核酸提取质量保证与全自动核酸提取仪的性能评价 廖璞
核酸提取仪标准
核酸提取仪标准
核酸提取仪是一种用于提取DNA或RNA的仪器，常用于分子生物学、遗传学、医学等领域。
为了确保提取出的核酸质量和纯度达到实验要求，需要遵循以下标准：
1. 选择合适的样品：样品的选择对于提取出高质量的核酸非常重要。
样品应该新鲜、无污染、保存完好，并且量足够。
2. 仪器操作：在使用核酸提取仪时，需要严格遵守操作说明书上的操作步骤。
仪器需要经过预热、平衡和冷却等步骤，以确保提取出的核酸质量稳定。
3. 试剂选择：试剂的质量和纯度也会直接影响到提取出的核酸质量。
应该选择经过认证的高质量试剂，并按照说明书上的要求使用。
4. 操作环境：在操作核酸提取仪时，需要保持操作环境清洁卫生，避免外界污染。
同时，也要注意避免试剂和样品之间的交叉污染。
5. 核酸质量检测：在提取出核酸后，需要进行质量检测。
可以使用紫外线分光光度计或凝胶电泳等方法，检测核酸的纯度和浓度。
总之，遵循以上标准可以提高核酸提取的效率和准确性，确保实验结果的可靠性。
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全自动核酸提取仪器及试剂对比
磁珠提取技术 cobas® AmpliPrep分析仪能净化PCR所需 的RNA或DNA靶标。
仪器比较
厂家 圣湘 复星 天隆
仪器 The NatCH 64 system SuperPure System-32
NP968
通量 64 32 32
/show1equip.asp?equipid=347691 7
ROCHE 全自动核酸提取工作站
cobas AmpliPrep
/products/Pages/COBASAmpliPrep.aspx
/products/instrumentation-automation/realtime-pcr/m2000-sp-rt.html#
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QIAGEN 全自动核酸提取工作站
QIAsymphony SP
QIAsymphony 技术将硅胶膜或NI-NTA纯 化的速度和效率与易于操作的磁珠相结合。 更高的操作安全性，样本体积多至1 ml ， 50 mg 组织或107 个细胞，以及多样的应 用（RNA、DNA和蛋白纯化），使 QIAsymphony SP工作站成为自动化样本 制备技术上一座新的里程碑。 工作站提供试管架和96孔板底座，可加载 多种类型的试管和96孔板，包括10-16.9 mm 的带条形码标签的试管或 96孔微孔 板或深孔板。上样模块共可放置4 个可加 载24个样本的试管架和一个用作内参的试 管架，或最多放置4个96孔微孔板或深孔 板。工作站在样品管/板进入仪器时自动 扫描条形码，确保纯化全过程的样本追踪。
时间 30min 30~50min 10~45min
样本体积 200ul ~1ml ~1ml
QIAGEN 罗氏 雅培
关于全自动核酸提取仪的优点都有哪些
关于全自动核酸提取仪的优点都有哪些随着科技的不断进步，现代医疗越来越依赖于分子生物学技术。
其中，核酸提取是基础而重要的步骤。
传统的核酸提取方法需要大量的人工操作，耗费时间和人力，而且操作过程中容易发生交叉感染的风险。
全自动核酸提取仪的出现，为核酸提取带来了翻天覆地的改变。
那么，全自动核酸提取仪有哪些优点呢？1. 高效快捷全自动核酸提取仪减少了繁琐的人工操作，节省了时间和人力成本。
整个核酸提取的过程在机器内部完成，无需操作人员亲自参与。
一旦样本加入到提取卡带中，全自动核酸提取仪就能够自动完成样本的提取、纯化和浓缩等工作，时间只需要几小时，甚至更短。
此外，全自动核酸提取仪还可以实现高通量的核酸提取，单次可以处理多个样本，大大提高了工作效率。
对于检测几千份样本的实验室来说，全自动核酸提取仪的效率是不可替代的。
2. 提取质量高全自动核酸提取仪在操作过程中，可以严格控制各个条件，使提取的核酸质量非常高。
仪器可以通过微调样品、缓冲液、磁珠等的浓度，以及加热、震荡等参数的设置，优化核酸提取的效果。
相比传统的手工提取方法，全自动核酸提取仪可以避免人为操作时产生的误差和不稳定性，从而提高提取的质量和纯度。
3. 降低操作风险全自动核酸提取仪的另外一个优点是大大降低操作风险。
传统的核酸提取过程中，操作人员需要进行许多繁琐的步骤，包括样品的移液、离心、吸液、加磁珠等，操作过程中很容易受到污染和误操作的影响。
在一次实验中，误操作有可能导致大量样品或关键试剂的浪费，而且还可能交叉感染。
相比之下，全自动核酸提取仪可以降低误操作的风险。
它把整个核酸提取流程封装在一个系统中，减少了对操作人员的依赖程度。
样品加入卡带后，整个提取过程在机器内部完成，操作人员接触样品的时间减少了很多。
这降低了污染和误操作的风险，提高实验的成功率。
4. 高度自动化全自动核酸提取仪可以高度自动化，减少了人工精度和疲劳对实验结果的影响。
几乎所有的步骤都由机器自动完成，例如样品输入、磁珠分离、洗涤等，只需要按照菜单的操作步骤即可。
全自动核酸提取仪标准
全自动核酸提取仪标准全自动核酸提取仪标准介绍•全自动核酸提取仪是一种用于从样品中提取核酸的高效设备；•核酸提取是分子生物学研究的重要步骤，也是疾病诊断和基因检测的关键步骤之一；•全自动核酸提取仪的标准是确保提取过程的准确性、一致性和可重复性。
核酸提取的重要性•核酸提取是从生物学样本中分离出核酸分子的过程；•核酸提取对后续的PCR扩增、测序等实验具有决定性影响；•核酸提取的质量和纯度直接影响后续实验的结果准确性。
全自动核酸提取仪标准的必要性•标准化的核酸提取过程可以确保提取结果的准确性和可靠性；•核酸提取仪的标准化可以提高实验室内不同操作者之间的一致性；•标准的验证和认证流程可以帮助生物实验室选择合适的核酸提取仪设备。
全自动核酸提取仪标准应包括的要点1.提取效率标准：–标准化的样品输入量和提取产量；–提取效率的变异系数限制；–提取过程中的样品损耗限制。
2.纯度要求：–核酸提取后的杂质含量要求；–蛋白质、RNA和DNA的污染限制；–标准化的纯化步骤和方法。
3.自动化程度：–提取过程中是否需要人工干预的限制；–是否具备自动化的样品处理功能；–自动化控制的准确性和稳定性要求。
4.流程验证和认证：–核酸提取仪的性能测试标准；–设备使用前的校准和验证要求；–核酸提取仪的质量管理体系要求。
结论全自动核酸提取仪标准的制定和遵守对于保证核酸提取的准确性和可靠性至关重要。
标准化的提取过程可以提高实验结果的一致性，并推动生物领域的科学研究和临床应用。
通过制定合理的标准和认证流程，我们能够选择到合适的核酸提取仪设备，为科学研究和医学诊断提供可靠的支持。
核酸提取仪国标
核酸提取仪国标
核酸提取仪国标是指中国国家标准化管理委员会发布的一项关于核酸提取仪器的国家标准。
该标准规定了核酸提取仪器的术语和定义、分类与命名、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存等要求。
随着生物技术的不断发展，核酸提取仪器的应用越来越广泛，涉及到医学、生物工程、农业等领域。
为了规范市场，提高核酸提取仪器的质量和技术水平，中国国家标准化管理委员会于2016年发布了《核酸提取仪器的通用技术要求》，并于2017年实施。
该标准对核酸提取仪器的性能和技术指标做出了详细的规定。
例如，仪器应具备自动化、快速、准确、稳定等性能特点，能够满足不同实验需求；仪器的外观应简洁、大方、易于操作；仪器的安全性能应符合国家相关标准等。
除了技术要求外，该标准还规定了核酸提取仪器的试验方法、检验规则等要求。
例如，仪器应进行哪些试验项目、如何进行试验、如何判定试验结果是否符合要求等。
此外，标准还规定了仪器的标志、包装、运输和贮存等要求，以确保仪器的质量和安全性能。
总之，核酸提取仪国标是保障核酸提取仪器质量和性能的重要标准之一。
该标准的发布实施对于提高核酸提取仪器技术水平、推动行业发展具有重要意义。
核酸提取仪标准
核酸提取仪标准
核酸提取仪是现代分子生物学研究中必不可少的设备之一。
它可
以从样本中提取DNA或RNA等核酸分子，为后续的PCR、测序、克隆等实验提供所需的基础物质。
在使用核酸提取仪时，需要注意以下几个
标准：
1. 样本的处理要严谨：样本的质量直接影响核酸提取效果的好坏。
在提取前，需要对样本进行处理，如细胞活性检测、去除污染物等。
同时，不同类型的样本在处理前也需要有所不同的处理方法，需
要根据实验需求进行相应的选择。
2. 操作条件要掌握：核酸提取仪需要在恰当的操作条件下才能
发挥出最佳效果。
包括样本的配比、温度、时长等，都需要按照设备
的要求进行精准的操作，遵守仪器的使用规范。
3. 环境的卫生要保证：核酸提取是十分精细的操作，很容易受
到环境中污染物的影响。
为了避免实验结果的偏差，操作前需要对实
验环境进行消毒处理，保证其干净卫生。
4. 仪器的维护需重视：一台核酸提取仪如果没有经过及时、规
范的维护，将会严重影响其使用寿命和检测准确性。
因此，在使用后
需要对仪器进行正确的清洗、消毒和维护，避免损坏和日常不良影响。
以上就是核酸提取仪标准的四个方面，能够较为全面地指导我们
进行实验，提高实验准确性和效率。
全自动核酸提取仪技术参数
全自动核酸提取仪技术参数嘿，大家好！今天咱们来聊聊全自动核酸提取仪，这可是个了不起的玩意儿哦！说到核酸提取，可能有的人就开始挠头了，核酸是什么？提取干嘛？别担心，今天我就带你们轻松了解这个神奇的小机器。
全自动核酸提取仪就像厨房里的搅拌机，能把原材料变成你想要的东西。
想象一下，咱们在实验室里，需要从样本中提取DNA或者RNA，传统的方法那可真是麻烦得很，手动操作还得小心翼翼，搞得像是在玩高难度的魔方。
可是，有了这个全自动的小家伙，整个过程简直就像开了挂！它能把繁琐的步骤统统自动化，让科研人员省时省力，心情也跟着好起来。
这仪器的技术参数，别说，还真是让人眼前一亮。
它的提取效率高得惊人，样本处理量大，像流水线一样，一下子就能搞定好多样本。
操作界面友好得很，像是在玩游戏一样，轻轻一点，仪器就乖乖开始工作。
它不仅速度快，而且提取的结果也特别纯净，基本上可以说是高质量的保证。
要知道，在科学研究中，质量可是一条命啊，差一点都不行。
这仪器的体积也挺小巧的，放在实验室里简直不占地方，关键是颜值也不低，简直就是实验室的“高颜值”代表。
它有各种模式可以选择，适应不同的实验需求。
简直是科研工作者的好帮手。
嘿，有时候我都想，它是不是有自己的小情绪，感觉它在帮我们加油，努力工作呢！说到安全性，大家可能会担心这些高科技的东西会不会出错。
放心吧，这个全自动核酸提取仪可是经过多重测试的，稳定性杠杠的。
就像你信任的老朋友一样，虽然长得比较复杂，但绝对不会给你添麻烦。
而且它的清洗和维护也很简单，简直不费吹灰之力。
真心觉得，这机器就像是个勤劳的小蜜蜂，工作再忙也不怕。
当然了，使用全自动核酸提取仪的好处可不仅仅是提取效率高、操作简单。
它还能减少人为操作带来的误差，这在科研领域可是个大大的加分项。
大家都知道，科研就是一个对数据精益求精的过程，哪怕是一点小差错，都可能影响整个实验的结果。
有了这台仪器，简直就像是为科研保驾护航，心里踏实多了。
国产全自动核酸提取仪的比较
国产全自动核酸提取仪的比较比较国产全自动核酸提取仪的特点：厂家仪器通道防污染措施提取时间___ 16、20、32、96 循环风路、hepa滤膜、紫外 30-40min西安天隆 24、32、48、96 紫外 30-50min杭州博日 32、96 30-60min___ 24、32、48、96 紫外 15-40min杭州艾康 32 紫外 12-40min___ 32 循环风路、hepa滤膜、紫外 30-70min___ 24、32、96 紫外 30-50min江苏硕世 24、32、96 30-50min百泰克 16、32 <60min厦门致善 32 30-60min___生物 24、32 30-40min天根 16、32 30-40min均一性 CV值___ <5%西安天隆 <5%___ <3%___ <5%杭州___ <1.5%___ <5%___ <3%江苏硕世 <5%百泰克 <5%厦门致善 <5%___生物 <5%天根 <5%是否有试剂盒磁珠回收率处理体积南京___ 有。
99% 30ul-2000ul西安天隆有。
99% 30ul-15ml杭州博日有。
98% 10ul-1000ul___ 无。
95% 50ul-10ml杭州艾康有。
98% 20ul-1000ul___ 有。
99% 100ul-2400ul___ 有。
98% 20ul-1100ul江苏硕世有。
99% Max1000ul百泰克有。
99% 20ul-7000ul厦门致善有。
99% 50ul-1000ul___生物有。
99% 50ul-1000ul天根有。
99% 20ul-2400ul对比这些国产全自动核酸提取仪，可以发现它们在通道、防污染措施、提取时间、均一性、是否有试剂盒、磁珠回收率和处理体积等方面存在差异。
其中，南京___、西安天隆、杭州博日、杭州奥盛、杭州艾康、___、___、江苏硕世、___、厦门致善、济凡生物和天根这些品牌的全自动核酸提取仪都有其各自的特点和优势。
全自动核酸提取仪介绍
陈晓东 jycxd@
1953
1956
1990
1993
免疫磁珠法
从经典方法到硅膜吸附法、磁珠分离法
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从手动到全自动
核酸纯化方法比较
酚氯法 纯度 较高 高盐沉淀法 低 硅介质柱 高 离子交换 高 磁性分离 高
方法稳定性
技术要求 有机试剂 操作时间 规模化 多步离心 自动化
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产品型号 处理体积 样品通量 磁珠回收效率 磁棒 加热温度 振荡混合 磁珠大小 试剂种类 操作界面 内部程序 计算机接口 程序管理 污染控制 操作时间 网络通讯 产品外形尺寸 重量 使用电源 操作温度范围 操作湿度范围
核酸提取仪NP968 20uL-1000uL 1-32 >95% 32 裂解加热温度：室温-120℃ 洗脱加热温度：室温-120℃ 多模式多档可调 > 1um 磁珠法试剂 中文操作系统，彩色液晶屏触控操作 内建15组模式程序（可存储 >500组程序） USB 新建、编辑、删除模式程序，自由灵活编辑提取程序 内置紫外消毒模块 30～60分钟/次 可扩展以太网远程控制 40cm×42cm×47cm 25Kg AC110～240V 50Hz/60Hz 1000VA 10℃～40℃ 低于80％
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硅胶膜法：可用于手工提取，也可用于自动化提取
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磁珠分离法：一般用于自动化提取
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（自动）核酸提取仪校准规范
（自动）核酸提取仪校准规范（征求意见稿）编制说明201707《（自动）核酸提取仪校准规范》（征求意见稿）编制说明一、任务来源根据国家质量监督检验检疫总局2015年国家计量技术法规计划立项（见国质检量函[2015] 146号文件“质检总局关于下达2015年国家计量技术法规制修订计划的通知”），由浙江省计量科学研究院和中国计量科学研究院共同承担《（自动）核酸提取仪校准规范》的制定工作。
归口单位：全国生物计量技术委员会主要起草单位：浙江省计量科学研究院二、规范制定的必要性自动核酸提取仪是一套高通量、高灵敏度的自动核酸纯化提取设备，其系统组成主要由温控系统、取液装置、振荡装置和分离纯化系统组成。
该仪器已广泛应用于国内外核酸分析检测，国内没有相应的法规来对核酸提取类仪器的质量进行验收及检定校准，现在该仪器的验证及验收服务还停留在拿一个简单的实物样品，进行核酸提取，其提取质量的判定也没有技术指标可以依据，具有较大的主观性。
国外有相应的验收指标，但这些指标都是各自的企业标准，没有统一的校准规范进行检测。
因此，目前缺乏相应的校准规范，仪器性能状态无法校准，测量数据难以达到可比性及可溯源性。
目前，国内现有自动核酸提取仪几百台，主要分布在生物学基础研究实验室、农业研发及检测实验室、医疗卫生系统等。
鉴于各实验室逐渐以第三方身份开展检测业务，为提高实验室权威性、公正性及业务水平，增强客户的信赖性，扩大业务量，各实验室对计量认证和实验室认可的需求越来越多，自动核酸分析系统的检定校准需求也越来越大。
因此，有必要通过制定（自动）核酸提取仪的校准规范，实现仪器性能的校准。
三、规范制定过程2015年6月立项后，起草小组对市场上常见的自动核酸提取仪进行了调研，通过走访用户和与厂家沟通交流等方式，就规范的构架设置、校准项目和校准方式广泛听取了用户和专家的意见。
2015.11-2017.06年，起草小组通过反复研究和实验确定了校准所用的标准器，并形成了《（自动）核酸提取仪校准规范》草稿，随后通过对不同厂家、不同型号的仪器进行校准试验，验证了草稿的适用性。
《(自动)核酸提取仪校准规范》征求意见稿发布
《（自动）核酸提取仪校准规范》征求意见稿发布随着生物分子工作领域的飞速发展，相关分离纯化工作量也逐渐增加，对核酸提取仪的应用也更加广泛。
基于此，近日，全国生物计量技术委员会发布了《(自动)核酸提取仪校准规范》征求意见稿，并面向全国的并面向全国的计量技术机构、科研院所以及相关的行业企业征求意见。
核酸提取仪，是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。
主要分为两类：一类是大型的自动化的，一般称为自动液体工作站；另一类是小型自动核酸提取仪，利用封装好的配套试剂自动完成提取纯化过程。
相较于大型自动液体工作站，小型自动核酸提取仪具有仪器设备和运行成本低、操作方便优势，现如今得到越来越多的应用。
现如今，几乎在每个实验室，与生物分子相关的分离纯化共作都是十分重要，且必不可少的，但要对多个样品进行纯化还是相当困难的，不仅需要选择合适的纯化技术，而且工作量也特别大，很难满足当前飞速发展对高通量样品进行提取纯化的需求。
而自动核酸提取仪是一套高通量、高灵敏度的自动核酸纯化提取设备，应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器，灵活、高效、结果稳定、成本低，成为这一实验过程中必备的仪器设备，具有重要作用。
为进一步规范其应用，精确技术参数要求，使其能高效的满足分离要求，《(自动)核酸提取仪校准规范》征求意见稿成功发布。
该规范的编制基于(自动)核酸提取仪的主要技术参数实验测试的基础上，参考了JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》，依据《JJF 1071-2010 国家计量校准规范编写规则》、《JJF 1059.1-2012测量不确定度评定与表示》完成本规范的制定。
作为首次发布的规范，它主要适用于(自动)核酸提取仪的校准。
该仪器设备其原理是利用一定的温度、振动等条件对样本进行破碎、纯化和提取，其系统组成主要由温控系统、取液装置、振荡装置和分离纯化系统组成。
配合提取单个标本的独立分装试剂，操作过程中，只需要加入标本动作，仪器自动完成提取纯化的全过程，不需要加入提取过程中所需要的试剂过程，是真正得到应用的小型自动核酸提取仪。
核酸提取质量保证与全自动核酸提取仪的性能评价 廖璞
不同核酸提取方法产率比较 （通过样本浓度倍比稀释后比较灵敏度）
Journal of Virological Methods 171 (2011) 195–199。
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
纯度 (Purity)
检测260nm、280nm、(320nm)OD值，计算比值
RNA核酸提取评价
完整性(Integrity)
不同RIN值对GAPDH扩增的影响 Methods. 2013 Jan;59(1):20-31.
重庆市临床检验中心
核酸提取其它评价
干扰物质、交叉污染
干扰试验
一、将已知病原体含量 的溶血或脂血标本用待评价 试剂提取，比较所得到的结 果。可知纯化后是否将有关 抑制物去除从而反映提取纯 度。
组织样本结合杆菌检测 不同提取方法效率比较
（检测限比较）
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
提取方法的选择
依据 标本类型
考虑 后续实验 对提取质 量的要求
依据
相关标准、 指南
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
提取方法的选择
依据治疗、监测要求选择
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
重庆市临床检验中心
微量样本的核酸质量评价
如NanoDrop超微量分光光度计、quabit、 Quant-iT荧光定量分析–用 于下游检测为（NGS）等需要精密测定的实验
重庆市临床检验中心
主要分子诊断技术对核酸提取的要求
1 临床病原微生物核酸检测
2 染色体病和遗传性疾病基因检测
3
肿瘤基因检测
4 器官移植配型HLA基因分型检测
全自动核酸提取仪对三种性传播病原体检测的性能评价
全自动核酸提取仪对三种性传播病原体检测的性能评价张睿;叶阿里;孔令君;窦亚玲;伊洁【摘要】目的评价全自动核酸(RNA)提取仪(型号 MagX)对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)和解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum,UU)检测结果应用于临床的可行性.方法收集检测CT样本159例、NG样本128例、UU样本144例,应用荧光核酸恒温扩增检测技术(Simultaneous Amplification and Testing,SAT),同一样本分别采用手工提取分装加样和 MagX提取分装加样两种检测方法,然后进行实时荧光 PCR.以手工检测结果为金标准,对 MagX检测结果进行阳性符合率(灵敏度)、阴性符合率(特异度)、总符合率(准确度)的评价.同时,对该仪器进行防污染验证.全自动核酸(RNA)提取仪与手工检测结果进行 Kappa一致性分析.结果 159例 CT, 128例 NG和144例UU样本的阳性符合率、阴性符合率、总符合率依次为CT:0.9106,92.59%,98.48%和97.48%;NG:0.9383,100.00%,98.18%和98.44%;UU:0.8856,93.33%,95.24%和94.44%;其 Kappa系数均>0.8(CT:Kappa=0.9106,NG:Kappa=0.9383,UU:Kappa=0.8856),CV值均<5%;没有携带污染现象存在.结论上海仁度生物科技生产的CT,NG和 UU核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增)在全自动核酸(RNA)提取仪(型号 MagX)的检测符合临床检测标准,可在临床使用.%Objective To verify the feasibility of Chlamydia trachomatis(CT),Neisseria gonorrhoeae(NG),Ureaplasmaurealyticum(UU)detection by automatic nucleic acid extraction workstation(MagX).Methods The test samples of CT (159),NG(128)and UU(144)were collected.The samples were extracted of nucleic acid two methods:manual extraction, which entailed manually preparing PCRreaction system and MagX automatic nucleic acid extraction workstation,which au-tomatically prepared the reaction system.The two parts of nucleic acids proceeded to the Simultaneous Amplification and Testing(SAT).The result of manual extraction was set as the golden standard and the Kappa consistency analysis was con-ducted.Meanwhile,the sensitivity,specificity,accuracy and carry pollution experiments of MagX were verified.Results The sensitivity of MagX automatic nucleic acids extraction workstation were92.59%(CT),100.00%(NG)and 93.33%(UU).The specificity were98.48%(CT),98.18%(NG)and 95.24%(UU).The accuracy were97.48%(CT),98.44%(NG)and 94.44%(UU).The results of kappa consistency analysis were greater than 0.8(CT:Kappa=0.910 6,NG:Kap-pa=0.9383,UU:Kappa=0.885 6).MagX detected the precision of CT,NG andUU:Coefficient of Variation(CV)<5%. There was no pollution phenomenon.Conclusion MagX automatic nucleic acids extraction workstation could be used to test three kinds of sexually transmitted pathogen in clinical settings.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2017(032)006【总页数】3页(P142-144)【关键词】沙眼衣原体;淋病奈瑟菌;解脲脲原体;全自动核酸(RNA)提取仪【作者】张睿;叶阿里;孔令君;窦亚玲;伊洁【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京 100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京 100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京 100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京 100730;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京 100730【正文语种】中文【中图分类】R446性传播微生物，沙眼衣原体(chlamydia trachomatis，CT)、淋病奈瑟菌(neisseria gonorrhoeae，NG)、解脲脲原体(ureaplasma urealyticum，UU)[1]可导致淋病、非淋球菌性尿道炎、宫颈炎、宫颈糜烂、女性不孕和男性免疫性不育[2，3]等，是人类泌尿生殖道的常见病原体，也是性传播疾病(sexually transmitted diseases，STD)的主要病原[4，5]。
（自动）核酸提取仪关键性能评价
（自动）核酸提取仪关键性能评价发布时间：2023-01-16T08:39:38.888Z 来源：《中小学教育》2022年18期作者：张进辑[导读] 本文将详细介绍自动核酸提取仪的操作流程与提取原理，通过专业的调查与研究，精准找出仪器内部关键性能的指标评价，对仪器评价与项目评价实行科学分析，有效增强核酸提取仪的使用效果。
张进辑中检西南计量有限公司云南昆明 650200摘要：本文将详细介绍自动核酸提取仪的操作流程与提取原理，通过专业的调查与研究，精准找出仪器内部关键性能的指标评价，对仪器评价与项目评价实行科学分析，有效增强核酸提取仪的使用效果。
关键词：关键性能；项目评价；核酸提取仪引言：为更好地控制核酸提取仪中的内部关键参数，需恰当了解该仪器的内部构造，明确不同仪器的提取方式，再根据实际情况改善仪器提取状态，增强仪器评价的准确性，为此后更多提取物质的研究打下坚实基础。
1自动核酸提取仪的操作流程与提取原理1.1操作流程若想明确自动核酸提取仪中的关键性能指标，需确认该类仪器的操作流程。
首先，要利用自动核酸提取仪开展裂解释放工作，使磁珠特异结合，提升提取效果。
其次，还要开展核酸与磁珠复合物洗涤，利用该项举措来洗脱核酸。
最后，需在试验下游开展对应性质量检测工作。
在明确了自动核酸提取仪的操作步骤后，需将操作流程划分成多个层次。
比如，可全面查询自动核酸提取仪的不同类型，依照其对应型号来规范操作模式。
针对雅培M200sp仪器来说，其采用的模式为单个管子、转移液体；而针对Ezbead仪器而言，其需采取多个管子、转移磁珠等模式，要依照不同的实验室环境来观察对应仪器的操作状态，科学设计操作模式与过程。
1.2提取原理在明确了自动核酸提取仪的操作内容后，还要找出仪器提取原理，借助对该项原理内部元素的判断，增强对该类仪器关键指标的控制。
比如，当前自动核酸提取仪的提取原理主要有柱提分离与磁珠分离，而磁珠分离原理较为常见。
确认磁珠分离的原理前，要找出磁珠结构，该结构中包括有机高分子、磁性无机粒子，利用合适方法将分子粒子有机结合，继而使该结构带有磁性[1]。
全自动核酸提取仪产品技术要求完整版
1 全自动核酸提取仪范围本标准规定了全自动核酸提取仪的分类、技术要求、检验方法、检验规则、标志、包装、运输与贮存。
本标准适用于XXXX 全自动核酸提取仪，该产品主要应用于临床样本中核酸的提取、纯化。
.2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
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GB/T 191包装储运图示标志GBT 18268.1-2010测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第1部分：通用要求GBT 18268.26-2010 测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第26部分：特殊要求体外诊断(IVD)医疗设备GB 4793.1-2007 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1部分：通用要求YY 0505-2012医用电气设备第1-2部分安全通用要求并列标准电磁兼容要求和试验YY 0648-2008 测量、控制和试验室用电气设备的安全要求第2-101部分体外诊断（IVD ）医用设备的专用要求3型号命名与分类3.1 型号与命名3.2 分类台式：全自动核酸提取仪3.3 工作环境a 、工作温度：5℃—＋40℃；b 、平均相对湿度：＜95％；4技术要求4.1、一般要求提取仪应符合本标准的要求，应按经规定程序审查批准的图样和技术文件制造。
4.2、基本参数4.2.1产品外观4.2.1.1提取仪的外观应整齐、美观、表面平整光滑、色泽均匀、不得有斑痕、裂痕等缺陷4.2.1.2面板上的文字符号标识清晰4.2.1.3显示屏清晰完整4.2.2使用功能4.2.2.1启动运行：机器启动正常，彩色液晶显示和触控操作正常4.2.2.2程序存储：可根据实验要求编辑并储存不同的检测项目程序4.2.2.3参数控制：可根据实验要求设置不同的加热温度、加热时间、混合速度、混合时间、磁吸时间4.2.3升温速率：从室温升温到70℃（裂解及洗脱位）≤5min4.2.4 温度波动：波动度≤±4℃4.2.5控温精度：孔内温度精度≤±10%4.2.6控温均一性：孔间温度精度≤8℃4.2.7 残留性能：磁珠在孔位间转移时无肉眼可见残留4.2.8 安全性能4.2.8.1 耐压强度：1500V，1min无闪络击穿4.2.8.2 对地漏电流：≤0.5mA4.2.8.3 接地电阻：≤0.1Ω4.2.9 电磁兼容：应符合GB/T 18268.1-2010和GB/T 18268.26-2010的要求4.2.10 尺寸：920mm*450mm*570mm4.2.11重量：75KG4.3 试验方法4.3.1试验条件除环境试验或有关标准另有规定外，试验应按下列条件进行a、温度：10℃～40℃；b、相对湿度：10％～80％；c、电源电压：220V±22V，50Hz±1Hzd、大气压力：85kPa～106kPa；24.3.23试验设备和器材a ）温度计；b ）耐压测试仪；c ）医用泄露电流测试仪；d ）医用接地电阻测试仪4.4 外观用目测方法检查4.3.3.1设备表面应整齐、美观、表面平整光滑、色泽均匀、不得有斑痕、裂痕等缺陷。
全自动生化分析仪的使用体会
全自动生化分析仪的使用体会
廖璞;程海平;王淑琴;廖雪松
【期刊名称】《实验与检验医学》
【年(卷),期】2001(019)001
【摘要】@@ 目前,使用全自动生化分析仪的单位日益增多,怎样使仪器保持在良好的工作状态,得到正确的检验结果,是大家十分关注的问题.我中心先后购买了美国ENCOR-Ⅱ型离心式全自动生化分析仪(92年)、日本OLYMPUSAU-600型全自动生化分析仪(97年),两台仪器档次、性能、工作原理、操作方法虽不尽相同,但由于我们精心的使用,两台仪器至今仍处于良好的工作状态,现将我中心多年来使用全自动生化分析仪的体会介绍如下.
【总页数】2页(P53-54)
【作者】廖璞;程海平;王淑琴;廖雪松
【作者单位】400014,重庆市临床检验中心;400014,重庆市临床检验中心;400014,重庆市临床检验中心;400014,重庆市临床检验中心
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11+2
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全自动核酸提取仪产品技术要求
全自动核酸提取仪1范围本标准规定了核酸提取的术语和定义、要求、试验方法、标志、标签、使用说明书、包装等要求。
本标准适用于WM-1300 全自动核酸提取仪。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
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GB/T 191-2008 包装储运图示标志GB4793.1 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1 部分：通用要求GB /T 14710 医用电器环境要求及实验方法GB/T 18268.1 测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第1 部分：通用要求YY/T0466.1 医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1 部分：通用要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1耗材配套仪器运行的磁棒套和96 孔深孔板。
3.2零位校准对耗材的孔1 位置；水平位置和垂直位置的定位设置。
3.3行程校准对耗材的孔1 位置和孔6 的，孔中心距离值的设置。
3.4等待将磁珠吸附到磁棒套上，然后将磁棒和磁棒套置于深孔板上方。
3.5CV 值变异系数，标准差与平均数的比值。
计算各个提取样本孔的平行数据的统一性。
3.6纯化率已知样本的核酸量和最终提取后所剩核酸量的比值。
3.7混匀磁棒套在深孔板中上下运动搅拌磁珠和溶液使磁珠和溶液中的DNA 充分结合。
3.8往复吸磁磁棒在磁棒套中；在试剂溶液中来回往复运动；吸附试剂中的磁珠。
3.9悬停吸磁磁棒在磁棒套中；停止在试剂溶液中的一个固定位置吸附磁珠。
3.10分段吸磁磁棒在磁棒套中；根据溶液体积平均分段进行悬停吸磁。
4 产品命名X XXX - XXXXX / XXXX产品规格，由二至四位数字、字母组成 产品型号，由五以内位数字和字符组成。
企业代码，由二至四位英文字母组成。
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CT-DENBA、-DUNUA-DNA 部血分清泌、物全等血。、咽拭子等
耐 葡甲 萄氧 球核西 菌林 相酸金 关提黄 基色 因取方粪物法便、：血液及各类分泌 H检HC测PM-VD煮-DN沸NAA法；胃尿全粘液血膜、等组乳织汁活、检血标清本、
H乙关MIVP肝基--1病因D柱RN毒检N提AA耐测取药；相痰血、清血咽或清拭血或子浆血等等浆 磁珠法等。
产率 (yield)
不同核酸提取方法产率比较 （通过样本浓度倍比稀释后比较灵敏度）
Journal of Virological Methods 171 (2011) 195–199。
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
纯度 (Purity)
检测260nm、280nm、(320nm)OD值，计算比值
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
产率 (yield)
不同核酸提取方法产率比较 （不同提取方法提取后Ct比较）
菌液浓度106 CFU/ml
Journal of Microbiological Methods 76 (2009) 30–37
菌液浓度105CFU/ml 重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
有机提取法 盐析法 氯化铯密度梯度离心法 硅材质技术 离子交换法 滤纸分离法 …
CLSI- MM13A Collection, Transport, Preparation, and Storage of Specimens for Molecular Methods
酶消化法 有机溶剂提取法 强变性剂提取法 酒精及氯化锂沉淀法 氯化铯及蔗糖密度梯度 离心法 离子交换层析法 硅材质技术 Oligo(dT) 亲和层析法 分离mRNA …
组织样本结合杆菌检测 不同提取方法效率比较
（检测限比较）
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
提取方法的选择
依据 标本类型
考虑 后续实验 对提取质 量的要求
依据
相关标准、 指南
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
提取方法的选择
依据治疗、监测要求选择
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
产率 (yield)
核酸定量分析方法
若不含脂肪组织，大于10mg的组织应能产出大于 10 μg的 RNA 或 DNA 。
CLSI-MM10-P Genotyping for Infectious Diseases:Identification and Characterization . CLSI- MM13A Collection, Transport, Preparation, and Storage of Specimens for Molecular Methods.
葡萄球菌相关基因 检测
部分泌物等。 粪血便清、、血全液血及、各咽类拭分子泌等 物
HP-DNA
HCMV-DNA 乙肝病毒耐药相
关基因检测
MP-DNA
胃粘膜组织活检标本 尿液、乳汁、血清、 全血等 血清或血浆
痰、咽拭子等
HIV-1RNA 血清或血浆等
细菌其宏它…基…因组 Flu-RNA
菌液 …… 咽拭子、呼吸道分泌 物样本等
核酸提取质量保证
与自动核酸提取仪性能评价
廖璞 重庆市临床检验中心
2015 . 10 重庆
内容
引言 核酸提取质量评价与保证 自动核酸提取仪性能评价 结语
重庆市临床检验中心
引言
器官移植 配型HLA 分型检测
分子诊断
病原微生物 核酸检测
核酸提取 与纯化是
基础
分子诊断 临床应用
染色体病 和遗传性 疾病基因
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取基本步骤
样本 预处理
裂解 释放
分离 纯化
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取与检测结果
核酸提取、扩增过程中人基因组的污染，导致测序结果被污染
J Natl Cancer Inst. 2011 Jun 8;103(11):847-8庆市临床检验中心
核酸质量综合评价 产率 纯度
完整性 其他
其他：干扰物质、交叉污染等
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
产率 (yield)
1
核酸定量
评2
价
提取核酸后进行定量PCR，比较Ct值
方3 通过标本倍比稀释后提取进行灵敏度评价
法
4
通过内标(Internal Control/Calibrator)评价
RNA核酸提取评价
产率 (yield)
不同实验室RNA提取产率比较 （ 通过RT-qPCR对提取出的RNA进行基因转录子扩增比较提取效率）
Methods 59 (2013) 20–31
重庆市临床检验中心
RNA核酸提取评价
纯度 (Purity)
比值 R = (A260–A320)/(A280–A320)
重庆市临床检验中心
微量样本的核酸质量评价
如NanoDrop超微量分光光度计、quabit、 Quant-iT荧光定量分析–用 于下游检测为（NGS）等需要精密测定的实验
重庆市临床检验中心
主要分子诊断技术对核酸提取的要求
1 临床病原微生物核酸检测
2 染色体病和遗传性疾病基因检测
3
肿瘤基因检测
4 器官移植配型HLA基因分型检测
提取后贮存方式
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
评价方法
完整性(Integrity)
1
普通凝胶电泳
2 脉冲场凝胶电泳
3
毛细管电泳
其他：如扩增不同 4 大小的片段比较
……
Clinica Chimica Acta 424 (2013) 274–286
不同实验室核酸提取后完整度比较 （脉冲场凝胶电泳）
5
个体化用药核酸检测
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
病毒与细菌 耐药相关检 测 细菌 核酸病检毒测
核酸检测
结核HT分BBV枝--DD杆NN菌AA、耐
药基H因CV检-R测NA
痰、肺及支气管灌洗液、 咽拭子等 血血清清或、血血浆浆、乳汁等
性病类：NG-DNA、 生殖泌尿道分泌物、眼
耐CT甲-D氧NE西AB、林-DU金NU黄-AD色NA
1. 检测260nm、280nm、
（ 320nm ）OD值，计算纯度
2. 层析
层析
NATURE PROTOCOLS, 2007,2(12)
重庆市临床检验中心
RNA核酸提取评价
完整性(Integrity)
评价方法
RNA电泳图：
1 普通凝胶电泳
毛细管电泳/RIN 2 值等
理想的RNA完整性为：清晰的 28S/18S两条带，以及5S条带，无 基因组污染的DNA条带。28S/18S 应近似两倍。
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取质量管理
性能验证
试剂性能验证记录应能反映该批试剂的核酸提取效率 和核酸扩增效率。
可采用凝胶电泳试验比较核酸提取物与核酸标准物确 认核酸片段提取的完整性、260nm紫外波长测定确认核酸提 取的产率、260nm/280nm比值 确认核酸提取的纯度。
检验过程
应使用验证过的核酸抽提和纯化方法。
检测
用药个体化 核酸检测
肿瘤基因 检测
重庆市临床检验中心
引言
核酸
脱氧核糖核酸
(deoxyribonucleic acid, DNA)
核酸的紫外吸收
核糖核酸
(ribonucleic acid, RNA)
• 线性高分子化合物，粘度极大； • 多元酸，较强酸性； • 核酸分子具有强烈的紫外吸收。
DNA纯品A260/A280=1.8 RNA纯品A260/A280=2.0
二、将影响后续实验的物 质加入到标本中，看提取试 剂是否能够有效去除干扰。
交叉污染
将已知不同浓度的病原 体含量（包括阴性）的标本 用待评价试剂提取，比较所 得到的结果。可知纯化后是 否存在标本间交叉污染。
重庆市临床检验中心
核酸提取其它评价
成本、时间、特殊设备要求等
Journal of Microbiological Methods 76 (2009) 30–37.
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
完整性(Integrity)
不同的提取方法 对核酸提取完整性的影响（ ImageJ分析）
Clin Chim Acta. 2015 Feb 2;440:205-10.
样本提取间隔时间 对完整性的影响(脉冲场电泳)
重庆市临床检验中心
RNA核酸提取评价
产率 (yield)
重庆市临床检验中心
引言 多样化
临床核酸提取标本类型
血液：全血、血清、血浆、血斑… 粪便、尿液、脑脊液…
分泌物：痰、乳汁、拭子…
细胞：肿瘤细胞、羊水细胞… 病理组织、微生物菌落…
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取方法
病毒核酸 提取方法
基因组核酸 提取方法
RNA 提取方法
有机提取法 靶向捕获技术 硅材质技术 …
重庆市临床检验中心
微量样本的核酸质量评价
如微生物群体中pg级的DNA提取量
• 使用荧光双链DNA染料
法在quabit荧光计上测
定浓度。
• Lonza FlashGel system检 测完整性、16S rRNA基 因进行qPCR检测
Nat Protoc. 2015 May;10(5):768-79.
我室核酸纯化过程中乙醇未完全去 除导致测序结果出现杂峰
乙醇未完全去除标本
乙醇完全去除标本