分光光度计的使用PPT课件
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分光光度计及其操作ppt课件
0.575
光源
单色器 吸收池 接收器
以下分别介绍各部件
6
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
1. 光源 用6～12V白炽灯 作用：提供光强一定的复合光(白光) 性能要求: 亮度稳定(以使入射光通量强度 故需电源电压稳定, 一般用稳压器提供稳压。
误差越小。 4.分光光度法，其他条件一定，ε越大，测定的灵
敏度越高。 5.朗伯-比尔定律不仅使用于可见分光光度法,也使
用于紫外分光光度法。 6. 透光率T与吸光物质浓度成反比。
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为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
721型分光光度计 应用
1. 测定组分浓度与含量: 依据A= -lgT= bc
2. 测定配合物的组成
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为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
小结
1.熟练掌握分光光度计的基本组成 部件 2.了解分光光度计的基本组成部件的作用 3.明确参比溶液的作用
作业:P232-10.12 15
自测题 为了规范事业单位聘用关系，建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度，保障用人单位和职工的合法权益 判断题 1.可见分光光度法所用参比溶液的作用是调A=0.00 2.可见分光光度法测定KMnO4时,应选紫色光为
入射光。 3.光度分析中,测定的吸光度越大,测定结果的相对
光源 参比
样品
紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc） 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况，包括测试样品、测 试波长、测试结果等，以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于 稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于 正常工作状态，以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量， 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序，释放计算机内存，或更新数据 处理软件。
超微量分光光度计ppt课件.ppt
仪器应用范围
K5500型微量分光光度计可用于测量： 核酸：核酸样品的浓度和纯度，包括双链DNA，单链
DNA和RNA。 蛋白质：①A280测蛋白质样品浓度，包括1Abs =
1mg/mL，BSA，IgG，Lysozyme；②试剂盒法 （Lowry法、BCA法、Bradford法）测定蛋白质浓度， 软件自动绘制标准曲线，直接给出浓度值。 常规紫外/可见全波长扫描：可进行紫外/可见全波长 （200～850nm）扫描。 细胞溶液：细胞溶液密度的测定。
样品需要稀释，测量浓 电磁阀调节)，样品无需稀释，测量
度范围小Βιβλιοθήκη 范围可达到常规分光光度计的50倍
与传统分光光度计的区别与优势
传统分光光度计
●灯源一般由氘灯（紫外） 和钨灯（可见）组成 寿命短 ●需要预热半个小时以上
K5500微量分光光度计
●氙气闪光灯为灯源 寿命长,性能稳定
●不需要预热，可随时检测
●显示吸光度值，不显示浓 度值
仪器特点
样品用量少（1～2µL）！ 无需比色皿！ 紫外-可见全波长扫描（200～850nm）！ 无需预热，可随时检测！ 检测速度快！ 直接显示浓度值！ 样品无需稀释，可测样品的浓度范围是常规紫外-
可见分光光度计的50倍！ 数据统计软件方便容易掌握！
与传统分光光度计的区别与优势
传统分光光度计
样品测量
（1） 以移液枪吸取样品（1～2µL）滴加到检测平台上。 （2 ）放下取样臂。 （3） 点击软件界面上的“Measure”按钮，即可得出样品参
数（吸光度和浓度）和图表。 （4 ）以干净的吸水纸擦去上下检测平台上的空白对照用溶
剂。
（5） 如需保存图表，可点击“Save Graph”按钮。
分光光度计培训课件页PPT文档
本页仅供参考，具体需详细查阅相应仪器说明书
722型分光光度计的使用操作方法
5、调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比 色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻 轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。
6、吸光度的测定 将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处， 用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，将选择开关置于“A”，盖上 试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使数字 显示为“0.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的 其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入 光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，打开 试样室盖，切断光路。
注意事项
1、该仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作 台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防 止灯泡灯丝发亮不稳定。 2、为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光 路切断，以延长光电管的使用寿命。 3、取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰 比色皿的光学表面。 4、比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛 刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸 吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。
本页仅供参考，具体需详细查阅相应仪器说明书
722型分光光度计的使用操作方法
重复上述测定操作1-2次，读取相应的吸光度值，取平均值 （吸光度值尽可能在0.2-0.8之间）。 7、浓度的测定 选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度 的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测 样品放入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的浓度值。 8、关机 比色完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比 色皿座架用用软布或软纸擦净。
《分光光度计培训》课件
准备待测的样品，确保样品适用于分光光度计测量。
2
2. 校准和基线
校准仪器并进行基线校正，确保准确的测量结果。
3
3. 光程、波长设置
设置适当的光程和测量波长，以获得准确的吸光度。
4
4. 测量和记录
将样品放入进样系统，测量吸光度并记录结果。
VI. 分光光度计的原理
分光光度计原理基于比较样品吸收的光线强度与参考样品或空白试验的光线强度的差异。这样可 以确定样品中特定物质的浓度。
VII. 分光光度计的应用领域
生物化学
用于测量酶活性、细胞浓度等。
环境科学
用于水质、大气等环境参数测量。
药学
用于药物配方和质量控制。
食品科学
用于食品成分和质量分析。
VIII. 分光光度计的精度和灵敏度
分光光度计具有高精度和灵敏度，可以测量微量物质的浓度和变化，从而在科学研究和质量控制 方面发挥重要作用。
II. 分光光度计的分类
紫外可见分光光度计
用于测量UV和可见光范 围内的吸光度。
红外分光光度计
用于测量红外光范围内 的吸光度。
紫外可见红外分光 光度计
同时覆盖紫外、可见和 红外光范围。
III. 常见的分光光度计
台式分光光度计
适用于实验室和教学环境，具有较高的精度和 灵敏度。
手持式分光光度计
便携、易于携带，适用于野外研究和快速测量。
《分光光度计培训》PPT 课件
这个PPT课件将向您介绍分光光度计的各个方面，包括原理、分类、工作原理 以及应用领域。让我们来一起探索这个精密仪器的世界。
I. 什么是分光光度计
分光光度计是一种用于测量物质溶液中吸光度的仪器。它可以通过分析样品对特定波长的光线的 吸收情况，来确定样品中特定物质的浓度。
分光光度计的使用课堂PPT
透 光 窗
然后盖上盖子。
*
按 MODE 键
（3）调节投射比为 0.000
至投射比（T）灯亮
*
T 方式
“0%”键
按一下“0%”键，此时仪器自动校正后显示 “0.000”。 （有的分光光度计没有黑体，需要在打开试样 室盖（起黑体的作用）的情况下调 T = 0.000）
*
（4）调透射比为 100% 将手柄向操作者方向拉出一档（听到“咔嚓”一 声），此时参比（0 号）溶液进入光路。 按一下“100% T”键， 此时仪器显示“BLA” 表示仪器正在自动校 正，校正完毕后显示 “100.0”。
编 号
0
1
2
3
4
5
6
V标准液/mL
0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
0.00
V试液/mL
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
5.00
4
4
4
4
4
4
4
V磺基水杨酸/mL
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
滴加氨水至黄色后再多加 4 mL 。定容、摇匀，测吸光度。
100% T
B L A
100.0
*
（5）重复（验证）（3）、（4）两步，直至透 射比为 0.000 和 100% 不变。 按“MODE”键至“ABSORBANCE”灯亮（此 时转换到测吸光度功能上）。
*
将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 一声），此时被测（1 号）溶液进入光路。 此时仪器所显示的数值即为 1 号被测溶液的吸光 度值（记录下来）。
分光光度计的使用课件
光的衍射
当光通过障碍物或狭缝时，光线会发生衍射现象。衍射现象会导致光线的方向发 生变化，形成类似于干涉的明暗相间的条纹。分光光度计中的衍射光栅利用光的 衍射原理来分离不同波长的光线。
光的偏振与极化
光的偏振
当光通过某些介质时，其电矢量会相对于传播方向以一定角 度振荡，导致光的偏振现象。偏振现象可用于分析物质的晶 体结构和光学性质。
分光光度计的使用课件
汇报人：
日期:
• 分光光度计基本原理 • 分光光度计基本构造 • 分光光度计使用方法 • 分光光度计实验技术 • 分光光度计应用实例 • 分光光度计维护保养与安全防护
01 分光光度计基本原理
光的吸收与散射
光的吸收
当光通过介质时，介质中的分子或原 子会吸收特定波长的光，导致光的强 度减弱。这种吸收现象可用于分析物 质中的特定成分。
药物代谢研究
通过测量药物在人体内的 吸收和代谢过程，可以研 究其动力学。
医学诊断
某些疾病可以通过测量人 体组织在特定波长下的透 射或反射光谱来进行诊断 。
06 分光光度计维护保养与安全防护
仪器维护与保养
01
02
03
04
仪器表面清洁
保持仪器表面清洁，避免使用 腐蚀性液体擦拭，以免对仪器
造成损害。
光学元件清洁
信号处理器
信号处理器是将检测器输出的电信号进行放大、处理和转换的装置，以便进行后续的数据处理和分析 。
03 分光光度计使用方法
样品制备与测量前的准备
01 02
样品制备
在开始测量之前，需要将待测样品进行适当处理，以适应分光光度计的 测量需求。例如，对于液体样品，可能需要摇匀、稀释或过滤以消除误 差。
误差来源 1. 比色皿不干净，导致吸光度测量值不准确。
当光通过障碍物或狭缝时，光线会发生衍射现象。衍射现象会导致光线的方向发 生变化，形成类似于干涉的明暗相间的条纹。分光光度计中的衍射光栅利用光的 衍射原理来分离不同波长的光线。
光的偏振与极化
光的偏振
当光通过某些介质时，其电矢量会相对于传播方向以一定角 度振荡，导致光的偏振现象。偏振现象可用于分析物质的晶 体结构和光学性质。
分光光度计的使用课件
汇报人：
日期:
• 分光光度计基本原理 • 分光光度计基本构造 • 分光光度计使用方法 • 分光光度计实验技术 • 分光光度计应用实例 • 分光光度计维护保养与安全防护
01 分光光度计基本原理
光的吸收与散射
光的吸收
当光通过介质时，介质中的分子或原 子会吸收特定波长的光，导致光的强 度减弱。这种吸收现象可用于分析物 质中的特定成分。
药物代谢研究
通过测量药物在人体内的 吸收和代谢过程，可以研 究其动力学。
医学诊断
某些疾病可以通过测量人 体组织在特定波长下的透 射或反射光谱来进行诊断 。
06 分光光度计维护保养与安全防护
仪器维护与保养
01
02
03
04
仪器表面清洁
保持仪器表面清洁，避免使用 腐蚀性液体擦拭，以免对仪器
造成损害。
光学元件清洁
信号处理器
信号处理器是将检测器输出的电信号进行放大、处理和转换的装置，以便进行后续的数据处理和分析 。
03 分光光度计使用方法
样品制备与测量前的准备
01 02
样品制备
在开始测量之前，需要将待测样品进行适当处理，以适应分光光度计的 测量需求。例如，对于液体样品，可能需要摇匀、稀释或过滤以消除误 差。
误差来源 1. 比色皿不干净，导致吸光度测量值不准确。
原子吸收分光光度计详解ppt课件
（2） 燃烧器
试样雾化后进入预混合室（雾化室），与燃气（如乙炔、丙 烷、氢等）在室内充分混合，其中较大的雾滴凝结在壁上， 经预混合室下面的废液管排出，而最细的雾滴则进入火焰中 主要优点：产生的原子蒸汽多，吸样和气流的稍许变动影响 小，火焰稳定性好，背景噪声低且比 较安全，但试样利用率只有10％ 一般采用吸收光程较长的长缝型喷灯， 易于对光，避免光源光束没有全部通 过火焰而引起工作曲线弯曲的现象， 降低了火焰噪声，提高了一些元素的 灵敏度
原子吸收中的原子发射现象
在原子化过程中，原子受到辐射跃迁到激发态后，处于不 稳定状态，将再跃迁至基态，故既存在原子吸收，也有原 子发射。但返回释放出的能量可能有多种形式，产生的辐 射也不在一个方向上，对测量仍将产生一定干扰。 消除干扰的措施： 1）光源后面加一个机械斩光器，使经吸收后的光源辐射在 检测系统中为交流信号，检测系统中采用交流放大器，将 其与火焰中原子发射时发出的直流信号的分开。 2）对光源的电源进行调制，将发射的光调制成一定频率； 检测器只接受该频率的光信号；原子化过程发射的非调频 干扰信号不被检测。
缺点：取样量少而导致进样量对实验结果影响较大，精密度 差，测定速度慢，操作不够简便，装置复杂。
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
（5）其他原子化方法
a. 低温原子化方法 主要是氢化物原子化方法，原子化温度700~900 ゜C ； 主要应用于：As、Sb、Bi、Sn、Ge、Se、Pb、Ti等元素 原理： 在酸性介质中，与强还原剂硼氢化钠反应生成气
3)空心阴极灯电流
在保证有稳定和足够的辐射光通量的情况下，尽量选较
低的电流。
4)火焰:依据不同试样元素选择不同火焰类型。
试样雾化后进入预混合室（雾化室），与燃气（如乙炔、丙 烷、氢等）在室内充分混合，其中较大的雾滴凝结在壁上， 经预混合室下面的废液管排出，而最细的雾滴则进入火焰中 主要优点：产生的原子蒸汽多，吸样和气流的稍许变动影响 小，火焰稳定性好，背景噪声低且比 较安全，但试样利用率只有10％ 一般采用吸收光程较长的长缝型喷灯， 易于对光，避免光源光束没有全部通 过火焰而引起工作曲线弯曲的现象， 降低了火焰噪声，提高了一些元素的 灵敏度
原子吸收中的原子发射现象
在原子化过程中，原子受到辐射跃迁到激发态后，处于不 稳定状态，将再跃迁至基态，故既存在原子吸收，也有原 子发射。但返回释放出的能量可能有多种形式，产生的辐 射也不在一个方向上，对测量仍将产生一定干扰。 消除干扰的措施： 1）光源后面加一个机械斩光器，使经吸收后的光源辐射在 检测系统中为交流信号，检测系统中采用交流放大器，将 其与火焰中原子发射时发出的直流信号的分开。 2）对光源的电源进行调制，将发射的光调制成一定频率； 检测器只接受该频率的光信号；原子化过程发射的非调频 干扰信号不被检测。
缺点：取样量少而导致进样量对实验结果影响较大，精密度 差，测定速度慢，操作不够简便，装置复杂。
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
（5）其他原子化方法
a. 低温原子化方法 主要是氢化物原子化方法，原子化温度700~900 ゜C ； 主要应用于：As、Sb、Bi、Sn、Ge、Se、Pb、Ti等元素 原理： 在酸性介质中，与强还原剂硼氢化钠反应生成气
3)空心阴极灯电流
在保证有稳定和足够的辐射光通量的情况下，尽量选较
低的电流。
4)火焰:依据不同试样元素选择不同火焰类型。
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6
未知
×.×××
绘制标准曲线：
吸
光
根据未知溶液（6 号
度 (A)
溶液）的吸光度从标准
曲线上查得试液浓度。
● ● ● ● ●
(Fe) / mg L1
原试液含铁质量浓度 = 查得的浓度 × 稀释倍数
查得
50 5
mg L1
实验报告格式
一、实验目的
………………………………………………………
分光光度计的使用
分光光度法的主要部件框架
通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光. 波长可调, 故选择性好, 准确度高.
光源
单色器
吸收池
检测系统
稳压电源
（1）分光光度计的主要部件
光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。
可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)
×.××× ×.××× ×.××× ×.×××
6
未知
×.×××
五、标准曲线（图）
六、从标准曲线上查得的 (Fe) mg L1
七、原试液的
(Fe)
查得
50 5
mg L1
八、思考题
毛面
透光面
容 量 的
3/4
用镜头纸擦净透光面，
所有关于吸收池的操作 均在实验台面之上的空 间进行，这样可保证一 旦吸收池滑落时掉在台 面上，不至于摔破。
不要将纸团成球， 不要来回擦， 而要向同一方向擦。
放入吸收池架（透光面向着透光窗一侧）。 放置顺序为：
透 光 窗
然后盖上盖子。
2号
1号 0号 遮光 黑体
指示器：
低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录
（2）分光光度计的类型
722型分光光度计结构方框图
光 分光 源 系统
吸收池
检测系统
分光光度计的使用
（1）选择波长
至所需波长
拧动此旋钮
（2）将测试溶液装入吸收池（操作如下） 手拿毛玻璃面， 先用待装液漂洗 3 遍， 装入量为吸收池高度的 3 / 4，
V磺基水杨酸/mL 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00
滴加氨水至黄色后再多加 4 mL 。定容、摇匀，测吸光度。
四、数据记录
编号
0
(Fe) / mg L1 0.000
吸光度（A） ×.×××
1
1.00
×.×××
2 345
2.00 3.00 4.00 5.00
单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。
棱镜:玻璃350～3200nm, 石英185～4000nm 光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便
吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。
可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池
检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流信号。
光电池，光电管，光电倍增管
二、实验原理
………………………………………………………
三、实验步骤
编号
0 1 2345 6
V标准液/mL 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 0.00
V试液/mL VNH4Cl / mL
0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 5.00 4 4 4444 4
将 1、2 号吸收池换装入 3 、4 号溶液（黑体 和 0 号参比溶液不动），然后同法测定各溶液的 吸光度、并一一记录下来，记录格式如下表。
编号
0
(Fe) / mg L1 0.000
吸光度（A） ×.×××
1
1.00
×.×××
2 345
2.00 3.00 4.00 5.00
×.××× ×.××× ×.××× ×.×××
按“MODE”键至“ABSORBANCE”灯亮（ 时转换到测吸光度功能上）。
将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 一声），此时被测（1 号）溶液进入光路。 此时仪器所显Байду номын сангаас的数值即为 1 号被测溶液的吸光 度值（记录下来）。
-0.01.80600
再拉出一档，仪器所显示的数值为 2 号溶液的吸 光度值。
将手柄向操作者方向拉出一档（听到“咔嚓”一 声），此时参比（0 号）溶液进入光路。
按一下“100% T”键， 此时仪器显示“BLA” 表示仪器正在自动校 正，校正完毕后显示 “100.0”。
1B0L0A.0
100% T
（5）重复（验证）（3）、（4）两步，直至透 射比为 0.000 和 100% 不变。
通过手柄将池架推到头， 此时黑体对着入射光。
（3）调节投射比为 0.000
按 MODE 键
至投射比（T）灯亮
按一下“0%”键，此时仪器自动校正后显示 “0.000”。 （有的分光光度计没有黑体，需要在打开试样 室盖（起黑体的作用）的情况下调 T = 0.000）
T 方式
“0%”键
（4）调透射比为 100%