流式细胞仪细胞分选的操作步骤
流式细胞仪的使用程序
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。
2.打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印,打开打印机电源。
5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。
二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1.从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x 轴和y轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测, EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
流式细胞仪细胞分选的操作步骤细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
流式细胞仪操作方法
一、样品制备1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。
分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。
每个样品至少获取2×104cells，二、上流式测细胞1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。
检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。
将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。
如果需要打印，打开打印机电源。
打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。
1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。
若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。
关闭液流抽屉。
执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。
结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。
2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。
流式细胞仪操作方法
—、样品制备1、取样（大约lx cells ）,离心弃上清，以PBS 洗两遍，逐滴加入1 ml 70%的 冷乙醇固定细胞，-20°C 冻存过夜。
分析时，离心弃上清，以PBS 洗两遍，加入 100|j 啲Rnase （GenScript 试剂A ）, 37°C 水浴30min,然后再加入400』的PI 染 液（GenScript 试剂B ）,在4°C 避光条件下孵ff30min 后即可上FCM 检测。
每个样品至少获取2xl04cells, 二、上流式测细胞1」、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属扌当板；取出鞘液桶， 倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS 或FACSFLow ）,拧紧鞘液桶盖，安上金属扌当板，保证管路畅通无扭曲。
检查废液 桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液） 向废液桶中倒入400ml 浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。
确实盖紧桶盖, 检查所有管路是否妥善安責。
1.2、 依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass 变Ac putput ）、变压 器电源，稳定5分钟。
将FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应 是STANDBYo 如果需要打印，打开打印机电源。
打开电脑（密码：BDIS ）,等待 屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。
1.3、 将压力阀責于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。
若滤器管路中有气泡，打开连接 头，挤出鞘液，以排除气泡。
关闭液流抽屉。
执行仪器PRIME 功能一次，以排除 Flowce 呻的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流岀）。
结束后自动STANDBY, 5分钟后即可进行试验。
2.1、从苹果画面中选取CELLQuest,最大化，选散点图标，打开，Plot type 选择Acq-analysis, X 参数和丫参数分别取FSC-H 、SSC-H （选择散点图主要是确定 所需细胞的细胞群）。
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程一、环境和液流的消毒1、准备足量的无菌1×PBS（3L左右）和去离子水（10L左右）。
PBS和去离子水可高压灭菌，sheath桶和装DI水的5L小桶依次用75％医用酒精和无菌去离子水各涮洗三次，然后将无菌PBS和去离子水分别注入相应桶内即可。
2、房间在分选前紫外灯照射15－20分钟；用1:50新洁尔灭拖地；用75％医用酒精擦拭工作台和收集架；用75％医用酒精喷洒分选细胞收集区和上样区。
二、开机和管道的消毒1、将 Sheath液换为活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液（不要用75％的酒精），开机。
开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，打开计算机并等计算机进入WINDOWS系统后，打开激光电源，运行FACSDiva软件，联机成功后，执行Fluidics startup命令。
然后从FACSDiva的sort菜单进入sort setup，选择合适的液流压力（high、 middle、low）。
一般来说，100μm的喷嘴选用Low，而70μm的喷嘴选用middle。
2、打开breakoff window，点击显示窗上的液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间和液流的形态是否正常。
如果出现异常，可以通过调整喷嘴的位置，改变 Breakoff 窗口的Amplitude的大小和打开Attenuation开关等来进行调整。
（具体操作可参考Instrument User’s Guide的194－200页），直至液流形态和位置符合分选要求。
3、在上样管中装入1ml 活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液,将上样管放在上样架上，点击Acquisition窗口的Load开关，运行15－20分钟后，点击Unload 开关，取下上样管。
4、将Sheath液换为无菌PBS，先后执行Fluidics shutdown和Fluidics startup程序各一次。
通过上述操作完成了环境和管道的消毒，为分选准备了无菌的环境，在后续的操作中应注意保持，以确保分选样本不被污染。
流式细胞仪操作流程(单标)
流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。
（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。
3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。
以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。
4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。
三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。
2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。
3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。
4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪的使用程序分子病毒实验室一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑 , 等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7.分析样品时，先用 FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个 50ml 离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个1.获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram （直方图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStationG3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞 DNA 检测， EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞术操作规程
流式细胞术操作规程流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，它可以用来检测和分析细胞表面标记物、细胞数量、细胞分布等信息。
以下是一份流式细胞术操作规程，详细介绍了该技术的操作步骤和注意事项。
一、实验前准备1. 准备所需的实验材料，包括流式细胞仪、标记抗体、孵育培养基、样本组织、显微镜片等。
2. 检查流式细胞仪的功能是否正常，确认仪器能够正常运行。
3. 清洁实验台面，确保操作环境干净整洁。
4. 准备所需的试剂和溶液，如PBS缓冲液、抗体染色溶液等。
二、样本处理1. 准备样本组织，将其转移到离心管中，并添加适量的孵育培养基使其完全浸泡。
2. 使用离心机将样本离心，去除上清液。
3. 重悬样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
4. 重复洗涤过程，直到样本完全洗净。
三、标记抗体染色1. 取出经过洗涤的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的标记抗体溶液。
2. 在黑暗条件下孵育样本，使其与标记抗体充分结合。
3. 静置反应15-30分钟，确保充分染色。
4. 在光线和温度适宜的条件下冰冻样本，避免抗体的结合。
5. 根据实验需求，可以选择单标记或多标记抗体。
四、样本准备1. 取出经过标记抗体染色的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
2. 将样本离心并去除上清液。
3. 重悬样本，并根据实验需要加入适量的PBS缓冲液进行稀释。
4. 检查样本的细胞数目和活性是否符合实验要求，如有必要，可以使用显微镜进行观察和计数。
五、流式分析1. 打开流式细胞仪，并确认仪器的设置和参数是否符合实验要求。
2. 调整仪器的流速和灵敏度，使其适应样本的特性。
3. 将样本转移至流式细胞仪的样本管中。
4. 开始流式细胞分析，记录并保存实验数据。
5. 根据实验需要，可以进行不同的数据分析和处理，包括细胞分布、细胞数量、表面标记物的表达等。
六、实验后处理1. 关闭仪器，清洁工作台和操作区域。
2. 处理和储存实验数据，可以使用相应的图像科学软件进行数据处理和结果分析。
流式细胞仪操作步骤（FACSCalibur）
流式细胞仪操作步骤（FACSCalibur）⼀、开机程序：1.检查鞘液桶和废液桶。
确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位置，可以连续⼯作3个⼩时左右）、盖紧⿊盖、管道畅通、废液桶有⾜够空间容纳本批标本排弃的废液。
如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中⽓压。
2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印机。
3.⽓压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以排除管路中⽓泡。
⼆、运⾏FACSComp软件、检查仪器状况1.制备三⾊标准微球样本。
⼀般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加⼊1滴质控⼩微球，也可以根据实际情况调节浓度。
2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。
选择所需校正内容，如果使⽤的微球是新⼀批产品要输⼊微球的批号。
3.在软件界⾯左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过程中是否需要清洗样品。
4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。
功能键设置在“RUN”。
5.仪器⾃动检查，并做电压、补偿等设置。
6.FACSComp软件运⾏完毕，显⽰结果通过测试。
7.做Set up。
8.打印校正结果，退出FACSComp程序。
备注：在质控过程中，如果提⽰收集细胞速度慢可以提⾼细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，⼀定要⽤“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。
在使⽤仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。
三、样品分析软件：CellQuest Pro软件，选择“联机”。
1.（2）对实验样本进⾏命名；（3）对实验通道进⾏预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。
备注：如果界⾯被关闭，重新调出步骤：2.调出质控模板。
3.画图选择画图⼯具（⼀般选择散点图），Inspect界⾯会⾃动弹出，对⼏个常⽤选项进⾏设定：将散点图选中（⽤⿏标点击散点图边框才能够选中图形），将更改横纵坐备注：第⼀个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC。
小鼠脾脏t细胞流式分选实验步骤
实验目的：通过流式细胞仪对小鼠脾脏T细胞进行分选，以探究T细胞在免疫应答中的作用及机制。
一、实验前准备1.1 实验材料准备1.1.1 小鼠脾脏组织1.1.2 10mL注射用生理盐水1.1.3 0.25胰酶液1.1.4 洗涤缓冲液（PBS）1.1.5 红细胞裂解液1.1.6 表面标记抗体：CD3-FITC、CD4-PE、CD8-APC1.1.7 流式细胞仪1.1.8 离心管、移液枪、吸头、培养皿等实验器材1.2 实验环境准备1.2.1 无菌操作台1.2.2 常温恒温器1.2.3 培养箱1.2.4 流式细胞仪操作间二、实验步骤2.1 小鼠脾脏细胞分离2.1.1 将小鼠处死并取出脾脏组织，放入含有10mL生理盐水的培养皿中，剪碎均匀。
2.1.2 加入0.25胰酶液，放入37摄氏度恒温器中消化30分钟。
2.1.3 将组织碎片过滤，用PBS洗涤，避免红细胞污染。
2.1.4 使用红细胞裂解液裂解红细胞，离心沉淀，得到细胞悬液。
2.2 细胞表面标记2.2.1 取得细胞悬液，计数并调整浓度至合适水平。
2.2.2 分别加入CD3-FITC、CD4-PE、CD8-APC表面标记抗体，进行表面标记反应，避免光照。
2.2.3 进行表面标记抗体的洗涤和离心，得到标记的细胞悬液。
2.3 流式细胞仪分选2.3.1 将标记的细胞悬液输入流式细胞仪，设置合适的参数。
2.3.2 进行T细胞的流式细胞仪分选，并收集目标T细胞子集。
2.3.3 对收集的目标T细胞子集进行进一步的分析或培养。
三、实验注意事项3.1 实验过程中要保持无菌操作，避免细胞污染。
3.2 实验中避免表面标记抗体受光照。
3.3 实验材料和仪器的准备和操作要符合实验要求，确保实验结果的准确性和可靠性。
通过上述步骤，可以对小鼠脾脏T细胞进行流式分选实验，进一步探究T细胞在免疫调节中的作用及机制，为相关研究提供重要的实验数据支持。
在实验过程中，对于小鼠脾脏T细胞的流式分选需要严格控制各个步骤，确保实验结果的可靠性和准确性。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
AriaII操作手册-分选
FACSAri aⅡ流式细胞仪一、开机准备（一）准备液路1.将流式细胞仪的上盖打开；2.开启计算机，等待所有程序载入。
3.开主机电源Mainpower（右图），从电脑桌面上双击打开FACSDiva软件，输入密码BDIS。
打开激光开关laser power（根据实验需要进行选择）；开启实验所需激光器电源。
4.确认液流车中各种液体的液面水平（鞘液、废液、去离子水、漂白剂、乙醇），倒空废液或加满其他液体（下图）。
5.从软件的Cytometer菜单上选择Fluidic Startup(射流启动)，点击OK确认。
将出现如下窗口：6．将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done；7．将Closed-loop 喷嘴（闭环喷嘴）插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中；8．达到100%，移去Closed-loop喷嘴，完成后点Done；9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6倍）；10．然后点OK，完成整个过程；11．从菜单上选择Sort(分类)sort setup,确认setup模式与喷嘴大小匹配。
（二）开液流1．打开液流窗口的液流；♦点击软件界面上（如下图）的按钮打开分选液流窗口（如下图）♦点击分选液流窗口的按钮(stream 的前面按钮)，开启液流2．打开分选仓前的门，检查液流。
液流应为一条细线落入废液槽正中(可通过调整红色标志的键)；（如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10秒钟后再开，排除气泡。
）3．关上分选仓前的门。
（三）设定液流断点1.调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3处。
（Ampl不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适）；2.确认卫星液滴与大液滴融合，应该在断滴的6滴之内融合（红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格），如果没有融合，重新安装喷嘴。
二、建立实验模板1.在软件界面左侧Browser面板下，依次点击New Folder、Experiment、Specimen （均可重命名），单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色（当前指示）。
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞流式分选操作步骤包括以下几步：
1. 细胞样品制备。
待分选的巨噬细胞需要先进行适当的预处理和
培养，获得一个适合流式分选的细胞样品。
样品中应包含足够数量和
纯度的巨噬细胞。
2. 细胞贴壁。
将细胞样品加入含有适当营养物质的培养基中，让
巨噬细胞自然贴壁，以去除流式细胞仪中杂质细胞的影响。
3. 细胞溶解。
加入适当的胰酶溶液，溶解贴壁的细胞，使其成为
单细胞悬浮液。
4.细胞过筛。
使用20μm的细胞滤网过滤掉细胞碎片和聚团，得
到单细胞悬浮液。
5. 细胞染色。
利用细胞染色剂对单细胞进行染色，使得巨噬细胞
可以被流式细胞仪所识别和区分。
6. 流式细胞仪操作。
将单细胞悬浮液加入流式细胞仪样品管，启
动流式细胞仪进行巨噬细胞的流式分选。
7. 巨噬细胞收集。
通过流式细胞仪的排序软件控制收集目标细胞，最终得到高纯度和高活力的巨噬细胞。
以上就是巨噬细胞流式分选操作的基本步骤。
这一技术在分离、纯化和分析巨噬细胞在免疫学和生物医学领域的作用有着重要的应用价值。
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞是一种具有吞噬功能的白细胞，它们在免疫系统中起着重要作用。
为了研究巨噬细胞的功能和特性，科学家通常需要将它们从其他细胞中分离出来并进行染色、检测等操作。
其中，流式分选技术被广泛用于巨噬细胞的纯化和分离。
下面，我们来介绍一下巨噬细胞流式分选的操作步骤。
一、实验前的准备工作：
1. 准备受试物表面抗原特定抗体；
2. 制备含酶解物的胶体金或荧光染料；
3. 准备含有酶解物或染料的肠系膜淋巴结细胞悬液；
4. 准备细胞懒散剂和细胞培养液等实验材料；
5. 整理并检查流式细胞仪等分选设备。
二、准备分选的细胞样品：
将含有成熟巨噬细胞群体的细胞样品溶于肠系膜淋巴结细胞悬液中，将其稀释到一定的浓度，使得在细胞样品中含有合适的巨噬细胞。
三、染色和标记：
将制备好的受体抗体加入到细胞样品中，在室温下孵育一定的时间，使受体抗体特异性地结合在巨噬细胞表面，并标记出这些细胞。
四、流式细胞分选：
将标记好的巨噬细胞与胶体金或荧光染料混合，将混合物加入流式细胞仪中。
开启仪器中的激光，利用其激发不同颜色染料的发光特性，将不同类型的细胞从流动的细胞样品中分离出来，并整理在不同的收集管中，完成样品的纯化与分选。
五、结果的观察和分析：
得到纯化后的细胞群体后，可对其进行进一步的分类或实验。
通过观察和分析分选后得到的巨噬细胞的形态、数量和功能等方面的特征，来研究这些细胞在免疫系统中所扮演的角色和作用。
facs技术操作规程
facs技术操作规程
《FACS技术操作规程》
流式细胞仪（FACS）是一种用于细胞分析和分选的高级仪器。
它可以分析、计数和分选细胞，对于细胞学和免疫学研究非常重要。
在使用FACS技术时，操作规程非常重要，可以确保实验的准确性和可重复性。
首先，操作人员需要准备好实验所需的样本和试剂。
样本可以是细胞悬液或者组织细胞悬液，而试剂包括细胞染色剂、抗体等。
在进行实验前，要确保所有试剂和仪器都是干净的，并且符合实验要求。
其次，需要根据实验设计设置FACS仪器。
这包括设置激光器的参数、选择合适的滤光片和检测通道，以及校准仪器。
合理的仪器设置可以确保后续实验的准确性。
接下来，操作人员需要将样本加入到流式细胞仪中进行分析。
在分析过程中，要确保样本被均匀地分散，并且避免气泡的产生。
此外，要根据实验目的选择合适的参数进行数据采集。
最后，如果需要进行细胞的分选，操作人员需要进行细胞的标记和排序。
细胞标记可以使用荧光染料或者特定的抗体，而排序可以根据细胞的特定荧光信号进行。
在进行分选时，要确保细胞的纯度和活性。
总之，FACS技术操作规程对于实验的成功至关重要。
遵循规
程可以确保实验结果的准确性和可重复性，同时也可以降低实验中的操作失误。
因此，操作人员在使用FACS技术时应该严格遵守相关规程，并按照标准操作步骤进行操作。
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细胞分选的简要操作步骤
一、上样前的准备
FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制）
5L无菌蒸馏水
5L无菌PBS
2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗
涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup。
在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。
按液流控制
键RUN。
10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直
至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
24、第一支收集管（最左）中收集15 mL PBS后取下，使PBS由左至右流入下一收集管。
重复
操作至2个管都收集了15 mL PBS为止。
点击Pause, Abort。
25、在收集管接口处安装2支新的收集管。
若要分选动物细胞，则应用无菌技术，用无菌
PBS4 % BSA缓冲液过夜包被50mL锥型管，将包被好的锥型管安置于收集接口。
26、按下述分选步骤分选样本
二、分选细胞
1、分选前应先做预实验，优化流式细胞仪的测定条件，建立分选门，具体操作步骤见
Cellquest操作步骤说明。
根据目标细胞的含量，调整流速和样品浓度，使目标细胞通过样品室的浓度为100-300个/秒，最好在200左右。
2、进入CellQuest,从Aquire菜单连机。
3、打开CellQuest中存储的获取窗口，打开优化后存储的仪器设置条件。
4、进样针处放上样本管。
5、可以先收集一个数据资料，将此数据与用分选后的样本收集的数据比较，以确定分选样本
的纯度。
6、从Acquire menu 选择Sort Setup。
7、依据样本中目的细胞的百分比及实验目的决定分选模式：在Sort Gate中选择分选用的
门，如选择No Gate （所有细胞）将只进行获取不分选；在Sort Count-中选择0 进行连续分选；在Sort Mode中选择Single Cel、Recovery、Exclusion的某种模式；在Aborted Cell 中选择不显示排除细胞数。
点OK。
8、点击液流控制键RUN。
9、点击获取控制窗口Aquire。
分选结束时点击Pause, Abort。
10、取下样本管，换上1mL蒸馏水。
点击获取控制窗口Sta ndby。
11、取下收集锥型管。
离心浓缩（300g 乂5min）,用培养液重悬，按实验所需条件进行培养。
三、上样后的清洗
分选结束后，为保证分选系统管路无腐蚀、无结晶、不堵塞、不染菌，必须进行管路的消毒与清洁，方法如下。
且一旦开始进行分选实验后，每周必须开机对分选管路用
无菌蒸馏水按照第一部分介绍的方法进行一次充分的冲洗。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制）
5L无菌蒸馏水
2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗
涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
8、从Acquire menu选择SortSetup。
在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。
按液流控制键RUN。
9、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
10、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。
11、再重复上述步骤2次，共需要1h。
12、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直
至洗净桶内壁残余乙醇。
13、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
14、在收集管接口处安装2支新的收集管。
15、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
16、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
17、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort
18、再重复上述步骤2次，共需要1h。
19、在鞘液筒中加入3L PBS（即鞘液），盖紧盖子。
安好鞘液筒。
20、放上一支装有PBS的进样管。
21、恢复过滤器的连接。
22、执行每日关机程序。