过氧化氢酶的活力和动力学常数测定
过氧化氢分解速率常数和活化能的测定(PPS)
过氧化氢分解速率常数和活化能的测定(PPS)过氧化氢分解速率常数和活化能的测定（PPS）是一种常用的化学分析方法，通过测定过氧化氢分解反应的速率常数和活化能，可以评估其在化学反应中的重要性，并为相关应用提供理论依据。
本文主要介绍PPS的基本原理、实验步骤和数据分析方法。
一、PPS的基本原理PPS是一种典型的动力学分析方法，其基本原理建立在化学动力学的基础上。
在化学反应中，反应物之间的化学键断裂和形成是一个复杂的过程，其速率一般由反应物浓度、反应温度、反应物质量和物理状态等因素决定。
为了确定反应速率和活化能，需对反应物的浓度和温度等因素进行控制，以便让反应发生在特定条件下。
在PPS实验中，一般使用一定量的过氧化氢和一定浓度的碳酸钠或碳酸氢钠作为反应物。
由于过氧化氢具有较高的反应活性，所以在温度适宜的条件下，可迅速分解产生氧气和水。
反应速率可以通过氧气析出速度的测定来确定，从而得到过氧化氢的分解速率常数。
根据阿伦尼乌斯方程，可以获得诸如反应物浓度、反应温度和活化能等参数。
二、PPS的实验步骤1、实验准备准备好所需设备和试剂，包括分光光度计、烧瓶、热水浴、过氧化氢、碳酸钠或碳酸氢钠等。
2、制备反应体系取一定的过氧化氢，放入烧瓶中，再加入一定量的碳酸钠或碳酸氢钠，组成反应体系。
3、测定反应速率将烧瓶放置在预热的热水浴中，控制反应温度在合适范围内，并不断搅拌，观察氧气析出速度，并通过分光光度计测定反应体系中的吸光度。
4、数据分析根据反应速率的测定结果，通过阿伦尼乌斯方程计算反应速率常数和活化能等参数。
三、PPS的数据分析方法根据氧气析出速度和反应瓶中氧气压力的测定，可计算出反应速率。
2、阿伦尼乌斯方程的应用3、计算分解半衰期分解半衰期是反应速率常数的一个常用指标，它表示分解速率的一半所需的时间。
可以通过反应速率常数和分解半衰期之间的关系计算分解半衰期。
四、PPS的应用范围PPS主要应用于过氧化氢反应的动力学研究、酶催化反应和氧气转移反应等方面的研究。
(完整版)实验35过氧化氢酶的活性测定
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积.H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性.一、过氧化氢含量的测定【原理】H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系.【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30％分析纯H2O257μl,溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5％（W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水.【方法】1。
制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号，并按表40—1加入试剂.待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色.2.样品提取和测定：（1）称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35—1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
(3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
3.结果计算:植物组织中H2O2含量（μmol/g Fw）=式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）;V t—样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；FW-植物组织鲜重(g）。
过氧化氢酶
实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名：凌豪指导教师：汪财生实验室： 6503 组员：①吴李伟②凌豪成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：豆芽菜5g2.标定数据：（1）KMnO4质量数及配制：KMnO4质量数3.1605g 溶解配制成1000ml （2）Na2C2O4质量数：取草酸钠0.11g（3）标定数据：17.3 17.4 16.8 平均17.2（4）KMnO4实际浓度 0.0191mol/L3.样品滴定酶反应组 0.25ml 0.3ml对照组 0.7ml 0.6ml（二）结果计算1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）(0.011*1)/0.0191=4.1mg2.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：0.3mgH2O2/g•min）二、动力学常数的测定（一）原始数据(KMnO4=0.0191mol/L H2O2=0.11)编号1 2 3 4 5 消耗的KMnO4（mL）2.13.5 3.8 5.7 11.45（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度V0编号1 2 3 4 5 [S]0 （mol/L）0.011 0.013 0.018 0.027 0.055 V0 （mmol/min）0.0056 0.0092 0.0110 0.0172 0.0360 （三）以1/V0对1/[S]0作图（用excel作图）（四）求出Km（mol/L）和Vmax（mmol/min）Km= 3.8 Vmax=2.4第四部分：课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。
答：1.酶的提取和存放一般需在0-4℃进行。
2.每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
3.各反应瓶的滴定终点微红色应为同一标准。
4.使用前，应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。
2.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?答：适宜的温度酸碱度的影响底物浓度3.过氧化氢酶与哪些生化过程有关?答：过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中，它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2，使得H2O2不至于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH4.在反应速度的测定中，加入硫酸有哪些作用？酸化溶液停止反应5.米氏方程中的Km有何实际应用？答：1.Km是酶的特征性常数2. Km可用来判断酶的最适底物3.Km可用来确定酶活性测定时所需的底物浓度4.Km可用于判断反应级数6.在什么条件下，酶的Km可以作为鉴定酶的一种手段，为什么？答：当酶促反应处于ν＝1/2 Vmax时，可从米一曼氏方程式得到Km ＝〔S〕。
过氧化氢酶活力的测定实验报告
过氧化氢酶活力的测定实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。
h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定
高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。
测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。
用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。
放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。
仪器药品氧电极仪记录仪电磁搅拌器超级恒温水浴注射器、微量注射器容量瓶反应杯亚硫酸钠过氧化氢酶50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。
50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。
标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。
操作步骤1.仪器的标定按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。
2.绘制酶活性标准曲线(1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。
(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。
(3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。
(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。
(5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。
3.样品测定(1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。
(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。
(3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。
过氧化氢酶活性测定
实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴； 5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3.0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液 5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液 2.5ml，再加入 2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4.0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc
过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活性测定
过氧化氢酶活性测定过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
紫外吸收法一、原理】H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与设备与试剂】1、材料小麦叶片等。
2、仪器设备研钵；离心机；250ml容量瓶；移液管（0.5ml、2ml各2支）；10ml试管3支；恒温水浴；紫外分光光度计；3、试剂0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。
【方法】1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。
混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm 下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。
5℃下保存备用。
2.酶活性测定取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表2-14-1顺序加入试剂。
表2-14-1 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表将S0号管在沸水浴煮1min以杀死酶液，冷却。
然后将所有试管在25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。
3.结果计算：以每分钟A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（U）。
过氧化氢酶活性U/(g.min)=Wt V V A S T⨯⨯⨯⨯∆1.0240∆A 240= A S0－2)(21S S A A +式中 A S0—加入煮死酶液的对照管吸光值； A S1, A S2—样品管吸光值； Vt —粗酶提取液总体积（ml ）； V 1—测定用粗酶液体积（ml ）； FW —样品鲜重（g ）；0.1—A 240每下降0.1为1个酶活单位（u ）； t —加过氧化氢到最后一次读数时间（min ）。
实验二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定
1 0.50
2 0.67 8.83
编号 3 0.83 8.67
4 1.25 8.25
5 2.50 7.00
各瓶分别加好H2O2和蒸馏水后，再依次加入酶液 0.5mL，混匀，记录各瓶起始反应的时间。30℃反应 5min后立即加入10% H2SO4 5.0mL终止反应。
2.滴定
用0.02mol/L KMnO4滴定各瓶中剩余的H2O2至微红色， 记录消耗的KMnO4溶液毫升数。 分别求出各瓶反应前后的底物浓度[S]0、[S]1，并计算反 应速度v： [S]0为反应前的底物浓度（mol/L） [S]0=C1V1/10 [S]1为反应后的底物浓度（mol/L） [S]1=2.5C2V2/10 C1为H2O2的浓度（mol/L） v=(C1V1-2.5C2V2)/5 C 为KMnO 用液的浓度（mol/L）
结果记录 与计算
高锰酸钾溶液标定
取5mL 0.1mol/L的草酸和3mL 10% H2SO4溶液于锥形瓶中， 加热至（75～85）℃（见冒热气），趁热用KMnO4标准溶液 滴定，刚开始反应较慢，滴入一滴KMnO4标准溶液摇动，待 溶液褪色，再加第二滴KMnO4（此时生成的Mn2+起催化作 用）。随着反应速度的加快，滴定速度也可逐渐加快，但 滴定中始终不能过快，，不断摇动或搅拌。滴定至溶液呈 现微红色并持续半分钟不褪色即为终点。
与反应速度的关系
v为反应速度 [S]为底物浓度 vmax为最大反应速度 Km为米氏常数
米氏常数Km
Km等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 在酶学分析中， Km是酶的一个基本特征常数，它包含 着酶与底物结合和解离的性质。
Km表示酶和底物之间的亲和能力， Km值越大，亲和能 力越弱，反之亦然。
过氧氢酶的活性测定-高锰酸钾法
过氧化氢酶的活性测定-高锰酸钾滴定法一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）仪器设备：1.三角瓶；2.酸式滴定管；3.恒温水浴；4.容量瓶等。
（二）试剂：1. 10%H2SO42. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L草酸溶液标定；3. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；4. 0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
5H2O2+2KMnO4+4H2SO4→5O2↑+2KHSO4+8H2O+2MnSO4三、实验步骤（一）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液1ml，对照加煮死酶液1ml，再加入2.5ml 0.1mol/LH2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO4 2.5ml。
用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30s内不消失）为终点。
2MnO4-+5H2O2+6H+=2Mn2++8H2O+5O2↑四、计算方法酶活性用每ml过氧化氢酶在1min内分解H2O2的mg数表示：过氧化氢酶活性=（A-B）×n/(1×1.7×t)式中：A—对照KMnO4滴定ml数；B—酶反应后KMnO4滴定ml数；1—反应时所用酶液量（ml）；t—反应时间（min）；1.7—1ml 0.1mol/L KMnO4相当于1.7mgH2O2；n—酶液稀释倍数。
酶活力的测定实验报告
酶活力的测定实验报告酶活力的测定实验报告引言：酶是一类生物催化剂，能够加速生物体内化学反应的速率。
酶活力的测定是生物学实验中常见的实验之一，通过测定酶活力的大小，可以了解酶在不同条件下的催化效果，进而研究酶的特性及其在生物体内的作用机制。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶的活力，探究酶活力与温度、酶浓度和底物浓度的关系。
材料与方法：1. 实验所需材料包括过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物、缓冲液、显色剂等。
2. 实验仪器包括分光光度计、试管、移液器等。
3. 实验步骤：a. 准备一组不同温度下的试验样品，分别将过氧化氢酶溶液和过氧化氢底物按照一定比例混合，并加入适量的缓冲液。
b. 在不同温度下，将试验样品分别放入预先恒温的水浴中反应一定时间。
c. 取出反应后的试验样品，加入显色剂，并在分光光度计中测定吸光度。
d. 重复上述步骤，分别改变酶浓度和底物浓度，进行实验。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同条件下的酶活力数据，并进行了分析和讨论。
1. 温度对酶活力的影响：在实验中，我们分别将试验样品置于不同温度下进行反应，结果发现酶活力随温度的变化呈现一定的规律性。
当温度较低时，酶活力较低，随着温度的升高，酶活力逐渐增加，但当温度超过一定范围后，酶活力开始下降。
这是因为酶是一种蛋白质，其结构在高温下容易受到破坏，从而导致酶活力的降低。
2. 酶浓度对酶活力的影响：在实验中，我们分别改变了酶的浓度，结果发现酶浓度对酶活力有着明显的影响。
当酶浓度较低时，酶活力较低，随着酶浓度的增加，酶活力逐渐增加，但当酶浓度超过一定范围后，酶活力开始趋于饱和，增加酶浓度对酶活力的提高效果不明显。
这是因为酶浓度的增加会导致底物与酶结合的速率增加，但酶分子之间的竞争也会增加，从而限制了酶活力的提高。
3. 底物浓度对酶活力的影响：在实验中，我们分别改变了底物的浓度，结果发现底物浓度对酶活力也有着明显的影响。
当底物浓度较低时，酶活力较低，随着底物浓度的增加，酶活力逐渐增加，但当底物浓度超过一定范围后，酶活力开始趋于饱和，增加底物浓度对酶活力的提高效果不明显。
过氧化氢酶活性的测定
植物体内过氧化氢酶活性的测定一、目的过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。
通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。
二、原理过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。
以钼酸铵作催化剂，使H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：H2O2+ 2KI + H2SO4—→I2+ K2SO4+ 2H2OI2+ 2Na2S2O3—→2NaI + Na2S4O6根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：水稻叶、甘蔗叶及其他植物叶片。
2. 仪器设备：分析天平；恒温水浴；研钵；100ml容量瓶；100ml三角瓶；滴定管；滴定管架；移液管；移液管架；漏斗；洗耳球等。
3. 试剂及配制1.8mol·L－1H2SO410﹪(NH4.)6MO7O40.02 mol·L－1 Na2S2 O320﹪KI1﹪淀粉液CaCO3粉石英砂0.018﹪H2O2溶液配制：吸取30﹪H2O2原液0.3ml至50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后再稀释10倍。
四、实验步骤1. 过氧化氢酶的提取选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入3～4ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。
然后再取滤液10ml 至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。
2. 酶活性测定2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO45ml以终止酶活性，作为空白测定。
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定可使用碘量法来进行。
具体步骤如下：
1.准备样品：制备合适浓度的过氧化氢酶样品。
2.制备反应液：将适量的磷酸缓冲液倒入试管中，加入适量的
过氧化氢底物。
3.加入样品：向反应液中加入过氧化氢酶样品。
4.开始反应：立即加入一定浓度的碘化钾溶液。
5.反应停止：加入淀粉溶液，用以观察碘化物是否被消耗完。
6.蓝色终点的判定：当溶液出现蓝色时，立即停止加淀粉溶液，记录下此时的反应时间。
7.对照试验：进行空白对照实验，重复以上步骤，但不加入过
氧化氢酶样品。
8.测定活力：根据反应时间计算出过氧化氢酶的活力值，活力
值等于样品试验结果减去对照试验结果。
需要注意的是，测定过程中需保证反应均匀和充分，同时需要计算和排除非酶催化的部分反应速率。
过氧化氢酶活力的测定
过氧化氢酶活力的测定（张一顺 p138）一、实验原理植物体内的黄素氧化酶类代谢物常含有过氧化氢。
植物在逆境下或衰老时，体内活性氧代谢加强，也会是过氧化氢发生积累。
过氧化氢的积累不但可导致破坏性的氧化作用，也会直接或间接的氧化细胞内的核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭到损坏，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶是清除过氧化氢的重要保护酶，是植物中重要的酶促防御系统之一，能将过氧化氢分解为O2和H2O2,使植物有机体免受H2O2的毒害作用。
其活力与植物的抗逆性密切相关。
过氧化氢酶活力的测定原理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解H2O2，是反应溶液吸光度随反应时间而降低，根据测定吸光度的变化速度即可测出CA T活力。
二、材料、仪器设备及试剂新鲜的子叶或茎段、研钵2个、冰浴槽两个、研锤2个、1ml注射器2个、石英砂1瓶、药勺1把、吸水纸若干、试剂瓶1个、冰块若干、大瓷缸1个、移液枪若干把、风光光度计一台、蒸馏水两瓶、干燥的试管若干个、试管架、离心机一台、离心管若干个、记号笔1个、标签纸若干、水笔1个、水浴箱1台。
Ph=7.8 0.2mol/L的磷酸缓冲液；0.1mol/L H2O2溶液：取30%的H2O2溶液5.65ml，用蒸馏水稀释至1000ml。
Ph=7.8 0.2mol/l配置：A液：91.5ml B液：8.5ml 混合后即可，总体积100ml三、试验方法与步骤1、粗酶液的提取准备工作：离心管14个，分别标号0~6和0Y~6Y（标有Y的装子叶研磨液,带0的表示实验组），冰浴槽2个，从冰箱中刚拿出的研钵2个（带研锤）放在冰浴槽中。
取1个棕色试剂瓶放入高瓷缸中，再向里面放一冰袋（目的磷酸缓冲液保持在较低温度下），从并行中拿出磷酸缓冲液倒入棕色试剂瓶中适量。
再拿出准备好的2个1ml注射器备用，取出石英砂和药勺（去石英砂用，用最小的那个）。
取出准备好的吸水纸若干放在适当位置（用于擦拭研钵中的水珠），干毛巾一个（在向离心管中到液体前用于擦拭研钵底部的水珠）。
酶活力测定实验报告
酶活力测定实验报告酶活力测定实验报告引言：酶是一种生物催化剂，能够加速化学反应的速率，对于维持生物体内的代谢平衡起着重要的作用。
酶活力测定实验是一种常用的实验方法，通过测量酶催化反应中底物消耗量或产物生成量的变化，来间接反映酶的活性水平。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶（catalase）在不同温度下的活性变化，探究酶活性与温度之间的关系。
材料与方法：1. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴槽。
2. 实验试剂：过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物溶液、磷酸盐缓冲液。
3. 实验步骤：a. 在分光光度计中设置波长为240nm。
b. 准备一组含有过氧化氢酶、过氧化氢底物和磷酸盐缓冲液的混合溶液，作为实验组。
c. 将实验组的混合溶液分别置于不同温度的恒温水浴槽中反应一段时间。
d. 取出反应后的混合溶液，通过分光光度计测定其吸光度，得到反应速率。
e. 重复以上步骤，分别在不同温度下进行实验，并记录实验数据。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同温度下过氧化氢酶的活性变化曲线。
实验结果显示，随着温度的升高，过氧化氢酶的活性呈现出先增加后降低的趋势。
在较低温度下，酶的活性较低，反应速率较慢；随着温度的升高，酶的活性逐渐增强，反应速率也随之增加；然而，当温度超过一定范围后，酶的活性开始下降，反应速率逐渐减小。
这一结果可以解释为酶的活性受到温度的影响。
酶是一种蛋白质，其活性受到温度的变化而变化。
当温度升高时，酶分子内部的振动加剧，使得酶与底物之间的碰撞频率增加，酶活性增强；然而，当温度过高时，酶分子的结构开始发生变化，部分酶分子失去了原有的构象，导致酶活性下降。
这种变化可能是由于酶分子的部分构象发生变化，使得酶活性中心的空间结构发生改变，从而影响了酶与底物之间的互作用。
此外，实验结果还表明，酶活性与温度之间存在一个最适温度。
在最适温度下，酶的活性达到最高点，反应速率最快。
这是因为在最适温度下，酶分子的结构处于最稳定的状态，酶活性中心与底物之间的互作用最为紧密，因此反应速率最高。
实验二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定
2.滴定
用0.02mol/L KMnＯ4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色
（在30s内不消失）为终点。
3.计算
酶活力用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示 酶活(mgH2O2/g· min)= ( A B ) VT 1.7 式中：
FW V 1 t
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
在反应系统中加入过量的H2O2溶液，经酶促反应后， 用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的 H2O2，即可求出消耗的H2O2的量。
5 H2O2 +2KMnO4+4H2SO4
=5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4
底物浓度对酶促反应速度的影响
在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶促反 应的速度有很大的影响。 底物浓度很低时，酶促反应的速度（v）随底物浓度的增 加迅速增加；随着底物浓度继续增加，反应速度的增加开 始减慢；当底物浓度增加到一定值时，反应速度达到极限 值（Vmax）。 米氏方程表示底物浓度
酶活力测定为什么需在进程曲线的初速度时间范围内进行？
米氏方程中的Km有何意义及实际应用。 为了准确测得米氏常数值，实验过程需注意哪些问题？
查阅资料，设计应用紫外吸收法测定过氧化氢酶活力的实验。
大组总结交流（PPT）：
内容：实验内容，结果计算和分析，课后研讨题，实验体会等。
结果记录 与计算
结果记录 与计算
用双倒数法（以1/v对1/[S]作图） 计算Km和vmax
三、材料、试剂与器具 1.材料：新鲜马铃薯
2.试剂：
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一、酶活力测定
（一）原始数据
1.样品原始质量：嫩豆芽5.010g
2.标定数据：
（1）KMnO4质量数及配制：0.02mol/L高锰酸钾标准液配制：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL ，临用前用草酸钠标定。
（2）Na2C2O4质量数：称取优级纯Na2C2O4 13.4g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
（3）标定数据：取5mL0.1mol/L的草酸和3mL10% H2SO4溶液于锥形瓶中，加热至（75～85）℃（见冒热气），趁热用KMnO4标准溶液滴定，刚开始反应较慢，滴入一滴KMnO4标准溶液摇动，待溶液褪色，再加第二滴KMnO4（此时生成的Mn2+起催化作用）。
随着反应速度的加快，滴定速度也可逐渐加快，但滴定中始终不能过快，，不断摇动或搅拌。
滴定至溶液呈现微红色并持续半分钟不褪色即为终点。
2KMnO4+5Na2C2O4+8H2SO4=2MnSO4+5Na2SO4+K2SO4+10CO2↑+8H2O
（4）KMnO4实际浓度：0.019mol/L
3.样品滴定数据
（二）结果计算
1．换算系数（1mL KMnO 4溶液相当于多少mg H 2O 2） 2KMnO 4+5H 2O 2+2H 2SO 4=K 2SO 4+MnSO 4+5O 2↑+2H 2O
2 5 2 1
1 5
2 1.9*10-5 4.75*10-5
m(H 2O 2)=4.75*10-5*34*1000=1.615mg
2.样品酶活计算（每克鲜重样品1min 内分解H 2O 2的毫克数表示：mg H 2O 2/g •min ）
酶活力用每克鲜重样品1min 内分解H2O2的毫克数表示
酶活(mgH2O2/g 〃min)=
式中：
A —对照KMnO4滴定毫升数；
B —酶反应后KMnO4滴定毫升数； VT —酶液总量（ml ）； V1—反应所用酶液量（ml ）； F W —样品鲜重（g ）；
1.7—1ml 0.02mol/L 的KMnO4相当于1.7mg H2O2 酶活(mgH2O2/g 〃min)
=0.235*50*1.7/(5.010*2.5*10)=0.159(mgH2O2/g 〃min)
().A B V FW V t T -⨯⨯⨯⨯171
二、动力学常数的测定
（一）原始数据
00
00
（四）求出Km（mol/L）和Vmax（mmol/min）
求得线性关系为y=1.3921x+0.0111
所以V max=1/0.0111=8.654*10-2
K M=1.205*10-1
第四部分：课后研讨题
1.总结本实验操作过程的注意事项。
(1)每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
(2)各反应瓶的滴定终点微红色应为同一标准。
(3)使用前，应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。
2.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?
温度，pH值和底物浓度
3.过氧化氢酶与哪些生化过程有关?
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧分子，在此过程中起传递
电子的作用。
4.在反应速度的测定中，加入硫酸有哪些作用？
提供反应所需的酸性条件，并作为反应物参与反应
5.米氏方程中的Km有何实际应用？
(1)鉴定酶：通过测定Km,可鉴别不同来源或相同来源但在不同发育
阶段，不同生理状态下催化相同反应的酶是否是属于同一种酶。
(2)判断酶的最适底物（天然底物）。
(3)计算一定速度下底物浓度。
(4)了解酶的底物在体内具有的浓度水平。
(5)判断反应方向或趋势。
(6)判断抑制类型。
6.在什么条件下，酶的Km可以作为鉴定酶的一种手段，为什么？
Km值是酶的特征性常数，只与酶的性质有关，与酶浓度无关。
因此，当底物、PH、温度和离子强度等条件相同时Km值为常数，对一酶促反应而言，在一定的条件下都有特定的Km值，可用来鉴别酶。
7.测定酶活力为什么要在进程曲线的初速度时间范围内进行？
要进行酶活力测定，首先要确定酶反应时间，酶的反应时间并不是
任意规定的，应该在初速度时间范围内选择。
可以通过进程曲线的
制作而求出酶的初速度时间范围。
进程曲线是在酶反应的最适条件
下采用每隔一定时间测产物生成量的方法，以酶反应时间为横坐标，产物生成量为纵坐标绘制而成。
从进程曲线可知，在曲线起始一段
时间内为直线，其斜率代表初速度。
随反应时间延长，曲线趋于平坦，斜率变小，说明酶的反应速度下降。
反应速度随反应时间的延
长而降低这一现象可能是由于底物浓度的降低和产物浓度的增高致
使逆反应加强等原因所致。
因此，要真实反映出酶活力大小，就应
在初速度时间内测定。
求出酶反应初速度的时间范围是酶动力学性
质的一系列研究中的组成部分和必要前提。
8.过氧化氢酶的活力测定还有另外一种方法，即紫外吸收法，原理
是H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变
化速度即可测出过氧化氢酶的活力。
请你查阅资料设计一个应用该
方法测定过氧化氢酶活力的实验。
过氧化氢酶的活力测定——紫外吸收法（参考百度文库）
一。
原理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解
过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。
根据测量
吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活力。
二。
材料、仪器与试剂
（一）、材料：小麦叶片
（二）、仪器（仪器的选择在实验开始前由学生在预习报
告中提出方案后教师审定）
紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；
0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水
浴；
（三）、试剂（试剂的选择在实验开始前由学生在预习报
告中提出方案后教师审定后并配制）
0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L
H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。
三、实验操作：
1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g臵研
钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研
磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并
冲洗液，并定容到刻度。
混合均匀将量瓶臵5℃冰箱中静臵10min，
取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗
提液。
5℃下保存备用。
2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支
为空白管，按表40-2顺序加入试剂。
表40-2 紫外吸收法测定H2O2样品液配臵表
管号 S0 S1 S2
粗酶液(ml) 0.2（煮死酶液） 0.2 0.2
pH7.8磷酸(ml) 1.5 1.5 1.5
蒸馏水(ml) 1.0 1.0 1.0
25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完
一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，
每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式
计算酶活力。
五、计算
以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。
过氧化氢酶活力(u/gFW/min)=
式中 A240 = AS0－
AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值；
AS1, AS2—样品管吸光值；
Vt—粗酶提取液总体积（ml）；
V1—测定用粗酶液体积（ml）；
FW—样品鲜重（g）；
0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；
t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。
”。