各类质粒载体图谱、序列及酶切位点大全(非常有用)
质粒图谱大全之欧阳美创编
（转载）一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA 二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusio nSystems39band40bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressi onSystem33bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressi onSystemsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressi onSystemsplusCompetentCellsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusio nSystems41and42ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusi onSystems43.1and44ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDN AProteinPurification?PurificationSystems?Strep?Tacti nResinsandPurificationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP pGEX-2T pGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
质粒的酶切参考PPT
•10
关于连接酶
定义：ATP存在下，在3’OH和5’ P之 间形成磷酸二酯键。
特性：连接粘端的效率远高于平端。 策略： 1.首选不匹配粘端
2.次选匹配粘端，载体脱磷 3.平端连接，提高酶量
•11
不 匹 配 粘 端 连 接 图 示
•12
匹 配 粘 端 连 接 图 示
•13
平 端 连 接 图 示
琼脂糖冻融法回收、纯化DNA片段
1. 在紫外灯下仔细切下含所需DNA片段的胶条（小于0.6g） 捣碎，置于1.5ml离心管中。
2. 加入等体积的Tris-Cl饱和酚（pH 7.6），振荡混匀； -20℃放置5-10min待结冻；
3. 10000rpm×5min，上层液转移置另一离心管中； 4. 原管加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，振荡混匀；
———C T G C A
PG———
———GP
A C G T C———
•4
限制性内切酶的定义、命名
1. 定义：广义指上述三个系统中的限制酶； 狭
义指II型限制酶。
2. 命名：限制酶由三部分构成，即菌种名、菌
系编号、分离顺序。 例如：HindⅢ 前三个字母来自于菌种名称 H. influenzae，“ｄ”表示菌系为ｄ型血清型； “Ⅲ”表示分离到的第三个限制酶。
-20℃放置5-10min待结冻； 5. 10000rpm×5min，合并上清液； 6. 用等体积酚/氯仿抽提2次、氯仿抽提1次，
取上清于新微量离心管； 7. 加入1/10体积3M NaAc（pH 5.2），2.5倍体积预冷的
无水乙醇，-20℃，放置30min（或过夜）； 8. 13000rpm×10min，弃上清；75%乙醇洗沉淀1-2次，晾干； 9. 适量H2O或TE溶解；电泳检测。
基因工程载体(质粒)(三)
从不同位点整合到寄主菌染色体上，这种细胞称为Hfr细胞
(高频重组细胞)。
F因子是雄性决定因子，F+ 细胞表面可以形成 一种叫做性须（pilus）的结果，它促使F+ 经 性须进入F- 细胞。F- 细胞则变为F+ 细胞。F因 子可以通过接合作用自我转移，也能够带动寄 主染色体一道转移。但F因子的这种整合过程 是可逆的。在一定条件下，Hfr细胞又可重新 变为F+或F-细胞。 基因工程多选用非接合型质粒，主要安全角度 考虑
常用的是抗生素抗性基因的选择标记。主要有： 四环素（Ter），氨苄青霉素（Amp），氯霉 素（Cm），卡那霉素（Km）。新霉素（Neo） 等。如质粒对氨苄青霉素有抗生时，则写成 AmPr，反之则写成AmPs，。带有抗药性质粒 称为R质粒。一个质粒载体通常有二种抗生素 抗性基因
新的质粒还带有下列标记基因，使于筛选重 组体： ①HA ②Luaferase ③GFP ④便于检测的多肽
非接合型质粒的寄主细胞中同时存在一 种接合型质粒，那么它们通常也是可以 被转移的。这种由共存的接合型质粒引 发的非接合型质粒的转移过程，叫质粒 的迁移作用（mobiligation）又叫质粒 的诱动。
带有大肠杆菌素基因的Col质粒和带有抗菌素抗性基因的R 质粒既有属于接合型的，也有属于非接合型的。 如果在非接合型质粒的寄主细胞中同时存在一种接合 型质粒，那么它们通常也是可以被转移的。这种由共存的 接合型质粒引发的非接合型质粒的转移过程，叫质粒的迁 移作用(mobilization)又叫质粒的诱动。ColE1 是一种可以
钝化了一个抗性基因，保留了另一个抗性基因。插入失活型载体，就是将 外源DNA片段插入到会导致选择性基因(Ampr，Tetr等)失活的位点。如
质粒图谱大全之欧阳歌谷创编
（转载）欧阳歌谷（2021.02.01）一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA 二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39b and40bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplus CompetentCellsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41a nd42ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43 .1and44ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurific ationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP pGEX-2TpGEX-2TKpGEX-4T-1 pGEX-4T-2 pGEX-4T-3 pGEX-5X-1 pGEX-5X-2 pGEX-5X-3 pGEX-6P-1 pGEX-6P-2 pGEX-6P-3五.PTYBsystem PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-) pCDNA3.1( ) pPICZalphaA pGAPZαA PYES2.0pBI121pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
载体图谱
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Oriλ即控制复制起始的位点。
原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。
而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。
抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+λ ,Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段λP/E 启动子/增强子λTermsλ终止信号加poly（A）信号λ可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活（5）hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。
它具有多个限制酶的单一切点。
便于外源基因的插入。
如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。
决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。
质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。
一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。
这是用来区别克隆载体与表达载体。
克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。
选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。
λ增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。
质粒载体图谱大全Vector
Origin Author
pUC
A. Geerlof
pUC
A. Geerlof
pUC
A. Geerlof
TEV
pUC
A. Geerlof
TEV
pUC
A. Geerlof
TEV
pUC
A. Geerlof
TEV
pUC
A. Geerlof
TEV
pUC
A. Geerlof
TEV
pUC
A. Geerlof
Vector
Antibiot
Vecto r map
Promoter
ic resistan
ce
p
Tag(s)
Proteas e
cleavag e site
Expression host
Origin of replicati
on
Source
pCDFDuet-1 map T7/lac
Spec/Stre p
pUC
EMBL-AG
pBADM-60(+) map araBAD Amp
N-NusA N-His
TEV
Top10 LMG194
pUC
EMBL-AG
pBAT4
map T7
Amp
BL21 (DE3) pUC
EMBL-MH
pBAT5
map T7
Amp
BL21 (DE3) pUC
EMBL-MH
pCal-n
map T7/lac Amp
TEV
N-His
C-His
(signal
sequence)
map seq
gb
T7-lac
质粒图谱大全之欧阳引擎创编
（转载）欧阳引擎（2021.01.01）一.九种表达载体Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C,pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA 二.克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39 band40bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33 bProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemspl usCompetentCellsProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems4 1and42ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems 43.1and44ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPuri ficationKits四.PGEX系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAP pGEX-2TpGEX-2TK pGEX-3X pGEX-4T-1 pGEX-4T-2 pGEX-4T-3 pGEX-5X-1 pGEX-5X-2 pGEX-5X-3 pGEX-6P-1 pGEX-6P-2 pGEX-6P-3五.PTYBsystem PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-) pCDNA3.1( ) pPICZalphaA pGAPZαA PYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
（完整版）所有质粒载体汇总,推荐文档
（完整版）所有质粒载体汇总,推荐文档酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF，pY15TEF，pY16TEF, 酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109；质粒pGADT7,pGBKT7；对照质粒pGBKT7-53，pGBKT7-lam，pGADT7-T，PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc，配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115，原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列（含GST标签），pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA （分泌型表达系列）,pQBI63（原核表达带荧光）pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF（+）, pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk233-3,pACYC184,pBR322,pUC119pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK （+）,pBlueScript SK （-）pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3）HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI）BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir）Tuner（DE3）Bl21 codonplusRIPL Novablue （DE3）Rosetta Rosetta（DE3）Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3）Rosetta-gamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami （DE3）OrgamiB（DE3）HMS174（DE3）植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIAsuper1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5,pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro，pSilencer 3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo，pSilencer 4.1-CMV neo， pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体（oligoengine）pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体（clontech）: RNAi-Ready pSIREN-Retro Q， RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen（Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）RNAi慢病毒载体（addgene）: pLKO.1 哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B，pSecTag2 A，pVAX1，pBudCE4.1,pTracer CMV2，pcDNA3.1（-）/myc-His A ，pcDNA6-Myc/His B，pCEP4， pIRES，pIRESneo，pIRES hyg3，pCMV-myc，pCMV-HA，pIRES-puro3，pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT，pBIND，pACT-MyoD，pBIND-Id，pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ，pOPI3CAT，pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统（Invitrogen）：pcDNA4/TO/Myc-His A，pcDNA4/TO/Myc-His B，pcDNA4/TO/Myc-His C，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ，pcDNA6/TR四环素调控系统（Clontech）：pTet-On，pTet-Off，pTRE2,pRevTRE，pRevTet-On，pRevT et-off信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pIκB-EGFP，pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1（PMA）-Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL 4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro]，pGL4.75;p53-Luc，pAP-1-Luc，pNF-κB-Luc，pSRE-Luc，pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc,Gateway系统（invitrogen）pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR，乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株，pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 00PLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523，pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosusGG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis M17,1663,Lactobacillus reuterii 广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos 载体pLAFR3,pMP2444（GFP）, pHY300PLK,pRT102,pRL1063a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET152,pOJ260,pPG611.1,pPG612.1，腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，腺病毒系统（Stratagene）: pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cellline 腺相关病毒系统（Stratagene）：pAAV-MCS，pAAV-RC，pHelper，pAAV-LacZ，pAAV-IRES-hrGFP，pCMV-MCS，慢病毒载体:pLVX-DsRed-Monomer-N1,pLVX-IRES-ZsGreen1,pLVX-AcGFP1-N1,Lenti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen,pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry质粒载体。
质粒图谱信息
质粒图谱信息一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19R DNApUC57 DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpV AX1PBR322pbv220pBluescript II KS (+)L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体Protein Expression » Prokaryotic Expression » pETDsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression System 33bProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression SystemsProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET GST Fusion Systems 41 and 42Protein Expression » Prokaryotic Expression » pETNusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Vector DNAProtein Purification » Purification Systems » Strep•Tactin Resins and Purification Kits四.PGEX系列表达载体T EcoR pGEX-1 I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYB systemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1(+)pPICZ alpha ApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种非病毒转基因载体。
质粒DNA限制性酶切图谱分析
问题二：DNA切割不完全
４．酶解温度与时间：
大多数限制酶反应温度为３７℃，如EcoRⅠ, HindⅢ, BamHⅠ, PstⅠ等，也有如BclⅠ需在５０℃下进行反应， 反应时间根据酶的单位与ＤＮＡ用量之比来定，原则是酶：ＤＮＡ=２－３：１ 注意事项——限制性内切酶酶切 ２小时即可，充分酶解。
注意事项——DNA凝胶电泳
琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。 胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。
问题一：DNA完全没有被内切酶切割
原 因
对 策
六、限制性内切酶酶切常见问题分析
内切酶活性下降 内切酶稀释不正确 DNA不纯，反应条件不佳 内切酶识别的DNA位点上的碱基被甲基化或存在其它修饰 部分DNA溶液粘在管壁上 内切酶溶液粘度大，取样不准 酶切后DNA粘末端退火 由于反应溶液、温度、强烈振荡使内切酶变性 过度稀释使酶活性降低 反应条件不适 识别位点两侧插入了可影响酶切效率的核酸顺序
单击此处添加大标题内容
平头末端：
II型酶切割方式的另一种是在同一位置上切割双链，产生平头末端。例如EcoRV 的识别位置是： 5’…… GAT|ATC …… 3’ 3’…… CTA|TAG …… 5’ 切割后形成 5’…… GAT ATC …… 3’ 3’…… CTA TAG …… 5’ 这种末端同样可以通过DNA连接酶连接起来。
pUC18 和 pUC19质粒图谱
pUC18 和 pUC19质粒图谱pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和X02514(pUC19)。
由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。
这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因此其拷贝数达 500-700 。
pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现α-互补作用。
因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。
特征序列区位:pBR322_origin 1471 - 852Ampicillin 2486 - 1626lac_promoter 543 - 514AmpR_promoter 2556 - 2528M13_pUC_rev_primer 500 - 478M13_reverse_primer 479 - 461M13_forward20_primer 379 - 395M13_pUC_fwd_primer 364 - 386lacZ_a 398 - 250pGEX_3_primer 51 - 29Orf2 2486 - 1626NOS terminator sequence:ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatg attatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttt tatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcg cggtgtcatctatgttactagtaatcgat设计引物:Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC及三个保护碱基)Reverse pri mer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC及三个保护碱基)请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。
所有质粒载体汇总
所有质粒载体汇总质粒载体是用于携带和复制DNA分子的小圆环DNA分子，在基因工程和分子生物学研究中扮演着重要的角色。
质粒载体的选择取决于不同的实验需要以及目标基因的特性。
下面是一些常用的质粒载体的简要概述。
1.pUC19：pUC19是一种常用的高拷贝质粒载体，在能源代谢和抗性等方面具有一些基本功能。
它含有多个限制性内切酶切位点，可以方便的进行基因克隆和插入。
2.pBR322：pBR322是最早的质粒载体之一，也是最常用的选择性质粒载体。
它具有多个抗性基因和多个限制性内切酶切位点，可以方便的进行限制性内切酶切和基因插入。
3. pET28a：pET28a是一种常用的诱导表达质粒载体。
它具有T7启动子和强力的胼胝体定位肽（His-tag），可以用于原核表达大量目标蛋白。
6. pcDNA3.1：pcDNA3.1是一种常用的真核表达质粒载体，可以在哺乳动物细胞中稳定表达目标基因。
它具有CMV启动子和多个选择性标记。
7.pAVEX系列：pAVEX系列是一组常用的双杂交质粒载体。
这些载体可以用于植物或哺乳动物细胞中检测蛋白相互作用。
8.pBI121：pBI121是一种常用的植物转化质粒载体。
它具有多个选择性标记和启动子，可以将目标基因导入植物细胞中进行稳定表达。
9.pCAMBIA1300：pCAMBIA1300是另一种常用的植物转化质粒载体。
它具有多个选择性和表达标记，以及多个启动子和启动子缺陷。
10.pHSE系列：pHSE系列是一组常用的高效表达质粒载体。
这些载体具有强力的启动子和增强子，可以用于高效表达目标基因。
这些只是众多质粒载体中的几个典型例子，根据不同实验需求和目标基因特性，科研人员可以选择适合自己实验的质粒载体。
质粒载体的设计和构建在基因工程研究和生物技术应用中起着至关重要的作用，不断的优化和改进将进一步拓宽其应用范围。