动物细胞融合过程示意图.

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第四章细胞融合

2、细胞融合的基本过程
（1）细胞在促融剂或正弦电场作用下凝集，彼此靠近；（2）两个相邻细胞之间的质膜相互融合，随后两个亲本细胞质膜上的受体、糖蛋白、糖脂等质膜成分也在融合后的质膜上重新分布；（3）细胞质发生融合；（4）细胞核融合，形成单核融合细胞。
动植物细胞的融合过程
植物细胞融合过程
生物种类细胞来源成功年代烟草两个种间苷蓝青菜大豆马唐草矮牵牛龙面花大麦花生大麦大豆小麦矮牵牛油菜大豆油菜大豆玉米大豆大豆野豌豆大麦蚕豆大豆草香木犀酵母菌鸡大豆烟草大豆秋水仙人胡萝卜番茄马铃薯人小鼠叶叶叶根愈伤组织叶叶花瓣种子种子叶悬浮细胞叶花瓣叶悬浮细胞叶悬浮细胞叶悬浮细胞悬浮细胞悬浮细胞叶根悬浮细胞叶原生质体血红细胞悬浮细胞叶悬浮细胞叶腹水癌细胞原生质体叶根尖纤维肉瘤细胞畸胎瘤细胞1972197219721972197219721972197219721972197219721972197219721972197219721972几种细胞融合成功的例子植物融合细胞成长状态对比右瓶为地面融合的细胞左瓶中为太空微重力环境下融合的细胞动物细胞融合实验使用的小白鼠白化豚鼠hartley豚鼠?4意义和应用?1可以避开生殖细胞的受精过程在亲缘关系较远甚至毫无亲缘关系的物种间实现基因转移创造出自然界中没有的新物种
（1）将两种不同亲本细胞各5×l06混匀；（2）离心沉淀，吸去上清液；（3）加1ml 50％PEG溶液，用吸管吹打，使之与细胞接触1分钟；
（4）加9ml 培养液，离心沉淀，吸去上清液；
（5）加5ml 培养液，分别接种5个直径60mm平皿，每个平皿加培养液至 5ml，37℃的CO2培养箱中培养。
叶——叶叶——根愈伤组织——叶叶——花瓣种子——种子叶——悬浮细胞叶——花瓣叶——悬浮细胞叶——悬浮细胞悬浮细胞——悬浮细胞叶——根悬浮细胞——叶原生质体——血红细胞悬浮细胞——叶悬浮细胞——叶腹水癌细胞——原生质体叶——根尖纤维肉瘤细胞——畸胎瘤细胞

细胞融合的方法、过程和影响因素PPT课件

第四章－1
细胞融合
Cell Fusion
1
细胞融合
细胞融合概念融合方法融合过程融合的影响因素
2
一、细胞融合的概念
细胞融合（cell fusion）：又称somatic hybridization or cell hybridization ，指在自然条件下或人工方法使两个或两个以上的细胞通过无性方式融合形成一个杂合细胞的过程。它能重新组合两个亲本细胞的优良遗传信息，是研究细胞间遗传信息传递、基因在染色体定位、改良动物遗传特性及创造新的符合人类需要的新的细胞系极为有效的手段。
34
软琼脂培养法
在加入饲养细胞的无菌平皿内铺上一层0.5％的琼脂，待凝固后再铺上一层混有杂交瘤细胞的 0.25％的软琼脂。待细胞长成集落后，用毛细管吸出移种于含饲养细胞的96孔板内。
35
第四节杂种细胞在细胞生物学研究中的应用
1）基因定位
不同种属的细胞融合时，常会出现一个亲本细胞的染色体被优先排除，而另一个亲本的染色体被选择性留下，即染色体分离的现象。由此，可根据表型和与表型特征相对应的基因在特定染色体上。例如：HGPRT－人细胞与TK－的小鼠细胞融合后，可用HAT培养基分离得到一种仅含一条人E组染色体的杂种细胞，具有TK活性，由此得到人的TK基因是在E组染色体上的。
2）注意控制高频交流电压和直流脉冲电压的强度和时间，以防止细胞连接成串或发生可逆性降解。
21
融合参数：主要包括交流电压、交变电场的振幅频率、交变电场的处理时间；直流高频电压、脉冲宽度、脉冲次数等。
22
优点：
融合率高，达70％－80％，甚至100％融合率＝（融合组多核细胞的核数－对照组多核细胞的核数/对照组的全部细胞数）×100％可在显微镜下定向诱导细胞融合可直接挑选杂种细胞

新教材高中生物第2章细胞工程动物细胞融合技术与干细胞技术教师用书苏教版选择性必修3

第2课时动物细胞融合技术与干细胞技术课标内容要求核心素养对接1.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物方法,使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。

2．概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。

3．简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。

生命观念：以细胞结构与功能为基础,理解动物细胞融合的过程及原理。

科学思维：结合具体实例,以流程图的形式表示单克隆抗体的制备过程。

社会责任：说明干细胞在疾病治疗、新药的研制和开发等领域的应用及发展潜力。

一、动物细胞融合技术及其应用1．动物细胞融合技术(1)概念：在一定条件下将两个或多个动物细胞,通过物理、化学或生物方法,结合形成一个细胞的技术。

(2)诱导方法①生物方法：仙台病毒、疱疹病毒、腮腺炎病毒。

利用仙台病毒诱导动物细胞融合的过程示意图如下：②化学方法：聚乙二醇诱导融合法成功率高,但有一定毒性。

③物理方法：采用电场诱导融合法。

对细胞伤害小,易操作、控制和观察。

成为细胞融合的重要技术手段。

(3)融合过程细胞质膜出现粘连、破裂和融合→进而细胞质和细胞核的融合→形成杂种细胞→挑选所需要细胞(4)诱导对象：同物种细胞和不同物种的细胞。

2．单克隆抗体(1)概念：单个细胞进行无性繁殖形成的细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体。

(2)传统抗体的不足含有多种抗体的混合抗体,不能专一性地对付某一类病原体,治疗效果不佳。

(3)单克隆抗体的制备流程(4)应用①制备单克隆抗体靶向制剂：化疗药物与单克隆抗体结合,对肿瘤细胞有较好的选择性杀伤作用。

②疾病诊断：单克隆抗体检测相关抗原是否表达及其表达水平,作为肿瘤诊断的辅助方法；用同位素标记某种单克隆抗体,诊断结肠癌肿瘤病灶是否已经转移。

③导向手术：利用同位素标记的单克隆抗体在体内显示肿瘤位置,用以指导手术范围。

二、干细胞技术及其应用1．干细胞的概念：动物(包括人)胚胎及某些器官中同时具有自我更新和分化能力的细胞。

2．干细胞的形态特点：通常呈圆球形或椭圆球形,细胞体积小,核相对较大。

细胞生物学实验报告——动物细胞融合

山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。

实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。

细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。

2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。

1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。

1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。

1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。

化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。

比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。

80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。

电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。

当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。

这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。

图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞（引自J. Teissie 等，1982 )。

动物细胞融合过程示意图

骨髓瘤细胞
B
杂交瘤细胞
C
足够数量的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔
原代 (5).C过程指细胞培养，该过程包括________培养和传代 50 __________培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。
1. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤ C.①②③④ D.②③
酶解法，如纤维素酶和果胶酶
2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？
无需，因为动物细胞无细胞壁
3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
离心、电激等物理方法；PEG等化学方法
4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
能还可以利用灭活的病毒进行诱导
5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？
不能
二、单克隆抗体
1.抗体是由何种细胞产生的？
效应B细胞（浆细胞）
提问
2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？
每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
3. 引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？ 4. 简述获得抗体的传统途径？
动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上
？
抗原
B
）
C．电刺激
4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案
A
制备单克隆抗体 (1).该实验方案的目的是：________________ (2).该方案能达到预期效果吗？为什么？不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。 (3).A是从小鼠的脾脏中取得__________ 该细胞能 B淋巴细胞抗体够产生______ 。细胞融合 (4).图中B为________________过程，常用灭活的病毒 _________________作为诱导剂，该细胞继承 ___________的遗传特性，既能__________,又能双亲细胞分泌抗体无限增殖 ___________。

实验八动物细胞融合

种内杂交细胞（intraspecific hybrid cell）: 同种细胞融合而成的细胞
种间杂交细胞（interspecific hybrid cell）: 不同种的细胞融合而成的细胞
人工诱导细胞融合
病毒诱导融合化学诱导融合细胞融合，如疱疹病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒、仙台病毒等。
①亲本细胞表面性质影响较大
②细胞种类不同，融合效果也不同，如腹水癌及株
化细胞较易融合，而淋巴细胞或血球细胞几乎不融合。
③细胞融合时需要适宜温度和运动状态。
如仙台病毒诱导-腹水癌细胞融合时，于37℃ 振摇时易于融合，且融合效率与病毒量呈正比。但在34℃振摇则融合率下降。在37℃时不振摇则-不融合。
本实验材料为鸡红细胞，其核结构紧密，易于观察。
PEG 融合实验步骤
鸡红血球的洗涤：每人取用0.9%生理盐水稀释100倍的鸡血1ml于1支 Ep管中，以1000r/min离心3min，去上清；再依次用1ml生理盐水和1ml GKN溶液各洗一遍（洗涤离心）加0.5mlGKN悬浮细胞（10-12滴）。37 ℃ 水浴锅中温育5min。
具有融合频率高、无毒性、作用机制明确、可重复性好等优点。难控制一对细胞间的融合。
4、激光诱导融合
利用激光俘虏法或者低浓度的融合剂PEG (5% ) 发使细胞聚集，然后利用激光微束可以对相邻细胞的接触区细胞进行破坏, 从而诱导许多细胞中所需的两个相邻细胞融合。
具有控制性好、融合频率高、无毒性、作用机制明确、可重复性好等优点。
聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）法的原理：PEG分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲合以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

因此可以利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。
单克隆抗体的制备
• 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质
单一特异性强的抗体
设计方案思路：
利用效应B细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂
交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞
6、动物细胞融合有什么意义？
一、动物细胞融合
1.概念：
动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。
2、原理：细胞膜的流动性
有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。
保留融合活性（诱导细胞融合）
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和
脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合
病毒的使用？
病毒在免疫调节中是抗原，在基因工程中可为
载体，在细胞工程中可为诱导剂。灭活病毒是动物细胞融合的诱导剂，一般不用植物体细胞融合过程。
两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的
受精作用
两个细胞正在融合
离心、振动、物理方法：电激等 3.诱导方法：化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒
4.融合过程：
为什么灭活的病毒能作诱导剂？
什么是病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。
仙台病毒
紫外线
灭活
丧失感染活性（不感染细胞）
单克隆抗体的制备
那么，如何大量获得化学性质单一、特异性强的抗体？（即单克隆抗体）

动物细胞融合

异核体（heterokaryon）：来自不同基因型的细胞所融合形成的杂交细胞。
第二节诱导细胞融合的方法
1.生物方法（病毒）病毒是最早采用的融合剂。某些病毒被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合。
常用于诱导动物细胞融合的病毒有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等。用作融合剂的病毒必须事先灭活（紫外线或β-丙内酯），使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。
1957年，日本科学家岗田善雄在培养动物细胞时加入失去活性的仙台病毒，发现了细胞融合、产生具有两个核的细胞。后来人们用此方法又成功地诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活，动物细胞融合技术随之诞生。现在这项技术已经广泛应用于细胞学、遗传学、免疫学、病毒学等多种学科的研究工作中。
最常用的是电融合法
细胞在电场中排列成串、聚集成串珠状，然后施加高压电脉冲，促使细胞在相互接触的细胞膜处产生穿孔，导致细胞之间的细胞质连通，进而发生细胞融合。细胞电融合技术有许多优点，如诱导细胞
融合的频率高，对细胞无毒害作用，操作简便，可重复性好。
第三节杂种细胞的筛选
两种亲本细胞融合的混合物中可能有多种类型细胞，如： 1) 亲本细胞 2) 同核体：同源细胞的融合体 3) 异核体：非同源的细胞的融合体 4) 多核体：含有双亲不同比例核物质的融合体筛选的目的是为了获得优良的杂种细胞
1.半固体培养法=平板培养
单细胞在软琼脂（或者琼脂糖）培养基上增殖后不能移动，形成集落。待细胞集落长到肉眼可见后，用吸管从琼脂上挑出来(一般8-10天后)，再移到液体培养基中，进行繁殖。
2. 有限稀释法
将细胞稀释到100个/ml，理论上每0.01ml(10μl) 含有1个细胞。取0.01ml细胞液在培养板(如96孔板) 的小孔中培养，则可获得单个细胞形成的集落。 1) 取1.0 ml 5×104/ml细胞+4ml培养基稀释，得 1×104/ml. 2) 取0.5ml 1×104/ml细胞液+4.5ml培养基稀释，得1×103/ml. 3) 取0.5ml1×103/ml细胞液+4.5ml培养基稀释，得 100 cells/ml. 4) 取0.01ml的 100 cells/ml细胞液于培养板小孔，加0.1 ml培养基，培养后得杂种细胞系。

动物细胞融合

12．将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体， AC 其依据是（多选） A.B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖 B.B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体 C.骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体 D.骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖
13．下列叙述中，与植物体细胞杂交密切相关的是（多选）
17.对下列有关实例形成的原理的解释，错误的是（多选） ABD
A、无子番茄的获得是利用了多倍体育种的原理 B、多莉羊的获得是利用了杂交育种的原理 C、单克隆抗体的制备是利用了细胞融合的原理 D、抗虫棉的获得是利用了基因突变的原理
18.动物细胞融合过程中所用的诱导剂—灭活的病毒，其抗原性和感染力的有无是 D A.失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力
在单克隆抗体上带上抗癌药物制成
课堂小结:
动物细胞融合过程两个过程
单克隆抗体制备过程
一个诱导细胞融合的新方法:灭活病毒
一个新细胞:杂交瘤细胞三个“一” 一个优势:单克隆抗体,特异性强、灵敏度高的优势
1．动物细胞融合技术的目的中最重要的是
B
A．克服远缘杂交不亲和的障碍 B．制备单克隆抗体 C．培育新物种 D．生产杂种细胞
15、下列属于单克隆抗体在实践上应用的实例是（多选）
CD
A．将抗药菌的某基因引入小鼠细胞内 B．培育成功转基因抗虫棉 C．利用免疫毒素清除异体骨髓移植中的供体骨髓T细胞 D．制成“生物导弹”，将药物定向地带到癌细胞所在部位
16、以下四种细胞工程技术中，培育出的新个体同时具有两个亲本遗传性的方法是（多选） BD A、细胞和组织培养 B、细胞融合 C、动物胚胎移植 D、细胞核移植

实验六细胞融合(PEG)

几种细胞融合成功的例子
生物种类
烟草两个种间苷蓝——青菜大豆——马唐草矮牵牛——龙面花大麦——花生大麦——大豆小麦——矮牵牛油菜——大豆玉米——大豆大豆——野豌豆大麦——蚕豆大豆——草香木犀酵母菌——鸡大豆——烟草大豆——秋水仙人——胡萝卜番茄——马铃薯人——小鼠
细胞来源
三、动植物细胞的融合过程
植物细胞融合过程
人造小鼠培育过程示意图
四、细胞融合的意义ຫໍສະໝຸດ 理论上说任何细胞，都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。理论上说任何细胞，都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。的遗传物质交换提供了有效途径。体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体亦可发生重组，裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新亦可发生重组的核外遗传系统。的核外遗传系统。淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。
实验操作
1. 在公鸡翼下静脉抽取2ml鸡血，加入盛有8ml的 Alsever液中，使血液与Alsever液的的比例达 1∶4，混匀后可在冰箱中存放一周； 2. 取此储存鸡血0.2ml加入0.8ml的0.85％生理盐水， 0.2ml 0.8ml 0.85 充分混匀，1500r/min离心5min，弃去上清，加入 1ml的0.85％生理盐水，重复上述条件离心两次。最后弃去上清，加GKN液0.8ml，离心； 3. 弃去上清，加入0.3ml的GKN溶液，制成细胞悬液；（也可以用血球计数板计数，用GKN液将其调整为106个/ml）；

细胞生物学实验-细胞融合

细胞融合应用
一. 单克隆抗体 1975年英国科学家 Milstein和Kohler将产生抗体的淋巴细胞同肿瘤细胞融合，成功建立了单克隆抗体技术，而获得1984年诺贝尔医学和生理学奖。
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1984 "for the discovery of the principle for production of monoclonal antibodies"
2化学法（聚乙二醇）
PEG: 聚乙二醇（polyethylene glycol, PEG）分子式：HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH 性状：白色蜡状固体，具有强烈的凝集、
沉淀蛋白质的作用分子量〉1000-6000u，可作诱融剂。
20世纪70年代，华裔科学家高国南发现聚乙二醇能诱导细胞融合
显微镜下的细胞融合过程
细胞融合的过程
细胞互相靠近细胞膜融合细胞桥形成细胞质融合细胞核融合
细胞融合主要经过了两原生质体或细胞互相靠近、细胞桥形成、胞质渗透、细胞核融合主要步骤。
细胞桥的形成是细胞融合最关键的一步，融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细胞桥。
细胞融合过程中两个细胞膜的变化
• 来源
前处理
融合的方法主要应用
• 动物细胞不需
仙台病毒,
PEG ，电融合生产单克隆抗体
• 植物细胞脱壁 PEG,电融合创造植物新品种
• 微生物细胞脱壁 PEG,
高产优质新菌种
加入融合剂
未融合
未融合
融合细胞的类型
同核体
同核体
异核体（杂交细胞）
• 同核体：由同一亲本细胞融合而来

《动物细胞融合》幻灯片

单抗导向，药物为
弹头
单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？
2.3单克隆抗体的应用
单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单
（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞
体外培养
小鼠腹腔内培养
获得产生相应抗体的B细胞
√ BB 、B瘤、瘤瘤
（B、瘤）
（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活
治疗疾病和运载药物
主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物
克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是〔 A〕
A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞
B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞
【例5】单克隆抗体是由以下哪种细胞产生的
〔 D〕
B淋巴细胞 B．T淋巴细胞
C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞
【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，以
下实验步骤中错误的选项是B〔〕
（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种： ①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是大量生产选①，小规模生产。选②
（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的__效__应__B_细胞制备的，其化学本质是 ____蛋__白__质___，应用于人体，会作为异物产生免疫反应，解决这个问题的方法是 ___采__用___人__的__效__应___B_细__胞___制__备____。

动物细胞培养的过程(课堂PPT)

英国科学家成功地利用骨髓干细胞培育出了人体心
脏瓣膜组织，估计在3到5年内能培育出人造心脏瓣膜用于
人体移植。
18
更为重要的是，新的细胞培养法有助于人类灵活应对大规模暴发的流感。近年来，高致病性禽流感的爆发总让人担心届时疫苗够不够用。用鸡蛋培养病毒的话，生产多少疫苗必须提前做出精确计划，但一般来说流感暴发时，人们很难在短时间内购置生产疫苗所需的数百万只鸡蛋。而新方法可在很小的生产空间，很快地制造出大批纯净的疫苗。 15
WWW
什么是动物细胞培养?
从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
如何进行细胞培养?
6
动物细胞培养的过程
放入二氧化碳培养箱中培养
思考：
每一步操作的理由或目的是什么？
在培养过程中，出现了哪些我们以前没有涉及过的现象或处理方法？
你觉得在了解细胞培养过程的知识中，应该抓住哪些关键词？
世界上第一个细胞培养生产的流感疫苗上市2007060916动物细胞培养与植物组织培养的区别1培养的起点2培养的结果3培养基的成分1718美国时代杂志评出2007年十大科学发现时代杂志说2007年11月美日科学家宣布他们利用皮肤细胞仿制出具备胚胎干细胞功能的干细胞从而避开了胚胎干细胞研究面临的伦理问题
某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量___多_______。（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是__血__清_可__以__补_充__合__成_培__养__基_中_ 缺乏的物质。细胞培养应在含 5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是_ 维持__培__养__液__p_H__。（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长将 ___停__止____。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更__多_____。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用___胰__蛋__白__酶__消化处理。（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加14入适量的___抗__生__素______。

细胞工程及其在食品工业中应用

第三章细胞工程及其在食品工业中应用
第一节概述
• 细胞工程（cell engineering）：以生物细胞或组织为研究对象，利用细胞生物学和分子生物学技术，应用工程学的步骤，按照预定目标和设计有计划地改变细胞的遗传物质并使之增殖，从而生产有用的细胞生物产品或获得新型生物品种的一门综合性技术。
传代培养
2、应用：
病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体的生产，制皮肤细胞，检测有毒物质的毒性
十代左右 • 原代培养：单个细胞 40~50代左右 • 传代培养：原代培养细胞 • 细胞株： 10到40、50代的细胞，遗传物质没发生改变
• 细胞系：Biblioteka 超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增殖
3、植物组织培养和动物组织培养的比较
植物体
p69
脱分化：植株上已经分化的细胞或组织离体后在培养条件下逐渐恢复到分生状态的过程。愈伤组织：细胞脱分化的结果通常是形成愈伤组织（未分化的细胞团）。已经脱分化的细胞或组织在一定条件下，它们又可以经过胚状体 ( 由体细胞形成的类似合子胚的结构 ) 或愈伤组织再分化出芽和根，从而发育成一个完整的植株，因为在细胞的基因中，除了全套的结构基因外，还有操纵基因，使结构基因不能启动而无法工作。激素则是在一定条件下能打破操纵基因的控制，使结构基因活化。因此，它直接影响和控制细胞的分化。
植物融合细胞成长状态对比,右瓶为地面融合的细胞，左瓶中为太空微重力环境下融合的细胞
动物细胞融合实验使用的小白鼠
三、动植物细胞的融合过程
植物细胞融合过程
人造小鼠培育过程示意图
四、细胞融合的意义
理论上说任何细胞，都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。

动物细胞融合过程示意图.

第四章细胞融合

细胞融合的方法、过程和影响因素PPT课件

新教材高中生物第2章细胞工程 动物细胞融合技术与干细胞技术教师用书苏教版选择性必修3

细胞生物学实验报告——动物细胞融合

动物细胞融合过程示意图

实验八动物细胞融合

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

动物细胞融合

动物细胞融合

实验六 细胞融合(PEG)

细胞生物学实验-细胞融合

《动物细胞融合》幻灯片

动物细胞培养的过程(课堂PPT)

细胞工程及其在食品工业中应用

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