灵芝菌丝液体深层发酵种子培养条件研究

３ ． 中 国辐 射 防 护 研 究 院 放 射 医学 与环 境 医 学研 究所 ， 山西 太 原 ０ ３ ０ ０ ０ ６ ）
（ 摘 要］ 利 用液体 深层 发 酵方 法进行 灵 芝 茵丝 最佳 培 养基 和 菌 种 最适 种龄 的确 定． 通 过 单 因
素 实验 和 正 交 实验 ， 研 究 了不 同 培 养 基 对 液 体 深 层 发 酵 灵 芝 茵 丝 生 长 及 多 糖 含 量 的 影 响 ， 确 定 了灵
１ ． ３ ． ３ 正 交 实验设 计
根 据单 因素实 验结 果所 选最 适碳 源 、 最适 氮源 及 ＫＨ Ｐ Ｏ 和 Ｍｇ Ｓ Ｏ ， 按 Ｌ ｇ （ ３ ） 设 计 四 因素 设三 水平 正 交 实验 （ 表 １ ） ［ ５ ］ ， 以菌 丝体 生物 量为 主要 指标 ， 确 定培 养基 中各组 分 的浓度 和 配 比 ， 每一 处理 重复 ３次．
本 文对灵 芝 菌丝 液体 深层 发酵 的 培养条 件进 行 了初 步研究 ， 以期 为规模 化生 产提 供实验 依 据．

１ 材 料 和 方 法
１ ． １ 菌 种培 养
实 验菌 株 ： 赤芝 ６号 ．
斜 面培 养基 ： Ｐ ＤＡ 培养 基 ， ｐ Ｈ 自然 ．
液 体种 子 培养基 ： 土豆 ２ Ｏ ， 葡 萄糖 ２ ， ＫＨ Ｐ Ｏ ０ ． ３ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ０ ． ０ ７ ５ ， ｐ Ｈ 自然 ． １ ． ２ 液 体种 子 的制 备 将 已活 化 的斜 面菌 种转 接至 液体 种子 培养 基 中 ， 于２ ８℃ ， １ ５ ０ ｒ ／ ａｉ ｒ ｎ恒 温震荡 培养 ． １ ． ３ 发酵 培养 基 营养条 件 的优 化 １ ． ３ ． １ 碳 源筛 选 分别以 ３ 的葡 萄糖 、 蔗糖 和玉 米粉 为碳 源 ， 并添 加 豆粉 ２ ， ＫＨ。 Ｐ Ｏ ０ ． ３ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ０ ． １ ５ ， 于２ ８℃ ， １ ５ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ培养 ７ ｄ ， 以菌 丝球 数量 、 菌 丝体 干 重和胞 内多糖作 为 检测指 标． １ ． ３ ． ２ 氮 源筛 选 分别以 ３ 的豆粉 、 蛋 白胨 和酵 母 膏为氮 源 ， 并添 加 玉米粉 ２ ， ＫＨ。 Ｐ Ｏ ０ ． ３ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ０ ． １ ５ ． 培养 方 法 及检 测指 标 同 １ ． ３ ． １ ．
１ ． ４ 生 物 量 测 定
将 菌 丝体 从发 酵液 中过 滤分 离 ， 洗净 后 于 ８ ０℃烘 干到恒 重 ， 用 电子天 平称量 干 重．
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ２ — ０ ９ — １ ５ 基金项 目： 山西 省 教 育 厅 应 用 研 发 项 目． 作者简介 ： 吴丽华 （ １ ９ ８ １ － ） ， 女， 山 西 交 口人 ， 博士 ， 太原师范学院生物系讲师 ， 主要 从 事 毒 理学 研 究
设 ２ ～７ ｄ ６ 个种龄， 观察 种龄对 菌丝 体生 长状况 的影 响 ， 并在 第 ３ ｄ ， ５ ｄ和第 ７ ｄ测发 酵液 中漆 酶 活性
Ｖ ｏ １ ． １ ２ Ｎ ｏ ． ２
Ｊ ｕ ｎ ．２ ０ １ ３
２ ０ １ ３年 ６月
灵芝菌丝液体深层发酵 种子培养 条件研究
吴 丽 华 仪 慧 兰 伊 晶 晶。
（ １太 原 师 范 学 院 生 物 系 ， 山西 太 原 ０ ３ ０ ０ ３ １ ； ２山 西 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 ， 山西 太原 ０ ３ ０ ０ ０ ６ ；
需菌种 的最 适种龄 为 ４ ｄ ．
（ 关 键词） 灵芝； 培 养基 ； 多糖 ； 漆酶； 种 龄
（ 文 章 编号］ １ ６ ７ ２ — ２ ０ ２ ７ （ ２ Ｏ １ ３ ） ０ ２ － ０ １ ２ ９ — ０ ４ （ 中图分 类号］ ０６ ９ （ 文献标 识码） Ａ
第 １ ２卷
第 ２期
太 原 师 范 学 院 学 报 （ 自然 科 学版 ）
Ｊ Ｏ ＵＲＮＡ Ｌ ＯＦ ＴＡ Ｉ Ｙ ＵＡＮ ＮＯ ＲＭＡ Ｌ ＵＮ Ｉ ＶＥ Ｒ Ｓ Ｉ ＴＹ （ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ）
芝液 体 深层发 酵 的培 养基 配 方 为 ： 玉米 粉 ３ ， 豆粉 ３ ， ＫＨ ２ Ｐ Ｏ ０ ． １ ５ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ０ ． １ ５ ； 并 且 通
过研 究 茵种种 龄 对液体 深 层发 酵灵 芝 茵丝 生物 量及 漆酶 活性 的影 响 ， 确 定 了灵 芝 液 体 深 层 发 酵 所
灵芝 （ Ｇ ａ ｎ ｏ ｄ ｅ ｒ ｍａ Ｌ ｕ ｃ ｉ ｄ ｕ ｍ） 是 我 国传 统 名 贵 药 食 两 用 菌 ， 古 代 被 称 之 为神 草 ． 始 载 于汉 代 《 神 农 本 草 经》 ， 被认 为 能“ 益 心气 ” 、 “ 安精 魂” 、 “ 补肝 益 气” 、 “ 坚筋 骨” ， 列 为上 品 卜 ． 灵 芝 多糖具 有抗 肿 瘤作 用 ， 近年 来
引起 了人 们 的广 泛重 视． 目前我 国灵 芝 多糖 主要从 灵 芝 子实 体 中提 取 ， 但 野生 资 源稀 缺 ， 而 人 工栽 培 生产 周 期长（ ２个 月 Ｉ Ｐ Ａ３ ｃ ） Ｅ 引， 采用 液 体深层 培养 的方 法 来 获取 灵 芝 菌 丝体 和 灵芝 多 糖 ， 可 大 大缩 短 培养 的周 期Ⅲ ．
１ ３ Ｏ
太 原 师 范 学 院 学 报（ 自然科 学 版 ）
表 ｌ 正 交 实 验 因素 与 水 平
第１ ２卷
１ ． ５ 胞 内多糖 测定
参 照毛健 多糖 测定方 法所测 ］ ， 胞 内多糖 为菌 丝体热水 浸 提液 乙醇 沉淀 物 中的多糖 ．
１ ． ６ 发 酵液体 种子种 龄 的筛选