叶绿素含量的测定

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叶绿素含量的测定分光光度法

叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是植物和一些原生生物中重要的光合色素之一，它在光合作用中起到接收和转换光能的关键作用。

测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的光合效率和健康状况，以及研究光合作用的机制和调控。

分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法，本文将介绍该方法的原理、实验步骤和数据分析。

一、原理分光光度法测定叶绿素含量的原理是基于叶绿素对光的吸收特性。

叶绿素分子可以吸收特定波长的光，特别是蓝光和红光，而对绿光的吸收较弱。

利用分光光度计测量叶绿素溶液在不同波长的光下的吸光度，可以通过比较吸光度与叶绿素浓度的标准曲线，计算出待测样品中叶绿素的含量。

二、实验步骤1. 制备叶绿素提取液：将适量的鲜叶片（去除茎和大的叶脉）放入离心管中，加入少量酒精，并用研钵捣碎，使叶绿素释放到酒精中。

然后用酒精将研钵中的残渣洗入离心管中，最后用酒精将叶绿素完全溶解。

注意，酒精的使用要避免火源。

2. 离心沉淀：将叶绿素提取液离心10分钟，以沉淀残渣和悬浮物。

3. 分光光度计测量：取离心后的叶绿素提取液，用分光光度计在特定波长下（如645 nm和663 nm）测量其吸光度。

记录吸光度值。

4. 制备标准曲线：取不同浓度的叶绿素标准溶液，用同样的方法测量其吸光度，记录吸光度值。

5. 计算叶绿素含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。

三、数据分析1. 标准曲线的绘制：将各个标准溶液的叶绿素浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制曲线。

利用标准曲线可以通过待测样品的吸光度值，反推出其叶绿素的浓度。

2. 计算待测样品中叶绿素的含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。

四、注意事项1. 实验中应尽量避免阳光直射，以免光线对实验结果的干扰。

2. 操作时应注意安全，避免酒精接触到火源。

3. 叶绿素提取液的制备应充分溶解，避免残渣和悬浮物的影响。

植物生理指标测定

植物生理指标测定1.叶绿素含量测定叶绿素是植物进行光合作用的关键分子，它的含量可以反映植物的光合能力和叶片的健康状况。

叶绿素含量的测定可以通过光谱分析或色度法进行。

其中，光谱分析通过测量叶片吸收和反射的可见光波段来计算叶绿素含量；色度法则是通过提取叶片中的叶绿素，然后用乙醇或乙酸乙酯进行溶解，最后通过比色法来测定其含量。

2.蒸腾速率测定蒸腾是植物通过叶片气孔释放水分的过程，蒸腾速率可以反映植物水分的利用和调节能力。

蒸腾速率的测定方法有多种，常用的有质量法和热法。

质量法是通过称量植物在不同时间段内的重量变化来计算蒸腾速率；热法则是利用蒸腾过程中产生的热量来测定蒸腾速率。

3.气孔导度测定气孔是植物调节气体交换的关键结构，气孔导度可以反映植物对环境中各种因素的响应和适应能力。

气孔导度的测定可以通过气体交换技术进行，常用的方法有蒸腾流速法和扩散阻力法。

蒸腾流速法通过测定气孔腔中水蒸气和二氧化碳的浓度来计算气孔导度；扩散阻力法则是通过测定气孔腔中水蒸气的扩散阻力来计算气孔导度。

4.抗氧化酶活性测定氧化应激是植物面临的常见环境胁迫，而抗氧化酶是植物对抗氧化应激的主要防御系统。

抗氧化酶活性的测定可以通过比色法、荧光法和电化学法等进行。

比色法是基于酶催化反应产生的物质的颜色变化来测定酶活性；荧光法是通过检测酶催化反应产生的荧光信号来测定酶活性；电化学法则是通过测量酶催化反应中释放或吸收的电荷来测定酶活性。

这些测定方法可以用于研究植物对不同环境因子的响应和适应能力，也可以用于评估植物的生长和发育状态。

通过测定植物生理指标，研究人员可以更好地了解植物的生理机制和适应策略，为植物的种植和管理提供科学依据。

叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定是指测定植物体内叶绿素的含量，主要有荧光法、比色法和HPLC法。

1. 荧光法：是利用叶绿素对荧光的强烈敏感性，用来测定叶绿素的一种方法，是生物体叶绿素含量测定最常用的一种方法。

其原理是根据叶绿素在紫外光照射下产生的荧光强度，可以分析出叶绿素的含量。

2. 比色法：是利用叶绿素和其他物质的吸收光谱差异，从而计算叶绿素含量的一种方法。

其原理是，在不同浓度的叶绿素溶液中添加相应量的比色剂，当叶绿素的浓度达到一定时，会产生色谱变化，根据色谱变化的大小，可以计算出叶绿素的浓度。

3. HPLC法：也称为高效液相色谱法，是一种新型的分析技术，用于测定叶绿素的含量。

其原理是将叶绿素以溶剂溶解后，通过高效液相色谱仪将叶绿素从溶剂中分离并测定叶绿素的含量。

叶绿素测定的原理

叶绿素测定的原理叶绿素是一种存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，它聚集在叶绿体中，起着光合作用的关键角色。

叶绿素测定的原理基于叶绿素吸收和反射光谱特性的不同。

叶绿素吸收光谱显示在蓝光和红光区域吸收高，而在绿光区域反射和几乎不吸收。

这是因为叶绿素a和b分子的结构中含有大量的酞咯环和烯丙基它们在不同区域的光谱产生显著的吸收峰。

此外，叶绿素a和b之间的差别在绿光区域更大，这是为什么植物呈现绿色的原因。

1.色度法：色度法是最常用的叶绿素测定方法之一、它通过提取叶片中的叶绿素，并利用叶绿素与乙醇或酸性溶液的反应形成叶绿素酸钠的溶液。

然后，通过测量叶绿素酸钠溶液的吸光度或荧光强度来确定叶绿素的含量。

2.光谱法：光谱法利用不同波长下叶绿素的吸收峰的特性，通过测量叶片或细胞所吸收或反射的光的强度来测定叶绿素的含量。

这种方法可以根据不同的吸收峰来计算叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总量的含量。

3.高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种精确测定叶绿素含量的方法。

它通过将提取的叶绿素样品分离，并用激光或紫外光检测器来检测叶绿素的浓度，从而确定叶绿素的含量。

4.光电导比色法：光电导比色法是一种快速测定叶绿素含量的方法。

它利用叶绿素溶液的电导率与其浓度之间的关系，通过测量叶绿素溶液的电导率来计算叶绿素的含量。

叶绿素测定的原理主要基于叶绿素分子的吸收和反射光谱特性的不同。

通过测量叶绿素吸收或反射的光的强度，可以计算出叶绿素的含量并评估植物的光合作用效率和叶绿素含量的变化。

这种测定对于研究植物的光合作用效率、光合产物的积累以及植物在环境胁迫下的适应性具有重要意义。

叶绿素含量的测定方法

叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上，还是在选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。

叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。

该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。

一、原理分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a和叶绿素b吸收光谱的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度。

叶绿素 a、叶绿素b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm处，同时已知叶绿素a和叶绿素b在663nm处的消光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的消光系数分别为16.75和45.60。

这样叶绿素a和叶绿素b的浓度与他们在663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：D663=82.04C a+9.27C bD645=16.75C a+45.60C b式中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长663nm、645nm处的光密度；C a、C b分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度，单位g.·L-1。

解方程可得到：计算：C a=12.7D663-2.59D645C b=22.9D645-4.67D663C a+b=20.3D645+8.04D663C a ,C b分别为叶a和叶b的浓度，C a+b为叶a和叶b的总浓度，单位为mg·L-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：叶绿素含量（mg·L-1或mg·dm-2）= C*VA*1000式中C：叶绿素浓度（mg·L-1）；V：提取液总体积（ml）；A：叶片鲜重（g）或面积（dm2）二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素：药品：丙酮：乙醇按1：1体积混合成浸提液仪器：分光光度计-1-1-1方法：丙酮乙醇混合液法1．将丙酮、无水乙醇按1：1比例配成混合浸提液。

叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度 A 与其中溶质浓度 C 和液层厚度L 成正比，即A＝α CL式中：α比例常数。

当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。

各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。

这就是吸光度的加和性。

今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、 b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、 b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。

在测定叶绿素a、 b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

已知叶绿素a、叶绿素 b 的 80% 丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。

已知在波长663nm 下叶绿素a、叶绿素 b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04 和 9.27；在波长 645nm 处的吸光系数分别为16.75 和 45.60。

根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb（ 1）A645=16.76Ca+45.60Cb（ 2）式（ 1）（ 2） A663 nm 和 A645nm 为叶绿素溶液在 663nm 和 645nm 处的吸光度， C a C b分别为叶绿素 a、叶绿素 b 的浓度，以 mg/L 为单位。

解方程（ 1）（ 2）组得C a=12.72 A 663— 2.59 A645(3)C b=22.88 A645— 4.67 A 663(4)将 C a+C b相加即得叶绿素总量C TC T＝C a十 C b＝ 20.29A645— 8.05 A 663(5)从公式（ 3）、（ 4）、（ 5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a、 b 浓度另外，由于叶绿素 a 叶绿素 b 在 652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为 30.5 ），也可以在此波长下测定一次吸光度（ A652）而求出叶绿素 a、叶绿素 b 总量所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算：A6521000C T＝(6)34.5有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。

叶绿素含量测定方法

叶绿素含量测定方法一、引言叶绿素是植物体内的一种重要的生物色素，对于植物的光合作用和生长发育有着至关重要的作用。

因此，测定叶绿素含量对于研究植物生理生态学、环境保护等领域具有重要意义。

本文将介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。

二、材料与仪器1. 乙醇：纯度为95%。

2. 醋酸：纯度为99%。

3. 氯仿：纯度为99%。

4. 石油醚：纯度为95%。

5. 甲醛：纯度为37%。

6. 碳酸钠：分析纯。

7. NaOH溶液：浓度为0.1mol/L。

8. 蒸馏水：去离子水或超纯水均可。

9. 离心管、比色皿、移液管等实验器具。

三、方法1. 乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%乙醇中，放置在室温下静置20-24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。

2. 醋酸法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入80%醋酸中，放置在室温下静置24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的80%醋酸；（5）用分光光度计在652nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。

3. 氯仿-甲醛法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%甲醛中，在水浴中加热至90℃保持10分钟；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的氯仿，并振荡混合均匀后静置10分钟；（5）用分光光度计在649nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。

4. 石油醚-乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入石油醚中，放置在室温下静置2-3小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。

5. NaHCO3-NaOH法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入NaHCO3-NaOH缓冲液中，在冰箱中保持暗处理2小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，并用蒸馏水稀释至一定浓度；（5）用分光光度计在665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。

[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定

[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定篇一 : 叶绿素含量测定叶绿素含量的测定根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A,aCL。

,)各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。

今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。

在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

已知叶绿素a、b的80 ,丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式:A663=82.04Ca +9.27Cb………………A645=16.75Ca+45.6Cb………………式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值;Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度。

解联立方程、可得以下方程:Ca=0.0127A663-0.00269A645…………Cb=0.0229A645-0.00468A663…………如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，、式则可改写为:Ca=12.7A663-2.69A645…………Cb=22.9A645-4.68A663…………叶绿素总量CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点，两者有相同的比吸收系数，因此也可以在此波长下测定一次吸光度求出叶绿素总量: CT=A652/34.5CT=A652×1000/34.5………因此，可利用、式可分别计算叶绿素a与b含量，利用式或式可计算叶绿素总量。

叶绿素含量的测定分光光度法

叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是一种广泛存在于植物和一些浮游生物中的绿色色素，它在光合作用过程中起着至关重要的作用。

测定叶绿素含量是研究植物光合作用和生长发育的重要手段之一。

其中，分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。

分光光度法是通过测量溶液对特定波长光的吸收程度来确定其中物质浓度的一种方法。

在测定叶绿素含量时，我们会选择特定波长的光，并测量通过溶液后的光线强度。

根据光线的吸收程度，可以计算出样品中叶绿素的浓度。

在进行叶绿素含量的分光光度法测定时，我们首先需要提取叶绿素。

通常采用乙醇、丙酮等溶剂来破坏叶绿素在叶片中的结构，并将其溶解出来。

然后，将提取液置于离心管中进行离心，以去除悬浮的杂质。

离心后，我们可以得到含有叶绿素的溶液。

接下来，我们需要使用分光光度计来测量叶绿素溶液的吸光度。

分光光度计通过选择特定波长的光源，将光线通过样品后，再通过光电二极管接收光信号，最后转化为电信号。

根据吸光度的定义，可以通过测量进射光和透射光的光强来计算吸光度，并由此得到叶绿素的浓度。

为了准确测定叶绿素含量，我们需要在测量前进行一些预处理。

首先，需要校准分光光度计，以确保测量的准确性。

其次，应该选择适当的波长进行测量。

常用的波长为663纳米和645纳米，这两个波长对叶绿素的吸光度较高。

最后，要注意样品的稀释，以确保其吸光度在仪器检测范围内。

在实际测定中，我们可以根据测量结果计算出叶绿素的浓度，并进行统计分析。

通过比较不同处理组的叶绿素含量，可以了解不同因素对植物生长和光合作用的影响。

此外，还可以将分光光度法与其他方法相结合，来对叶绿素含量进行验证和比对，以提高测定结果的可靠性。

分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。

通过测量溶液对特定波长光的吸收程度，可以计算出叶绿素的浓度。

在实际应用中，我们需要注意校准仪器、选择适当的波长、稀释样品等步骤，以确保测定结果的准确性。

分光光度法的应用为我们研究植物生长和光合作用提供了重要的手段。

叶绿素含量的测定

植物生理学实验叶绿体色素含量的测定----分光光度法姓名学号系别班级实验日期同组姓名摘要:叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。

因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度。

叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。

叶绿体色素95 ％乙醇提取液中叶绿素a 和b 及类胡萝卜素分别在665nm ,649nm 和470nm 波长下具有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素乙醇提取液中叶绿素a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。

一、实验原理与实验目的实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm、649nm和470nm。

根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。

实验目的：掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。

二、实验材料和方法植物材料：菠菜叶片、番茄幼苗叶片实验用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等实验试剂：95%乙醇、石英砂和碳酸钙试验方法：分光光度法三、实验步骤1、叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片（或番茄幼苗叶片）0.5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和CaCO3,再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆,再加95%乙醇10ml,静置10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容量瓶定容至50ml 。

2、吸光度的测定取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照,在波长665、649和470nm下测定吸光度。

3、结果计算依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。

附录：722分光光度计的使用1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开样品室盖，打开电源开关预热20min。

叶绿素含量的测定及计算

叶绿素含量的测定及计算叶绿素含量的测定及计算方法如下：1. 原理：根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

2. 计算公式：根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：A=acl。

式中：a为比例常数。

当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，a 为该物质的吸光系数。

各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。

3. 测定波长的选择：在测定叶绿素a、b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

已知叶绿素a、h的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663 nm 和645 nm，又知在波长663 nm下，叶绿素a、b在该溶液中的吸光系数分别为82.04和9.27，在波长645 nm下分别为16.75和45.60。

4. 计算：叶绿素a（Ca）、叶绿素b（Cb）和类胡萝卜素（Cx）的浓度可以根据测定的波长吸光度计算得出。

计算公式如下：Ca=（13.95*A665-6.88*A649）；Cb=（24.96*A649-7.32*A665）；Cx=（1000*A470-2.05*Ca-114.8*Cb）/245。

5. 叶绿素含量计算：根据求得的色素浓度（mg/L），再计算出各色素含量（mg/g鲜重表示）。

叶绿素含量（mg/g）=（色素浓度mg/L * 提取液体积ml * 稀释倍数）/(1000 * 样品鲜重g)。

上述信息仅供参考，如果想要获取更多关于叶绿素含量测定的专业指导，可以查阅相关的学术文献或者咨询专业科研人员。

叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定：
1实验仪器：高级型分光光度计，离心机，电子天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管。

2实验试剂：丙酮，石英砂。

3实验材料：植物叶片。

4实验步骤：
（1）色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，秤取0.5g放入研钵中加纯丙酮5ml ，少许石英砂，研磨成匀浆，，再加入80%丙酮5ml ，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用80%丙酮定容至20ml。

（2）测定OD值：取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，分别测定663nm、645nm的OD值。

（3）计算：按照公式计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度，再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量。

（4）公式：ρa=12.7A663—2.69A645；
ρb=22.9A645—4.68A663；
ρ（a+b）=ρa+ρb =8.02A663 +20.21A645
注意：ρ代表叶绿素浓度，单位：mg/L 。

1.由于植物叶子中含有水分，故先用丙酮进行提取，以使色素提取液中丙酮的最终
浓度近似80% 。

2.由于叶绿素a、b的吸收峰很陡，仪器波长稍有变差，就会是结果产生很大的误
差，因此最好能用波长较正确的高级型分光光度剂。

叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定叶绿素含量的测定一、实验目的1. 了解分光光度计的工作原理；2. 掌握不同型号分光光度计的操作方计；3. 通过本实验的学习掌握叶绿素含量测定的一种常见的方法------分光光度法。

二、实验原理叶绿素是脂溶性色素，主要存在于以叶绿体为首的色素体中。

在活体中，叶绿素与脂蛋白结合并受到还原系统的保护，对氧和光是稳定的。

叶绿素的80%丙酮提取液在波长663nm，645nm有吸收峰，叶绿素a和叶绿素b 的浓度符合以下公式：Ca=0.0127A663-0.00259A645Cb=0.0229A645-0.00467A663 浓度单位是：g/LCa=12.7A663-2.59A645Cb=22.9A645-4.67A663 浓度单位是：mg/L叶绿素总浓度为： CT=Ca+Cb 若以试液中色素含量来表示，则C(mg/L)?提取液总体积(ml)叶绿素含量（mg/g鲜样）?样品重(g)?1000三、仪器、试剂和材料 1. 仪器紫外-可见分光光度计、研体、25ml容量瓶、玻璃漏斗、玻璃棒、皮头滴管 2. 试剂丙酮（分析纯）、85%丙酮、80%丙酮 2. 材料滤纸、石英砂、碳酸镁四、操作步骤1. 在遮光条件下取出等测样品，剪碎，混匀，称取鲜样0.1-0.5g；2. 样品置于研钵内，加入少量碳酸镁和石英砂，加入一定体积的丙酮研磨匀浆，再加85%丙酮适量继续研磨至组织白色；3. 经铺有滤纸的漏斗将匀浆液转入25ml的容量瓶中，并用80%的丙酮分次清洗研钵和滤纸，最后用80%的丙酮定容。

4. 以80%的丙酮为参比液，在663和645nm波长处测定吸光值（A应在0.2-0.8范围内，浓度过大应用80%丙酮适当稀释）。

五、结果处理按照公式计算出叶绿素a和叶绿素b的浓度，再计算出叶绿素的含量。

六、注意事项1. 在活体内，结合态叶绿素是稳定的，组织一经破坏，叶绿素易被光解。

因此，抽提和测定工作应尽可能避光快速完成。

叶绿素含量测定

植物组织中叶绿素的提取分离和定量测定
原理：根据叶绿素色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

叶绿素a,b在95%乙醇中最大吸收峰的波长分别665nm和649nm，类胡萝卜素为470nm。

可根据列出以下关系式：
Ca=13.95A665-6.88A649
Cb=24.96 A649-7.32 A665
Cx-c=(1000A470-2.05Ca-114.8 Cb)/245
C T= Ca+ Cb
Cx-c是类胡萝卜素。

C T是叶绿素总量
二、材料、仪器及试剂
材料：新鲜的植物材料
95%乙醇
三、方法步骤
从具有代表性的植株上按试验目的采集供试叶5—10张，擦去尘土，用打孔器在叶片的中部取10片叶圆片（称重，因为到时有可能用重量的公式计算），加入10ml95%乙醇，置暗箱中浸提叶绿素，中间振荡数次，直至小圆片完全变白。

用分光光度计进行测定。

叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定之南宫帮珍创作二、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收, 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度, 即可用公式计算出提取液中各色素的含量.根据朗伯—比尔定律, 某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比, 即A＝αCL式中：α比例常数.当溶液浓度以百分浓度为单元, 液层厚度为1cm时, α为该物质的吸光系数.各种有色物质溶液在分歧波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在分歧波长下的吸光度而求得.如果溶液中有数种吸光物质, 则此混合液在某一波长下的总吸光度即是各组分在相应波长下吸光度的总和.这就是吸光度的加和性.今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量, 只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A, 并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度.在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰, 所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最年夜吸收峰.已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最年夜吸收峰分别位于663、645nm处.已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60.根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb（1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2）式（1）（2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度, C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度, 以mg/L 为单元.解方程（1）（2）组得C a 2 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—5 A 663 (5)从公式（3）、（4）、（5）可以看出, , 就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外, 由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交, 两者有相同的吸光系数（均为）, 也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定资料的单元面积或单元重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝5.341000652 A (6)有叶绿素存在的条件下, 用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量.Licht-enthaler 等对Arnon 进行了修正, 提出了80%丙酮提取液中3种色素含量的计算公式：C a ＝A 663—2.59 A 646 (7) C b = A 646—A 663 (8)＝22910427.31000470ba C C A -- (9)式中：C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度；Cx.c 为类胡萝卜素的总浓度；A 663 A 646 A 470 分别为叶绿素提取液在波长663nm 646nm 470nm 下的吸光度.由于叶绿素在分歧溶剂中的吸收光谱有不同, 因此, 在使用其他溶剂提取色素时, 计算公式也有所分歧.绿素a 、叶绿素b 在95%乙醇中最年夜吸收峰的波长分别为665nm 和649nm,类胡萝卜素为470nm,可据此列出以下关系式；C a ＝A 665—A 649 (10) C b = A 649—A 665(11)＝2488.11405.21000470b a C C A --(12)三、资料、仪器设备及试剂（一）资料新鲜（或烘干）的植物叶片.（二）仪器设备1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量0.01g ）；3. 研钵；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管.（三）试剂 1.96％乙醇（或80％丙酮）. 2.石英砂.3.碳酸钙粉.三、实验步伐 1. 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干资料, 擦净组织概况污物, 剪碎（去失落中脉）, 混匀.四、称取剪碎的新鲜样品0.2g, 共3份, 分别放入研钵中, 加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇, 研成均浆, 再加乙醇10ml, 继续研磨至组织变白.静置3～5min.五、取滤纸1张, 置漏斗中, 用乙醇湿润, 沿玻棒把提取液倒入漏斗中, 过滤到25ml 棕色容量瓶中, 用少量乙醇冲刷研钵、研棒及残渣数次, 最后连同残渣一起倒入漏斗中.六、用滴管吸取乙醇, 将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中.直至滤纸和残渣中无绿色为止.最后用乙醇定容至25ml, 摇匀.七、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm 的比色杯内.以95％乙醇为空白, 在波长665nm 、649nm 下测定吸光度.四、实验结果计算与分析按公式(10)、(11)、(12)（如用80%丙酮, 按公式7、8、9）分别计算绿素a 、叶绿素b 和类胡萝卜素的浓度（mg/L ）.(10)、(11)式相加即得叶绿素总浓度.求得色素的浓度后再按下式计算组织中个色素的含量（mg/L 鲜质量或干质量暗示）：叶绿素含量（mg/g ）=1000⨯⨯⨯W NV C式中：C 为色素含量(mg/L);V 为提取液体积 (mL)；N 为稀释倍数；W 为样品鲜质量或干质量(g)；1000即1L=1000ml. 注意事项(1)为了防止叶绿素光解, 把持时应在弱光下进行, 淹没时间应尽量短些.(2)叶绿体色素提取液不能浑浊.可在710nm或750nm下丈量吸光度, 其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时吸光之哦的5%, 否则应重新过滤.(3)用分光光度计法测定叶绿素含量, 对分光光度计的波长精确度要求较高.如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a的测定误差为2%, 叶绿素b为19%, 使用前必需对分光光度计的波长进行校正.校正方法除按仪器说明书外, 还应以纯的叶绿素a和叶绿素来校正（表2-12-1）表2-12-1叶绿素含量测定记载表。