血小板膜表面CD62P检测活化方法
流式细胞仪双色术检测机采血小板活化方法
流式细胞仪双色术检测机采血小板活化方法傅晓岚;陈兆珍;成晓玲;赵树铭【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2003(25)18【摘要】目的探讨一种流式细胞仪检测机采浓缩血小板悬液活化状态的方法。
方法用CD41 FITC、CD62 PE双色标记 ,避光反应 15min后加入 1ml 1%多聚甲醛固定 ,上机分析。
结果采用此方法测定2 2℃保存下不同时间的血小板CD62P表达 ,表明随着时间的延长CD62P阳性率增加 ,保存达到 3d及以上 ,CD62P阳性率增加非常显著。
标本以多聚甲醛固定在 2 4h对CD62P测试结果无明显影响 ,样品不固定处理 ,不同时间测定对结果影响非常大。
结论双色标记流式细胞术检测机采血小板活化敏感、特异 ,重复性好 ,操作简便 ,能较好地反映储存中血小板的CD62P的变化。
可方便应用于血小板的保存及输注的质量监控。
【总页数】2页(P1672-1673)【关键词】流式细胞术;血小板活化;CD62P;血小板保存【作者】傅晓岚;陈兆珍;成晓玲;赵树铭【作者单位】第三军医大学高原军事医学系中心实验室;第三军医大学附属西南医院输血科【正文语种】中文【中图分类】R446.11【相关文献】1.机采血小板保存质量控制的主要指标及检测方法 [J], 王鹤;鲍丽;王淑梅2.流式细胞术检测活化血小板采血方法的改良和护理 [J], 王素侠;张华伟;王振芳;郭琼;吕合作3.机采血小板中白细胞碎片定量检测方法的建立及其影响因素 [J], 蒋光明;张林杰;王保龙;叶书来;陈家萍;周建华;王敏;廖艳秋4.全血三色法流式细胞术检测血小板P-选择素的方法 [J], 龚艳春;郭冀珍;史桂英;石学耕5.流式细胞术与三种活化血小板检测方法对比与分析 [J], 吴迪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞术在血小板检测中的应用于方法介绍
47
Flow Cytometry
June 2000
血小板的活化、荧光染色与流式细胞仪分析
前言 血小板活化试验，对于血小板功能、心血管疾病的研究，有重要意义。使用流式细 胞仪进行多参数分析，可以特异灵敏地检测血小板表面标记，了解血小板的活化状态和 反应性，并同时获得更多关于血小板的信息。在疾病监测、抗血小板治疗病人的筛选及 治疗监测、预测并发症等方面有良好的应用前景。 使用推荐的三色流式分析方法检测血小板活化的优点是： 检测血小板的反应性。 了解血小板活化进程。血小板先发生膜糖蛋白变化，然后是胞浆内颗粒释放到 血小板外。 同时检测多种血小板表面标志。 高度灵敏。 直接检测血小板的多种标志。 使用全血，标本量少。 操作简便快捷，将血小板人工激活减至最低。
51
Flow Cytometry
June 2000
附：BDIS 血小板活化试剂
BD 抗体： CD PAC-1 CD62P CD61 Isotype 1 CaliBRITE 3 Ig Subclass IgM IgG1 IgG1 Form FITC PE PerCP PE Unlabeled,FITC,PE,PerCP Catalog No. 340507 348107 340506 340013 340486 Tests 50 100 50 25g 25
流式细胞仪检测全血中血小板功能状态 全血中血小板更接近生理状态 操作简便，减少由于操作造成的血小板状态改变（如血小板活化试验） 同时检测血小板的多个标志物，结合 FSC 和 SSC，评估多个参数，进行定量分析 多采用血小板特异抗体 CD41 或 CD61 画门，找出血小板，避免杂质碎片的干扰 检测血小板亚群灵敏度高 用血量少 无放射性污染
活化血小板检测方法
活化血小板检测方法活化血小板是指被某种刺激物激活后，细胞内释放出一种含有血小板生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）的血小板。
这种活化血小板在生理和病理条件下都有丰富的生物学功能，它们可以促进血管新生、细胞迁移和增殖、纤维蛋白溶解等。
活化血小板在生物学研究、生物医学技术和临床应用等方面都有广泛的应用。
为了检测活化血小板的生物学功能和应用价值，科学家们开发了多种方法，包括细胞学、免疫学、分子生物学等方法。
下面是十条关于活化血小板检测方法的详细描述：1. 光散射法光散射法是一种典型的血小板功能检测方法，它基于光学特性来测量血小板的形态、大小和聚集状态。
光散射法检测活化血小板时，可以通过检测血小板的聚集状态和形态来判断其活化状态。
2. 电阻抗法电阻抗法是一种测量细胞电阻的方法，它可以用来检测血小板的形态和大小，进而评价其活化程度。
电阻抗法还可以用于测量血小板与其他细胞的互作效应。
3. 血小板聚集率测试血小板聚集率测试是一种检测血小板功能的方法，它基于血小板在接触到激活物质后，聚集和黏附的特性。
通过测量血小板聚集率的改变，可以评价血小板的活性和功能状态。
4. 流式细胞术流式细胞术是一种高通量的单细胞分析技术，可用于评估单个细胞及其亚群的生物学特性。
流式细胞术可以检测活化血小板的数量、形态和功能状态，并且可以分析不同血小板亚群的活性和功能。
5. 电子显微镜检查电子显微镜检查可以清晰地看到血小板的细节结构，包括血小板的形态、大小、颗粒和内部结构等，从而能够准确评估血小板的活性和功能状态。
6. PCR技术PCR技术是一种针对DNA序列进行扩增的高灵敏度技术，其可以用于检测血小板内含有的mRNA和DNA序列。
通过PCR技术，可以检测血小板内含有的多种生物标志物，如DNA 和RNA修饰物、微小RNA等，从而评价血小板的功能状态和表达谱。
7. 血小板膜蛋白检测血小板膜蛋白检测可以测量血小板表面的分子，如GPIIb/IIIa、GPIb、P-selectin等，这些分子是血小板活化的标志。
肿瘤患者放疗中血小板CD62P CD63及血浆CD62P的检测及意义
肿瘤患者放疗中血小板CD62P CD63及血浆CD62P的检测
及意义
唐中;杨明辉
【期刊名称】《川北医学院学报》
【年(卷),期】2003(018)001
【摘要】目的探讨肿瘤患者在放射治疗中血小板CD62P、CD63、SCD62P水平
的变化情况.方法利用流式细胞术检测血小板CD62P、CD63,ELISA测定SCD62P,血球计数仪CD1700测定血小板数量.结果随着放射治疗时间延长CD62P、CD63、SCD62P表达均明显高于对照组,血小板数量低于对照组.结论放射治疗能使血小板CD62P、CD63高度活化,最终导致血小板数量下降.
【总页数】3页(P104-106)
【作者】唐中;杨明辉
【作者单位】川北医学院附属医院检验科,四川,南充,637000;川北医学院附属医院
检验科,四川,南充,637000
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11+3
【相关文献】
1.肿瘤患者放射治疗中血小板CD62P、CD63及血浆CD62P的检测 [J], 唐中;杨明辉
2.血小板活化标志物CD62P、CD63的表达与血小板参数对非小细胞肺癌患者的
意义 [J], 雷鸣;胡黎娅;王自米;金从国;杨蕊
3.肿瘤患者放射治疗中血小板CD62P、CD63及血浆CD62P的检测 [J], 唐中;杨明辉
4.肿瘤患者放射治疗中血小板CD62P、CD63及血浆CD62P的检测 [J], 唐中;杨明辉
5.流式细胞仪检测血小板CD63、CD62P在偏头痛患者发病中的意义 [J], 郑冰;林惠;张书强;罗助荣
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原发性血小板减少性紫癜的血小板活化分子CD62P及CD …
原发性血小板减少性紫癜的血小板活化分子CD62P及CD …肖若冰;周铭
【期刊名称】《衡阳医学院学报》
【年(卷),期】2000(028)002
【摘要】目的探讨原发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者血小板的活化。
方法
应用流式细胞术检测ＩＴＰ患者的血小板ＣＤ６２Ｐ（α－颗粒糖蛋白）、ＣＤ６３（溶酶体膜糖蛋白）表达。
结果（１）ＩＴＰ患者的ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３表达率显著高于对照组；（２）患者ＣＤ６２Ｐ的表达与ＣＤ６３、ＰＡＩｇＧ、ＰＡＩｇＭ呈正的直线相关，与Ｐｌｔ呈负的直线相关，与ＰＡＩｇＡ为零相关；（３）患者ＣＤ６３的表达与ＰＡＩｇＧ、ＰＡＩｇＡ、ＰＡ
【总页数】2页(P145-146)
【作者】肖若冰;周铭
【作者单位】衡阳医学院第二附属医院,湖南衡阳;上海市中西医结合医院检验科【正文语种】中文
【中图分类】R554.6
【相关文献】
1.冠心病心虚证不同证型与血小板活化分子CD62P及CD63表达的关系 [J], 杨
丁友;段学忠
2.紫外线照射充氧自血回输对银屑病患者血小板活化分子CD62P及CD63表达的影响 [J], 刘华昌;李冠勇;周春蕾
3.脑挫裂伤血瘀证患者血小板活化分子CD62P和TSP的改变及临床意义 [J], 陈
永斌;阮玉山;黄李平;陈业强;李山;谭源福
4.PAIgG及血小板活化标志物PAC-1、CD62P检测在原发性血小板减少性紫癜患者临床意义 [J], 王传新;牛爱军;卢振铎;杨晓静;王立水;邹雄;
5.银屑病辨证分型与血小板活化分子CD62P及CD63表达的关系 [J], 李冠勇;刘华昌;尹格平;孙晓明
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危重患者血小板活化标志物CD_(62)P、PAC-1的临床观察
Ｐ Ｃ １随病情加重 ， Ａ一 绝对值逐渐增加 ， 比较 差异有统计 学意义 （ ３组 Ｐ均 ＜ ． １ 。结论 ００ ） 关键词 ： 全身炎症反应综合征 ； 多脏器功能不全 ； Ｄ２ ；Ａ — Ｃ ６Ｐ Ｐ Ｃ ｌ
Ｓ Ｃ ９ １年芝加 哥会议 上提 出 的 ＳＲ Ｃ Ｍ １９ Ｉ Ｓ诊断 标准 ， 符合 诊 断 标 准 为 ＳＲ Ｉ Ｓ组 ， 符 合 诊 断 标 准 为 无 不 ＳＲ Ｉ Ｓ组 。ＭＯ Ｓ诊 断参 照 Ｆｙ１９ Ｄ ｒ ９ ２年提 出的 ＭＯ Ｓ Ｄ 诊 断标准 ， 符合 诊 断标 准 为 ＭＯ Ｓ组 。排 除标 准 为 Ｄ １ ０ｄ内有应 用抗血 小板 药物史 ； ｄ内有抗凝史 。 ３ １２ 血 标本 的采 集 与标 记 ． 患者 均 放置 中心 静脉
６ ８例患 者根 据全身 炎症 反应综 合征 （Ｉ Ｓ 和多 脏器 功能 不全 （ Ｄ ） ＳＲ ） ＭＯ Ｓ 诊断 标准 ， 将患 者分为 无 ＳＲ Ｉ Ｓ组 、 无 ＳＲ ＩＳ组 、ＩＳ组 、 Ｏ Ｓ组 患者 Ｃ Ｐ ＳＲ Ｍ Ｄ Ｄ 、 动 态监测危重 患者 Ｃ Ｐ Ｄ 、
ＳＲ 组 和 ＭＯ Ｓ 。应用 Ａ Ａ Ｈ 评分 系统分别评分 ； ＩＳ Ｄ 组 Ｐ Ｃ Ｅｌ Ｉ 应用 Ｈ ＭＡ Ｅ ＬＰｕ 全 自动血细胞分析 仪通过阻抗法进 Ｅ Ｃ Ｌ ｌｓ 行血小板 的计数 ； 应用流式细胞 仪分别 检测 ３组 Ｃ Ｐ、Ａ 一。结 果 Ｄ Ｐ Ｃ１
［ ］ 西 学 杂 志 ，０６，５ ３ ：３ Ｊ． 陕 ２０ ３ （ ）３ ．
技 杂 志 ，０ ７ １ （ ０ ：２ ０１６ ． ２ ０ ，４ １ ） １６ —２ １
［ ５］华裕忠 ， 许俊华 ， 陈敏 ， ． 等 胸腔积液腺苷脱氨酶测定对结核性胸 膜炎的诊断价值 ［ ］医学检验与临床 ，０６，７ ２ ：４ Ｊ． ２０ １ （ ）４ ． ［ ］王西华 ， ６ 高庆梅 ， 杨远 ， ． 等 支气管肺泡灌洗液腺苷脱 氨酶对肺结 核鉴别诊断的临床价值 ［］临床荟萃，０４， （３ ：３３１３． Ｊ． ２０ １ ２ ） １３－３５ ９ ［ ７］吕青． 结核 性多 发浆 膜炎 ４ ５例 Ｉ 临床分 析 ［ ］ 中国防痨 杂志 ， Ｊ．
血小板活化标志物CD62P、CD63在糖尿病患者早期肾脏微血管病变中的表达
血小板活化标志物CD62P、CD63在糖尿病患者早期肾脏微血管病变中的表达李云婷;张雷雷;张巧丽【摘要】目的观察糖尿病肾病患者血小板活化标志物CD62P、CD63表达情况,探讨其在糖尿病早期肾脏微血管病变中的作用.方法选择单纯糖尿病48例,早期糖尿病肾病50例,正常对照组49例.应用流式细胞仪检测各组CD62P、CD63的阳性表达率.结果早期糖尿病组CD62P、CD63阳性表达率高于单纯糖尿病组和正常对照组;单纯糖尿病组CD62P、CD63阳性表达率高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).早期糖尿病肾病组与单纯糖尿病组β2微球蛋白高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论血小板活化标志物CD62P、CD63在糖尿病早期肾损害中有着重要的临床意义.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2015(036)005【总页数】3页(P551-553)【关键词】糖尿病肾病;CD62P;CD63;微血管病变【作者】李云婷;张雷雷;张巧丽【作者单位】河北医科大学第二医院检验科,河北石家庄 050000;河北省食品质量监督检验研究院食品部,河北石家庄050000;河北医科大学第二医院检验科,河北石家庄 050000【正文语种】中文【中图分类】R735.7糖尿病肾病是2型糖尿病最常见的并发症，是糖尿病主要微血管病变之一。
据统计30%～40%糖尿病患者可能发生糖尿病肾病，进而发展成为终末期肾脏疾病［1］；因其发生机制复杂，早期缺乏明显的症状和体征，容易错过最佳的治疗时间而最终导致肾衰竭，因此临床早期全面诊断显得尤为重要。
近年有研究发现糖尿病肾病患者血小板活化显著高于不伴肾病者，且2型糖尿病早期患者开始出现血小板活化，抗血小板活化药物对2型糖尿病有一定的疗效［2］，均提示血小板的活化与糖尿病肾病的形成有关。
本研究观察2型糖尿病并发早期肾病患者血小板膜糖蛋白CD62P、CD63的表达情况，旨在探讨其在糖尿病肾病早期微血管病变发展过程中的临床价值。
测定血小板表面CD62p评估心房颤动的高血凝状态
测定血小板表面CD62p评估心房颤动的高血凝状态樊红光;洪小苏;陈建昌;江建良【期刊名称】《中国血液流变学杂志》【年(卷),期】2004(14)1【摘要】目的通过测定心房颤动(房颤)患者血小板表面CD62p了解血小板活化百分率,评估原发病、左房内径(LAD)、年龄和心室率对房颤的血凝状态的影响,以期对临床治疗产生一定的指导作用.方法采用流式细胞仪(FCM)测定房颤组和对照组血小板表面CD62p了解血小板活化百分率.结果除孤立性房颤组外,其它各房颤组血小板活化率均高于对照组(P<0.05).血小板活化率与LAD、年龄有良好的相关性(r分别为0.655和0.508,P值均<0.01),与心室率无相关性.结论血小板活化率和LAD可以作为评估房颤患者高血凝状态的两个重要指标,对指导抗凝治疗有重要意义.【总页数】2页(P84-85)【作者】樊红光;洪小苏;陈建昌;江建良【作者单位】连云港市第一人民医院心脏中心,连云港,222004;苏州大学附属第二医院心内科,苏州,215006;苏州大学附属第二医院心内科,苏州,215006;苏州大学附属第二医院心内科,苏州,215006【正文语种】中文【中图分类】R541.75【相关文献】1.单核细胞和血小板CD40L高表达及血小板CD62P高含量与急性冠脉综合征的关系 [J], 沈凯;袁国裕;陈国雄;俞晓军;王炎一;方波;王红娜;魏峰涛2.流式细胞仪测定血小板表面CD62p的临床意义 [J], 徐长根;戴瑞娣;朱阳泉3.化纤胶囊对脓毒症大鼠血小板最大聚集率、血小板活化复合物（PAC-1）、血小板表面蛋白CD62p的影响 [J], 王若晖;李雪;李卉4.糖尿病合并急性冠状动脉综合征患者血小板表面PAC-1和CD62P表达水平 [J], 柳晓娜;朱宁;魏国峰;王纪文;李忠艳5.外周血凝血指标、血小板计数和NLR检测对恶性肿瘤患者治疗前机体凝血状态的评估价值 [J], 汪敏;于鹏跃;王言;宋燕珂;李峣;孙莹;赵丽艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脑梗死患者血小板膜糖蛋白CD62P和CD63的测定及意义
用流式细胞仪 测定 ６ ８例 脑 梗 死 患 者 及 ２ ０例 正 常 对
照 者 外 周 血 血 小 板 膜 糖 蛋 白 Ｃ ６ Ｐ和 Ｃ ６ 。 结 果 脑 梗 死 患 者 Ｃ ６ Ｐ和 Ｃ ６ Ｄ２ Ｄ３ Ｄ２ Ｄ ３的 阳性 率 明 显 高 于 健 康 对 照 组 ， 且 发 病 ３ 并 ｄ内 Ｃ ６ Ｐ和 Ｃ ６ Ｄ２ Ｄ ３的 阳性 率 高 于 发 病 １ ４ｄ以 上 者 （ Ｐ＜０ ０ ） ． １ 。结 论 脑梗 死 患 者 的 血 小 板 活 化 程度 明 显 增 高 ， 明 阻 止 或 说
抑 制 血 小板 活化是 防 治 啮 梗 死 的方 法 之 一 。
关 键 词 ： 脑 梗 死 ； 血 小 板 膜 糖 蛋 白 类 ； Ｐ选 择 素 中 图 分 类 号 ： Ｒ７３ ３ ４ 文献标识码 ： Ａ
Ｄｅ ｅ ｔｏｎ ａ ｉｎ ｆｃ ｃ ｆｐｌｔ ｌｔｍ ｅ ｂｒ ｎｅ ｇｙ ｏ ｏｅ ｎ ＣＤ６ ｔｃ ｉ ｎｄ ｓｇ ｉ ａｎ ｅ ｏ ａ ｅｅ ｍ ｉ ａ ｌｃ ｐｒ ｔｉ ２Ｐ ｎｄ ＣＤ６３ ｉ ｐａ ｉｎｔ ｔ ｅ ｅ ｒ ｌｉ ａ ｃ ｉｎ ａ ｎ ｔｅ ｓ ｗｉｈ ｃ ｒ ｂ ａ ｎｆ ｒ ｔｏ
ｔ ｒｖ ｎ ｎ ｒ ａ ｅ ｅ ｒ ｎ ａ ｃｉ ｎ ｏ ｐ ｅ ｅ ｔａ ｄ ｔｅ ｔｃ ｒ ｂ ａ ｉ ｆ ｒｔ ｌ ｏ Ｋｅ ｒ ｓ ｃ ｒ ｂ ａ ｉ ｆｒ ｔ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ： ｅ ｅ ｒ ｎ ａ ｃｉ ； ｐ ａ ｄｍ ｍｂ ａ ｅ ｇｙ ｏ ｒ ｔｉ ； ｌ ｏ ｌｔ ｍｅ ｒ ｎ ｌ ｃ ｐ ｏ ｅｎ Ｐ ｓ ｌｃｉ —ｅｅ ｔｎ
Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒｃ ： Ｏｂｅｔｖ Ｔ ＿ｖ ｉａｅ ｔｅ ｄｎｃｌｓｇ ｉｃｎ ｅｔ ｅｐａｄ ｔｍｅｎ ｒＤ ｌｅｐｏｅ ｓｉ ａｉ ｔ ｗｉ ｒｂ ａ ｉ ａｃ ｏ ｊｃｉｅ ｏ ｍ ｔ ｔ ｈ ｉｉａ ｉｎｆ ａ ｃ ｈ ｌｔ ｅ ｒｂａ＿ ｇｙｏｒｔｉ ｎ ｐ ｔ ｎ ｓ ｔ ｃ ｅ ｒｌ ｎｒ ｔ ｎ ｇ ｉ ｅ ｎ ｅ ｈｅ ｆ ｉ
血小板活化标志物CD62p、PAC-1在心血管系统疾病中的研究进展
血小板活化标志物CD62p、PAC-1在心血管系统疾病中的研究进展齐茗综述审校（延安大学附属医院，陕西延安 716000）【摘要】许多心血管系统疾病的发生与发展都与血小板的活化有关，而在血小板活化的过程中会释放出多种特异性的标志物（如CD62p，PAC-1），随着流式细胞仪在临床中的广泛应用，为血小板活化的检测提供了极大的方便，血小板活化对判断是否具有血栓形成和血栓形成倾向具有重要意义。
本文就血小板活化在心血管系统疾病中的应用进行综述。
【关键词】血小板活化；CD62p；PAC-1目前的研究发现, 血小板是从骨髓造血组织中的巨核细胞上脱落下来的胞质小块，其主要的功能是凝血、止血和修补破损的血管，此外，血小板还在动脉粥样硬化、炎症、肿瘤转移等的发生发展过程中起着重要作用[1,2]。
正常的血小板活化参与体内生理性止血的过程，然而，血小板活化过度则会引起多种血栓性疾病的发生,如急性心肌梗死、深静脉血栓等。
在血小板活化的过程中，会释放出多种具有特异性的标志物，其中最具特征性的是CD62p和PAC-1 [3，4]。
1.血小板活化标志物CD62p（也称为P-选择素，GMP140）是一种位于血小板特殊颗粒和血管内皮细胞的weibel-palade小体内的膜糖蛋白。
在正常情况下，CD62p只少量表达在血小板表面，当血小板受到刺激时，迅速、大量地在血小板膜表面表达，通过N端的凝集素样结构域作用，介导活化的内皮细胞与单核细胞、中性粒细胞等的粘附功能，这些细胞不仅促进纤维蛋白沉积，还参与炎症反应和血栓的形成。
用抗GMP140抗体处理活化的血小板后，其相互之间的粘附作用立即消失，说明GMP140可介导活化血小板或内皮细胞与白细胞之间的粘附，是血小板活化的重要标记物之一。
PAC-1是血小板膜糖蛋白II b／IIIa复合物，也是血小板表面较丰富的糖蛋白，含有与纤维蛋白原(Fg)、纤维连接蛋白(Fn)、vWF因子等粘附蛋白结合的特异位点，在正常情况下以单体形式存在，没有与配体结合的能力。
流式细胞术与三种活化血小板检测方法的比较
表 3 血样放置 1 h及 2 h后正常组和脑梗死组活化
血小板 CD62p的表达情况 ( % , x ±s)
组别 例数 正常组 30 脑梗死组 30
表 2 3种方法检测正常组和脑梗死组采血半小时内
血小板 CD63的表达 ( % , x ±s)
组别 正常组 脑梗死组
例数 30 30
内固定法 传统血浆法 2192 ±1121 3134 ±1162 7169 ±2112 8151 ±3101
全血法 3120 ±1129 8133 ±3121
从表 2可以看出 , 3 种方法测得的 CD63 结果脑梗死组 均显著高于正常组 ( P均 < 0101) ;组内比较得到 ,内固定法 所得 CD63结果要显著低于传统血浆法和全血法 ( P 均 < 0105) ,而后两者之间差异无统计学意义 ( P > 0105) 。
5 王建中 ,孙芾 ,王淑娟 ,等. 流式细胞术检测活化血小板. 中华医 学杂志 , 1994, 17: 2322235.
6 尚明谦 ,郭述苏 ,陈同慧 ,等. 脑梗死患者血小板膜糖蛋白 CD41, CD62P, CD63的监测. 中风与神经疾病杂志 , 1997, 14: 11213. (收稿日期 : 2005205228) (本文编辑 :袁桂清 )
一 、对象和方法 11对象 : (1)正常组 30名 (男 18名 ,女 12名 )平均年龄 43岁 。均为体检合格 ,抽血前至少两周未用过任何药物的 健康者 。 (2)脑梗死组 30 名 (男 20 名 ,女 10 名 )平均年龄 62岁 。所有病例均为首诊患者 ,均经 CT和 MR I显像证实 , 诊断时症状 、体征已持续 5 h以上 。 ( 3)血标本采集在患者 入院后 ,未经任何治疗立即抽取 。 21试 剂 : ( 1 ) 抗 体 : CD62P2F ITC, CD632PE, IgG12F ITC, IgG12PE均购自法国 Immunotech公司 。 ( 2)仪器 : EP ICS2XL 型流式细胞仪 ,美国 Coulter公司 。 31方法 : (1)标本采集及处理 :空腹取血 ,第一管做其他 检查 ,第二管采集于 116 m l 血于含 3%多聚甲醛 ( PFA )和 318%枸橼酸钠的负压抗凝管 ( PFA 的终浓度为 1% )及普通 的 1∶4枸橼酸钠抗凝管中 。 ( 2 )富血小板血浆 ( PRP)的制 备 :将抗凝全血以 1 000 r/m in离心 5 m in,可得 PRP。 (3)内 固定法 :将上述固定抗凝管中的全血分离出 PRP,取 200 μl PRP,用磷酸盐缓冲液 ( PBS)洗涤后 ,加 015 m l PBS重悬 ,取 20μl标本和 10μl荧光标记单抗混合室温孵育 20 m in后 , 用 PBS洗涤一次后 ,加入 015 m l PBS重悬 ,上机分析 。 ( 4) 传统血浆法 :将普通 1 ∶4枸橼酸钠抗凝全血分离出 PRP,取 200μl PRP,加入等量 2% PFA固定 20 m in后 ,洗涤 ,重悬 ,标 记同内固定法 。 (5)全血法 :参考文献 [ 3 ]。取普通 1 ∶4 枸 橼酸钠抗凝全血 5μl加入 10μl荧光标记单抗 ,室温孵育 20 m in后 ,加入 1% PFA固定 20 m in,洗涤一次后 ,用 PBS重悬 , 上机分析 。 (6)流式细胞仪分析 : 以 Flowcheck荧光微球检 查仪器光路 、流路 ,调整颜色补偿 ,测定标本 。3种方法均用 CD41 / sslog散点图设门 ,流速控制在 100 ～200 s,每份标本 测定 5 000～10 000个血小板 。
糖尿病患者血小板膜糖蛋白CD62p、CD63表达及其临床意义
作用后 ， 一 ａ 颗粒膜 与胞浆膜融合 ．一 Ｐ 选择索 暴露于胞浆膜表
面 ， 血 小 板 表 面表 达 Ｃ ６ ｐ和 Ｃ ６ ， 使 Ｄ２ Ｄ ３ 因此 Ｃ ６ ｐ和 Ｃ ６ Ｄ２ Ｄ３ 的测 定能 够 反 映 体 内血 小 板 活化 的程 度 及 血 栓 形 成 的倾 向１ ３ ，
仪 、 克隆 抗 体 Ｃ ６ ｐ ＦＴ Ｃ ６ 一 Ｅ及 其 同型 阴性 对 照 均 单 Ｄ ２ － ＩＣ、 Ｄ ３ Ｐ
由法 国 Ｉ ＭＵ Ｏ Ｅ Ｈ 公 司 提 供 Ｍ Ｎ ＴＣ
的表达也显著高于正常对照组 ． 说明 ２型糖尿病发生后 即可
能 有 血 小 板 过 度 活 化 ． 当 出 现 血 管 病 变 时 更 明显 ， 也 显 且 这
伤 在 血栓 形 成 过 程 中起 了重 要 作 用 Ｉ１ 一 粒膜 蛋 白ｆ一 １。ａ 颗 ． ２ Ｐ 选
择 素， 又称 Ｃ ６ ｐ￣溶酶体膜 蛋 白ｆＤ ３￣ － 在于静息血 Ｄ ２） Ｃ ６） 存
小 板 ａ 颗 粒 膜 上 ．正 常 生 理情 况 下 ．血 小 板 表 面 Ｃ ６ ｐ和 一 Ｄ２
维普资讯
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２ ４． ７
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经验交流 ・
糖尿病 患者 血小板膜糖 蛋 白 Ｃ ６ ｐ Ｃ ６ 表 达及其 临床意义 Ｄ ２、Ｄ ３
Ｃ ６ Ｄ ３的表 达 较 低 ． 只在 活 化 型 血 小 板 膜 表 面 大 量表 达 。当血 小 板 黏 附 于血 管 破 损 处 或 受 到凝 血 酶 、 Ｄ Ａ Ｐ等 血 小 板 活 化 剂
FCM对单采血小板悬液活化程度的检测汇总
FCM对单采血小板悬液活化程度的检测刘波方国安金秀国庄晓玲方汉波关键词：流式细胞仪；血小板中图分类号：R446 文献标识码：B文章编号：1001-2087(2000)06-0335-02我们利用流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM)检测了血细胞分离仪(机采法)单采血小板和手工分离血小板(手工法)CD62p的表达，并作两者的比较。
材料和方法一、检测对象男性献血员46名，20～36岁，血小板计数(plt)均大于150×109/L，一周内未服用阿司匹林等药物。
其中机采法30名，手工法16名。
二、试剂CD62p-PE单克隆抗体(美国Becton-Dickinsin，B-D公司)。
IgG1FITC/IgG2aPE(B-D公司)。
用pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)配制的1%多聚甲醛(Sigma公司)。
三、仪器流式细胞仪FACS Calbur(B-D公司)。
血细胞分离仪COBE Spectra(美国COBE公司)。
四、方法1.标本采集单采前用一次性塑料针筒抽血1.8 ml，用109 mmol/L柠檬酸钠9∶1抗凝，混匀后低速离心(600～800 r/min,5 min)，吸取富血小板血浆(PRP) 0.1 ml加等量1%多聚甲醛固定。
机采组采用COBE Spectra血细胞分离仪和血小板采集专用管道。
单采结束后观察采集袋内血小板的聚集情况，放置1 h后，轻轻充分混匀，推挤小管4次，封闭管子后采PRP 0.1 ml，加等量1%多聚甲醛固定。
手工法浓缩血小板单采方法按文献［1］。
采集后标本采取方法同机采组。
标本固定30 min后用PBS洗涤3次(2000 r/min 5 min)，调整血小板数为300×109／L。
分别吸取血小板悬液0.05 ml加入2支专用试管内，测定管加CD62p-PE单克隆抗体0.01 ml，阴性对照管加IgG1 FITC/IgG2aPE试剂0.01 ml。
血小板及血小板活化的FCM 分析
血小板及血小板活化的FCM 分析流式细胞术是血小板分析研究最好的方法，该法可提高检测灵敏度、并减少人为因素的干扰，该法可以精确地检测病人血小板生成方面的情况，即使血小板计数很低时也可检测表面标记。
一、血小板表面标记检测方法全血法荧光单标记可检测血小板CD62p、CD63、CD42b、CD41、CD61 等指标。
具体染色方法步骤如下：1、采血用枸橼酸盐或EDTA 抗凝；2、10μl 荧光标记抗体，加100μl PBS，再加5μl 全血（样品管）；10μl 抗体同型对照，加100μl PBS，再加5μl 全血（对照管）；轻轻混匀，室温孵育15min；3、加2-3ml PBS（1% PFA）终止反应，上机检测分析。
四、全血中活化血小板检测：活化血小板表面会出现一些新的标记。
主要的有两个：PAC-1 （活化的IIb/IIIa）和CD62P （P-selectin），它们是对临床有用的活化血小板标记。
此外还有CD31 （PECAM）和 CD63 （a lysosomal antigen）两个活化标记，并已在临床应用。
血小板活化研究的全血标本收集要求使用 19 号（或更大）针头，开始吸出的2ml 血注入试管（或弃用），然后将后续血液轻轻注入另1 个试管。
（1）血小板特异性膜糖蛋白检测先对全血中的血小板膜糖蛋白进行免疫荧光标记，将血小板与血中其他细胞分开。
根据血小板特异性糖蛋白制备的荧光单抗，能在全血中特异性地识别血小板。
（2）活化血小板的标志物检测活化血小板与静止血小板相比，膜上某些糖蛋白常发生显著变化，成为活化血小板的检测标志物，如CD62P 和PAC-1 等。
应用这些特异性糖蛋白制备的荧光单抗，便能在全血中特异性地识别活化的血小板，血小板膜糖蛋白已被深入研究，表2-6-1 显示了血小板膜上主要的糖蛋白及其功能。
在这些膜糖蛋白中，仅在血小板膜表面表达主要有GPIb，GPIIb，GPIIIa 等有限的几种。
不同处理方法对血小板表面活化标志CD62p流式检测结果的比较
不同处理方法对血小板表面活化标志CD62p流式检测结果的比较丘勇新;刘广亚;张雅妮;单桂秋【期刊名称】《华南国防医学杂志》【年(卷),期】2012(26)4【摘要】目的探讨不同处理方法对血小板表面活化标志CD62p流式检测结果的影响。
方法采集作者血液中心单采血小板浓缩液5 ml,用贫血小板血浆调整血小板计数为(200～250)×109/L(待测PRP,n=6),分别采用不洗涤不固定不加活化抑制剂与洗涤、固定、加活化抑制剂进行标本处理,流式细胞仪检测血小板活化标志CD62p的变化。
结果 CD62p的表达与标本的处理方法有关,但4组之间没有统计学差异(P>0.05)。
其中不洗涤不固定不加活化抑制剂组CD62p测定值为(40.47±2.54)%,低于其它3组检测值[(46.35±2.60)%、(47.54±3.47)%、(45.85±2.88)%]。
结论流式细胞术检测血小板活化标志物CD62p中,标本处理步骤越少其活化率就越低,以不洗涤不固定不加活化抑制剂为最好。
【总页数】3页(P326-327)【关键词】处理方法;CD62p;流式细胞术检测【作者】丘勇新;刘广亚;张雅妮;单桂秋【作者单位】广州军区广州总医院输血科【正文语种】中文【中图分类】R446.1【相关文献】1.血小板活化标志物CD62P,CD63与血清胱抑素C 联合检测在糖尿病肾病早期诊断的临床研究 [J], 李云婷;赵建宏;付洁;杨敬慈2.活化血小板流式细胞术不同检测方法比较 [J], 王志军;湛玉良;程文立;于长安;柯元南3.检测体外血小板活化程度时4种血小板表面活化标志蛋白的比较 [J], 吴国新;阮长耿4.PAIgG及血小板活化标志物PAC-1、CD62P检测在原发性血小板减少性紫癜患者临床意义 [J], 王传新;牛爱军;卢振铎;杨晓静;王立水;邹雄;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达
在血小板多种表面分子活化标志物中 ,活化和 非活化血小板之间的差别以 CD62p 最大[1 ] ,区分最 明显 ,其它血小板激活标志物在活化和非活化血小 板之间重叠较多 ,难以确定其表达率 。利用 CD62p 表达测定活化血小板具有明显的优越之处 。患者外 周血血小板 CD62p 阳性率的测定在血栓性疾病及 广泛性血管内炎症等疾病发展及其监测中有较高的 价值[2 ] 。
信息获得和存储 以 SSC , FSC 和 CD61 联合 识别获取血小板 。以 300 个/ 秒的速度获取 5 000 10 000 个血小板 ( 图 1 中 R1 或图 2 中 R2) ,对其 FSC ,SSC ,FL2 和 FL3 信息进行储存 。
Figure 1 The events were discriminated by their for ward scat2 ter( FSC) and side scatter( SSC) in R1
血液采集与血小板制备 室温 (22 ℃左右) 条件 下 ,用 ACD 四联采血袋于 3 分钟内采集健康献血者 全血 200 ml , 用于制备富含血小板血浆 ( FPRP) , COB E Spectra 血细胞分离机单采集健康献血者浓 缩血小板 200 ml 。
血小板 CD62p 的表达测定方法 标本处理方法 将血小板标本用 25 ℃ TBS 调 节浓度至 (200 - 400) ×109/ L ,潘生丁终浓度为 100 μmol/ L ;在 FCM 专 用 试 管 中 加 入 抗 CD61 和 抗 CD62p 各 5μl , TBS 30μl ,4 ℃避光保存待用 ;然后加 入相应的血小板 5 μl ,轻轻混匀后室温避光孵育 15 分钟 ;加 4 ℃1 %多聚甲醛 500 μl ,避光固定 15 - 30 分钟 ;48 小时内进行 FCM 分析 。 对照包括 单纯血小板对照 ;抗 CD61 PerCP 单 染 ;抗 CD62p RPE 单染 ,用于校正流式细胞仪 SSC , FSC 和相应频道的荧光参数 。 流式细胞术结果分析方法 仪 器 校 正 FACSCalibur 流 式 细 胞 仪 由 CEL 2
优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达
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关 键 词 流 式 细 胞 术 ；血 小 板 保 存 ；Ｃ ６ ｐ Ｄ ２
中 图分类 号
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血小板膜表面CD62P检测
操作步骤
1. 标本采集：
(1)采血管顺序编号。
(2)抽取静脉血，采血管中注入2ml。
(3)于10分钟之内完成血小板激活和染色步骤，操作时应注意
减少人工激活。
注意事项：1、至少要采集10ml全血
2、而且必须用粗针采血
3、如果是用注射器，则将采的血先放入才血管，最后将
剩余的几毫升弃掉或做它用。
4、如果是用采血针采血，先弃掉2ml,然后再往采血管中采
集。
2. 荧光抗体染色：
(1)取2支试管，加入待测外周血标本，两管各加5ul
(2)在对照管中加入CD62P的同型对照抗体、CD61 各20μl
(3)在试验管中加入CD62p抗体和CD61抗体各20μl。
(4)轻轻混匀，室温暗处孵育15-20分钟。
(5)孵育后，加入500ul的PBS（若血小板数目过多，可以多加一
些PBS），混匀后上机检测；若不能立即上机，加入500ul 1%的多聚甲醛溶液固定，24小时内上机分析。
注意事项：
1、在所有操作中动作应轻柔，不可力度过大，因为血小板容易活化
2、方案的建立：
两张图：（1）散点图CD61/SS，圈CD61阳性的血小板（2）直方图CD62P，分析血小板的表达情况
FS，SS均应选择Log方式检测，阈值设在FL1（CD61的荧光通道）上，值可能会比较大，可能在200、300左右。