或淡黄色，形似菜花样。
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4、抗体检测
检测PPDIgG辅助诊断。目前血清抗阿拉伯糖 甘露糖脂IgG抗体是一种新的较好的诊断结核 病的指标。 5、抗原检测
6、核酸检测
快速诊断： PCR-特异性核酸探针
7、高效液相色谱分析技术
测分枝菌酸可鉴定菌种 8、全血干扰素测定
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理
T-SPOT.TB技术：
• 利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（PBMC）中
存在结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特
异抗原刺激后分泌r干扰素而设计的T细胞免疫斑点试 验。 • 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r干扰素的T淋 巴细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统
结核菌素的纯蛋白衍化物（PPD）皮内注 射0.1ml（5IU）硬结≥5mm为阳性反应，如无反应， 可在一周后再用5IU，如仍为阴性，大致可除外 结核感染，但也要考虑感染的窗口期，还未建 立充分的变态反应，应用糖皮质激素等免疫抑 制药物、免疫力低下或营养不良也成阴性反应。
结核菌素试验对婴幼儿的诊断价值较成人 大，3岁以下强阳性反应者，应视为有新近感染 的活动性肺结核。
②索状因子：是分枝菌酸与海藻糖的复合物，具有破 坏细胞线粒体膜，毒害微粒体酶类，抑制中性粒细胞 游走和吞噬作用，引起慢性肉牙肿。具有该物质的TB 菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成索状。
③蜡质D：是一种肽糖脂与分枝菌酸复合物，能引起迟 发型变态反应，并具有佐剂作用。
④硫酸脑苷脂：TB菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬细 胞中的吞噬体与溶酶体融合，使结核杆菌在细胞内存 活。
特异抗原 ELISPOT
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T-SPOT-TB—几个概念
• ELISPOT（enzyme-linked immunospot assay,）是 一种新型的免疫酶技术，它是从单细胞水平检测分 泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞。（简单说：可以 数出分泌特异因子的细胞的个数）
• ESAT-6和CFP-10蛋白：存在结核分枝杆菌及少数 致病非结核分枝杆菌中名为“RD1”的基因序列， 编码产生两种蛋白。在卡介苗菌株和大部分环境中 的分枝杆菌基因中则缺乏次序列。
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基于T淋巴细胞检测结核感染 的原理
• 结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结 核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T 细胞
• 当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释 放r干扰素
• r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答 中最重要的细胞因子
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三、临床意义
TB菌引起结核病。对人类致病的有人结核分枝杆菌、牛
型结核杆菌和非洲分枝杆菌，人型结核杆菌感染引起的发病 率最高。成为全球性重大公共卫生问题。
•所致疾病
TB菌的致病作用可能是细菌在细胞内增殖引起炎症反应，以
及诱导机体产生免疫反应性损伤，属于IV型（迟发型）变 态反应。通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体， 侵犯多种组织器官，引起相应
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基于T淋巴细胞检测结核感染 的原理
• 空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑 点数大于20时视为试验有效
• T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形 成细胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs
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• 变异性
TB菌易发生形态、菌落、最适生长温度、毒力和耐药 性的变异。如卡介苗、Much颗粒和多重耐药菌株出现 等。
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• 抵抗力
TB菌细胞壁含大量脂类，抵抗力较强
干痰中存活6-8个月，粘附尘埃上保持传染性 8-10天，阴湿处能生存5个月以上。
3%HCL或4%NaOH、6%H2SO4溶液中能耐受 30分钟
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由来----γ干扰素释放试验 （IGRAs）
IFN-γ在调节对结核分支杆菌的 细胞介导的免疫反应中起重要 作用，从而使得（interferon gamma release assays） IGRAs用于检测结核感染。 IGRAs通过检测代表结核分支 杆菌的抗原刺激T淋巴细胞反应 后释放IFN-γ的量来判断是否存 在结核杆菌感染。
• 分类属放线菌科，本属有80多种，可分三类： 结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌。 细菌的DNAG+Cmol%为62－70
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一、分类
结核分枝杆菌（Mycobacterium Tuberculosis，TB）复合群：
人结核分枝杆菌(M.tuberculosis) 牛分枝杆菌(M.bovis)
• 大便找抗酸杆菌？
1•0/8/大2019便结核杆菌PCR结？核分枝杆菌
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• 3.泌尿生殖系统结核---尿液 • 4.结核性脑膜炎---脑脊液 • 5.结核性腹膜炎---腹水 • 6.关节结核---关节液
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四、微生物学检验
临床标本
涂片检查
分离培养
核酸检测 抗体检测
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• 鉴别试验：
NAP(p-nitro-α-acetylamino-β-hydroxypropiophenome)抑制试验 结核分枝杆菌 NAP非结核分枝杆菌 NAP+
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• 药物敏感试验 • 动物接种
菌株分离和检测毒力
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• 3、结核菌素试验：OT或PPD 迟发型超敏反 应
• PCR法，40个结核菌即可出现阳性结果
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• 2.肠结核
• 患者多有开放性肺结核或喉结核，经常吞 咽含结核杆菌的痰液而患病。，主要位于
回盲部。
• 辅助诊断：
• 结核菌素试验
• X线胃肠钡餐造影或钡剂灌肠
• 结肠镜，活检找到干酪样坏死性肉芽肿或 结核杆菌具有确诊意义。
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分枝杆菌属Mycobacterium
• 一类直或微弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，可呈丝 状或菌丝样生长。细胞壁脂质含量高（分枝菌酸）， 耐酸，抗酸染色阳性。对氧和营养要求高，生长慢。 又称抗酸杆菌(acid-fast bacillus)---不易着色，可抵抗盐
酸酒精的脱色作用
非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌
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二、细菌特性
• 形态染色
TB菌细长略弯曲，有时可见分枝，呈单、成堆或成束排 列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。可出现多形性，在陈旧 的病灶和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状，串球 状，短棒状，长丝形等。TB菌革兰染色阳性。
荧光染料金胺O染色，在荧光下菌体呈橘黄色。 萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌体染成红色。
液体培养基---生长较快呈粗糙皱纹状菌膜生长，有毒株可 呈索状生长（吐温干扰）。
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• 生化反应
生化不活泼。不发酵糖类，多数菌株触酶阳性，热触酶 阴性，非结核分枝杆菌正好相反。 结核分枝杆菌烟酸和硝酸盐试验阳性，耐噻吩－2－羧酸 肼(T2H)，牛型则相反。有毒株中性红试验阳性。
2倍以上，曾经一度控制良好，再次死灰复燃，随着
耐药菌株的出现和传播，结核控制更加棘手。
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2.患者的需要
• 有患者咨询，结核病怎么检查
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3.医生的需求
• 有医生咨询结核病的检查
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4.各类考试常见的考点
• 中级职称 • 高级职称 • 研究生考试
直接涂片 集菌涂片 处理标本或无污染标本
染色 抗酸.. 金胺O..
液体培养基 固体培养基
（罗氏或米氏）
37℃，
仪器培养
＜7天生长
＞7天生长
快速生长菌 慢生长菌
动物试验
涂片镜检
菌种鉴定
抗酸染色
菌落特点
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鉴定试验
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药敏试验
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• 标本采集
感染部位不同，取不同的标本
常见标本：痰、纤支镜刷片、尿、胸腹水、脑脊 液、关节液等
对斑点进行计数，1个斑点代表一个细胞，计算计算 对结核杆菌反应的效应T细胞数量
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理
包
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理
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基于T淋巴细胞检测结核感染 的原理
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