条件培养基培养法53页PPT
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细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
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实验程序4
（培养基和玻璃器材等的灭菌）
湿热灭菌：高压蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法的操作步骤如下： 1. 灭菌锅内加入一定量的水。 2. 将待灭菌的物品放入锅内，并关严锅盖。 注意：器物不能装得太满。 3. 接通电源，进行加热。 4. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待温度 计指示温度为100℃时关闭排气阀；或当排出的蒸气相 当猛烈且微带蓝色时关闭排气阀。
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
4
实 验 程 序
玻璃器皿的洗涤和包装 培养基的制备 无菌稀释水的制备 培养基和玻璃器材等的灭菌
5
实验程序1
（玻璃器皿的洗涤和包装）
清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。 棉塞的制作 包装培养皿和移液管等。
6
实 验 程 序2
（培养基的种类）
据组成成分可分为:
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实 验 材 料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2 支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。
其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
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实 验 程 序
细菌的纯种分离
细菌的接种方法
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实验程序1
（细菌的纯种分离）
稀释平板法 平板划线法
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法） 间歇灭菌法：即常压灭菌，用于一些受高温而破坏的培 养基的灭菌。 操作方法： a. 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次， 每次在100℃煮沸30～60min，连续3d重复进行。 b. 在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在37℃ 恒温条件下培养24h，这样可以使每次蒸煮后未杀死残 留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放在 37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
培养基配制技术ppt课件
概述
一、微生物的概念及种类
（一）什么是微生物？
是存在于自然界的一群体积微小、结构简单、肉眼看不见， 必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才 能观察到的微小生物。
（二）微生物有什么特点？
个体微小、结构简单、繁殖迅速、分布广泛、种类繁多、 容易变异等特点
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
二、微生物与人类的关系
• 绝大多数微生物对人和动植物是有益的，有些则是必需 的。
自然界中N、C、S等 元素循环
有少数微生 物能引起人 类和动、植 物的病害
工业,微生物应用于食 品、皮革、纺织、石油、 化工、冶金等
污水处理,利用微生物 降解有机磷、氰化物等
农业,以菌造肥, 以菌催长,以菌 防病,以菌治病
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
• 抑制剂
培养基的类型（作用）
• 作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的 检出率
• 种类：
• 盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）。
• 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、玫瑰红。
回顾
• 微生物培养基的类型 • 微生物培养基配制原则、配制步骤 • 常用的几种培养基的适用微生物 • 牛肉膏蛋白胨培养基中琼脂的作用
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
培养基的类型
按物理性状划分：
• 固体培养基：适合于菌种和孢子的培养和保存，也用于有子 实体的真菌类（香菇、白木耳）的生产
条件培养基培养法
第 八 章 植物细胞及原生质体培养
第一 节
植物细胞培养
植物细胞培养（plant cell culture）：
指对植物器官或愈伤组织上分离出来的 单细胞(或小细胞团)进行培养，形成单细无 性系或再生植物的技术。
植物细胞培养的意义：
（1）研究细胞生理代谢过程及各种影响因子；
（2）用于植物品种的改良；
C . 半连续培养：
是利用培养罐等装置进行细胞大量培养的 一种方式。在半连续培养时，当培养容器内细 胞增殖到一定数量后，倒出一半细胞悬浮液于 另一培养罐等容器，再分别加入新鲜培养基继 续培养。半连续培养能够重复获得大量均一的 培养细胞供进一步利用。
（三）优良悬浮培养体系要求：
A. 悬浮培养物分散性好，细胞团较小，一般由几 十个以下的细胞组成。
培养基中加入高密度的细胞进行培养。一
定时间后这些细胞就会向培养基中分泌一 些物质，使培养基条件化。这样的培养被 利用来进行某些单细胞的培养的方法。
二、细胞的悬浮培养(cell suspension culture)
是指将游离的植物细胞按一定的细胞密度，
悬浮在液体培养基中进行培养的方法。
适宜于大规模培养，细胞工程产业的技术
植物原生质培养和细胞融合可用产生远 缘杂种； 是目前植物细胞及基因工程的核心技术。
一、植物原生质体培养
通过一定方法除去细胞壁，而得到一个裸露 的植物细胞，即为原生质体(Protoplast)。游离 的原生质体像正常的植物细胞那样具有全能性， 在一定条件下培养可以重新再生出完整植株。
自1970年首次获得烟草原生质体再生植株 成功以来，通过原生质体获得再生植株的植 物约有280余种，其中有20种为我国首先报道。
第一 节
植物细胞培养
植物细胞培养（plant cell culture）：
指对植物器官或愈伤组织上分离出来的 单细胞(或小细胞团)进行培养，形成单细无 性系或再生植物的技术。
植物细胞培养的意义：
（1）研究细胞生理代谢过程及各种影响因子；
（2）用于植物品种的改良；
C . 半连续培养：
是利用培养罐等装置进行细胞大量培养的 一种方式。在半连续培养时，当培养容器内细 胞增殖到一定数量后，倒出一半细胞悬浮液于 另一培养罐等容器，再分别加入新鲜培养基继 续培养。半连续培养能够重复获得大量均一的 培养细胞供进一步利用。
（三）优良悬浮培养体系要求：
A. 悬浮培养物分散性好，细胞团较小，一般由几 十个以下的细胞组成。
培养基中加入高密度的细胞进行培养。一
定时间后这些细胞就会向培养基中分泌一 些物质，使培养基条件化。这样的培养被 利用来进行某些单细胞的培养的方法。
二、细胞的悬浮培养(cell suspension culture)
是指将游离的植物细胞按一定的细胞密度，
悬浮在液体培养基中进行培养的方法。
适宜于大规模培养，细胞工程产业的技术
植物原生质培养和细胞融合可用产生远 缘杂种； 是目前植物细胞及基因工程的核心技术。
一、植物原生质体培养
通过一定方法除去细胞壁，而得到一个裸露 的植物细胞，即为原生质体(Protoplast)。游离 的原生质体像正常的植物细胞那样具有全能性， 在一定条件下培养可以重新再生出完整植株。
自1970年首次获得烟草原生质体再生植株 成功以来，通过原生质体获得再生植株的植 物约有280余种，其中有20种为我国首先报道。
培养基的使用和管理.ppt
●斜面培养基：将培养基分装试管。灭菌后摆放成高层斜 面（斜面与底层高度约为2:3）和普通斜面（斜面与底层 高度约为3:2），冷却后备用。高层斜面培养基：用接种 针挑取菌苔穿刺接种至琼脂高层，穿刺接种完毕后，再在 斜面上划“之”字形接种；比如三糖铁琼脂斜面。斜面培 养基：用接种环挑取菌苔在斜面上划“之”字形接种，如 营养琼脂斜面。
பைடு நூலகம்
培养基的贮存
● 脱水合成培养基：脱水合成培养基一般为粉末或颗粒状形式 包装于密闭的容器中。使用时要按先购先用的原则。实验室应 保存有效的培养基目录清单，应包括以下内容：容器密闭性检 查、记录首次开封日期、内容物的感官检查。开封后的脱水合 成培养基，其质量取决于贮存条件。通过观察粉末的流动性、 均匀性、结块情况和色泽变化等判断脱水培养基的质量的变化。 若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。 ● 商品化即用型培养基：应严格按照供应商提供的贮存条件、 有效期和使用方法进行培养基的保存和使用。 ●自配培养基：避光、干燥保存，必要时在5 ℃±3 ℃冰箱中 保存，通常建议平板不超过2周~4周，瓶装及试管装培养基不 超过3个月~6个月，除非某些标准或实验结果表明保质期比上 述的更长。建议在培养基中添加的不稳定的添加剂应即配即用。 当培养基发生这些变化时（颜色改变、蒸发（脱水）、微生物 生长等）应禁止使用。
培养基的使用和管理
培养基的定义和分类
●按状态分类 1）固体培养基：在液体培养基中加入一定量固化物（如：琼脂、 明胶等），加热至100℃溶解，冷却后凝固成固体状态的培养基。 倾注到平皿内的固体培养基一般称之为“平板”；倒入试管并摆放 成斜面的固体培养基称作“斜面”。 2）半固体培养基：在液体培养基中加入极少量固化物（如：琼 脂、明胶等），加热至100℃溶解，冷却后凝固成半固体状态的 培养基。 3）液体培养基：是相对固体培养基而言的，是微生物或动植物 细胞的液状培养基。 ●按用途分类 1）鉴别培养基（特异性培养基）：能够进行一项或多项微生物 生理和（或）生化特性鉴定的培养基。（例如：麦康凯琼脂）
培养基的配制及质量控制课件(共44张PPT)
3、当批培养基不符合促生长试验，应寻找造成不合格的原因。
禁用金属容器如铁、铜、铝容器，避免 ①每种菌液接种量含菌小于100cfu
⑶其他 如溶血，可能冷藏温度下形成的结晶，大量的汽泡，微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数量和有效期的检查和记录，培养 基的无菌检查等。
金属离子与培养基成分结合，生成有害 当培养基需要添加其它组分时，添加后也应将其充分混匀。
⑵微生物限度检查(计数培养基)培养基 的适用性检查
微生物限度检查(计数培养基) 使用 前应进行适用性试验，适用性试验包括 促生长、抑制及指示能力检查。
菌种
铜绿假单胞菌 [CMCC(B)10 104]
金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003]
枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501 ]
白色念珠球菌 [CMCC（B）98001]
矫正pH 配制培养基必须矫正pH，干燥培养基也
必须对pH进行验证，高压灭菌前的pH应比最终 pH值高左右。矫正pH后的培养基应加热、过滤，
使培养基澄清。
2、培养基的灭菌
灭菌方法及条件不当可直接影响培养基质量，培 养基灭菌方法和条件,商品化的成品培养基或自配 的培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能 引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝固力或pH的变
整个有效期内均需符合这些相应的标准。每批培养基储 存的时间将取决于一定存放条件（包括容器和密封性） 的培养基组成成分的稳定性。
试验结果处理
⑴当批培养基不符合促生长试验，应寻找造成不 合格的原因。
⑵这个调查包括采取适当的行动以防止问题的重 复出现。
⑶如果未找到原因或还没有解决有关培养基的促 生长问题，那么任何不符合要求的批次均不能使 用。
一、培养基的配制
培养基是绝大多数微生物试验的基础。因此，培养基的质 量是微生物试验成功与否的关键因素。适宜的培养基制备 方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
禁用金属容器如铁、铜、铝容器，避免 ①每种菌液接种量含菌小于100cfu
⑶其他 如溶血，可能冷藏温度下形成的结晶，大量的汽泡，微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数量和有效期的检查和记录，培养 基的无菌检查等。
金属离子与培养基成分结合，生成有害 当培养基需要添加其它组分时，添加后也应将其充分混匀。
⑵微生物限度检查(计数培养基)培养基 的适用性检查
微生物限度检查(计数培养基) 使用 前应进行适用性试验，适用性试验包括 促生长、抑制及指示能力检查。
菌种
铜绿假单胞菌 [CMCC(B)10 104]
金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003]
枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501 ]
白色念珠球菌 [CMCC（B）98001]
矫正pH 配制培养基必须矫正pH，干燥培养基也
必须对pH进行验证，高压灭菌前的pH应比最终 pH值高左右。矫正pH后的培养基应加热、过滤，
使培养基澄清。
2、培养基的灭菌
灭菌方法及条件不当可直接影响培养基质量，培 养基灭菌方法和条件,商品化的成品培养基或自配 的培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能 引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝固力或pH的变
整个有效期内均需符合这些相应的标准。每批培养基储 存的时间将取决于一定存放条件（包括容器和密封性） 的培养基组成成分的稳定性。
试验结果处理
⑴当批培养基不符合促生长试验，应寻找造成不 合格的原因。
⑵这个调查包括采取适当的行动以防止问题的重 复出现。
⑶如果未找到原因或还没有解决有关培养基的促 生长问题，那么任何不符合要求的批次均不能使 用。
一、培养基的配制
培养基是绝大多数微生物试验的基础。因此，培养基的质 量是微生物试验成功与否的关键因素。适宜的培养基制备 方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
细菌的接种与培养—培养基的制备(微生物检验课件)
培养基的主要成分及其作用
营养物质：蛋白胨、肉浸液及牛肉膏、糖类、血液、鸡蛋与动物血清、无机盐、 生长因子
水分 凝固物质：琼脂、明胶、卵白 抑制剂：常用的有胆盐、煌绿等抑制革兰阳性菌生长；亚碲酸盐、四硫磺酸盐
及多种抗生素等 指示剂：为了观察细菌是否利用分解糖类、氨基酸等物质，常在某些培养基中
培养基的制备程序
制备程序：调配、溶化、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、鉴定7个主要步骤 分装量：琼脂斜面分装量约为试管容量的1/4，斜面长度约为试管长度的2/3；液
体培养基和半固体培养基为试管长度的1/3；琼脂平板平皿内径为9cm，倾注培 养基13-15ml，若内径为7cm，倾注培养基7-8ml 灭菌：高压蒸汽灭菌法最常用
原料称量
加热溶化
pH矫正
水
酚红 指示剂
培养基
培养基
比色管
目视
pH矫正
蒸 待馏 测水 管
标培 准养 比基 色
管
过酸
蒸 待 测馏 水 管
标准比培养基 色
管
相同
蒸 待馏 测水 管
标培 准养 比基 色
管
过碱
培养基分装
培养基的包扎
培养基的包扎
细菌生长繁殖的条件有哪些？ 叙述培养基的制备程序。 简述培养基的种类及用途。
加入一定种类的指示剂，如酚红、溴甲酚紫、增菌培养基 选择培养基 鉴别培养基 厌氧培养基
按物理性状分类 • 液体培养基 • 固体培养基 • 半固体培养基
基础培养基
基础培养基
含有基础生长所需的基本营养成分，最 常用的是肉浸液，俗称肉汤，主要成分 含牛肉浸液和蛋白胨。
生长繁殖方式：无性繁殖方式，即二分裂。 生长繁殖速度：多数细菌分裂一代需20～30min。结核分枝杆菌需
培养基和试剂的质量要求 ppt课件
常见问题产生沉淀原料中的杂质培养基出现抑制低的生长率使用成分不正确如成分称量不准添加剂浓度不正添加成分的加入不正确例如加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误添加剂污染污染添加剂污染梯子横档间距以30厘米为宜使用时上端要扎牢下端应采取防滑措施
培养基和试剂的质量要求
GB 4789.28——2013 食品室：赵文
例如：XLD 生长率：定量测试 (TSA为参比培养基)PR≥0.5 选择性：
五 培养基的质量要求
性能评价和结果解释
若按照规定的所有测试菌株的性能 测试达到标准，则该批培养基或试剂 的性能测试结果符合规定。若基本要 求和微生物学要求均符合规定，则该 批培养基或试剂可被接受。
常见问题
培养基不能凝固 制备过程中过度加热 低pH造成培养基酸解 称量不正确 琼脂未完全溶解 培养基成分未充分混
二 培养基的配置
实验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm(相当于电阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有规定要求。
水的微生物污染不应超过103CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂 培养基，在36 ℃±1 ℃培养48h±2 h进行定期检查微生物污染。
小心称量所需要的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作， 以防吸收含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水充分混合（注意避 免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其 快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前浸泡几分钟。
实验室应保存有效的培养基目录清单，清单应包括 以下内容：——容器密闭性检查； ——记录首次开 封日期；——内容物的感官检查
贮存
• 实验室自制的培养基
• 在保证其成分不会改变条件下保存，即避光、干燥保存，必要时在5 ℃±3 ℃冰箱中保存:
培养基和试剂的质量要求
GB 4789.28——2013 食品室：赵文
例如：XLD 生长率：定量测试 (TSA为参比培养基)PR≥0.5 选择性：
五 培养基的质量要求
性能评价和结果解释
若按照规定的所有测试菌株的性能 测试达到标准，则该批培养基或试剂 的性能测试结果符合规定。若基本要 求和微生物学要求均符合规定，则该 批培养基或试剂可被接受。
常见问题
培养基不能凝固 制备过程中过度加热 低pH造成培养基酸解 称量不正确 琼脂未完全溶解 培养基成分未充分混
二 培养基的配置
实验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm(相当于电阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有规定要求。
水的微生物污染不应超过103CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂 培养基，在36 ℃±1 ℃培养48h±2 h进行定期检查微生物污染。
小心称量所需要的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作， 以防吸收含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水充分混合（注意避 免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其 快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前浸泡几分钟。
实验室应保存有效的培养基目录清单，清单应包括 以下内容：——容器密闭性检查； ——记录首次开 封日期；——内容物的感官检查
贮存
• 实验室自制的培养基
• 在保证其成分不会改变条件下保存，即避光、干燥保存，必要时在5 ℃±3 ℃冰箱中保存: