第四章 人工染色体载体
基因工程复习总结.docx
思考题
第二章分子克隆工具酶
1简述基因工程研究用的工具酶的类型和作用特点。
常用的工具酶
□工具酶名称主要功能
限制性械酸内切酶在DNA分子内部的特异性的restriction endonucleases 破基序列内部进行切割
DNA连接酶DNA ligase
将两条以上的线性DNA分子或片段催化形成磽酸二酯键连接成一个签体
DNA聚合酶1 DNA polymerase I 通过向3’螭逐一增加核昔酸以填补双链1）\A分子上的单链裂o.即5'f 3'DNA 聚合酶活性与3'->5’及5'-*3'外切酶活性
多核甘祓激酶催化将把一个琪酸分子加到多核昔酸.低的
DNA polymerase kinease 5' — 0H末端上
反转母晦以RNAADXAK为棋板合成互补的cDNAtt reverse transcriptase
DNA*境转移酶
DNA terminal Deoxynuc leatidy transferase 将璟聚物尾巴加到了线性双低
或单KDNA分子的3’ 一0H未端或DNA的3’ 一未端
破性碑酸酶
BAP or CIP 核酸外切B&III exonuclease III 降解酶
SI nuclease SI 核酸酶
Bal 31 nuclease Bal31 Taq DNA聚合酶
Taq DNA polymerase
核檐核酸酶
RNase
脱氧核糖核酸》阴
DNase
去除DNA, RNA, dNTP的5’磽酸基团
降解DNA3' - 0H末端的核甘酸歿基
隆解单链DNA或R\A,产生带5’烫酸的单核甘酸或取聚核甘酸.同时
第四章 基因工程的质粒载体
（3）质粒DNA的接合转移
①细胞交配对的形成
雄性细胞的性须顶端与受体细胞表面接触之后，便会迅速收缩， 把给体细胞与受体细胞拉在一起。因此，性须在确立配对细胞 表面间的紧密接触方面，起着至关重要的作用。
大肠杆菌雄性细胞是不会同其它的亦带有F质粒的细胞发 生配对作用的，因为traS和traT编码的“表面排斥”蛋白质， 使此种细胞无法成为接合作用的受体。这就决定了雄性细胞只 能同不具F因子的雌性细胞配对的特异性。
（5）分子量要相对较小 （6）在细胞内稳定性要高 （7）易分离纯化 ※表示载体必须具备的条件
（四）基因工程中常用的载体
基因工程中常用的载体有5类： 质粒（plasmid） 单链DNA噬菌体M13 噬菌体的衍生物 柯斯质粒（cosmid） 动物病毒（virus）
载体的种类和特征
质粒*
受体细胞
结构
E.coli
ColE1是一种可以迁移但是属于非接合型的质粒。需要质 粒自己编码的两种基因参与。一个是位于ColE1 DNA上的特异 位点bom；另一个是ColE1质粒特有的弥散的基因产物，即 mob基因（mobilization gene）编码的核酸酶。
相容性的两种质粒F和ColE1共存于同一细菌细胞中，F质粒可以为ColE1质粒提 供其所缺乏的结合功能，这样使得ColE1质粒也能够发生转移作用。
人工染色体载体名词解释
人工染色体载体名词解释
人工染色体载体是一种带有特定功能的DNA分子，用于在实验室中携带和传递外源基因或其他遗传物质。它是通过基因工程技术构建的，通常由一段核酸序列组成，包括宿主微生物所需的基本元素，如起始子、启动子、终止子以及复制和稳定性元件。人工染色体载体可以在细胞中自主复制和传递，并能够稳定地继承和表达携带的外源基因。不同类型的人工染色体载体具有不同的设计目的和特点，可以用于基因治疗、基因组编辑、产生转基因动物、研究基因组功能等领域。
基因工程知识结构(生工)
《基因工程》课程知识结构
第一章基因工程概述
一、基因工程的内容与应用
（一）基本概念
通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。
（二）Technical process of genetic engineering
1．Cloning of target gene
2．Preparation of vectors
3．Joining the target gene to vectors to produce recombinant DNA
4．Introduction the recombinant DNA into host cells
5．Identification and selection of the recombinant
6．Propagation of the recombinant DNA in a host cell
（三）Basic conditions
1．Four elements: Target gene, Vectors, Enzymes, Host cells
2．Three major components: Donors, Receptors, Vectors
3．Three tools:
Restriction endonuclease----Molecular scissors
DNA ligase------Molecular glue
Vectors-----Molecular Transporter
2.1 基因工程载体-质粒载体 201209
E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli
酵母细胞
哺乳类细胞 动物细胞
λ 噬菌体 丝状噬菌体及噬菌粒 粘粒载体 BAC (Bacterial Artificial Chromosome) PAC (P1-derived Artificial chromosome) YAC (Yeast Artificial chromosome ) MAC (Mammalian Artificial Chromosome) 病毒载体 穿梭载体
死
抗菌素
活
b.蓝白斑试验（IPTG-Xgal 试验）
乳糖操纵子的天然诱导物是乳糖
乳糖类似物异丙基-β-D -硫代半乳糖苷 （IPTG） 有更强的诱导作用。 IPTG配合使用在基因工程可作蓝白斑筛选。
LacZ基因编码的乳糖苷酶 X-gal 蓝色吲哚产物
-半乳糖苷酶Xgal显色反应： -半乳糖苷酶能把无色的化合物 Xgal分解成半乳糖和一个深蓝色的 物质5-溴-4-氯靛蓝。 Xgal 半乳糖 5-溴-4-氯靛蓝
(3)带有可供选择的标记
• 常采用的标记是对某种抗生素的抗性，
如氨卞青霉素抗性(Ampr)、卡那霉素 抗性(Kanr)、四环素抗性(Tetr)等， 而且希望各抗性基因内有若干单一的 限制酶切点。
A、 抗菌素选择原理 不带有抗菌素抗性基因的受体菌不能在 含有抗菌素的培养基（选择培养基）中 生长。 当带有抗菌素抗性基因的载体进入受体菌 后，受体菌才能生长。 抗性基因
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红河学院《基因工程》理论课程教学大纲
一、课程基本情况与说明
（一）课程代码：
（二）课程英文名称: Genetic Engineering
（三）课程中文名称: 基因工程
（四）授课对象：生物技术专业生物科学专业
（五）开课单位：生命科学与技术学院
（六）教材：《基因工程》，孙明主编，高等教育出版社，2006
（七）参考书目
[1] 《基因工程》，楼士林，北京科学出版社；
[2] 《基因工程原理与应用》，陈宏，中国农业出版社；
[3] 《基因工程》，刘祥林、聂刘旺，科学出版社。
（八）课程性质
《基因工程》是生物技术专业的专业必修课程，同时也是生物科学专业的专业选修课。其以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段而建立起来的一门技术学科。基因工程兴起于20世纪70年代初，它的问世带动了生物技术的兴起和发展，是现代生物技术的核心内容。基因工程课程的主要内容包括基因的分离、基因的克隆、基因的表达、植物基因工程、动物基因工程、药物基因工程和基因治疗等。它是生命科学学院生物技术专业本科生的主干专业课程之一，它是生物工程(包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程)中最重要的课程，其它三大工程是建立在基因工程基础之上的，同时也为生物技术制药等后继学科奠定了重要的理论基础。
（九）教学目的
1.使学生对基因工程基本原理及其主要操作技术有比较全面、系统的认识；
2.使学生通过学习能够清楚基因工程的实质及发展现状；
3.调动学生对基因工程技术的兴趣，使学生能运用所学的基本理论、知识和技能，分析和解决生产实践中相关的一般问题。
《植物生物技术》教学大纲
《植物生物技术》教学大纲
一、课堂教学大纲
1、教学目的
该课程系统地论述了植物生物技术的理论和方法，既介绍了基本知识，也反映了该领域的最新研究进展。全课程共分三大部分：植物组织培养、植物基因工程和植物分子标记及应用。要求学生全面系统地了解植物生物技术的发展过程和发展趋势；理解各部分的基本理论、原理和概念；融会贯通三大部分的内容，并能运用所学技术解决生产中的实际问题。通过学习，使学生学习掌握现代生物技术知识的技能和方法，尤其要求学生具有将植物生物技术与传统方法相结合改良植物、培育新品种、设计高新技术产业的能力，提高学生综合分析问题，系统利用专业知识的综合素质。
2、教学内容
第一章绪论（2学时）
•生物技术的产生与发展
•植物生物技术与农业革命
•植物生物技术在未来农业生产中所起的作用
第二章植物细胞培养实验室建设与操作技术（2学时）
本章重点、难点：植物组织培养所涉及的基本概念；培养基的组成、特点和用途；植物组织培养实验室建设；无菌操作的原理与技术等。
•植物组织培养实验室建设
•实验室的设置
•主要仪器设备、用途和使用方法
•无菌操作器械
•培养基及其制备
•培养基的成分组成
•常用培养基及其特点
•培养基的改良与效应分析
•培养基的制备
•植物组织培养离体操作技术
•培养用品的清洗与洗涤液的使用
•灭菌与消毒
•无菌操作技术
•无菌操作中应注意的事项
第三章胚胎培养（2学时）
本章重点、难点：胚培养、胚珠培养和胚乳培养的意义，在育种工作中的实用价值。
•胚培养
•胚培养的意义和用途
•胚培养的方法
•影响胚培养效果的因素
•培养条件下的胚发育
基因工程知识点全
第一章
第二章
第三章基因工程概述
1.什么是基因工程，基因工程的基本流程？
基因工程（Genetic engineering）原称遗传工程。从狭义上讲，基因工程是指将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。因此，供体、受体和载体称为基因工程的三大要素。
1.分离目的基因
2.限制酶切目的基因与载体
3.目的基因和载体DNA在体外连接
4.将重组DNA分子转入合适的宿主细胞,进行扩增培养
5.选择、筛选含目的基因的克隆
6.培养、观察目的基因的表达
第四章基因工程的载体和工具酶
1. 基因工程载体必须满足哪些基本条件？
具有对受体细胞的可转移性或亲和性。
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点。
具有合适的筛选标记。
分子量小，拷贝数多。
具有安全性。
2. 质粒载体有什么特征，有哪些主要类型？
1、自主复制性
2、可扩增性
3、可转移性
4、不相容性
主要类型有1.克隆质粒2.测序质粒3.整合质粒4.穿梭质粒5.探针质粒6.表达质粒
3. 质粒的构建
（1）删除不必要的DNA 区域，尽量缩小质粒的分子量，以提高外源DNA 片段的装载量。一般来说，大于20Kb 的质粒很难导入受体细胞，而且极不稳定。
（2）灭活某些质粒的编码基因，如促进质粒在细菌种间转移的mob 基因，杜绝重组质粒扩散污染环境，保证DNA 重组实验的安全，同时灭活那些对质粒复制产生负调控效应的基因，提高质粒的拷贝数
（3）加入易于识别的选择标记基因，最好是双重或多重标记，便于检测含有重组质粒的受体细胞。
第4章-载体的选择与构建
蓝白斑筛选(互补筛选）原理 ★
载体携带大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个
pT181, pC221, pUB112, pE194 pS194, pC223,
革兰氏阳性细菌
pBC110, pBC16 pSN2, pE12, pIM13
1.6 质粒的复制方式
（1）θ型复制 单向复制 双向复制
革兰氏阴性细菌中多数质粒是以θ型 方式复制，R1，R100等是单向复制 ，F，R6k等是双向复制类型。
有的质粒具有宿主致死功能，杀死丢失质粒的细胞，如F质粒的ccdA(编码解 毒剂）,ccdB（编码毒性蛋白）
1.5 质粒的不相容性 ★
用同一复制系统的两种质粒会在复制和随后向子细胞的分配过程中彼 此竟争，这样的质粒在同一个细胞中不能和平共处。这种现象称之为不相 容性
若两种质粒拷贝数 不一样，分配有利 于高拷贝数质粒
RepA 调控
Iterons are directly repeated sequences（17～22bp) which play an important role in regulation of plasmid copy number in bacterial cells （重复子） Ori附近的repA基因编码RepA蛋 白，其对自身的表达具有负调节 作用 RepA蛋白可以和Iterons结合，促 进复制复合物的形成，从而开始 质粒的复制 质粒拷贝数高时， RepA蛋白浓 度高，形成二聚体，两个质粒聚 集连在一起，复制停止。细胞分 裂后重新复制
基因工程温习笔记
基因工程温习笔记
第一章基因工程概述
1.基因工程的概念：是指在基因水平上的遗传工程,它是用人为方式将大分子(DNA)提掏出
来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一路导入某一更易生长、繁衍的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而取得新物种的一种崭新的育种技术。
2.1972年，美国斯坦福大学的Paul Berg及其同事第一个制造重组DNA分子。
3.1973年，Cohen & Boyer第一次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化，标志着基因工
程的诞生。
4.1981年，第一个转基因哺乳动物小鼠在美国问世；1982年，基因工程胰岛素商品在美
国投向市场，同年转基因烟草取得成功并能按孟德尔方式遗传给后代。
5.基因工程的通用策略：
6.基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段取得纯化的？
大分子质量的DNA会含有许多特殊限制性内切酶位点，因此用一种限制酶处置一完整染色体或整个基因组会产生许多不同的DNA片段，每一个片段带有基因组的一个不同的基因或一个不同的小片段。当全数片段与用同种限制酶处置过的载体分子混合时，每一个片段将插入一个不同的载体分子。一样，当用这些质粒转化宿主细胞时，每一个宿主细胞将只接收一个质粒DNA分子，而挑选出的含重组质粒的每一个菌落事实上会含有某一特异的供体DNA片段的多个拷贝。一旦带有待研究的特定基因的克隆被确认，此重组DNA分子可从宿主细胞中提掏出来纯化。
第二章分子克隆工具酶
1.限制性核酸内切酶的概念：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一
生物化学重点名词英文缩写
生物化学英文缩写
第一章蛋白质
氨基酸分类
1、非极性脂肪族氨基酸Gly 甘氨酸
Ala 丙氨酸
Val 缬氨酸
Leu 亮氨酸
Ile 异亮氨酸
Pro 脯氨酸
2、极性中性氨基酸
Ser 丝氨酸
Cys 半胱氨酸
Met 蛋氨酸
Asn 天冬酰胺
Gln 谷氨酰胺
Thr 苏氨酸
3、芳香族氨基酸
Phe 苯丙氨酸
Trp 色氨酸
Tyr 酪氨酸
4、酸性氨基酸
Asp 天冬氨酸
Glu 谷氨酸
5、碱性氨基酸
Lys 赖氨酸
Arg 精氨酸
His 组氨酸
Hb 血红蛋白
Mb 肌红蛋白
PrP 阮病毒蛋白
PI 等电点
CD 圆二色光谱
NMR 核磁共振技术第二章核酸
cAMP 环腺苷酸
HGP 人类基因组计划
hnRNA 不均一核RNA
m7GpppN 7-甲基鸟嘌呤-三磷酸核苷
CBP 帽结合蛋白
PABP poly（A）结合蛋白
ORF 开放阅读框
DHU 双氢尿嘧啶
ψ假尿嘧啶核苷
m G，m A 甲基化嘌呤
snmRNA 非mRNA小RNA
snRNA 核内小RNA
snoRNA 核仁小RNA
scRNA 胞质小RNA
siRNA 小片段干扰RNA
第三章酶
NAD+尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸，辅酶I NADP+尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，辅
酶II
FMN 黄素单核苷酸
FAD 黄素腺嘌呤核苷酸
LDH 乳酸脱氢酶
CK 肌酸激酶
PCR 聚合酶链反应
BAL 二巯基丙醇
PAM 解磷定
第四章糖代谢
SGLT Na 依赖型葡萄糖转运体
GLUT 依赖一类葡萄糖转运体
G-6-P 6-磷酸葡萄糖
PEK-1 6-磷酸果糖激酶-1
PEP 磷酸烯醇式丙酮酸
FBP-2 果糖二磷酸酶-2
TAC 三羧酸循环（TCA循环）GSH 谷胱甘肽
基因工程B
《基因工程》复习要点
名词解释：
天然DNA：存在于生物体内的DNA，涉及染色体DNA、质粒DNA、病毒(噬菌体)DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA。其中绝大部分是双链DNA，部分病毒和很少数质粒是单链DNA
PCR(polymerase chain reaction):模仿细胞内发生的DNA复制过程进行的，在体外由酶催化合成特异性
DNA片段的反映。
限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)：能专一性的辨认双链DNA上的特殊核苷酸序列，并使每条链
的一个磷酸二酯键断开的一类内切核酸酶。
同尾酶(isocaudamer):切割DNA分子所得的DNA片段具有相同的粘性末端的限制性内切核酸酶。
同裂酶(isoschizomer):来源不同，但具有相同的辨认序列的限制性内切核酸酶。
限制性图谱(restriction map):DNA分子(片段)上的限制性内切核酸酶的辨认序列的分布图称为~
Star活性：某些限制酶在特定条件下，可以在不是本来的辨认序列处切割DNA的现象。
DNA连接酶(DNA ligase):催化DNA链的相邻3’-羟基和5’-磷酸基团发生缩合反映，形成磷酸二酯键的酶。克隆载体：一种具有携带外源DNA片段或基因进入受体细胞，并使其在受体细胞中得以维持或表达的功能的DNA分子。
质粒(plasmid)是存在于细胞内染色体之外的外链DNA分子，一个质粒就是一个DNA分子
质粒表达载体：在质粒载体的基础上增长了表达元件构建而成的，在受体细胞内能稳定维持并表达外源目的基因的克隆载体。
基因工程的质粒载体
3．若质粒DNA经过适当的核酸内切 限制酶切割之后，发生双链断裂形成 线性分子（IDNA），通称L构型
（5）质粒空间构型与电泳速率
在琼脂糖凝胶电泳中，不同构型的同一种质粒DNA，尽 管分子量相同，仍具有不同的电泳迁移就绪。其中走在最 前沿的是SC DNA，其后依次是L DNA和OC DNA
如：F质粒（性质粒、或F因子）：
甚至能使寄主染色体上的基因随其一道 转移到原先不存在该质粒的受体菌中。
不符合基因工程的安全要求。
（2）F质粒(F plasmid)
又称F因子、致育因子或性因子，是大肠杆菌等细菌决定性别 并有转移能力的质粒。分子量约为大小94kb，共编码19个转 移基因。
F质粒在寄主细胞中有三种存在形式： ✓ 以染色体外环形双链质粒DNA形式存在，不带来自寄主染
➢ 在基因导入受体时：将目的 片段转移到受体细胞中并进 行使之表达——转化载体或 表达载体。
✓ 细菌质粒(克隆)； ✓ λ噬菌体(克隆)； ✓ 柯斯质粒(克隆)； ✓ 穿梭质粒(克隆/表达)； ✓ 细菌人工染色体(克隆/表达)；
✓ 酵母人工染色体(克隆/表达)；
✓ Ti质粒及其衍Fra Baidu bibliotek载体(转化)。
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第4章 人工染色体载体
黏粒载体 酵母人工染色体载体 细菌人工染色体载体 P1噬菌体载体和P1人工染色体载体
表4-1 5种常见高容量克隆载体及其基本特性
载体
黏粒 P1 PAC BAC YAC
容量（kb） 复制子
30-45 70-100 130-150 120-300 250-400 ColE1 P1 P1 F ARS
宿主
拷贝数
重组DNA导入 宿主的方式
转导 转导 电转化 电转化 转化
筛选标记
— sacB sacB α-互补 ade2
克隆DNA 获取方法 碱抽提
大肠杆菌 高 大肠杆菌 1 大肠杆菌 1 大肠杆菌 1 酵母菌 1
脉冲场电 泳
1
4.1 黏粒载体
4.1.1 黏粒的结构特征和用途
o 黏粒（cosmid）是质粒的衍生物，是带有cos序 列的质粒。cos序列是λ噬菌体DNA中将DNA包装 到噬菌体颗粒中所需的DNA序列。 o 黏粒的组成包括质粒复制起点（ColE1）、抗性 标记（ampr）、cos位点，因而能像质粒一样转 化和增殖。 o 它的大小一般5-7kb左右，用来克隆大片段 DNA，克隆的最大DNA片段可达45kb。
4.1.2 黏粒载体的 工作原理
图4-1 黏粒载体 克隆 DNA的 一般原 理和步 骤
2
4.1.3 黏粒克隆载体
1．黏粒pJB8
o 大小为5.4kb，由 ampr，ColE1复制 起点（ori）， cos位点，多克隆 位点组成，可容 纳33-46.5kb外源 DNA片段，主要用 来在细菌中克隆 真核DNA。
2．含双cos位点的黏粒载体
o c2RB和 Supercos-1是 含双cos位点的 黏粒载体， c2RB大小为 6.8kb，含两个 cos位点，在 cos位点之间有 Kanr（图4-3）。 o 装载容量3346.5kb
图4-3 黏粒载体c2RB图谱
3
图4-4 Supercos-1克隆 的原理和步骤
o Supercos-1 大小为 7.94kb，含 有在真核细 胞中起作用 的来自猿猴 病毒SV40的 复制起点 ori-SV40和 新霉素抗性 基因 （neor）。
4
4.1.4 黏粒的优缺点
（1）同时具有λ噬菌体和质粒载体的特性
（2）具有高容量的克隆能力
柯斯质粒的缺点
o 两个粘粒之间，当存在同源序列时，可能会发生 重组，结果使克隆的外源DNA片段重排或丢失。 o 含不同重组DNA的菌落生长速度不一。当柯斯质 粒文库复制扩增时，由于不同的插入片段对宿主 细胞作用的情况不同，结果会出现各种外源DNA 片段间的比例失调。另外不同重组柯斯质粒的产 量相差悬殊。 o 包装蛋白制备过程较复杂，每批包装蛋白的包装 效率不稳定。而且，购买包装蛋白的费用较高。
5
4.2 酵母人工染色体载体
o YAC (Yeast Artificial Chromosome ) 酵母人工 染色体 o 利用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的染 色体的复制元件构建的载体，其工作环境也是在酿 酒酵母中。 o 酿酒酵母的形态为扁圆形和卵形，生长的代时为90 分钟；含16条染色体，其大小为225-1900kb，总计 有14×106bp；具真核mRNA的加工活性。
4.2.1 YAC载体的复制元件和标记基因
o 最常用的是pYAC4。 o 由于酵母的染色体是线状的，因此其在工作状 态也是线状的。但是，为了方便制备YAC载体， YAC载体以环状的方式存在，并增加了普通大肠 杆菌质粒载体的复制元件和选择标记。 o YAC载体的复制元件是其核心组成成分，其在酵 母中复制的必需元件包括复制起点序列即自主 复制序列（autonomously replicating sequence， ARS）、用于有丝分裂和减数分裂 功能的着丝粒（centromere, CEN）和两个端粒 （TEL）。
6
YAC载体必须含有元件
①端粒重复序列（telomeric repeat， TEL），定 位于染色体末端一段序列，用于保护线状的DNA不 被胞内的核酸酶降解，以形成稳定的结构。 ②着丝粒（centromere， CEN），有丝分裂过程中 纺锤丝的结合位点，使染色体在分裂过程中能正 确分配到子细胞中。在YAC中起到保证一个细胞内 只有一个人工染色体的作用。如pYAC4使用的是酵 母第四条染色体的着丝粒。 ③自主复制序列（autonomously replication sequences，ARS）一段特殊的序列，含有酵母菌 中DNA进行双向复制所必须的信号。
YAC载体的选择标记 o 主要采用营养缺陷型基因，如色氨酸、亮氨酸和组 氨酸合成缺陷型基因trp1、leu2和his3、尿嘧啶合 成缺陷型基因ura3等，以及赭石突变（突变为 UAA） 抑制基因sup4。 o 与YAC载体配套工作的宿主酵母菌（如AB1380）的 胸腺嘧啶合成基因带有一个赭石突变ade2-1。带有 这个突变的酵母菌在基本培养基上形成红色菌落， 当带有赭石突变抑制基因sup4的载体存在于细胞中 时，可抑制ade2-1基因的突变效应，形成正常的白 色菌落。 o 利用这一菌落颜色转变的现象，可用于筛选载体中 含有外源DNA片段插入的重组子。
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4.2.2 YAC载体的工作原理
o YAC载体主要是用来构建大片段DNA文库，特别 用来构建高等真核生物的基因组文库。
ClaI (25)
CEN4
HindIII (30) EcoRI (555)
ARS1
HindIII (9630)
Sma I (592) Sal I (944)
TRP1
XbaI (9201)
URA3
pYAC4
AP r
11454 bp
XhoI (3533)
PMB1
XhoI (6711) HindIII (6701)
HindIII (3543)
TEL
BamHI (4238)
TEL
BamHI (6006)
ClaI (4307) HindIII (5045)
HIS3
HindIII (5232)
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