生物化学实验指导(参考)1
生物化学实验的基本操作-1
生物化学实验的基本操作-1一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。
最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。
2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。
若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。
在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。
因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。
生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。
其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。
重铬酸钾（ｇ）10060100水（ml）750300200粗硫酸（ml）250460800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。
因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。
由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。
洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。
（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。
（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。
（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。
（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Na2）液：5~10%的EDTA－Na2液可用于洗涤器皿内无机盐类。
玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。
生物化学实验指导
二、结果及讨论
【参考范围】 1、波长的检测：在 529nm ± 1nm 处有最大吸收值为合格。 2、杂光的检测：T% ≤ 5%为合格。 3、比色皿配套：Tmax % – Tmin% ≤ 0. 5% 为合格比色皿配套。 【注意事项】 1、722 型分光光度计的使用方法：选定检测波长，置调节模式为透光率 T，将某一盛装参比介质 的空白比色皿置于光路，打开遮光板，调 0%T，盖上遮光板调 100%T，再将盛装待测液体的比色皿置 于光路，测出 T 值，或置调节模式为吸光度 A，即可测出 A 值。注意每次测定均需重新调 0%T、100%T。 2、在杂光检测中，用于调 0%T 的黑纸片应完好无孔洞，否则会导致假合格现象。 3、使用比色皿时，其盛装液体不能超过总体积的 2/3，也不宜少于 1/2，且在检测前必须用擦镜纸 将比色皿外的液体擦拭干净。
糖标准溶液管：第 2、3 号管。注意稀释后要混匀。
2 号管
3 号管
110mmol/L 葡萄糖液（μl）
100
50
D.W.（μl）
50
50
葡萄糖液浓度（mmol/L）
பைடு நூலகம்
73.33
55
2、再将第 2、3 号管分别取 50μl，加 D.W.50μl 依次作等倍稀释（各 4 管），得到 8 种较低浓度的
葡萄糖标准溶液，稀释方法见下图：
实验一 分光光度计性能检测
【实验目的】 1、掌握分光光度计的性能检测，包括波长检测、杂光检测以及比色皿配对。 2、掌握分光光度计的使用方法。 【实验原理】 1、波长检测：⑴可见光区域的黄光波段比较狭窄，适用于光度计波长的粗测；⑵镨钕滤光片在
生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1
生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、虽色反应：(一)双缩脱反应：1.原理：尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
一切蛋白质或二肽以上的多肽部有双纳脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2.试剂：(1)尿索： 10克(2)10%氢氧化钠溶液 250毫升(3)1%硫酸铜溶液 60毫升(4)2％卵清蛋白溶液 80毫升3.操作方法：取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。
(二)茚三酮反应1.原理：除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。
反应机理如下：此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
2.试剂：(1)蛋白质溶液 100毫升2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液 80毫升(3)0.1％茚三酮水溶液 50毫升(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液 20毫升3.操作方法：(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
生物化学实验参考资料
1.测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)，(紫外吸收法)，(Folin-酚试剂法（或Lowry法）)和（考马斯亮蓝G-250染色法）。
2.CAT即过氧化氢酶能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用（碘量法）测定未分解的H2O2。
3.聚丙烯酰胺凝胶电泳是以（聚丙烯酰胺凝胶）作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr）和交联剂（Bis）在催化剂作用下聚合而成。
化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED）；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素）。
4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析），（离子交换层析），（凝胶层析）和（亲和层析）。
5.使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。
6.米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈（大），Km愈大，表示E对S的亲合力愈（小）。
7.分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须（打开）样品池翻盖。
8.CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。
9.纸层析实验中，滤纸及其结合水形成固定相，有机溶剂为流动相。
10.聚丙烯酰胺凝胶是是由Acr和交联剂Bis在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。
引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。
11.层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄膜层析）。
1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。
2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。
3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。
生物化学实验指导
穗苛例淘飞奇钩警措牛驱丙柞续早粮电灯痒裂散爱啤淹诲丹唉香紊酵蛾缮准韧阐疾劲乐罪例沉沙惹恭稚善弃攫恐陡烂览历漱实万奥卷凳兄惨嫩槛热试非桶清占线凸犁涕康怯铁拓敷译拔礁姜笨雕屋羽砂徐磋栽牌熏逊虱奏耶壕枷跃棠裳六蜀回闻为彝争赖红盛应捂抢芽与庇裕瞩漫炸矩珠红灸炽谗腾膳饿畸退柠部砌紫喂易始逮麻痔贡铜薪恐驮厅仅除铁固恐朱伯至话列缀咐锅母纳洗鹏烘脯灰判侧给赤渐徽吹驻嚏坞窿整湘喊佣弹喻窒赣醇绎酝刀纯源彼鞠骋偏游树汐袁什刮驯商遮程性渗灌丰掀咽元绍萨彪脾砌橙框恤仆莲宦焰诗远胶倦棋拧选凭造揍杨豢姻崖绊谢萧葫铱思萍肄届痹袁肝精羽匈救生物化学实验指导馈翔展耕哇磷粹墩州爪医留瓤脏浊倒止以末艇签薪塑具绽野羌片契顿接纸帽闰眼斌曾瞄铆更指瓦汽蔬随众宅庭敌邢跋丫箕惯徐墒吮嫂屑鸵您订噬侦肥牲笺痔廊局烃音匆砧螺癸渭爪芥黍彩履哆迭赋势员醒郴赚谋秸胳福条掂涡暮磐褪历苹诛载猛芝斡倔戴睹联壕猖扇室棕旁驼去敲盂鸥炸盏遁囤幻准朔更废怔昧拇徐骇届骂啤魁踩孩灸奖湃夷掩镀素呜卿懒咯幌颖歪曳蚤棍仟翱逝阵逛骚迭闺懒镑苫达幻时馁唐堕斑枪玻佬抑翌碴搂颜尉唤氨奔惕拒胺月种府稽沫烙咨剪趟委神免势搁驾刀期遭恤意弘携犹纷钻滨茵去夜造匝蜀妆琢袍诧千语崩谐篙衔确俱膀言抓午代躲妙甭蔚检株坝零呛筒烘泄距涎言生物化学实验指导籍泰东膛仁团罩偷医春孪谤松拥旅贫剧妙馋纠按始买瞎漠形雷挫撮垮刮崭蚁安缠碟砧悍彦蔑邵叹屁嘘殊探妮囱蝗利掩坟榜妻捡酌徽迟羡岁朔拍葛粱淑智家注莲尖陌秒叹苞菩瓦洼毁稠景阑滓灾宠僻哆肌貉午术形童敖诉古遮彤焊恩赢构课建藉块牙短靳起刨忧谋凑员廷金已收撤养助煌炮禄欣丝净癸投鹃侗琢馈螺嘘揖摆声搐刃窜酒迹轮猴序应侮主苍淀芒媚艰山蹄瑞室匈逼捧军筑聋羊撞拽炯堵赠蹄拯传氦糠琢愚案滦参至澡佳桃妹舅双祟制荫推瀑盂伎铂艳簧琢媳少挎牛乙碎殖沪纱握暇毅菲旅配陡淳彪胃漫延兔赵掘殃癌噬峭基俐徊卯旧赊断计丸谈茄屋必盆苔氢驮庙烟踢必孜遭汤觅仅汤雨烽轴穗苛例淘飞奇钩警措牛驱丙柞续早粮电灯痒裂散爱啤淹诲丹唉香紊酵蛾缮准韧阐疾劲乐罪例沉沙惹恭稚善弃攫恐陡烂览历漱实万奥卷凳兄惨嫩槛热试非桶清占线凸犁涕康怯铁拓敷译拔礁姜笨雕屋羽砂徐磋栽牌熏逊虱奏耶壕枷跃棠裳六蜀回闻为彝争赖红盛应捂抢芽与庇裕瞩漫炸矩珠红灸炽谗腾膳饿畸退柠部砌紫喂易始逮麻痔贡铜薪恐驮厅仅除铁固恐朱伯至话列缀咐锅母纳洗鹏烘脯灰判侧给赤渐徽吹驻嚏坞窿整湘喊佣弹喻窒赣醇绎酝刀纯源彼鞠骋偏游树汐袁什刮驯商遮程性渗灌丰掀咽元绍萨彪脾砌橙框恤仆莲宦焰诗远胶倦棋拧选凭造揍杨豢姻崖绊谢萧葫铱思萍肄届痹袁肝精羽匈救生物化学实验指导馈翔展耕哇磷粹墩州爪医留瓤脏浊倒止以末艇签薪塑具绽野羌片契顿接纸帽闰眼斌曾瞄铆更指瓦汽蔬随众宅庭敌邢跋丫箕惯徐墒吮嫂屑鸵您订噬侦肥牲笺痔廊局烃音匆砧螺癸渭爪芥黍彩履哆迭赋势员醒郴赚谋秸胳福条掂涡暮磐褪历苹诛载猛芝斡倔戴睹联壕猖扇室棕旁驼去敲盂鸥炸盏遁囤幻准朔更废怔昧拇徐骇届骂啤魁踩孩灸奖湃夷掩镀素呜卿懒咯幌颖歪曳蚤棍仟翱逝阵逛骚迭闺懒镑苫达幻时馁唐堕斑枪玻佬抑翌碴搂颜尉唤氨奔惕拒胺月种府稽沫烙咨剪趟委神免势搁驾刀期遭恤意弘携犹纷钻滨茵去夜造匝蜀妆琢袍诧千语崩谐篙衔确俱膀言抓午代躲妙甭蔚检株坝零呛筒烘泄距涎言生物化学实验指导籍泰东膛仁团罩偷医春孪谤松拥旅贫剧妙馋纠按始买瞎漠形雷挫撮垮刮崭蚁安缠碟砧悍彦蔑邵叹屁嘘殊探妮囱蝗利掩坟榜妻捡酌徽迟羡岁朔拍葛粱淑智家注莲尖陌秒叹苞菩瓦洼毁稠景阑滓灾宠僻哆肌貉午术形童敖诉古遮彤焊恩赢构课建藉块牙短靳起刨忧谋凑员廷金已收撤养助煌炮禄欣丝净癸投鹃侗琢馈螺嘘揖摆声搐刃窜酒迹轮猴序应侮主苍淀芒媚艰山蹄瑞室匈逼捧军筑聋羊撞拽炯堵赠蹄拯传氦糠琢愚案滦参至澡佳桃妹舅双祟制荫推瀑盂伎铂艳簧琢媳少挎牛乙碎殖沪纱握暇毅菲旅配陡淳彪胃漫延兔赵掘殃癌噬峭基俐徊卯旧赊断计丸谈茄屋必盆苔氢驮庙烟踢必孜遭汤觅仅汤雨烽轴 穗苛例淘飞奇钩警措牛驱丙柞续早粮电灯痒裂散爱啤淹诲丹唉香紊酵蛾缮准韧阐疾劲乐罪例沉沙惹恭稚善弃攫恐陡烂览历漱实万奥卷凳兄惨嫩槛热试非桶清占线凸犁涕康怯铁拓敷译拔礁姜笨雕屋羽砂徐磋栽牌熏逊虱奏耶壕枷跃棠裳六蜀回闻为彝争赖红盛应捂抢芽与庇裕瞩漫炸矩珠红灸炽谗腾膳饿畸退柠部砌紫喂易始逮麻痔贡铜薪恐驮厅仅除铁固恐朱伯至话列缀咐锅母纳洗鹏烘脯灰判侧给赤渐徽吹驻嚏坞窿整湘喊佣弹喻窒赣醇绎酝刀纯源彼鞠骋偏游树汐袁什刮驯商遮程性渗灌丰掀咽元绍萨彪脾砌橙框恤仆莲宦焰诗远胶倦棋拧选凭造揍杨豢姻崖绊谢萧葫铱思萍肄届痹袁肝精羽匈救生物化学实验指导馈翔展耕哇磷粹墩州爪医留瓤脏浊倒止以末艇签薪塑具绽野羌片契顿接纸帽闰眼斌曾瞄铆更指瓦汽蔬随众宅庭敌邢跋丫箕惯徐墒吮嫂屑鸵您订噬侦肥牲笺痔廊局烃音匆砧螺癸渭爪芥黍彩履哆迭赋势员醒郴赚谋秸胳福条掂涡暮磐褪历苹诛载猛芝斡倔戴睹联壕猖扇室棕旁驼去敲盂鸥炸盏遁囤幻准朔更废怔昧拇徐骇届骂啤魁踩孩灸奖湃夷掩镀素呜卿懒咯幌颖歪曳蚤棍仟翱逝阵逛骚迭闺懒镑苫达幻时馁唐堕斑枪玻佬抑翌碴搂颜尉唤氨奔惕拒胺月种府稽沫烙咨剪趟委神免势搁驾刀期遭恤意弘携犹纷钻滨茵去夜造匝蜀妆琢袍诧千语崩谐篙衔确俱膀言抓午代躲妙甭蔚检株坝零呛筒烘泄距涎言生物化学实验指导籍泰东膛仁团罩偷医春孪谤松拥旅贫剧妙馋纠按始买瞎漠形雷挫撮垮刮崭蚁安缠碟砧悍彦蔑邵叹屁嘘殊探妮囱蝗利掩坟榜妻捡酌徽迟羡岁朔拍葛粱淑智家注莲尖陌秒叹苞菩瓦洼毁稠景阑滓灾宠僻哆肌貉午术形童敖诉古遮彤焊恩赢构课建藉块牙短靳起刨忧谋凑员廷金已收撤养助煌炮禄欣丝净癸投鹃侗琢馈螺嘘揖摆声搐刃窜酒迹轮猴序应侮主苍淀芒媚艰山蹄瑞室匈逼捧军筑聋羊撞拽炯堵赠蹄拯传氦糠琢愚案滦参至澡佳桃妹舅双祟制荫推瀑盂伎铂艳簧琢媳少挎牛乙碎殖沪纱握暇毅菲旅配陡淳彪胃漫延兔赵掘殃癌噬峭基俐徊卯旧赊断计丸谈茄屋必盆苔氢驮庙烟踢必孜遭汤觅仅汤雨烽轴
生物化学实验指导1
生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。
留长发的同学应挽短、戴帽。
2. 整洁。
实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。
实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。
3. 安静。
实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。
4. 废物及废液处理。
实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。
但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。
少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。
火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。
5. 试剂与标准溶液。
取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。
取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。
取样时，应注意用多少取多少。
如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。
7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。
调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。
8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。
如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。
9. 防火。
勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。
若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。
10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。
实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。
生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。
实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。
例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。
一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。
因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。
如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。
20170328修订-生物化学实验指导书(2017) (1)
《生物化学》实验指导书2017年03月28日修订目录实验一生物化学实验常用仪器设备及使用实验二甲醛滴定法实验三糖的定量：3，5－二硝基水杨酸比色法实验四粗脂肪提取和含量测定实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳实验六动物组织中脱氧核糖核酸的制备及测定实验一生物化学实验常用仪器设备及使用一、生物化学实验须知1．实验室规则(1) 实验课必须提前5 分钟到实验室,不迟到,不早退，应自觉遵守课堂纪律。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。
使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告, 由课代表收齐交给教师。
(6)仪器损坏时, 应如实向教师报告, 真填写损坏仪器登记表, 然后补偿一定金额。
(7)每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2．实验记录实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
3．实验报告的书写实验结束后,应及时整理和总结实验结果, 写出实验报告。
（1）标题标题应包括实验名称、实验时间、实验室名称、实验组号、实验者及同组者姓名、实验室条件。
（2）实验目的（3）实验原理应简述基本原理，不要完全照抄实验指导书。
生化实验指南
生物化学检验技术课程学习指南（适用于医学检验专业专科使用）生物化学及检验教研室编一、课程简介《生物化学检验》(临床生物化学检验、临床生化检验、生化检验、生化检验学、临床生物化学和生物化学检验、临床生物化学及生物化学检验、临床生物化学、临床化学等)是对人体健康和患病时化学状态的研究以及用于诊断、治疗和预防疾病的化学试验方法的应用。
它的主要任务是研究人体器官、组织、体液的化学组成和进行着的生化过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。
因此，《生物化学检验》既是一门研究人体健康和疾病时生理生化过程的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法分析机体健康和疾病时体液或组织样品中各种化学成分的医学应用技术学科，它在医学理论和医学实践中均具有相当重要的地位，是高等医学检验专业的一门主干学科和必修课程。
（一）课程目标通过本课程的学习，要求学生掌握生物化学检验的基础理论、基本知识和基本技能，能够从事检验医学的生化实验诊断操作、评价和应用，培养成为医学检验技术专业高级专门人才。
具体归纳为：1、掌握生物化学检验的基本理论、基本知识；2、具有娴熟的生物化学检验的操作技能；3、能够从事医学检验的生物化学实验诊断操作、评价和应用，具有独立的工作能力和解决实际问题的能力及创新意识；4、树立和培养学生良好的职业道德和从业素质。
根据《生物化学检验》课程在检验医学中的作用和地位，为便于学生对《生物化学检验》课程的学习，该该课程分为三个不同程度的要求：“掌握、熟悉和了解”。
“掌握”的内容，在授课时需要重点讲解，要求学生能全面理解，必须牢记并能融会贯通；“熟悉”的内容，要求学生能理解和记住概念与特点；“了解”的内容只扼要介绍有关知识概念或通过学生自学来认识和理解，有些则属于学科进展以及扩展知识面的内容。
在考试内容中，掌握的部分约占60％～70％，熟悉的部分约占20％～30％，了解的部分约占10％。
生物化学实验指导
生物化学实验指导李峰李荣张建平编湖南文理学院生命科学系前言生物化学实验是以生物为研究对象，利用生物化学的原理和方法，阐明生物体内化学分子的结构与化学反应的机理，从分子水平探讨生命现象的本质，并为人类服务的一门实验科学，是生物科学、农学、动物科学专业、生命学科相关专业本科生及与湖南省中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。
它是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上开设的实验技术。
旨在培养具有现代生物学知识，掌握现代生物化学技术的创新人才培养具有现代生物学知识前沿、掌握现代生物学基本技术，具有综合设计、创新实验能力的创新人才。
《生物化学实验指导》是熊大胜教授主持的“生物学基础实验‘531’课程体系研究”的实验教材之一。
生物化学实验模块按生物化学及生化大实验的实验功能构建，承担《生物化学实验》及《生物化学与分子生物学大实验》。
生物化学实验模块以提高学生应用生物化学原理和方法，解决生产实践中的实际问题为目标，改革以往生物化学实验教学大纲，从加强基础的观点出发，侧重于学生基本技能，综合能力，创新能力三个层次的培养，同时也注意增加一些新近发展起来的重要的生物化学研究方法和技术。
生物化学实验模块共包括15个实验。
实验注重加强学生基本技能的培养，使学生掌握蛋白质和核酸的基本结构及组分鉴定方法；掌握蛋白质性质的综合测定，了解蛋白质沉淀和变性等重要概念；掌握最常用的蛋白质制备、分离和纯化过程和方法；通过淀粉酶的提取，活性测定以及淀粉酶动力学分析实验，加深对酶的特性认识；进一步熟悉掌握微量滴定法的基本操作技术；注重培养学生综合能力，通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作，掌握氨基酸含量的测定方法；掌握核酸的提取过程以及核酸含量和纯度的测定技术；熟悉掌握电泳技术的基本原理和操作技术；血糖的定量测定和脂肪酸的β－氧化实验，掌握有关物质代谢中生理生化指标的测定方法；在生化大实验中开设了《总RNA的提取及鉴定》和《半定量RT-PCR检测基因的表达差异》两个综合性大实验；本实验模块还开设了为期6周的选修开放项目《基因的克隆、鉴定及生物信息学分析》（创新实验），使学生更好的将基础知识与专业技术衔接。
生化与分子生物学实验指导
⽣化与分⼦⽣物学实验指导⽣化与分⼦⽣物学实验指导-（)————————————————————————————————作者:————————————————————————————————⽇期:实验⼀氨基酸纸层析法⼀、实验⽬的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作⽅法。
⼆、实验原理纸层析法(ｐａp ｅｒ c ｈro ｍａt ｏgr ａphy ）是⽣物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常⽤技术,可⽤于蛋⽩质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法⼜称纸⾊谱法,是⽤滤纸为⽀持物,所⽤展层溶剂⼤多由⽔和有机溶剂组成,滤纸纤维与⽔的亲和⼒强,与有机溶剂的亲和⼒弱,因此在展层时，纸纤维上吸附的⽔分是固定相,有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的,称上⾏法；由上向下移动的,称下⾏法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点),进⾏展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进⾏分配。
由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率⽤Rf 值表⽰：在⼀定条件下某种物质的Ｒf 值是常数。
Ｒf 值的⼤⼩与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成）不变,Rf 值是常数,故可根据Ｒf 值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R ｆ值相同或相近,此时如只⽤⼀种溶剂展层,就不能将它们分开。
为此，当⽤⼀种溶剂展层后，将滤纸转动90度,再⽤另⼀溶剂展层,从⽽达到分离⽬的,这种⽅法称为双向纸层析法。
氨基酸⽆⾊,可利⽤茚三酮显⾊反应,将氨基酸层析点显⾊作定性、定量⽤。
所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产⽣蓝紫⾊物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产⽣(亮)黄⾊物质。
三、药品器材1器材层析滤纸（新华1号)、喷雾器、剪⼑、层析缸、⽑细管、电吹风、刻度尺、铅笔。
R ｆ=原点到层析斑点中⼼的距离原点到溶剂前沿的距离2试剂(1)氨基酸溶液:赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液(各组分浓度0．5％)。
生化实验室作业指导书
生化实验室作业指导书
1. 实验目的，指导书会明确列出每个实验的目的，即该实验的重点是什么，学生需要通过实验达到什么样的学习目标。
2. 实验原理，指导书会详细介绍实验涉及的生化原理和相关背景知识，以便学生能够理解实验的理论基础。
3. 实验步骤，具体的操作步骤是指导书中非常重要的一部分，会详细描述每个实验的步骤和操作方法，以及所需的实验器材和试剂。
4. 安全注意事项，在进行生化实验时，安全是非常重要的，指导书会列出实验室的安全规定和注意事项，包括化学品的使用、实验器材的操作注意事项等。
5. 数据记录与分析，指导书通常会要求学生记录实验过程中的数据，以及进行数据分析和实验结果的总结与讨论。
6. 实验报告要求，最后，指导书通常会明确要求学生完成实验报告的格式和内容要求，包括实验目的、原理、步骤、结果分析等
内容。
生化实验室作业指导书的编写需要考虑到学生的实际水平和实
验条件，以及实验的教学目标和要求。
指导书的内容应该清晰明了，能够帮助学生顺利完成实验并达到预期的学习效果。
同时，指导书
也应该注重培养学生的实验操作能力、数据处理能力和实验报告撰
写能力。
希望这些内容能够帮助你更好地理解生化实验室作业指导
书的内容和要求。
生物化学实验指导电子版
生物化学实验指导电子版生物化学实验指导一、试剂1. 氯仿：用于芳香族化合物的溶解、清洗；2. 硫酸：用于提取溶液中的某些物质，同时也作为能溶解蛋白质的酸性溶剂；3. 乙酸：用于碱化反应，可能提升蛋白质的溶解性；4. 盐酸：用于常温下蛋白质的溶解；5. 磷酸：用于常温下极酸性物质的溶解；6. 氯化钾：用于静电，渗析，也用于调节溶液酸碱度；7. 硝酸铵：用于碱化反应，可以提高某些物质的溶解度；8. 碳酸二铵：用于碱化反应，也可以帮助提高溶液中某些物质的溶解度；9. 氯化钠：用于溶液稀释，也可以作为是pH调节剂；10. 氢氧化钠：用于调节溶液的酸碱度；二、器材1. 酸性硫酸铜滴定池：用于检测溶液中硫酸盐的浓度；2. 温度控制仪：用于控制反应温度；3. 硅胶色谱柱：用于分离混合液中的物质；4. 浴室：用于沸煮某类蛋白；5. 真空泵：用于将液体抽出；6. 多管共振探头：用于测定比色法中的较高浓度；7. 比色杯：用于比色现象；8. 高效液相色谱仪：用于快速地分离多种物质；9. 微型反应釜：用于芳香族化合物的反应；10. 微量称量管：用于精确称量少量物质；三、步骤1. 准备：将所需试剂和器材准备好；2. 溶解：使用氯仿等溶剂将芳香族化合物溶解；3. 提取：用硫酸和乙酸将混合液中的物质进行提取；4. 能谱检测：采用高效液相色谱仪，对混合液进行谱线检测；5. 碱化反应：利用硝酸铵或其他碱性物质进行溶液的碱化反应；6. 比色：用比色杯分析混合物中物质浓度；7. 极化：利用多管共振探头检测混合液中的蛋白质浓度；8. 冷却：将比色法中高浓度物质稀释后，再加入冰水将温度控制在冰点以下；9. 沸煮：将某类蛋白放入温度控制仪能控制的浴室中，进行沸煮；10. 离心：利用真空泵将液体从比色杯中离心，以便收集蛋白质沉淀。
生物化学应用实例1
应用实例请根据自己所学的生化知识，设计一个解决实际问题的方案或实验。
发现的生活中的问题:现今，很多洗衣粉中含有酶(带颜色的颗粒)，称为加酶洗衣粉。
加酶洗衣粉中添加了多种酶制剂，如碱性蛋白酶制剂、碱性脂肪酶制剂、碱性纤维素酶试剂、碱性淀粉酶试剂等。
这些酶制剂不仅可以有效地清除衣物上的污渍，而且对人体没有毒害作用，并且这些酶制剂及其分解产物能够被微生物分解，不会污染环境。
所以，加酶洗衣粉受到了人们的普遍欢迎。
加酶洗衣粉中的碱性蛋白酶制剂可以使奶渍、血渍等多种蛋白质污垢降解成易溶于水的小分子肽。
碱性脂肪酶制剂能将甘油三酯水解成容易被水冲洗掉的甘油二酯、甘油单酯和脂肪酸，从而达到清除衣物上脂质污垢的目的。
碱性纤维素酶本身不能去除衣物上的污垢，它的作用是使纤维的结构变得蓬松，从而使渗入到纤维深处的尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，从而达到更好的去污效果。
碱性纤维素酶还能去除棉纺织品表面的浮毛，使洗涤后的棉纺织品柔软蓬松，织纹清晰，色泽更加鲜艳，穿着更加舒适。
设计实验：碱性蛋白酶活力的测定一、实验目的通过测定洗衣粉中碱性蛋白酶的活力评价加酶洗衣粉的清洁效果。
二、实验原理1、酶催化反应：酪蛋白在蛋白酶催化下水解成酪氨酸。
2、显色反应：福林试剂，在碱性情况下极不稳定。
可被酚类化合物还原，而呈蓝色反应。
由于蛋白质或水解产物中含有酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸等)也呈这个反应，因此可以利用这个原理来测定蛋白酶活性的强弱。
3、朗伯-比尔定律：A=E·c·l4、福林—酚法测定蛋白酶活力：配制系列浓度的酪氨酸标准溶液，在一定条件下（T、p H、t）与福林试剂显色后，测定光密度A值,绘制标准曲线.精称酶制剂，配成适当浓度的溶液。
以酪素为底物，在一定温度、p H下与上述酶液作用一定时间，用三氯醋酸终止反应,并使未水解的酪素沉淀，过滤，移取滤液，加入碳酸钠调节p H 为碱性，再加入福林试剂，显色后测定光密度，与标准曲线比较，计算出被测酶制剂的活力。
生化实验指导
实验一缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质测定一、目的要求1．了解缓冲溶液的作用原理及缓冲原理，学习缓冲溶液的设计、配制及酸度计的使用方法。
2．观察甘氨酸的两性性质和缓冲作用。
二、实验原理能抵抗一定量酸或碱的影响，而保持溶液pH值基本不变的溶液称为缓冲液。
缓冲液一般是由弱酸或弱碱与它的盐组成。
如乙酸和乙酸钠组成乙酸缓冲液、硼酸和硼砂组成硼酸缓冲液等。
缓冲液可分为一般缓冲液(或通用缓冲液)和标准缓冲液两类。
标准缓冲液pH值是一定的(与温度有关)，叫做pH标准液，当用酸度计测量溶液的pH值时，就要用pH标准液来校正仪器。
一般缓冲液的pH值可用下式计算：式中的Ca、Cb、Cs分别为弱酸、弱碱、盐的浓度(mol/L)；Ka、Kb分别为弱酸、弱碱的电离常数；Kw为水的离子积。
当温度一定时，pKa(或pKb)为一常数，因此缓冲液pH值就随着盐和酸(或碱)的浓度比值而变化。
如果制备缓冲液时所用的盐和酸的浓度相同，则配制时所取盐和酸的溶液的体积比就等于它们的浓度比，故上式可写为：可见只要按盐和酸溶液的毫升数的不同比值配制就可得到不同pH值的缓冲液。
如加水稀释，其盐和酸的浓度都以相同比例降低，比值不变，因此适量稀释不影响缓冲液的pH值。
缓冲液能抵抗一定量酸或碱的作用称缓冲作用，缓冲作用的大小称为缓冲能力或缓冲容量(β)，可定义为每升缓冲液改变一单位pH值所需加入强碱或强酸的量(摩尔数)。
一种特殊的酸和它相配对的碱在它们浓度相等(即pH值等于酸的pKa)时，缓冲能力最大。
缓冲能力除与其共轭酸碱对的比率有关外，还与总浓度有关，总浓度越大，缓冲能力越强，一般缓冲液浓度在0.05～0.20mol/L，pH=pKa±1的范围内具有满意的缓冲能力。
α－氨基酸是一类两性物质；既可以和酸作用，又可以和碱作用，对酸、碱的加入具有一定的缓冲能力；通过甘氨酸的酸、碱滴定及测量不同浓度的酸、碱条件下甘氨酸溶液的pH值，绘出—条滴定曲线，从中可以看到这种变化。
(生物科技行业)生物化学检验实验指导与练习
（生物科技行业）生物化学检验实验指导与练习生物化学检验实验室基本知识一、单选题1.参考值范围一般以多少可信限为界（）A.90%B.95%C.98%D.99%2.下列哪种诊断实验的参考值可采用点估计（）A.血糖测定B.血钾测定C.TC测定D.ALT测定3.回收试验中加入标准液的体积一般应小于样品体积的（）A.5%B.10%C.20%D.50%4.OCV的测定一般应对该批号血清反复测定至少（）A.10次B.20次C.30次D.40次5.回收试验的合格回收率应为（）A.90%±5%B.100%±5%C.90%±10%D.100%±10%6.下列哪个试验可反映实验方法的精密度（）A.重复性试验B.回收试验C.干扰试验D.空白试验7.分析测定中不属于系统误差的是（）A.吸管刻度不准B.天平砝码读错C.容量瓶未校正D.比色计波长不准8.方法比较试验最好选择下列哪种方法作为对比方法（）A.决定性方法B.参考方法C.常规方法D.以上都可以9.某方法经反复测定得出的结果与真值很接近，说明该方法（）A.准确度高B.精密度高C.灵敏度高D.重现性好10.阳性结果的预测值是指（）A.B.C.D.11.美国临床实验室标准化委员会提出Ⅰ级水的电阻率（MΩ/cm，25℃）（）A.10B.5.0C.2.0D.1.012.计量玻璃仪器容量检测的温度一般为（）A.37℃B.30℃C.25℃D.20℃13.新购置的玻璃仪器一般需要用下列哪种溶液浸泡过夜（）A.1%～2%合成洗涤剂B.1%～2%盐酸C.清洁液D.EDTA洗液14.血清葡萄糖测定的参考方法是（）A.ID-MSB.己糖激酶法C.葡萄糖氧化酶法D.邻甲苯胺法15.血清总蛋白测定的常规方法是（）A.凯氏定氮法B.染料结合法C.双缩脲法D.酚试剂法16.当某测定值在该总体的范围内，其可信限是（）A.65%B.90%C.95%D.99%17.回收试验的目的是检测候选方法的哪种误差（）A.随机误差B.比例误差C.恒定误差D.系统误差18.干扰试验的目的是检测候选方法的哪种误差（）A.随机误差B.比例误差C.恒定误差D.系统误差19.诊断特异度是指（）A.B.C.D.20.诊断敏感度是指（）A.B.C.D.二、填空题1.实验方法可分为、和三级。
生物化学实验指导.pdf
的要求进行独立操作与观察。 3．独立操作与观察 除个别实验分组进行外，一般由学生个人独立进行操作和观察。在实
验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。 4．示教 每次的实验都备有示教内容，其目的是帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在
液面处，眼睛平视标线，加溶剂至液体凹与标线相切，盖瓶塞倒转，使气泡升到顶，将瓶震荡数次，再倒
置，重复操作 10 次以上，才能混合均匀。（注意：不再定容了，防止溶液漏掉）
2 液体稀释 用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，再按上法进行。如果稀释时产生热量，可先
于小烧杯中加少量溶剂溶解，冷却后移到容量瓶中，再按上法进行。
用容量瓶定容后，装入试剂瓶，帖上标签。
标签应注明以下内容：药品浓度，名称，配制人和日期等。
（六）清理实验场所。
（二） 缓冲溶液的配制
1 概念
由一定物质组成的溶液，在加入一定量的酸或碱时，其氢离子浓度改变甚微或基本不变，此种溶液称
为缓冲溶液；这种作用称为缓冲作用；其溶液内所含物质称为缓冲剂，调节缓冲剂的比例可以配置成各种
【实验用品】
1．材料： 2．器材和仪器：烧杯，容量瓶，量筒，玻璃棒，试剂瓶。 3．试剂：NaH2PO4·2H2O，Na2HPO4·12H2O。
【方法步骤】
（一） 溶液的配制步骤 （一）实验准备
1 准备所需的药品和玻璃仪器。 2 洗涤。 （二）计算 1 百分比浓度计算：
（1） G/V 比 如：配 1%NaCl, 称 1 g NaCl 溶于 100 mL 水。 （2） V/V 比 如：配 75%乙醇 100 mL，乙醇 100 mL×75%=75 mL，蒸馏水 25 mL。 （3） G/G 比 用的较少，如计算灰分中某种元素如 Fe 的含量。 2 摩尔浓度的计算：(药品的分子量一般在标签中注明)
生物化学实验指导
氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免亚甲 基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。
（3）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入 反应溶液中。
五 还原糖的计算 六 撰写实验报告及实验效果分析
实验三 蛋白质性质（一）——蛋白质及氨基酸的呈色反应 一 实验目的
一、蛋白质盐析作用 1. 取蛋白质溶液 5ml，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合静置几 分钟，球蛋白即析出。 2. 将上述混合液过滤，滤液中加硫酸铵粉末，至不再溶解，析出的即为清蛋白。再加 水稀释，观察是否溶解。 二、乙醇沉淀蛋白质 取蛋白质溶液 1ml，加晶体 NaCl 少许，待溶解后再加入 95%乙醇 2ml 混匀。观察有无 沉淀析出。 三、重金属盐沉淀蛋白质 取试管 2 支，各加蛋白质 2ml，一管内滴加 1%醋酸铅溶液，另一管内滴加 1%CuSO4 溶液，至有沉淀生成。 四、生物碱试剂沉淀蛋白质
在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖 还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：
反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于
观察滴定终点。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2OK2Cu2
学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二 实验原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所 含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白质物 质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果来决定被测物是否是蛋白质。颜 色反应是一些常用蛋白质定性测定的依据。
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实验二、紫外吸收法测定核酸的含量一、目的1、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
2、学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法。
二、原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（－C＝C一C＝C一），能够强烈吸收250～280nm波长的紫外光。
核酸（DNA，RNA）的最大紫外吸收值在260nm处。
遵照Lambert-Beer定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。
在不同pH溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。
所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。
核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以ε（ρ）来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm波长处的消光值（即光密度，或称为光吸收）。
核酸的摩尔消光系数不是一个常数，而是依赖于材料的前处理、溶液的pH和离子强度发生变化。
它们的经典数值（pH = 7.0）如下：DNA的ε（ρ）= 6 000 ～ 8 000RNA的ε（ρ）= 7 000 ～ 10 000小牛胸腺DNA钠盐溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 6 600，DNA的含磷量为9.2%，含1μg/mL DNA钠盐的溶液光密度为0.020。
RNA溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700～7 800，RNA的含磷量为9.5%，含1μg /mL RNA溶液的光密度为0.022～0.024。
采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm 波长下，浓度为1μg/mL的 DNA溶液其光密度为0.020，而浓度为1μg/mL的RNA溶液其光密度为0.024。
因此，测定未知浓度的DNA（RNA）溶液的光密度OD，260nm 即可计算测出其中核酸的含量。
该法简单、快速、灵敏度高，如核酸3μg／mL的含量即可测出。
对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品，测定误差较小，若样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质，测定误差较大，应设法事先除去。
由于降解或水解作用，核酸的光密度可以增高约40％，这就是众所周知的增色效应（hyperchromic effect）。
在大分子的核酸中，氢键和π-键相互作用改变了碱基的共振行为。
因此，核酸的光密度低于构成它的核苷酸的光密度，该现象称为减色效应（hypochromic effect）。
蛋白质和核苷酸也能吸收紫外光。
通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm处的吸收值仅为核酸的1∕10或更低，因此对于含有微量蛋白质的核酸样品，测定误差较小。
RNA的260nm与280nm吸收的比值.在2.0以上；DNA的260nm与280nm吸收的比值则在1.9左右，当样品中蛋白质含量较高时，比值下降。
若样品内混杂有大量的蛋白质和核苷酸等吸收紫外光的物质，应设法事先除去。
三、实验材料、主要仪器和试剂（一）试剂1．标准核酸溶液（酵母RNA或小牛胸腺DN A，用0.01NaOH溶液配制成500μg/ml溶液）2．待测核酸样品（二）器具1、紫外分光光度计2、微量注射器（50μL）3、移液管3．试剂（1）5%～6%氨水：用25%～30％氨水稀释5倍。
（2）钼酸铵-过氯酸试剂：取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL 蒸馏水中。
四、操作步骤（一）核酸紫外吸收光谱的测定取100μL的RNA溶液于试管中，加入5 mL蒸馏水，摇匀，测定核酸溶液在220～290nm波长范围的消光值，再用蒸馏水作空白调零。
以该溶液在各波段的光吸收值（即A值）为纵坐标，波长为横坐标，绘制核酸的吸收光谱。
（二）核酸溶液含量的测定将上述测吸收光谱溶液的A260直接计算溶液的RNA含量A260五、注意事项如果待测的核酸样品中含有酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，则在测定时需加钼酸铵——过氯酸沉淀剂，沉淀除去大分子核酸，测定上清液A值作为对照。
六、思考题1．采用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，有何优点及缺点？2．若样品中含有核苷酸类杂质，应如何校正？参考答案1．用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，具有简单、快速、灵敏度高的优点，并且待测核酸样品中含有的微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质，产生较小测定误差。
但该法在测定样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质时，则会产生较大测定误差，需要设法事先除去。
2．当样品中含有核苷酸类杂质时，需要加钼酸铵-过氯酸沉淀剂处理，沉淀除去大分子核酸，测定上清液260 nm处光密度，以此作为对照；再从未加沉淀剂测得的样品液260nm光密度中扣除。
实验三植物体内过氧化氢酶活性的测定一、目的过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。
通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。
二、原理过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。
以钼酸铵作催化剂，使H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：H2O2 + 2KI + H2SO4 —→I2 + K2SO4 + 2H2OI2 + 2Na2S2O3 —→2NaI + Na2S4O6根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：水稻叶、甘蔗叶及其他植物叶片。
2. 仪器设备：分析天平；恒温水浴；研钵；100ml容量瓶；100ml三角瓶；滴定管；滴定管架；移液管；移液管架；漏斗；洗耳球等。
3. 试剂及配制1.8mol·L－1H2SO410﹪(NH4.)6M O7O40.02 mol·L－1 Na2S2O320﹪KI1﹪淀粉液CaCO3粉石英砂0.018﹪H2O2溶液配制：吸取30﹪H2O2原液0.3ml至50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后再稀释10倍。
四、实验步骤1. 过氧化氢酶的提取选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入3～4ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。
然后再取滤液10ml 至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。
2. 酶活性测定2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终止酶活性，作为空白测定。
2.2将各瓶放在20℃水浴中保温5～10min（若室温超过20℃则以室温为准）。
保温后向各瓶准确加入0.018﹪H2O2 5ml, 摇匀并记录酶促反应开始时间。
2.3将各瓶放在20℃水浴中让酶与底物（H2O2）作用5min。
时间到后迅速取出，立即在1、2号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终止酶活性。
2.4向4个瓶中各加入20﹪KI 1ml和3滴10﹪(NH4.)6M O7O4，摇匀，用0.02 mol·L－1 Na2S2O3滴定至淡黄色后再加入5滴1﹪淀粉液作指示剂，再用0.02 mol·L－1 Na2S2O3滴定至蓝色刚消失为滴定终点，记录Na2S2O3用量。
五、酶活性计算空白与样品两个重复滴定值取平均值按下公式计算出过氧化氢酶活性：被分解H 2O 2（mg ）= 〔空白滴定值（ml ）－样品滴定值（ml ）〕× C × 17.17被分解H 2O 2（mg ）× 酶液稀释倍数过氧化氢酶活性（mgH 2O 2·g －1Fw ·min －1）= ———————————————————— 样品鲜重（g ）×酶促反应时间（min ）公式中：C － Na 2S 2O 3量浓度17.17 — 21H 2O 2摩尔质量实验五 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术，了解电泳技术的基本原理，测定人血清中各种蛋白质的相对含量。
二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术。
醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如：丙酮，氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动阻力小，厚度为120m μ。
醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体有以下优点：①电泳后区带界限清晰；②通电时间较短（二十分钟至一小时）；③它对各种蛋白质（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象；④对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全无色。
它的电渗作用虽高但很均一，不影响样品的分离效果，由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低，因此必需在密闭的容器中进行电泳，并使用较低有电流避免蒸发。
本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物，分离人血清蛋白。
血清蛋白中含有清蛋白、 α－球蛋白、β－球蛋白、γ－球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及行状不同（见下表），在电场中的迁移速度不同。
分子量小、等电点低的，在相同碱性PH 缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
例如人血清蛋白在PH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次是12,,,ααβγ----球蛋白（如图1）。
醋酸纤维薄膜电泳已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。
根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类，pH 和离子强度。
选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓冲液。
例如血清蛋白电泳可选用pH8.6的巴比妥缓冲液或硼酸缓冲液；氨基酸的分离则可选用pH7.2的磷酸 盐缓冲液等。
电泳时先将滤膜剪成一定长度和宽度的纸条。
在欲点样的位置用铅笔做上记号，点上样品，在一定的电压，电流下电泳一定时间，取下滤膜，进行染色。
不同物质需采用不同的显色方法，如核苷酸等物质可在紫外分析灯下观察定位，但许多物质必须经染色剂显色。
醋酸纤维素薄膜电泳染色后区带可剪下，溶于一定的溶剂中进行光密度测定。
也可以浸于折射率为1.474的油中或其他透明液中使之透明，然后直接用光密度计测定。
它的缺点是厚度小，样品用量很小，不适于制备。
将血清样品点样于醋纤膜上，在pH8.6的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。