任务三发酵罐实消接种
实验三 发酵罐使用及灭菌
四、操作步骤
L1523发酵罐操作流程 发酵罐操作流程 1、发酵前准备工作 、
1) 把进气过滤器、补料瓶、及可能用到的各种插针在高 把进气过滤器、补料瓶、 压锅内灭菌。 压锅内灭菌。 2) 打开水、电、空压机 打开水、 3) 打开发酵罐总电源 4) 校正 电极。之后插入发酵罐内 校正PH电极 电极。 5) 将提前配好的培养基放入罐内，并加入消泡剂。 将提前配好的培养基放入罐内，并加入消泡剂。
实验报告： 实验报告： 1、灭菌时为什么要搅拌？ 2、降温时为什么要通气？
A．到95℃时，系统出现提示，此时关小排气 关闭 ． 系统出现提示，此时关小排气(关闭 ℃ 后，回 旋1/3圈)，按“OK”。 圈， 。 B．当温度达到121℃时，较正 2零点。 ．当温度达到 较正PO 零点。 ℃ C．降温到100℃时，系统出现提示。此时，在火焰 ．降温到 系统出现提示。此时， ℃ 保护下接好进气插针，并通入压缩气体。 保护下接好进气插针，并通入压缩气体。 D．到达培养温度后，设定好转速、通气量后。此 ．到达培养温度后，设定好转速、通气量后。 时校正PO 时校正 2的100%。 。
3、清洗 、
在不开罐的情况下，放入水，加大转速即可。 在不开罐的情况下，放入水，加大转速即可。 废水可以从底阀排出。 废水可以从底阀排出。
4、关机 、
在关闭电源前，确认温度和转速处于“ 在关闭电源前，确认温度和转速处于“OFF”状 状 电源关闭后，及时关闭冷却水。 态。电源关闭后，及时关闭冷却水。发酵罐在不 使用的情况下，一般保持一定体积的清水。 使用的情况下，一般保持一定体积的清水。
实验三
培养基的制备、 培养基的制备、实罐灭菌 及接种反应器实罐灭菌，掌握无菌接种技术，掌握 学会反应器实罐灭菌，掌握无菌接种技术， 培养方法。 培养方法。 二、实验原理： 实验原理： 发酵罐能够提供微生物生长的适宜环境。 发酵罐能够提供微生物生长的适宜环境。 三、实验器材 发酵罐，带灭菌培养基等。 发酵罐，带灭菌培养基等。
发酵罐的空消与实消
教案首页
授课顺序学时日期年月日班级课
题
2.3 发酵罐的空消与实消
学习目标
通过老师的讲解和操作演示，学习、掌握蒸汽灭菌的原理，认识、熟悉蒸汽发生器，梳理蒸汽输入管道进罐路线，会进行空气过滤器蒸汽灭菌的保护操作，可以独立完成空消操作，可以独立完成实消操作。
主要内容（1）学习、掌握蒸汽灭菌的原理。
（2）学习发酵罐空消、实消两种灭菌方法。
（3）认识、熟悉蒸汽发生器，梳理蒸汽输入管道进罐路线。
（4）会进行空气过滤器蒸汽灭菌的保护操作。
（5）可以独立完成空消操作。
（6）可以独立完成实消操作。
教
学过程1、资讯→2、计划→3、决策→4、实施→5、检查→6、评价
教
具
或
工
具
工作任务单、DS-Y-10L操作手册等
载
体
DS-Y-10L发酵系统。
考核与评价采用工作任务单上的考核表进行评价，将评价结果记入期末总成绩，并填写教师评语部分。
轻工职业技术学院教案附页
2.3 发酵罐的空消与实消。
简述发酵罐实消和空消的工艺流程
简述发酵罐实消和空消的工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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发酵罐使用的基本流程有哪些
发酵罐使用的基本流程有哪些1. 准备工作在开始使用发酵罐之前，有一些准备工作需要做。
这些准备工作包括： - 清洁和消毒：确保发酵罐是干净的，并通过适当的消毒方法杀灭细菌和其他有害微生物。
- 准备培养基：根据实验的需要，准备适当的培养基填充发酵罐。
2. 接种菌种接种菌种是发酵罐中的关键步骤。
在接种之前，需要准备好菌种，并根据实验的需要进行相应处理。
接种菌种的步骤如下： - 从保存的菌种中挑取一小部分，并转移到无菌培养基中。
- 将培养基中的菌种均匀地分布在发酵罐中。
可以使用一根无菌的玻璃棒或者一次性医用级的移液管来进行。
3. 调节发酵条件发酵罐的发酵条件对于生产出优质的发酵产品至关重要。
调节发酵条件的步骤如下： - 温度控制：根据菌种的要求，调节发酵罐的温度。
温度的调节可以通过加热或者冷却系统来实现。
- 氧气供应：某些菌种需要氧气来进行呼吸作用，因此需要保证发酵罐中的氧气供应充足。
可以使用搅拌机来增加氧气的溶解度。
- pH控制：不同的菌种对于pH值有不同的要求，因此需要根据菌种的需求调节发酵罐中的pH值。
- 随时间变化的参数：在发酵过程中，一些参数如溶解氧浓度、培养基的营养物质浓度等可能会发生变化，需要进行监控和调节。
4. 监测发酵过程在发酵过程中，需要定期监测和记录发酵罐中的各种参数，以确保发酵过程的正常进行。
这些参数包括： - 温度：发酵罐中的温度需要定期测量，并根据需要进行调节。
- pH值：发酵罐中的pH值需要定期测量，并根据需要进行调节。
- 溶解氧浓度：发酵罐中的溶解氧浓度需要定期测量，并根据需要进行调节。
- 生长曲线：监测菌种的生长曲线是评估发酵过程的有效方法之一。
5. 收获和处理发酵产物在发酵过程结束后，需要将发酵产物从发酵罐中收获出来，并进行后续的处理。
这些处理步骤可能包括： - 分离和提纯：将发酵产物中的目标物质分离出来，并进行进一步的提纯。
- 干燥和包装：将发酵产物进行干燥处理，并根据需要进行适当的包装，以延长产品的保质期和使用期限。
发酵罐操作规程
发酵系统操作规程一、发酵前准备工作（1）检查电源是否正常，空压机、微机系统和循环水系统是否正常工作。
（2）检查系统上的阀门、接头及紧固螺钉是否拧紧。
（3）开动空压机，用0.15Mpa压力，检查种子罐、发酵罐、过滤器、管路、阀门等密封性是否良好，有无泄漏。
罐体夹套与罐内是否密封（换季时应重点检测），确保所有阀门处于关闭状态（电磁阀前方的阀门除外）。
（4）检查水（冷却水）压、电压、气（汽）压能否正常供应。
进水压维持在0.12Mpa，允许在0.15-0.2Mpa范围变动，不能超过0.3Mpa，温度应低于发酵温度10℃；单相电源AC220V±10%，频率50Hz，罐体可靠接地；输入蒸汽压力应维持在0.4Mpa，进入系统后减压为0.24MPa；空压机压力值0.8Mpa，空气进入压力应控制在0.25-0.30MP（空气初级过滤器的压力值）。
（5）温度、溶氧电极、PH电极校正及标定，详见触摸屏PH、DO的标定帮助。
（6）检查各电机能否正常运转（共4个）。
电磁阀能否正常吸合（整套系统共11个电磁阀）。
二、灭菌1.发酵系统安装好后的初次清洗罐内的清洗：酸碱罐、补料罐、种子罐可将罐体上方的法兰卸开，由操作工采用洁净布手动清洗，结束后排尽罐内的污水，在多冲洗几遍即可。
发酵罐的清洗可采用自来水管通过手孔向罐体内壁冲洗，当水位上升到搅拌轴的第二片叶轮时停止冲洗，开动电机搅拌清洗。
各管路的清洗，可以先采用清水冲洗，再根据相应功能采用相应的清洗介质（清洗管路时应以保护管路中的各种元件为前提），具体步骤可参考“空气管路的灭菌”。
如果发酵系统长时间不用或培养的菌体与上一批次的不相同时，可采用2%NaOH清洗，其他各罐也可以采用发酵罐的清洗方式清洗，清洗结束后应对发酵系统灭菌。
2.空气管路的灭菌（1）空气管路上的除菌过滤器，使用蒸汽通过减压阀（空气减压阀不能进行蒸汽灭菌，所以空气预过滤器不灭菌）、蒸汽过滤器然后进入除菌过滤器。
实罐灭菌实验报告
一、实验目的1. 理解实罐灭菌的概念和原理。
2. 掌握实罐灭菌的操作步骤和注意事项。
3. 通过实验验证实罐灭菌的效果。
二、实验原理实罐灭菌是一种将培养基放入发酵罐或其他容器中，通入蒸汽将培养基和容器加热至灭菌温度后维持一定时间，再冷却到接种温度的灭菌方法。
该方法无需专门的灭菌设备，灭菌效果可靠，但温度低、时间长，对培养基成分破坏较大。
三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基2. 发酵罐：5L通气机械搅拌发酵罐3. 蒸汽发生器4. 温度计5. 秒表6. 冷却水四、实验步骤1. 空消：将发酵罐用蒸汽进行灭菌，消除所有死角的杂菌，保证系统处于无菌状态。
具体操作如下：- 将发酵罐内加入适量的水，开启蒸汽发生器，调节蒸汽压力至0.13MPa。
- 维持蒸汽温度在121℃左右，先开排污水阀和进气阀，排空夹套水。
- 对气路、料路、种子罐、发酵罐进行灭菌，空消时间大约为30到40分钟。
- 当设备初次使用或长期不用的情况下，最好采用间歇灭菌的方法，即第一次空消结束后，间隔3到5个小时再空消一次，以便杀死芽孢。
- 蒸汽减压阀必须调整在0.13MPa，不得超过0.15MPa。
- 空消时，应将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13～0.15MPa。
- 空消结束后，应将罐内冷凝水排掉，并将排空阀门打开，防止冷却后罐内产生负压、损坏设备。
- 空消时，溶氧、pH电极取出，可以延长其使用寿命。
2. 实消：当罐内加入培养基后，用蒸汽对培养基进行灭菌。
具体操作如下：- 将配好的培养基从加料口加入罐内，此时夹套内应无冷却水。
- 开启蒸汽发生器，调节蒸汽压力至0.13MPa。
- 维持蒸汽温度在121℃左右，维持一定时间，以确保培养基和容器内所有微生物被杀灭。
- 实验过程中，应密切观察罐内压力、温度变化，确保灭菌效果。
- 灭菌结束后，关闭蒸汽发生器，将发酵罐冷却至接种温度。
五、实验结果经过实罐灭菌处理后，培养基和发酵罐内均无杂菌生长，说明实罐灭菌效果良好。
任务三发酵罐实消接种
任务三：发酵罐实消、接种子任务二；发酵罐接种引导课文通过本任务的学习你应该能够掌握下列知识：1．掌握小型发酵罐无菌接种的原理和方法。
2．理解杂菌污染的途径和防治方法。
3. 掌握接种安全操作规程通过操作训练你应该具有下列能力：1. 能进行发酵罐无菌接种操作。
2．对接种异常问题能及时预见、反应、处理。
3. 能严格按照安全操作规程进行操作。
前面我们已经制备了符合要求的产黄青霉菌种子，进行了发酵罐的清洗及空消、实消，接下来的任务就是进行接种了，那么发酵罐接种的知识你了解多少呢？一、无菌接种的必要性：案例：山东省某大型制药企业的2号发酵生产车间连续发生染菌污染事件，且每次杂菌的种类基本相同，分析可能染菌的原因，提出检查方案和防治措施。
分析：若排除了管路灭菌、空消、实消不彻底而导致染菌的因素外，能导致污染的另外一个原因就是接种操作不规范引起的。
我们的发酵属于纯培养，是由单一菌种接种以后进行的培养，其中不可以有任何杂菌，否则会影响产品的使用效果，所以为了确保每一批发酵的成功，在上罐之前，发酵人员必须具备以下两种意识：⏹无菌意识⏹安全意识二、接种量的确定接种量指移入的种子液体积与接种后培养液体积的比例接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度，采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。
但接种量过大或过小，均会影响发酵。
接种量过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而却会过多移入代谢废物；接种量过小会延长培养时间，降低发酵罐的生产率。
通常接种量：细菌1-5%，酵母菌5-10%，霉菌7-15%，有时20-25%。
二、发酵罐接种的方法一般情况下，发酵罐接种有三种方法：①火圈直接倒种②注射器接种③压力差接种。
前两种方法适用于小型发酵罐，第三种方法适用于大型工业化生产发酵罐。
1、火圈直接倒种法操作规程如下：⏹当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。
⏹准备合格的摇床菌种。
发酵罐灭菌接种操作规程
发酵罐灭菌接种操作规程发酵罐灭菌接种操作规程操作前请认真检查冷水机、空压机、反应器、进出水管、气管情况。
填好使用说明书。
开机：先打开其他单元上的开关，再打开主机背后的开关。
关机：先把控制器上所有单元的参数状态调到off，把进气开关打开后关机；关机时先关控制器后面的开关，再关其他单元上的开关。
灭菌操作1、取下马达，平放于桌上。
罐顶端套上黑色保护帽。
2、由罐上取下温度传感器，该传感器不需要灭菌。
3、取下PH电缆线，盖上红色保护帽；将PH电极要插到底。
务必拧紧电极的上下两个固定螺帽。
PH电极灭菌前要标定。
PH电极标定：接好电缆后拧开电极的固定螺帽（第一个），将PH电极取出后用去离子水冲洗干净后，轻轻用面纸吸干上面的水后先放入标准溶液4.01中校正，等控制器上数据稳定后在 set zero处输入4.01（不管实际数值的微弱差别）；输入完闭后从标准液中取出电极，冲洗、吸干后放入7.00的标准溶液中，等控制器上数据稳定后在set span处输入7.00（不管实际数值的微弱差别）。
PH电极校正后不要关控制器。
4、取下DO电缆线，DO电缆接口处用锡箔纸包好后套上黑色帽。
DO电极灭菌完后标定。
DO电极要插到底，拧紧电极的上下两个固定螺帽。
灭菌前要注意溶氧电极里头的保护液是否还有，没有则要进行添加。
5、取下消泡或液位电缆线，将消泡或液位电缆插到底，灭菌后定位到所需要的高度后就不要再压下去。
消泡电极的高度离液面约1.5cm处。
6、拆下发酵罐上和冷凝器上的进、出水管，拆下的同时要用夹子夹住拆下水管的接头处，以防水流出。
7、发酵罐上的过滤器的两端多要用夹子夹死，过滤器的出口处用锡箔包好，所有过滤器的两端多要用夹子夹住。
发酵完毕倒罐后注意检查过滤器是否被打湿，若有则赶快用吸球将其中的液体吹出。
8 、用铁夹夹死收获管上的硅胶管以防在灭菌锅内跑液。
收获管不用时上面一定要卡死不移走。
9、在灭菌前.将发酵罐的六个固定螺帽拧松出气，其他螺帽一定要拧紧！灭菌完后打开高压锅后立刻将其拧紧，注意戴上手套防止被烫伤。
发酵罐接种操作
发酵罐接种操作3.0 内容：3.1 接种前准备3.1.1将温度降至25℃以下的发酵罐移至接种室，接通进气管道，先调整进气压力为0.06Mpa，开启进气阀门后打开发酵罐排气阀，保持罐内正压；3.1.2 将接种工具和摇瓶检测用试管放在层流罩下一侧平台架上；环境检测用平板放在检测专用平台上；3.1.3 将准备好的灭火用水、湿毛巾、酒精放入接种室的回风区；3.1.4 关闭接种室门，开启层流罩开关和紫光灯开关，30min后关闭紫光灯后开始接种。
3.1.5 摇瓶使用前挑选：摇瓶摇瓶在使用前由技术部挑选是否为合格菌种，并将所用摇瓶菌丝状态填写在《摇瓶接种及使用记录》上。
3.1.6 需放在磁力搅拌器上搅拌10分钟，待菌球打碎均匀后，方可接种，品保部每瓶进行复核。
3.2 接种3.2.1 接种人员带接种用手套，使用75%酒精+新洁尔灭溶液手部喷雾消毒；3.2.2 将准备好的摇瓶使用75%酒精+新洁尔灭溶液表面喷雾消毒，经接种孔，放入层流罩内待接发酵罐上；3.2.3 在检测专用架上打开环境检测平板；3.2.4 除去安全阀上的保险丝，将95%的酒精棉均匀放入发酵罐接种口下的凹槽中，用火焰喷枪引燃；3.2.5充分灼烧发酵罐的盖面部分，并将灼烧后的接种工具并放于盖面上；3.2.6 用火焰喷枪对待用接种摇瓶瓶口及瓶口以下10cm范围灼烧消毒，灼烧棉塞，灼烧过程中旋转摇瓶，使其灼烧均匀充分；3.2.7调整进气阀压力为0.00Mpa，待排气口出气微弱后，用工具打开接种口的保护阀，迅速调整进气阀压力为0.06Mpa，用接种工具挑起接种口罐盖，并放于发酵罐盖面火焰附近。
3.2.8在喷枪的火焰保护下，用坩埚钳拔去摇瓶棉塞扔至灭火水桶内，并在火焰保护下迅速将摇瓶菌种倾倒入发酵罐，留20-30ml样品检测PH值备用；3.2.10挑取发酵罐盖盖于接种口上，使用工具锁紧保护；3.3 摇瓶检测3.3.1将灼烧后的接种钩放于摇瓶内；3.3.2手持检测用试管，在酒精火焰上对试管口进行灼烧，待试管口内壁干燥后，保持试管口在火焰上方，另一只手指缝拔取棉塞，用接种钩蘸取少量样品，在试管斜面培养基上划线，并迅速塞上棉塞。
发酵罐 操作说明书
发酵系统操作规程一、发酵前准备工作（1）检查电源是否正常，空压机、蒸汽发生器和循环水系统是否正常工作。
（2）检查系统上的阀门、接头及紧固螺钉是否拧紧。
（3）开动空压机，用0.15Mpa压力，检查发酵罐、过滤器、管路、阀门等密封性是否良好，有无泄漏。
罐体夹套与罐内是否密封（换季时应重点检测），确保所有阀门处于关闭状态。
（4）检查冷却水压、电压、气（汽）压能否正常供应。
进水压维持在0.12Mpa，允许在0.15-0.2Mpa范围变动，不能超过0.2Mpa，温度应低于发酵温度10℃以上；电源AC220V±10%，零地分开，频率50Hz，罐体可靠接地；输入蒸汽压力应维持在0.4Mpa，进入系统后通过阀门控制压力为0.12-0.13MPa；空压机压力值0.7Mpa，空气进入压力应控制在0.25-0.30MP（空气初级过滤器的压力值）。
（5）检查电机能否正常运转。
电磁阀能否正常吸合。
二、灭菌1.发酵系统安装好后的初次清洗罐内的清洗：种子罐可将罐体上方的法兰卸开，由操作工采用洁净布手动清洗，结束后排尽罐内的污水，在多冲洗几遍即可。
发酵罐的清洗可采用自来水管通过手孔向罐体内壁冲洗，当水位上升到搅拌轴的第二片叶轮时停止冲洗，开动电机搅拌清洗。
各管路的清洗，可以先采用清水冲洗，再根据相应功能采用相应的清洗介质（清洗管路时应以保护管路中的各种元件为前提），具体步骤可参考“空气管路的灭菌”。
如果发酵系统长时间不用或培养的菌体与上一批次的不相同时，可采用2%NaOH清洗，清洗结束后应对发酵系统灭菌。
2.发酵罐空消（1）空气精过滤器的空消：将所有阀门均关闭，然后微开J3、J4、J5、打开Q9，通过调节J3、J4、J5阀门的开启度保持空气精过滤器上端压力表读数为0.12-0.125Mpa，维持30分钟，空气经过滤器消毒完成。
（2）发酵罐空消：打开G2、J2、G3、J1、J9、Q6、Q7及Q9，通过调节G2和J1阀门的开启度调节发酵罐压力控制在0.12-0.125Mpa，温度121度-125度。
发酵罐的实消技术
入少量空气翻腾 10~15min，关闭进气。
公两个人盖子进行实
消，先将蒸汽管道内的残存水放完，然后通三路 蒸汽，一路罐底，一路进风管，一路取样管，同
时打开罐顶所有排气阀门，小旋塞及压力表下的
排气旋塞，让蒸汽排出，先大后小，待罐压上升 到 1.2kgf/cm2，温度 121℃时，逐步关小各排汽
公两个人，一条鱼也足够我们吃了。盛情难却
阀门，保温保压 25~30min。 保压时间到，关蒸汽，此时应即从分过滤器
进无菌空气。开排气阀，关闭罐顶所有阀门，开
冷却水对发酵罐进行降温，待温度冷却至 35℃左 右进行接种。发酵罐
1ck0f7c7f 发酵罐/
发酵罐的实消技术： 1、进料空消完毕，开始进料，进料约 2/3
体积时，开始搅拌。由于加热时物料糊化膨胀，
故先不定容。当温度达到
公两个人，一条鱼也足够我们吃了。盛情难却
70℃时，定容。 2、液化底路直接进蒸汽加热至 75℃左右，
关蒸汽，加入用 50℃水调匀的α -淀粉酶，严防 酶结块，根据生产需要调整加入量，从进风管通
发酵罐的实消与空消
保小 在 现 护直 空 机 机接 消 封 因 封蒸 过 漏 罐 但汽 程 气 体 缺来 中 严 老 点降 则 重 化 是低 可 现 等 空罐 以 象 原 消体 通 （ 因 时压 过 如 很 间力 开 图 多 较， 大 所 发 长这 排 示 酵 以样 气 ） 罐 及做 阀 。 空 蒸的 们 遇 消 汽目 开 到 过 消的 度 这 程 耗是 以 种 中 大为 及 情 或 。了 关 况 出
发酵罐的实消与空消
发酵丙班：黄辉
Green,Harmonious, Faithful,Caring Yixing-union
绿色 . 和谐 . 诚信 . 爱心
发酵罐实消的具体操作
1，实消前的准备工作
2，实消过程中的具体操作
3，实消结束后的具体操作 4，实消过程中的问题及解决方法
1，实消前的准备工作
水于 空 出关 消 如 水闭 过 图 阀状 程 为 门态 中 发 。， 必 酵 而须罐 在保冷 实证却 消热水 冷回的 却水三 过与路 程循出 中环水 必水， 须出在 先水实 开阀消 循门与 环处
4，实消过程中的问题及解决方法
1，在冷却过程中如果遇到机封漏气特别严重的罐体，则在罐体压力 稳定以后应关闭进气阀门，此时罐体压力处于缓慢下降的状态， 这就要求监盘人员必须时刻注意罐体压力变化，当压力低于一定 值时及时派人出去上压。 2，在发酵罐冷却过程中可以通过罐体压力值判断出发酵罐定容是否 准确，因为P空气总管=P料液+P罐体。其中P罐体就是发酵罐压力表显示 的压力，因为定容体积是固定的所以机封不怎么漏气的发酵罐冷 却过程中P罐体大约为0.12Mpa。
1，关闭投料阀打开排气阀及旁通自动阀和所有小排气。发酵罐开启搅拌，打开泡敌管 道上的俩个阀门。 2，开视镜蒸汽再依次开启直接蒸汽取样口蒸汽和底部蒸汽，其中开蒸汽阀门要先开一 次阀再开二次阀，一次阀开度要比二次阀大。 3，当料液温度加热到85度时开表面蒸汽带罐体压力上来后关闭底部蒸汽，直接蒸汽 以及取样口蒸汽。其中底部蒸汽关闭前要将排污管道打开一段时间，对排污阀及 管道进行灭菌同时防止排污堵塞。 4，收小排气阀门，利用表面蒸汽开度对罐体压力进行调节维持罐压在0.07MPa，一定 要保证排气阀门畅通（可以收小但不能关死），以保证排气阀门的消透。 5，有气液分离器的罐体要保证连接气液分离器的蒸汽处于开启状态。现车间要求保压 时间为50分钟。
发酵罐的实消及接种发酵
发酵罐的实消及接种发酵发酵罐的实消及接种发酵一、实验目的1、学习发酵过程中培养基的添加、实消、接种等一般操作过程。
2、对发酵罐进行参数设定并对发酵罐进行自动化控制，完成培养、取料、罐的清洗等步骤。
二、实验原理（一）培养基的添加按工艺要求配制培养基原液。
打开排气阀F14，关闭进气阀F13，卸去罐内压力；将校验好的pH、DO电极装入发酵罐内。
注意：传感器的坡面要放置正确，使得罐壁平滑；防止出现死角灭菌不彻底。
打开罐盖上的加料口，将培养基原液加入发酵罐内，并加水至所配培养液总量的75～85％左右（视环境温度、蒸汽压力及接种量而定，其余25～15％为蒸汽冷凝水和种子量）。
拧紧加料口螺母，但不要太紧以免损坏密封圈。
（二）培养基的实消检查夹套排水阀F33是否打开，夹套水是否排尽。
夹套预热：打开F2、稍开F33，接通电源，开电源开关，手动开启搅拌电机，调节电机转速至150rpm左右，进行慢速搅拌。
注意：F2不要太大，防止产生内压而损坏罐体。
夹套预热是为了防止进入罐内的水蒸气冷凝成水后改变培养基浓度。
当发酵罐内的温度达到80℃左右时，打开F4、F22，排尽蒸汽罐中冷凝水后即关闭F22；稍开F21，使蒸汽徐徐进入发酵罐；继续升温关闭进气阀F13，并将排气阀F14调为微开当培养液养液温度达到95～100℃后可停止搅拌。
当发酵罐内温度达到灭菌要求温度时，关闭阀门F4和F14。
在灭菌过程中，应时刻注意罐压，并控制在0.1～0.11MPa 之间，严禁超压。
罐压的控制通过调节阀门F2和F33来实现。
注意在升温过程中，要关闭冷却水，否则当温度设定值设定在培养温度时，冷却水管中会自动通冷却水，不仅会影响升温速度、浪费水蒸气，更重要的是会引起冷凝水过多，引起培养液浓度变化或不能达到灭菌效果。
实消时间一般为30分钟。
到时间后，关闭F2、F14。
自然冷却10分钟左右。
通冷却水进行冷却，操作如下：关闭夹套排水阀F33，按冷却键，至手动冷却状态；或调整温度设定值(调节方法见“DF-B1C控制系统的操作说明”)，按冷却键至自动状态；此时起即进入控温状态。
发酵罐安全操作流程(三篇)
发酵罐安全操作流程1、检查蒸汽发生器，确保已开启；2、检查空气源，保证供气压力在0.4~0.7MPa之间，相对湿度应小于60%；再调节空气减压阀，使其出口压力在0.2~0.25MPa之间；3、检查各管道、阀门是否有泄漏，进料口、补料口硅胶垫是否需要更换，如有请及时修整；4、检查各压力表是否归零，不能归零的予以更换；5、检查罐内是否清洗干净；6、查看控制系统、传动系统是否良好；7、检查完毕进行打压试漏：压力0.15MPa保持30min，如果出现压力下降，请用肥皂水查找泄漏点，并进行修复；8、安装已标定的PH电极、溶氧电极等其他检测设备，确保已安装到位、螺母旋紧；9、检查一切无问题，如实填写记录并签字；二、空气过滤器消毒1、首先关闭空气过滤器前的进蒸汽阀，缓慢卸掉空气过滤器内压力；2、打开蒸汽过滤器下端的排污阀（排净冷凝水后微开），缓缓开启蒸汽阀，排净管道内冷凝水后调整蒸汽阀大小，保证蒸汽压力0.2MPa以上；3、打开空气过滤器下端的排污阀，慢慢打开过滤器前的蒸汽阀，待排尽冷凝水后排污阀微开；4、开启过滤器后的排气阀门，通过调整其与蒸汽阀的大小，维持压力0.12~0.14MPa消毒30min；5、消毒结束调小排气阀与排污阀的开度，迅速关闭蒸汽阀同时打开进空气阀（换气过程中保证压力不掉零），调整空气阀大小保持压力在0.08~0.1MPa，以便吹干空气过滤器；6、约20~30min过滤器吹干后（过滤器外壁温度降至常温，手试吹出的空气干燥、细腻、滑润），关闭过滤器下端的排污阀及排气阀，保持正压；三、罐空消1、首先打开夹套下端的排水阀，排尽夹套中的水；2、依次打开取样阀、蒸汽阀，排尽管道内冷凝水后将取样阀转为微开；稍开罐排气阀，再缓慢开启罐底隔膜阀使蒸汽徐徐进入发酵罐；3、在灭菌过程中时刻注意并控制罐压在0.11~0.12MPa内，罐压的控制通过蒸汽阀和排气阀来实现；4、空消30~50min后，关闭蒸汽阀和罐底隔膜阀，关闭后压力会迅速下降，为防止罐内产生负压，需将进空气阀打开，维持罐压0.03~0.05MPa或者压力下降至零时将排气阀打开自然冷却；待温度降至80℃以下时排尽罐内冷凝水；四、实消1、将标定好的PH电极、溶氧电极等检测设备安装，检查确保安装到位，旋紧螺母；2、关闭罐底隔膜阀，微通风、开低转速，按工艺要求将配制好的培养基加入罐内，检查无漏加原料后将加料口螺母适度拧紧；3、打开夹套排水阀，排尽夹层水；关闭夹套进出水阀门；缓慢打开夹套进蒸汽阀（打开过快夹层容易产生异响）进行预热，保证夹层压力小于0.1MPa；4、待罐内温度达到90℃以上（某些培养基在70~90℃时容易起泡沫，注意观察）时关闭夹套蒸汽阀；5、关闭搅拌、通风，排气阀微开；依次打开取样阀、蒸汽阀，排尽管道内冷凝水后将取样阀转为微开，打开罐底隔膜阀，将蒸汽缓缓通入罐内（注意料液翻滚）；再打开进风管道上的蒸汽阀门，通过控制罐底隔膜阀、风管蒸汽阀、排气阀调节罐压至0.11~0.12MPa，维持121℃灭菌30min（加料口、补料口等均稍微排气，以彻底消除死角，时刻注意罐压）；6、灭菌过程中校正溶氧电极零点，30min灭菌完毕后，依次关闭加料口、补料口、罐底隔膜阀、风管蒸汽阀；关闭夹套排水阀，打开循环进出水阀（变换要迅速，时刻注意罐压变化，防掉零）；此时在控制柜中找到对应罐，开启“冷却手动”和“转速”按键，开始冷却降温；7、降温时罐压将迅速下降，当降至0.05MPa时开启风管进气阀，随时保持压力在0.05MPa；五、无菌接种1、当料液温度降至工艺要求时，按照工艺要求将转速、通风量调至最大，并维持罐压稳定几分钟后，标定溶氧电极满度；2、用酒精棉擦拭接种口和接种者双手，火圈加入酒精套在接种口上，关闭搅拌转速，降低通风量，维持罐压在0.01~0.02MPa（不能掉零，否则容易引起污染），点燃火圈，用工具扳手缓慢拧下接种口螺母（快速开启，容易出现危险），螺母不能离开火焰；3、接种者将菌种瓶口在火焰上稍微烧一会儿，拔下瓶塞迅速将菌种倒入罐内；4、拧紧接种口螺母，熄灭火焰，并用酒精棉将接种口擦拭干净；按工艺要求调好转速、通风量、罐压，并点击“开始发酵”按键开始计时培养；六、取样操作关闭蒸汽阀、全开取样阀，开启罐底隔膜阀进行取样；取样完毕后微开取样阀和蒸汽阀，用少量蒸汽进行封口，保持无菌状态；七、罐的清洗1、发酵罐在使用前和使用后要及时清洗干净；打开两边清洗口，用水管清洗余料，若不能清洗干净则需拆开罐盖；2、拆洗前首先关闭电源，拧开周边螺丝，两人小心地同时将罐盖垂直向上取出（注意：请不要抓传动轴，以免影响机械密封和轴的传动稳定性），水平放置平整的地面上，并防止滚动；3、彻底清洗干净后，将罐盖按原位轻轻放入发酵罐内，拧上周边螺丝（注意：对角拧螺丝，松紧基本一致）；4、安装完毕后通入空气（0.15MPa）,检查管道和罐的密封性，如有泄漏则需修复；5、如不接着进入下一批发酵，请将溶氧电极拆下清洗干净，放回安全处保存；PH电极清洗干净浸泡在3mol/L的KCL溶液中保存；八、维护与保养1、与发酵相配套设备按要求定期维护与保养；2、空气精过滤滤芯根据实际使用效果定期更换，一般使用期限为一年；3、发酵罐清洗时，请使用软毛刷，避免硬器刮擦；4、压力表、减压阀时常检查，不归零及时更换；5、定期检查垫圈、密封圈等，损坏及时更换，以免影响罐的密封性；6、电器、仪表、传感器等电器设备严禁直接接触水、汽；7、PH电极在使用前必须通电稳定2~3h，否则电极不稳定，造成测量数据不准；8、溶氧电极在使用前必须通极化4~6h，否则电极不稳定，造成测量数据会不准；9、设备长时间停止使用时，应清洗干净，排尽罐内及各管道中的余水；松开罐盖螺丝，防止密封圈产生永久变形。
食品生物技术《实训指导- 活性干酵母发酵生产》
学习情境3 活性干酵母发酵生产实训三、小型发酵罐的使用及补料分批发酵第一局部：认识小型发酵罐并掌握其使用方法生物反响器是生物工程的重要组成局部，是生物技术转化为产品的关键设备，在生物工程中处于中心地位。
机械搅拌式生物反响器，又称发酵罐，是进行液体发酵的特殊设备。
实验室使用的小型发酵罐，其容积可从1 L至数百升。
发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动地调控试验所需的培养条件，是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需的设备。
发酵罐是进行液体发酵的特殊设备。
生产上使用的发酵罐容积大，均用钢板或不锈钢板制成；供实验室使用的小型发酵罐，其容积可从约lL至数百升或稍大些。
一般来说，5L以下是用耐压玻璃制作罐体，5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。
发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动地调控试验所需要的培养条件，是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需的设备。
一、发酵罐的主要结构各厂家生产的发酵罐会有所差异，但根本原理是相同的，根本结构是类似的。
现以GUJS-7C、GUJS-10C型发酵罐为例，说明小型发酵罐的结构。
GUJS-7C、GUJS-10C发酵系统由发酵罐、空气处理系统、蒸汽净化系统、电气控制系统、恒温系统及管道、阀门等组成。
其工艺流程图如下：自来水压缩空气摇床菌种蒸汽源本实验室的发酵罐为5L、10 L玻璃发酵罐，其结构可分为罐体和控制器两局部。
1、罐体罐体为一硬质玻璃圆筒，底和顶两端用不锈钢及橡胶垫圈密封构成，容积为5 L，顶盖上有8个孔口，分别是加料及接种口、补料口、溶氧电极口、放置温度电极口、放置in，开启冷凝水出水阀，开启蒸气阀门，进行在位灭菌。
5、当保护罩顶部阀门有蒸气排出时，2min后关闭阀门，当罐温接近灭菌温度时，微开阀适当排气，并调整蒸气阀维持罐温。
保温结束后，关蒸气阀，全开冷凝水出水阀，开进水阀，将温度设定在37℃，切入自动。
6、当温度降到100℃以下，缓缓开排气阀，使保护罩顶压力表指示为零，移去保护罩。
Labfors3发酵罐灭菌操作规程
则需要吹灭铁板两侧溢出的火焰。） 2、将接种圈沾酒精点着后套住接种口处，将扳手或钳子沾酒精后拧开螺帽后用钳子将其夹住拿出，吹灭螺帽和 钳子上的火焰后迅 速放入装 95%乙醇的搪瓷缸容器里。 3、将接种瓶在火焰处拔开后迅速倒入发酵罐内。完毕后用钳子夹出螺帽拧上。整个过程确保无菌操作！ 溶氧设定：按 off 键→按 control 键→ 按 Auto键→setup→cascade→选择。 选择 U1：1、开机后→按 use 键→按 U1～U4 单元的Fermentation 或 cell culture 键选择发酵模式或细胞培养模式；连续按翻阅键→ 分别对 U1～U4 单个单元进行控制操作。
方式（吸光度/透过率/反射率）。
─点击光度计 按键条中的 “基线”，启动基线校 正操作，点击确定。
注：在开始基线 校正之前，确认样品或 参比光束无 任何障碍物 ，并且样品室 中没有样品 。
3.测量光谱
⑴在空白池架 中放入样品 空白比色池 ，样品池架中 放入样品池 ，点击仪器条 中的“开始”，启动
1、开电源，打开盖。 2、样品加满配平，放好。 3、按下 DEF 除霜。 4、小心提着转子，垂直放进去，提着盖好舱盖。 5、选择转子、转速、时间、温度，按下 Start 开始。 6、运行完毕，自动结束，或按下 Stop 结束后，当 Speed 变成 0，打开舱门，轻轻抱出转子。 7、试验完毕，按下 DEF 除霜，晾干舱内体后，关闭舱门，关闭离心机电源。 8、使用完毕后，填写仪器使 用记录。
发酵罐的操作规程
发酵罐的操作规程发酵罐的操作规程一、使用前的技术准备1.上岗前的技术培训：G R J-D发酵罐是机电一体化的高科技设备，因此；操作人员上岗前必须进行技术培训，使他们熟悉整个系统的工作原理、管路、阀门的操作程序，并对空压机、电热蒸汽发生器能正确操作使用。
未经培训的人员，不得单独上岗操作。
2.设备使用之前，应先检查电源是否正常，空压机、蒸汽发生器、循环水系统是否能正常工作。
3.检查系统上的阀门、接头及紧固螺钉是否拧紧。
4.开动空压机，用0.15M p a压力，检查发酵罐、过滤器、管路、阀门的密封性能是否良好，有无泄漏。
5.溶氧仪、p H仪、P L C系统应根据使用说明书进行检查、校正。
6.上岗人员对上述各项必须能熟练操作。
二、空消在投料前，气路、料路、发酵罐必须用蒸汽进行灭菌，消除所有死角的杂菌，保证系统处于无菌状态。
1.空气管路的空消(1)空气管路上有除水减压阀，和除菌过滤器。
除水减压阀不能用蒸汽灭菌，因此在空气管路通蒸汽前，必须将通向除水减压阀的阀门K Q F1关死，使蒸汽通过蒸汽过滤器然后进入除菌过滤器。
(2)空消过程中，除菌过滤器下端的排气阀应微微开启，排除冷凝水。
(3)空消时间应持续40分钟左右，当设备初次使用或长期不用后启动时，最好采用间歇空消，即第一次空消后，暂定3～5小时再空消一次，以便消除芽孢。
(4)经空消后的过滤器，应通气吹干，约20～30分钟，然后将气路阀门关闭。
2.发酵罐空消(1)发酵罐是将蒸汽直接通入罐内进行空消。
(2)空消时，应将罐上的接种口，排气阀，及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13～0.15M p a。
(3)空消时间为30～40分钟，特殊情况下，可采用间歇空消。
（4）空消结束后，应将罐内冷凝水排掉。
注意：1.发酵罐空消时，应将夹套内的水放掉，空消时最好将夹套排水阀打开，以防夹套水排不净。
2.空消时，溶氧、p H电极应取出，可以延长其使用寿命。
任务三发酵罐实消接种
任务三：发酵罐实消、接种子任务二；发酵罐接种引导课文通过本任务的学习你应该能够掌握下列知识：1．掌握小型发酵罐无菌接种的原理和方法。
2．理解杂菌污染的途径和防治方法。
3. 掌握接种安全操作规程通过操作训练你应该具有下列能力：1. 能进行发酵罐无菌接种操作。
2．对接种异常问题能及时预见、反应、处理。
3. 能严格按照安全操作规程进行操作。
前面我们已经制备了符合要求的产黄青霉菌种子，进行了发酵罐的清洗及空消、实消，接下来的任务就是进行接种了，那么发酵罐接种的知识你了解多少呢？一、无菌接种的必要性：案例：山东省某大型制药企业的2号发酵生产车间连续发生染菌污染事件，且每次杂菌的种类基本相同，分析可能染菌的原因，提出检查方案和防治措施。
分析：若排除了管路灭菌、空消、实消不彻底而导致染菌的因素外，能导致污染的另外一个原因就是接种操作不规范引起的。
我们的发酵属于纯培养，是由单一菌种接种以后进行的培养，其中不可以有任何杂菌，否则会影响产品的使用效果，所以为了确保每一批发酵的成功，在上罐之前，发酵人员必须具备以下两种意识：⏹无菌意识⏹安全意识二、接种量的确定接种量指移入的种子液体积与接种后培养液体积的比例接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度，采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。
但接种量过大或过小，均会影响发酵。
接种量过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而却会过多移入代谢废物；接种量过小会延长培养时间，降低发酵罐的生产率。
通常接种量：细菌1-5%，酵母菌5-10%，霉菌7-15%，有时20-25%。
二、发酵罐接种的方法一般情况下，发酵罐接种有三种方法：①火圈直接倒种②注射器接种③压力差接种。
前两种方法适用于小型发酵罐，第三种方法适用于大型工业化生产发酵罐。
1、火圈直接倒种法操作规程如下：⏹当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。
⏹准备合格的摇床菌种。
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任务三：发酵罐实消、接种
子任务二；发酵罐接种
引导课文
通过本任务的学习你应该能够掌握下列知识：
1．掌握小型发酵罐无菌接种的原理和方法。
2．理解杂菌污染的途径和防治方法。
3. 掌握接种安全操作规程
通过操作训练你应该具有下列能力：
1. 能进行发酵罐无菌接种操作。
2．对接种异常问题能及时预见、反应、处理。
3. 能严格按照安全操作规程进行操作。
前面我们已经制备了符合要求的产黄青霉菌种子，进行了发酵罐的清洗及空消、实消，接下来的任务就是进行接种了，那么发酵罐接种的知识你了解多少呢？
一、无菌接种的必要性：
案例：山东省某大型制药企业的2号发酵生产车间连续发生染菌污染事件，且每次杂菌的种类基本相同，分析可能染菌的原因，提出检查方案和防治措施。
分析：若排除了管路灭菌、空消、实消不彻底而导致染菌的因素外，能导致污染的另外一个原因就是接种操作不规范引起的。
我们的发酵属于纯培养，是由单一菌种接种以
后进行的培养，其中不可以有任何杂菌，否则会影响产品的使用效果，所以为了确保每一批发酵的成功，在上罐之前，发酵人员必须具备以下两种意识：
⏹无菌意识
⏹安全意识
二、接种量的确定
接种量指移入的种子液体积与接种后培养液体积的比例
接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度，采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。
但接种量过大或过小，均会影响发酵。
接种量过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而却会过多移入代谢废物；接种量过小会延长培养时间，降低发酵罐的生产率。
通常接种量：细菌1-5%，酵母菌5-10%，霉菌7-15%，有时20-25%。
二、发酵罐接种的方法
一般情况下，发酵罐接种有三种方法：①火圈直接倒种②注射器接种③压力差接种。
前两种方法适用于小型发酵罐，第三种方法适用于大型工业化生产发酵罐。
1、火圈直接倒种法操作规程如下：
⏹当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。
⏹准备合格的摇床菌种。
⏹用酒精棉擦洗罐顶接种口，并在接种口四周围上酒精棉。
接种者的双手也需用酒精
棉擦洗消毒、晾干。
⏹调进气阀，减少进气量（不能关闭，否则罐压跌零，引起污染），拧松接种口螺母；
检查罐内压力是否在0.01MPa以下（如不在应开大排气阀或调进气阀，减少进气量），点燃接种口四周的酒精棉；拧下接种口螺母，并将其放入预先准备的盛有酒精的培养皿中。
⏹将菌种瓶的瓶口在火焰上烧一会儿，并在火焰下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐
内。
⏹盖上接种口螺母，灭火焰，拧紧螺母；并用酒精棉将接种口擦洗干净。
⏹调节进气阀及排气阀，达到工艺要求的通气量及保持罐压。
图示：火圈直接倒种法
2、注射器接种法：
灭菌及罐压调节都同于火圈直接倒种法。
此时准备无菌注射器，预先在超净台上将菌种液体吸入注射器内，无菌操作将菌种注射入发酵罐内。
此种方法尤其适合于微小型发酵罐（容积在5L）以下。
3、压力差接种：
●移种前应先路内的冷凝水随时可以排空。
●移种时在关闭蒸汽阀后应当立即进行移种，避免造成负压污染。
●采用压差移种即P小大于P大，移种前对移种管道、阀门蒸汽灭菌20min，P
小0.05 Mpa，P大0.03Mpa，打开移种管道上的阀门，通过压差作用转罐，移
种结束后立即关闭移种阀，然后打开与之联通的蒸汽阀通入蒸汽进行冲刷消毒，
并立即清洗种子罐，防止发酵料粘结在管道阀门及罐壁上，消毒后立即关闭蒸
汽阀门和排冷凝水的阀门及管帽。
三、我们实验室发酵罐接种操作及注意事项
●注意事项：
1.环境：关闭车间门窗和排气扇，接种环境周围禁止人员来回走动，降低空气流动
性；
2.无菌：倒摇瓶需靠在火焰附近，三角瓶不可倾斜过度，避免种子液流出；接种操
作过程中罐压不能掉零；
3.安全：三角瓶靠近火焰倾倒，但需注意操作人员应离开火焰一段距离，穿好防护
服，严禁穿羽绒服、尼龙等易燃衣物；女生不可披头发、带丝巾操作；点燃火焰
圈不可随处乱扔，熄灭以后才可以继续操作。
●准备操作
➢准备好接种所需材料
➢关闭门窗、排气扇
➢操作人员合理分工，一个为主操作，一个为副操作
●消毒
➢副操作用酒精棉擦拭接种口进行消毒
➢消毒以后用火焰保护好接种口
●接种
1.本系统采用火焰封口接种，接种前应事先准备：酒精棉花、钳子、镊子、
接种环、石棉网手套、Z字扳手。
2.菌种装入三角烧瓶内，接种量根据工艺要求确定。
3.将酒精棉花围在接种环周围点燃，将菌种瓶口在火焰上烧一会儿，用Z
字扳手拧开接种口，迅速将菌种倒入罐内，此时应向罐内通气，使接种
口有空气排出（压力接近与零，但不能为零）。
4.将接种口盖在火焰上灭菌后拧紧。
接种后，罐压保持在0.03-0.07Mpa
（0.05Mpa），调节通风量。
●消毒
➢副操作用酒精棉擦拭接种口消毒以后迅速盖上接种盖，设置好参
数后进行培养
任务工单
任务：阅读完引导文后，请结合网络资料查阅设计我们实验室小型发酵罐的接种方案，内容至少包括：接种准备（药品、器具、发酵罐压力调试）、接种量确定、接种操作（分组，主操作与副操作）、接种后压力调试。
❖接种准备
药品：
器具:
接种量：
接种前调节发酵罐压力至：
❖接种操作
组号：，成员：
主操作：；主要职责：
副操作：；主要职责：
❖接种后操作：
消毒工作：
发酵罐压力调试：
❖请总结下本次任务安全操作注意事项：。