肿瘤科研项目方案设计

XX肿瘤相关功能基因XXX研究课题设计

一、XX肿瘤相关基因功能研究整体技术路线

不同肿瘤细胞株

XXX表达检测

XXX shRNA

lentivirus

细胞功能实验

增殖(MTT)细胞周期与凋亡(流式

PI&Annexin V双染)

克隆形成

侵袭转移

(transwell实验)

裸鼠成瘤实验

肿瘤细胞沉默XXX后成瘤

肿瘤细胞成瘤后定

点注射瘤体

2株高表达XXX基因肿

瘤细胞平行实验

作用机理研究

real-time PCR检测下游

分子表达变化

Western blot

验证

Genechip

co-IP

GST-pull down

相关表型分析

相关分子检测

肿瘤临床标

本检测

组织芯片或

免疫组化

分析XXX表达与肿瘤发

生、转移和预后的相关性

XXX non-silencing

lentivirus

XXX rescue

lentivirus

Western blot &

real-time PCR

预实验

Part.1 Part.2

Part.3 Part.4Rescue实验

Part.5

XXX与化疗、放疗敏感性关

系的分析与实验研究

Cell

Tissue

二、合作项目简介

整个文章的研究思路是，在临床病理当中发现在XX肿瘤标本中XXX基因特异性高

表达，在相应的肿瘤细胞系也得到一致的结果，随后选取2株典型的细胞系用XXX基因的RNAi的lentivirus获得细胞、整体水平研究数据，了解该基因沉默后对肿瘤增殖，凋亡，侵

袭转移能力的影响。最后检测XXX基因的下游作用分子，寻找其可能的作用途径。

预期文章数据框架:

Fig.1 肿瘤病理标本中研究的靶基因呈现表达上调（免疫组化或qPCR）

Fig.2 不同的XX肿瘤细胞株中该基因的表达也显著增高

Fig.3慢病毒（lentivirus）结构图，肿瘤细胞感染图片

Fig.4 靶基因RNAi慢病毒感染肿瘤细胞后，mRNA和蛋白表达显著下调（qPCR和western）Fig.5 在两株细胞上沉默靶基因之后平行的MTT结果及统计

Fig.6 在两株细胞上沉默靶基因之后流式分析细胞周期，计算凋亡率

Fig.7 在两株细胞上沉默靶基因之后克隆形成能力变化，图片和统计结果

Fig.8 用肿瘤细胞感染RNAi慢病毒制备成稳定细胞株，然后做裸鼠成瘤实验，裸鼠图片，

每天量瘤子大小，做肿瘤生长曲线，4周处死称瘤重，计算抑瘤率。

Fig.9下游基因的qPCR检测结果（如果有阳性结果就放上去）

Fig.10 western blot验证上述实验结果

三、实验方案

1、XXX在XX细胞表达检测实验

实验内容：选取多株XX细胞株，检测XXX基因的表达，高表达XXX基因的两株细胞用

于后续RNAi的研究。

1.qPCR检测不同细胞株中XXX的mRNA水平；

2.对XXX表达阳性的细胞株进行感染预实验，确定各个细胞株病毒感染的难易程度

3.将有XXX表达并且容易感染的肿瘤细胞感染RNAi病毒并进行MTT实验

实验目的：确定各细胞XXX的表达以及在MTT实验中哪株细胞的功能最明显，作为选择

相应细胞株进行后续功能实验研究的依据。

实验在多株肿瘤细胞上平行进行（如qPCR检测发现有细胞低表达XXX，则该细胞不

进入MTT实验）

项目分组NC Con RNAi

qPCR-XXX（验证）

细胞增殖检测（MTT法）

2、XXX在肿瘤细胞系中的功能研究

实验内容：根据预实验的结果选择1～2株细胞系进行XXX的相应功能的实验研究，获得

一套in vitro实验数据。同时在XXX RNAi获得功能表型的变化后，重新导入一个突变的XXX表达病毒载体，使得功能变化得到回复，从而验证RNAi反应和基因功能的特异性。实验目的：确定XXX基因在肿瘤细胞中的功能

Knock Down XXX功能验证

XXX siRNA病毒Control NC XXX RNAi

组别说明空白对照RNAi阴性对

照

RNAi病毒

qPCR-XXX

Western-XXX

细胞增殖检测（MTT法）

凋亡检测（annexin-v/pi双染法）

克隆形成（克隆形成实验）

3、XXX作用机理研究（下游相关基因检测）

实验内容：根据上述的实验结果确定XXX的功能后，对其相关基因进行检测（qPCR或WB 法），确定XXX作用的信号传导通路。相关基因可以是以前研究报道的，也可以是经典的

途径如与凋亡相关的、增殖相关的或侵袭相关的途径

实验目的：确定XXX的作用机制

4、XXX在动物水平功能研究

实验内容：运用慢病毒感染后的肿瘤细胞直接与对照细胞在裸鼠体内成瘤，4周后比较瘤体大小，计算抑瘤率，也可以采用细胞成瘤后定点注射瘤体的方式进行实验，两种方式互为验证，获得一套高质量的in vivo实验数据

实验目的：在整体水平验证XXX基因在肿瘤成瘤过程中的功能

分组Control NC-1 RNAi-1 NC-2 RNAi-2

组别说明空白对

照

用阴性对照病毒

感染细胞成瘤

用RNAi病毒

感染细胞成瘤

定点注射阴

性对照病毒

定点注射

RNAi病毒