实验三、6 实验三、凯氏定氮法测定总蛋白的含量2011.3
实验二_蛋白质含量的测定-凯氏定氮法1
实验二_蛋白质含量的测定-凯氏定氮法1一、实验原理蛋白质是生物体内重要的营养成分,因此测定样品中蛋白质含量是生物学领域中的一项基础性工作。
凯氏定氮法是测定蛋白质含量的一种常用方法。
由于蛋白质中氮元素的含量较高,因此凯氏定氮法以氮元素计算蛋白质含量,具有简便、准确、重现性好等特点,广泛应用于蛋白质含量的测定中。
该法的基本原理是:将待测样品中蛋白质水解后,将产生的氨基酸再通过氧化还原反应以生成气态氨,利用碱性铜离子氧化氨生成蓝色化合物,蓝色化合物的浓度与样品中氮的含量成正比,从而计算出样品中蛋白质的含量。
二、实验仪器和试剂1. 仪器:水浴器、移液器、分析天平。
2. 试剂:包括0.1mol/L NaOH、1% CuSO4、1% KNaC4H4O6、1% Na2SO4、 Na2CO3和测定氯离子的盐酸铵铁Ⅲ溶液等。
三、实验步骤1. 准备样品:首先将待测样品去除水分,将10mg的样品放入烘箱中加热到60℃,持续4h使其干燥。
取出后冷却,称取约10mg-20mg样品,转移到干净、干燥的燃烧器中。
2. 水解:加入3ml的6mol/L HCl,进行加热水解。
将燃烧器放到水浴器中,加入适量的水,然后用酒精灯或燃气灯加热至沸腾。
持续水解1h,注意不要使燃烧器干燥,需要时加入适量的水。
3. 去除氨:过滤水解液,将滤液倒入容量瓶中,并加入足量的NaOH溶液,使pH值达到9-10。
再加入10ml的Na2SO4溶液,混匀。
然后将瓶口拔开,将瓶口放在水浴器中并加入适量的NaOH溶液,使瓶内的氨气完全挥发,待液面稳定后用盖子盖好。
4. 确定还原态铜离子的数量:取一定量的0.1mol/L NaOH溶液,加入CuSO4和KNaC4H4O6,混匀后加入约1g的Na2CO3,加水定容,制成标准CuSO4溶液。
5. 滴定:取出约5ml水解液,放入锥形瓶中加清水至刻度线,加入50μl的盐酸铵铁Ⅲ溶液,混匀。
用标准CuSO4溶液滴定至液体颜色由黄变蓝。
凯氏定氮法测蛋白质含量
凯⽒定氮法测蛋⽩质含量凯⽒定氮法测蛋⽩质含量原理蛋⽩质是含氮的有机化合物。
⾷品与硫酸和催化剂⼀同加热消化,使蛋⽩质分解,分解的氨与硫酸结合⽣成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离,⽤硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋⽩质含量。
1. 有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4作⽤下,硝化⽣成(NH4)SO42反应式为:2NH2+H2S04+2H=(NH4)2S04(其中CuSO4做催化剂)2. 在凯⽒定氮器中与碱作⽤,通过蒸馏释放出NH3,收集于H3BO3溶液中反应式为:(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O3. ⽤已知浓度的H2SO4(或HCI)标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因⼦,既得蛋⽩质的含量反应式为:(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3试剂所有试剂均⽤不含氨的蒸馏⽔配制。
硫酸铜。
硫酸钾。
硫酸。
2%硼酸溶液。
混合指⽰液:1份0.1%甲基红⼄醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿⼄醇溶液临⽤时混合。
也可⽤2份0.1%甲基红⼄醇溶液与1份0.1%次甲基蓝⼄醇溶液临⽤时混合。
40%氢氧化钠溶液。
0.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液。
仪器定氮蒸馏装置:如图所⽰。
凯⽒定氮法仪器1.安全管2.导管3.汽⽔分离管4.样品⼊⼝5.塞⼦6.冷凝管7.吸收瓶8.隔热液套9.反应管10.蒸汽发⽣瓶操作⽅法1、样品处理:精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品(约相当氮30-40mg),移⼊⼲燥的100ml或500ml定氮瓶中,加⼊0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及20毫升硫酸,稍摇匀后于瓶⼝放⼀⼩漏⽃,将瓶以45度⾓斜⽀于有⼩孔的⽯棉⽹上,⼩⽕加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停⽌后,加强⽕⼒,并保持瓶内液体微沸,⾄液体呈蓝绿⾊澄清透明后,再继续加热0.5⼩时。
凯氏定氮法实验报告
凯氏定氮法实验总结题目:蛋白质浓度测定(微量凯氏定氮法)姓名:穆拉地力·地力夏提学号:074031141一、【实验目的】1. 掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法2. 学会使用凯氏定氮仪并学会用凯氏定氮仪测出小油馕中的蛋白质含量二、【实验原理】凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热,经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程,最后有机氮转变为无机氮硫酸铵,这一过程称为有机物的消化。
为了加速和完全有机物质的分解,缩短消化时间,在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂,加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解,硫酸铜起催化剂的作用。
使用时常加入少量过氧化氢作为氧化剂以加速有机物氧化。
消化完成后,将消化液转入凯氏定氮仪反应室,加入过量的浓氢氧化钠,将NH4+转变成NH3,通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内,硼酸接受氨后,形成四硼酸铵,然后用标准盐酸滴定,直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。
滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数,通过计算即可得出总氮量。
在滴定过程中,滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。
测定出的含氮量是样品的总氮量,其中包括有机氮和无机氮。
以甘氨酸为例,其反应式如下:NH2CH2COOH+3H2SO4 =2C02+3SO2+4H2O+NH3(1)2NH3 +H2SO4 = (NH4)2SO4 (2)(NH4)2SO4+2NaOH=2H2O+Na2SO4+2NH3 (3)反应(1),(2)在凯氏烧瓶内完成,反应(3)凯氏蒸馏烧瓶中进行(图1)。
蛋白质是一类复杂的含氮化合物,每种蛋白质都有其恒定的含氮量(约在14%~18%,平均为16%)。
凯氏定氮法测定出的含氮量,再乘以系数6.25,即为蛋白质含量。
三、【试验器材】1. 凯氏定氮仪2. 电炉3. 消化架4. 锥形瓶100ml(×5)5. 量筒10ml(×1)6. 滴定管(5ml,可读至0.02ml)7. 凯氏烧瓶(×2)8. 玻璃珠9. 吸耳球10.移液管(2ml,5ml,10ml×1)四、【实验试剂】1. 浓硫酸(A.R.)2. 硫酸钾-硫酸铜混合物:硫酸钾3份与硫酸铜1份混合研磨成粉末。
凯氏定氮[精彩]
凯氏定氮实验报告一实验目的1、掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法。
2、掌握凯氏定氮法的操作技术和凯氏定氮仪的使用方法。
二实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系,其中含碳50~55%、氢6~8%、氧20~23%、氮15~17%和硫0.3~2.5%。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征,而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近,一般恒定在15~17%,平均值为16%左右,因此在蛋白质的定量分析中,每测得1克氮就相当于6.25g蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量,再乘以6.25,就可以计算出样品中的蛋白质含量。
这种测定方法就叫做凯氏定氮法,也称克氏定氮。
凯氏(Kjeldahl)定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氮基酸等)的含氮量生物样品中的含氮量可用以下反应来测定:消化:样品与浓硫酸共热时,浓硫酸是有机物脱水,其中的碳、氢二元素被氧化为二氧化碳和水,而蛋白质分解出的氨进一步与硫酸作用生成硫酸铵,反应式如下:有机物(C、H、O、N、P、S)+浓H2SO4 (NH4)2SO4 +CO2 + SO2 + H3PO4此消化反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,加速有机物分解,反应式如下:K2SO4 + H2SO4 = 2KHSO42KHSO4 = K2SO4 + H2O + SO32CuSO4Cu2SO4 + SO2 + O2Cu2SO4 + 2H2SO4 2CuSO4 + 2H2O + SO2样品消化后,要使其中硫酸铵中的氨游离出来,浓碱可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,可借助水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量及一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨与溶液中的氢离子结合,生成铵离子,使溶液中的氢离子浓度降低;然后用标准无机酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止,最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)即可计算出待测样品中的氮含量。
凯氏定氮法测定蛋白质的含量
凯氏定氮法测定蛋白质的含量一、原理:有机含氮化合物与浓硫酸共热消化,氮转化为氨,再与硫酸结合成硫酸铵。
硫酸铵与强碱反应,放出氨。
将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中,再用标准碱溶液进行滴定。
根据测得的氨量,计算样品的总氮量。
二、试剂与材料:浓硫酸、硫酸钾-硫酸铜粉末(称取80g硫酸钾和20g硫酸铜(五水),0.3g二氧化硒研细混合)、30%氢氧化钠溶液、2%硼酸溶液、0.01M标准盐酸、混合指示剂(田氏指示剂)储存液(取50ml0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1%甲基红溶液混合,储存于棕色瓶中备用。
此指示剂在PH5.2为紫色;PH为5.4为暗灰色或灰色;PH5.6为绿色;变色点为PH5.4)、硼酸-田氏指示剂混合液(100ml2%硼酸溶液,滴加约1ml田氏指示剂,摇匀后,溶液呈紫红色)、蛋白质样品、容量瓶、吸管、凯氏烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、微量滴定管、电炉浓硫酸500ml硫酸钾200g硫酸铜200g硼酸50g盐酸200ml甲基红0.5g溴甲酚绿0.5g三、操作方法1、样品处理:固体样品,应在105℃干燥至恒重。
液体样品可直接吸取一定量,也可经适当稀释后,吸取一定量进行测定,使每一样品的含氮量在0.2-1.0mg范围内。
2、消化:取一定量样品,于50ml干燥的凯氏烧瓶内。
加入300mg硫酸钾-硫酸铜混合粉末,再加入3ml浓硫酸。
用电炉加热,在通风厨中消化,瓶口加一小漏斗。
先以文火加热,避免泡沫飞溅,不能让泡沫上升到瓶颈,待泡沫停止发生后,加强火保持瓶内液体沸腾。
时常转动烧瓶使样品全部消化完全,直至消化液清澈透明。
另取凯氏瓶一个,不加样品,其它操作相同,作为空白试验,用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质,以对样品进行校正。
3、蒸馏:将微量凯氏蒸馏装置洗涤(先用水蒸气洗涤)干净。
将凯氏烧瓶中的消化液冷却后,全部转入100ml的容量瓶,用蒸馏水定容至刻度。
吸取20ml稀释消化液,置于蒸馏装置的反应室中,加入10ml30%氢氧化钠溶液,将玻璃塞塞紧,于漏斗中加一些蒸馏水,作为水封。
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法测定蛋白质含量简介凯氏定氮法(Kjeldahl method)是一种常用的测定蛋白质含量的方法,它通过将样品中的有机氮转化为氨,然后将氨转化为氨基氮,再由氨基氮计算得出蛋白质的含量。
这个方法的优点是稳定可靠,适用于各种类型的样品。
实验原理凯氏定氮法的实验原理如下:1.样品预处理:将待测样品进行预处理,去除样品中的非氮有机物。
这样可以确保凯氏定氮方法只测定到蛋白质中的氮。
2.消化反应:将预处理后的样品与硫酸相结合,加热至沸腾。
在这个过程中,有机氮将被转化为氨。
3.碱化反应:将消化后的样品中的硫酸中和,加入过量的氢氧化钠溶液,使样品呈碱性。
4.蒸馏捕收:将碱化后的样品进行蒸馏,捕集捕集样品中的氨。
5.滴定:将捕集到的氨溶液与酸反应,使用盐酸或硫酸等强酸进行滴定,直至中和反应结束,测定出反应过程中消耗的酸的体积。
6.计算:根据滴定所消耗的酸的体积,计算出样品中的氨的量,再根据氨和蛋白质含氮的摩尔比例,计算出样品中蛋白质的含量。
实验步骤以下是凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验步骤:1.准备样品:根据实验需要,准备待测样品。
样品的选择应根据实验目的和样品的特性进行。
2.样品预处理:将样品经过细碎、研磨等处理,去除样品中的非氮有机物。
3.消化反应:将预处理后的样品与浓硫酸相结合,加热至沸腾。
消化时间一般为2小时。
4.碱化反应:将消化后的样品中的硫酸中和,加入过量的氢氧化钠溶液,使样品呈碱性。
5.蒸馏捕收:将碱化后的样品进行蒸馏,捕集捕集样品中的氨。
6.滴定:将捕集到的氨溶液与酸反应,使用盐酸或硫酸等强酸进行滴定,直至中和反应结束。
7.计算:根据滴定所消耗的酸的体积,计算出样品中的氨的量,再根据氨和蛋白质含氮的摩尔比例,计算出样品中蛋白质的含量。
实验注意事项1.在进行样品消化时,必须控制好加热温度,避免样品的溢出和烧焦。
2.在进行滴定时,应注意控制滴液的速度,避免过量的酸滴入。
3.实验过程中需注意个人安全,避免触及强酸和强碱。
凯氏定氮法测定蛋白含量原理解析
实验凯氏定氮法测定面粉中的粗蛋白质含量一、实验目的与要求:1. 掌握微量凯氏法测定蛋白质总氮量的原理及操作技术。
2. 掌握凯氏定氮法的样品消化、蒸馏、吸收及滴定等基本操作技能与含氮量的计算。
二、实验原理样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,其中C、H 形成CO2、H2O逸出,而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵留在酸液中。
然后将消化液碱化,蒸馏,使氨游离,用水蒸气蒸出,用硼酸吸收。
吸收氨后的硼酸再以标准盐酸溶液滴定所生成的硼酸铵,根据标准盐酸溶液消耗量可计算出总氮量,再折算为粗蛋白含量。
2NH2-(CH2)2-COOH + 13H2SO4 = (NH4)2 SO4 + 6CO2↑+12SO2↑ + 16H2O(NH4)2 SO4 + 2NaOH = 2NH3↑ + Na2SO4 + 2H2O2NH3 + 4H3BO3 = (NH4)2 B4O7 + 5H2O(NH4)2 B4O7 + 2HCl + 5H2O = 2NH4Cl + 4H3BO3三、样品:面粉四、仪器与试剂仪器:凯氏烧瓶、微量凯氏定氮装置、微量滴定管、加热套1000W试剂:所有试剂均用不含氮的蒸馏水配制。
1. 消化试剂:浓H2SO4 硫酸铜(固体) 硫酸钾(固体)2. 2%硼酸(H3BO3)溶液: 10g硼酸(化学纯)溶解于500m1热水中,摇匀备用。
二组配500ml3. 40%NaOH溶液准确称取面粉1.0~1.2g左右于定量滤纸上,包好,塞入干燥的定氮烧瓶中(勿粘附在瓶壁上),加入0.5gCuSO4、6g K2SO4及25mL浓硫酸,加数粒玻璃珠,轻轻摇匀后,用电炉以小火加热,待泡沫停止产生后,加大火力,至液体变蓝绿色透明后,再继续加热微沸30分钟。
为了加快消化速度,待泡沫消失后,可添加双氧水,每次加4-5ml。
注意,每次添加双氧水时,就从热源上取下定氮瓶,待消化液冷却至70-80℃后,方可加入30%浓度的双氧水。
凯氏定氮法实验报告
某:马倩学号:0902041144 系年级:09级工业分析蛋白质浓度测定Kjeldahl method for measurement of protein--微量凯氏定氮法摘要凯氏定氮法的仪器设备简单,测定过程也较简便,又能同时测定多个试样,多用于化工生产的常规分析。
但此法不能直接用于硝基化合物,亚硝基化合物,偶氮化合物,肼,等的测定关键词:消化,碱化蒸馏,吸收,滴定Abstract :the Kjeldahl apparatus has the advantages of simple equipment, the determination process is simple, and can simultaneously measure a plurality of samples, are used for chemical production routine analysis. But this method can not be used directly for nitro pound, a nitroso pound, azo pounds, such as hydrazine, determination ofKey words:digestion, alkali distillation, absorption, titration一、【实验目的】1. 掌握凯氏(Kjeldahl)定氮法测定蛋白质含量的原理和方法2. 学会使用凯氏定氮仪二、【实验原理】凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热,经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程,最后有机氮转变为无机氮硫酸铵,这一过程称为有机物的消化。
为了加速和完全有机物质的分解,缩短消化时间,在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂,加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解,硫酸铜起催化剂的作用。
使用时常加入少量过氧化氢作为氧化剂以加速有机物氧化。
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量 实验报告
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告实验原理:
凯氏定氮法是通过测定含氮物质的数量,从而计算出样品中蛋白质的含量。
凯氏试剂是含钾离子和官能羰基的化合物,它与蛋白质中的氨基酸进行反应,在碱性条件下,产生深蓝色的染色。
然后该样品通过消化样品中的蛋白质,并测定生成的氨基酸,从而确定蛋白质含量。
实验步骤:
1、将待测样品称取1.0g,加入100ml蒸馏水中,加压漏斗过滤,过滤液用量筒调整至100ml。
2、分别取3个15ml离心管,分别加入0.5ml、1.0ml、1.5ml的上述过滤液,加入10ml去离子水,倒入3个含3ml凯氏试剂的小烧杯中混匀。
3、将上述混合液加热至沸腾,然后降温至室温。
4、取10ml反应液加入预先消化好的咪唑试液,加0.6ml甲酸(25%质量比),加入2ml亚硝酸钠(0.6mol/L,pH7.6),使溶液变成黄绿色,插入预先调整好的滴定管,滴定0.1mol/L氢氧化钠溶液,直到溶液变成淡黄色。
5、重复2~4步骤,做三次平均。
实验结果:
测得0.5ml、1.0ml、1.5ml三组样品分别消耗10.8ml、21.4ml和32.1ml的0.1mol/L 氢氧化钠溶液。
计算得出每份样品中蛋白质的含量分别为3.24mg、3.22mg和3.18mg,平均值为3.21mg。
实验结论:
本实验通过微量凯氏定氮法测定出样品中蛋白质含量为3.21mg/g,该方法操作简单、准确、重复性好,是一种快速测定蛋白质含量的有效方法。
总蛋白的六种检测方法
总蛋白的六种检测方法(一)凯氏定氮法将血清与强酸一起加热消化,使血清中的含氮化合物转化为铵盐,再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来,最后用酸滴定测定氮量,按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。
应用历史较久,结果较准确,是蛋白质测定的参考方法,但操作复杂,影响因素较多,且不少蛋白质的含氮量并非16%,不适用于日常工作,目前多用于标准蛋白的标定及校正其它的常规方法。
(二)双缩脲法蛋白质中的肽键(-CONH-)在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物,产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。
此反应和二分子尿素缩合后的产物双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与碱性铜溶液作用形成紫红色的反应相似,故称为双缩脲反应。
几分子中含有两个甲酰胺基(-CO-NH2)的化合物都能出现此反应。
因至少含2个-CONH-基团才能与Cu2+络合,所以氨基酸和二肽无此反应。
体液中小分子肽含量极低,故血浆中除蛋白质外几乎不存在可与双缩脲试剂显色的物质,且各种蛋白质显色程度基本相同。
此法简便、准确、重复性好,在10-120g/L。
浓度范围内呈良好的线性关系,批内CV值<2%,但灵敏度较其它方法稍差,是目前临床上最常规的方法。
(三)酚试剂法蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。
Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+,提高了呈色的灵敏度,其中75%呈色靠铜离子产生。
Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。
由于各种蛋白质中酪氨酸和色氨酸的比例不同,如白蛋白含色氨酸为0.2%,而在一些球蛋白中色氨酸含量高达2%~3%,因此使用本法测定纯粹的、单一的蛋白质较合适。
此法灵敏度较高,为10~60ug/ml,因而适用于测定蛋白质含量较少的标本(如脑脊液),但试剂反应易受还原性化合物糖类、酚类及多种药物如水杨酸、氯丙嗪和某些磺胺药的干扰。
(四)紫外分光光度法蛋白质分子内的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm波长处有一吸收峰,依此性质可用于蛋白质定量。
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法测定蛋白质含量【凯氏定氮法测定蛋白质含量】引言:蛋白质是生物体中非常重要的一类有机物质,它在细胞结构、代谢调节、酶催化等方面都起到至关重要的作用。
因此,准确测定蛋白质的含量对于研究生物体的生理功能和代谢过程十分重要。
凯氏定氮法是一种常用的测定蛋白质含量的方法,它利用蛋白质中的氮元素与含氮化合物反应,通过测定反应生成物中的氨基氮含量来确定蛋白质的含量。
本文将一步一步地介绍凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理、实验步骤以及注意事项。
一、原理:凯氏定氮法的原理基于蛋白质是含有较高比例的氮元素的化合物。
测定蛋白质的含量可以通过测定样品中氨基氮的含量来实现,其中氨基氮与蛋白质的含量呈线性关系。
凯氏定氮法的核心步骤是将蛋白质样品与含有氧化剂的酸溶液一起加热,使蛋白质中的氮元素被氧化转化为氨基氮,然后用氨盐指示剂反应形成带有颜色的化合物,最后通过比色分析来测定蛋白质中氮元素的含量。
二、实验步骤:1. 实验前准备:根据实验需求准备蛋白质样品、凯氏试剂、氨盐指示剂等。
2. 样品制备:将蛋白质样品称取适量,加入酸性溶液中溶解,使其完全溶解。
注意保持溶液的酸性,并避免样品中的氨基酸被过度氧化。
3. 氮元素的氧化:将样品溶液与凯氏试剂混合,在适当的温度下加热,使样品中的氮元素被氧化转化为氨基氮。
反应时间根据样品的性质而定,一般为1-2小时。
4. 反应结束:冷却样品溶液,使其达到室温。
反应结束后,样品中的蛋白质会被转化为氨基氮。
5. 比色分析:将反应溶液与氨盐指示剂进行反应,形成带有颜色的化合物。
然后使用分光光度计测定化合物的吸光值。
通过与标准曲线进行比较,可以确定样品中氨基氮的含量,进而计算出蛋白质的含量。
三、注意事项:1. 样品的选择:样品的选择取决于实验的目的,可以是纯蛋白质样品,也可以是含有蛋白质的复杂混合物。
样品的含量和浓度应该适当,以保证实验结果的准确性。
2. 温度和时间的控制:样品与凯氏试剂的加热温度一般为75-105摄氏度,反应时间根据样品的性质而定。
凯氏定氮法测蛋白质含量的原理
凯氏定氮法测蛋白质含量的原理凯氏定氮法,听起来就像个高深莫测的科学名词,其实它可是一种测定蛋白质含量的绝佳方法。
说白了,就是通过测量食物中氮的含量来推算出蛋白质的含量。
简单点说,蛋白质的主要成分就是氨基酸,而这些氨基酸又含有氮。
所以,只要我们能找到氮的踪迹,基本上就能算出蛋白质的量。
想象一下,你在厨房里忙活,突然发现那道菜里的神秘调料,原来就是氮。
哈,这可真是个意外的惊喜!我们来看看这个过程是怎么进行的。
开始的时候,研究人员会把待测的样品放进一个大锅里,没错,就是那种实验室的烧杯。
这时,样品会和浓硫酸混合在一起,像是进行一场化学派对。
硫酸可是个强力的“派对动物”,它能把食物中的有机物质全都分解开,释放出氮。
然后,经过一番折腾,这些氮就变成了氨。
听起来是不是像变魔术?不过,魔术师是化学家,而道具则是他们的试剂。
氨可不能就这样自个儿溜了。
它得被收集起来,接着进入到一个叫做蒸馏的环节。
此时,氨会被转化为氮气,心里是不是有点小激动?在这一过程中,氨和水混合,然后通过蒸汽的方式被分离出来。
这就像是将美味的汤和食材分开,留下清汤,味道更浓郁。
氮气经过测量,化学家们就能得出蛋白质的含量,真是一举两得。
这一过程听起来是不是挺复杂的?其实在实验室里,化学家们早已驾轻就熟。
虽然乍一看很严肃,但背后可是一门艺术。
想象一下,在实验室里,化学家们一边进行实验,一边讨论着各种饮食习惯,就像是参加一场美食聚会。
每当他们看到实验结果,脸上那种恍若发现新大陆的神情,简直让人忍俊不禁。
不过,凯氏定氮法可不是唯一的测定方法。
随着科技的发展,越来越多的测量手段涌现出来。
有人可能会问,为什么还要坚持用这个老方法呢?这可是有原因的。
凯氏定氮法不仅精准,而且适用范围广,特别是在食品行业。
你要知道,蛋白质的含量影响着食物的营养价值,尤其是对运动员来说,那可是“能量来源”的关键。
想想,如果在运动会上,选手们吃了低蛋白的食物,那比赛可就像一锅淡汤,毫无味道。
定量测定蛋白质含量的方法
定量测定蛋白质含量的方法嗨,朋友!你有没有想过,在那些小小的细胞里,蛋白质就像一群勤劳的小工匠,构建着生命的大厦。
那我们怎么知道这里面到底有多少这些重要的小工匠呢?这就涉及到定量测定蛋白质含量的方法啦。
我有个朋友叫小李,他在实验室里整天和这些蛋白质打交道。
有一次,我去他的实验室参观,就像走进了一个充满奥秘的小世界。
他拿着一个小试管,里面装着一些样品,就开始给我讲起了测定蛋白质含量的第一种方法——凯氏定氮法。
凯氏定氮法就像是一场巧妙的化学魔术。
首先呢,把含有蛋白质的样品和浓硫酸一起加热。
这个过程就像是把蛋白质放进了一个超级高温的熔炉里,让它发生一系列复杂的化学反应。
在这里面,蛋白质中的氮元素就被转化成了铵盐。
这一步可不容易啊,就像要在一堆乱麻里找到一根特定颜色的线一样。
接着呢,再通过碱化蒸馏的步骤,把铵盐转化成氨,然后用硼酸吸收氨,最后用标准酸溶液滴定。
嘿,你看,通过这么一长串的操作,就能根据消耗的酸量算出氮的含量啦。
不过你可能会问,这算出来的是氮的含量,怎么就知道蛋白质含量了呢?这是因为啊,一般蛋白质中氮元素的含量是比较固定的,大概在16%左右,就像一个小规律一样。
所以通过氮含量就能推算出蛋白质的含量啦。
但是这个方法也有它的小缺点,要是样品里有其他含氮的非蛋白质物质,就像一些调皮的小捣蛋鬼混在里面,那算出来的结果可能就不太准确了。
还有一种方法叫双缩脲法。
我跟小李聊天的时候,他打了个很有趣的比方。
他说双缩脲法就像是给蛋白质做一个独特的标记。
蛋白质分子里有肽键,就像一个个小挂钩一样。
双缩脲试剂呢,遇到这些肽键就会发生反应,产生一种紫色的络合物。
这个反应可好玩了,就像两个好朋友一见面就紧紧拥抱,然后发出一种独特的信号(变成紫色)。
我们只要用分光光度计测定这个紫色的深浅程度,就能知道蛋白质的含量啦。
这种方法简单又快速,就像抄近路一样,不需要像凯氏定氮法那样复杂的步骤。
可是呢,它的灵敏度不是特别高,如果蛋白质的含量很低,就像在一个大池塘里只有几滴墨水一样,那这个方法可能就不太能准确地检测出来了。
测量蛋白质总量的方法
测量蛋白质总量的方法嗨,朋友!你有没有想过,在我们的身体里,在食物里,蛋白质就像一个个小小的建筑工人,它们可是干着超级重要的活儿呢。
那我们怎么才能知道这里面到底有多少这些“建筑工人”,也就是怎么测量蛋白质总量呢?这可真是个有趣又很有用的事儿啊,今天我就来和你唠唠这个。
咱先说说凯氏定氮法。
这方法就像是一个精明的侦探,专门去揪出蛋白质里的氮元素。
你看啊,大多数蛋白质里氮元素的含量是比较固定的,大概在16%左右呢。
这个方法的步骤还挺有意思的。
首先呢,要把含有蛋白质的样品放到一个特制的容器里,就像是把犯人关进审讯室一样。
然后加入浓硫酸,哇,这硫酸就像一个超级严厉的审讯官,把样品里的氮元素都转化成铵盐。
接着通过一系列的化学魔法,比如说加碱让铵盐变成氨气释放出来,再用酸把氨气吸收了,最后根据酸的用量就能算出氮元素的量啦。
然后再根据氮元素和蛋白质的比例关系,就能算出蛋白质的总量了。
这过程是不是像一场神秘的化学之旅呢?不过呢,这个方法也有个小缺点,要是样品里有其他含氮的非蛋白质物质,那就像混进了假的犯人一样,会让结果偏高呢。
我就想啊,要是能有一种东西像个小筛子,把这些非蛋白质的含氮物质筛出去就好了。
还有一种方法叫双缩脲法。
这个方法就像是给蛋白质做个小标记一样。
蛋白质分子里有一些特殊的结构,就像它们身上独特的纹身。
双缩脲试剂呢,碰到这些有特殊结构的蛋白质就会发生颜色变化,从蓝色变成紫色或者紫红色。
颜色越深,就说明蛋白质的含量越高。
这就好比是我们看天上的星星,星星越亮,就代表它越厉害一样。
这个方法比较简单快捷,不需要像凯氏定氮法那样复杂的操作。
但是呢,它的灵敏度没有凯氏定氮法高,如果蛋白质的量很少,可能就像星星太暗了不容易被发现一样,不太能准确测量出来。
我和我的小伙伴有一次在实验室做实验,就用了双缩脲法。
我的小伙伴着急地说:“哎呀,这个颜色变化怎么这么不明显呢?是不是我们操作错了?”我就安慰他说:“可能是这个样品里蛋白质的量太少啦,就像小蚂蚁力气小,不容易被发现一样。
凯氏定氮法测定蛋白质的氮含量
凯氏定氮法测定蛋白质的氮含量秦润梅【摘要】蛋白质是人体肌肉、血液、内脏、神经、骨骼、韧带、毛发、指甲和皮肤等组织的主要成分,人体许多与生命活动有关的活性物质,如酶、抗体、激素等,都是由蛋白质或蛋白质的衍生物构成。
凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。
【期刊名称】《内蒙古石油化工》【年(卷),期】2011(000)017【总页数】1页(P12-12)【关键词】凯氏定氮法;蛋白质【作者】秦润梅【作者单位】内蒙古化工职业学院材料系,内蒙古呼和浩特010010【正文语种】中文【中图分类】O656.32凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。
当蛋白质与浓硫酸共热时,其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
此过程通常称为“消化”。
但是,这个反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。
消化完成后,在凯氏定氮仪中加入浓碱,可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,借助水蒸汽蒸馏法,将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨与溶液中氢离子结合,使溶液中的氢离子浓度降低,指示剂颜色改变,然后用标准无机盐酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。
根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。
蛋白质的含氮量为16%,即1克蛋白质中的氮相当于6.25g蛋白质,用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。
2.1 实验器材微量凯氏定氮仪1套;50m l凯氏烧瓶4个;移液管;锥形瓶;试管;小玻璃珠;电子万用炉;容量瓶。
2.2 试验试剂浓硫酸;30%氢氧化钠溶液;2%硼酸溶液;标准盐酸溶液(0.01m o l/L)。
粉末硫酸钾-硫酸铜混合物:K 2SO 4与CuSO 4·5H 2O以3∶1配比研磨混合。
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告一、实验目的1.学习微量凯氏定氮法的原理2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术(未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等)二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氨基酸等)的含氮量。
当天然含氮有机物与浓硫酸共热时,其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水,而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
此过程称为“消化”。
此过程进行的相对较为缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。
氧化剂过氧化氢也能加速反应。
消化过程:424423)(2SO NH SO H NH →+322242NH O H SO CO SO H +++→+含氮有机物蒸馏:在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性,加热蒸馏,即可释放出氨气。
反应方程式如下:OH NH SO N OH N SO NH 4424242a a 2)(+→+吸收与滴定:蒸馏所放出的氨,可用硼酸溶液进行吸收,待吸收完全后,再用盐酸标准溶液滴定,直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止(即滴定至蓝紫色),最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。
324333BO H NH BO H NH →+334324BO H CL NH HCL BO H NH +←+三、实验试剂、材料和器材实验材料:食用面粉。
实验试剂:浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.01M HCL 。
实验器材:凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、锥形瓶、100ml容量瓶、酸式滴定管。
四、操作步骤1.消化(1)准确称取1克食用面粉,用称量纸卷好小心送入至50毫升的凯氏烧瓶底部,切勿沾于瓶口或瓶颈上;(2)向另一烧瓶加入1ml水作空白对照;在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物(克氏催化剂)少许,浓硫酸10ml,小瓷片两粒,摇匀;(3)将烧瓶约60度角固定在铁架上,每个瓶口放一小漏斗,在通风厨内的电炉上消化;(4)在消化开始时,应控制火力,不要使液体冲到瓶颈;(5)待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明绿色为止;(6)消化完毕,待烧瓶内容物冷却后,加蒸馏水10ml(注意慢加,边加边摇);(7)冷却后将瓶中内容物转入100ml的容量瓶中,并用蒸馏水洗烧瓶数次,溶液一并倒入容量瓶,最后定容至刻度摇匀,做上记号备用。
凯氏定氮法测定蛋白含量原理解析
凯氏定氮法测定蛋白含量原理解析牛司锋,山东公司品管部凯氏定氮法是目前蛋白质测定最常用的方法,通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量。
由于样品中含有少量非蛋白质含氮化合物,如核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白质的含氮化合物,因此,此法的结果称为粗蛋白质含量。
凯氏定氮法是测定总有机氮量较为准确、操作较为简单的方法之一,可用于所有动、植物食品的分析及各种加工食品的分析,可同时测定多个样品,故国内外应用较为普遍,是个经典分析方法。
凯氏定氮法的原理是食品与浓硫酸、催化剂共同加热消化,使蛋白质分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵,留在消化液中,然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后,再用盐酸标准溶液滴定,根据盐酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数,即可计算出食品中的蛋白质含量。
一、实验试剂1.40%氢氧化钠溶液:称取40g氢氧化钠溶于60mL蒸馏水中;2.4%硼酸溶液:称取4g硼酸溶于蒸馏水中稀释至l00mL;3.0.1mol/L盐酸标准滴定溶液;4.甲基红次甲基蓝混合指示液:将次甲基蓝乙醇溶液(1g/L)与甲基红乙醇溶液(1g/L)按1+2体积比混合;5.蒸馏水;6.硫酸铜;7.硫酸钾;8.浓硫酸。
二、实验步骤及相关原理1.样品处理称取充分混匀的固体试样0.2~2g、半固体试样2~5g或液体试样10~25g(约相当于30~40mg 氮),精确至0.0001g,移入干燥的100mL、250mL或500mL定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜、6g 硫酸钾及20mL浓硫酸,轻摇后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。
小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色并澄清透明后,再继续加热0.5~1h。
取下放冷,小心加入20mL水。
放冷后,移入100mL容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
实验三
微量凯氏定氮法
一、实验目的和要求
(1)掌握利用凯式定氮法测定生物材料中氮的含量和蛋白质的含量的方法
(2)理论用于实践中:比较不同的材料中蛋白质的含量
二、原理
样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫酸氨.经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品氮的含量.以甘氨酸为例:
1.有机物中的氮在强热浓H2SO4 作用下,消化生成(NH4)2SO4
反应式为:H2SO4==SO2+H2O+[O]
R. CH.NH2.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3+ nCO2+mH2O
2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4
2.在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中。
反应式为: NH4++OH-==NH3+H2O
NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-
3. 再用已知浓度的HCI标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量。
三、实验试剂及主要仪器
HCI标准溶液(0.1mol.L-1 )
H3BO3溶液(2%)
H2SO4(浓)
NaOH溶液(30%)
K2SO4(固体) 与CuSO4.5H2O(固体)以3:1混合
0.1%甲基红+0.5%溴甲酚绿乙醇溶液(1:1)混合作指示剂
仪器:定氮仪:定氮仪的优点
要提高蛋白质含量测定的检测速度,其关键首先要加速样品消化煮解的时间,KDN-04A 型定氮仪消化装置,由于采用井式电加热炉,增大了消化管受热面,使消化管连同管内所注入的10mlHSO及试样插入井式炉内加热取得了较佳的热效应,在消化前置入催化剂,进一步加速消化煮解,大大缩短了消化时间,消化管内逸出的SO2等有害气体,通过消化炉上的排污管经抽吸泵从水中排入下水道,有效地抑制有害气体的外逸,省略了实验室中安装毒气通风橱。
蒸馏器内冷却水经稳压器流入蒸汽发生炉内,炉内因水位上升使电极圈产生电流,较快的使水煮沸产生蒸汽,对已消煮的样品进行蒸馏,将消化过程中产生的硫酸铵转化成氨并与硼酸反应生成硼酸氢铵。
四、操作方法:
1、消化:
准确称取干燥样品0.1g(视含蛋白量而定),置于凯氏烧瓶内,加入0.2g(K2SO4,CuSO4.5H2O)混合物也到消化瓶底部,再加5ml浓H2SO4。
盖好逸气管,将消化管放到消化炉上,将排气管接到水龙头上。
设置消化温度开始消化。
初化时设定在300度左右,样品完全溶解后,再升高温度到450度左右。
至少消化2个小时。
消化结束后,关闭电源,将消化瓶架放在冷却架上冷却。
其后沿瓶壁加入45ml纯水,
溶解盐类,混匀。
2、蒸馏
(1)打开定氮仪上的电源开关,将水龙头打开少许,按“蒸气”键,使水慢慢进入蒸气发生炉内,到绿灯闪亮,到红灯闪亮,到红灯熄灭时蒸气即自动喷出。
(2)取定容的消化液20ml加入消化管中,关闭蒸气键,置入消化管,放上带有2滴左右指示剂的2%硼酸溶液的接收瓶(三角瓶内加10ml硼酸溶液),20ml30%氢氧化钠溶液倒入玻璃瓶中,进碱管插入玻璃瓶中,按“碱泵”碱液全部进完后,,再按“蒸气”键通蒸气进行蒸馏和吸收。
自变色起再蒸馏3-4min,移动冷凝管下口使其离开接收液面。
再蒸馏,用纯水洗冷凝管下口,洗液流入吸收液内。
3、滴定:取下接收瓶,用0. 1moL/LHCl标准溶液滴定至暗红色为终点。
五、计算;
V M*0.014(50/20)
X =-------------------------*100%
m*
式中V为消耗的盐酸的体积,M为盐酸的摩尔浓度。
X为氮元素的百分含量
若样品中除有蛋白外,尚有其他含氮物质,则样品蛋白质含量的测定要更复杂一些。
首先需向样品中加入三氯乙酸,使其最终浓度为5%,然后测定未加三氯乙酸的样品及加入三氯乙酸后的样品的上清液中的含氮量,从而计算出蛋白氮,再进一步算出蛋白质的含量。
蛋白氮=总氮—非蛋白氮
蛋白质百分含量(克/%)=蛋白氮元素百分含量×6.25。