蛋白质的盐析作用PPT课件
生物化学实验PPT课件 3蛋白质的盐析分离和凝胶排阻层析脱盐
珠内部反复穿行，缓慢流出。
流 动 相
固 定 相
实验简述
1. 通过盐析法使鸡蛋卵清蛋白和卵球蛋白分离；通过盐溶法 使沉淀析出的卵球蛋白再次溶解 2. 制备葡聚糖凝胶SephadexG-25凝胶排阻层析柱 3. 通过凝胶排阻层析分离卵球蛋白和盐离子 4. 检测层析后收集的各管样品中的盐离子（醋酸钡法） 5. 检测各管样品中的蛋白质含量（UV法）
用移液枪去除上清（含卵清蛋白） 加50%硫酸铵溶液1.5ml 洗涤 3000rpm，离心3分钟 用移液枪去除上清
实验二 凝胶柱的制备和蛋白脱盐
1. 垂直固定层析柱，并安装乳胶管、止水夹
2. 向层析柱中加入1/3体积的水，以平衡、排出基质和乳胶管中的 气泡；若层析柱流水不畅，应反复正反冲洗柱基质！！
实验三 脱盐后离子测定及蛋白浓度测定
1. 硫酸根离子浓度测定
（决定是否停止洗脱）
醋酸钡与溶液中的硫酸根离子可以形成白色的沉淀，同时不能同蛋 白质形成沉淀。 从每管洗脱液中取1滴加在黑瓷板上，加入1滴醋酸钡溶液，观察沉淀
实验中设阴性对照(双蒸水)和阳性对照(醋酸钡检测溶液) 用++/+/-记录每管硫酸钡沉淀情况
6. 分析结果：盐析分离蛋白及凝胶排阻层析脱盐是否成功？
实验一 卵球蛋白的盐析分离
0.7ml 卵清 + 0.7ml 饱和硫酸铵溶液 （每组2个EP管） 混合均匀 （避免产生气泡） 静置3-5分钟，蛋白质析出
将两管上清合并， 即为样品 3000rpm, 离心3分钟
1ml水充分溶解 卵球蛋白沉淀
3000rpm，离心3分钟
凝胶排阻层析
(分子筛层析、分子排阻层析、凝胶过滤层析)
固定相：常用交联葡聚糖凝胶，如Sephadex系列，有不同凝胶
《盐析法分离蛋白质》课件
盐析法分离蛋白质的步骤
制备盐溶液并调节pH值
选择合适的盐浓度并准确调节溶液的pH值。
加入待分离的蛋白质溶液
将待分离的蛋白质溶液添加到盐溶液中。
分离出蛋白质
通过盐析作用，蛋白质会从溶液中沉淀下来形成团块，可以进行进一步的纯化和分析。
实验注意事项
1 卫生和安全
实验过程中应注意卫生和安全，佩戴实验室 个人防护装备。
《盐析法分离蛋白质》 PPT课件
# 盐析法分离蛋白质 本课程将介绍盐析法分离蛋白质的基本原理、步骤及实验注意事项。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 简介
盐析法是一种常用的蛋白质分离方法。通过利用盐对蛋白质溶解度的影响，可实现蛋白质的有效分离与纯化。
盐析法的原理
盐析法利用盐对蛋白质溶解度的影响，达到分离蛋白质的目的。盐对蛋白质 溶解度的影响是因为盐对水分子的结构及运动方式产生影响。
2 盐溶液浓度
制备盐溶液需要注意选择合适的盐浓度，以 保证盐析效果。
3 pH值的调节
4 蛋白质检测
调节pH值时，应注意正确使用pH计，确保pH 值的准确度。
分离出的蛋白质需要进行检测，可使用凝胶 电泳等方法，以确认纯度和分子量。
结束语
掌握盐析法分离蛋白质的基本原理及操作步骤对于生物学研究具有重要意义。 希望本课程能为大家提供有益的指导和帮助。
蛋白质的盐析现象及原理
蛋白质的盐析现象及原理
在生物化学中，蛋白质的盐析现象是蛋白质分离的一种重要手段。
当溶液中的蛋白质浓度发生变化时，会影响蛋白质在水中的溶解度。
当溶液中的某一种物质浓度超过一定值时，就会析出该物质，这一现象就叫做盐析。
盐析现象可以用化学方式来解释，即溶液中存在着某种盐类时，其溶液会产生某种不可逆的变化，从而使蛋白质沉淀析出。
例如在蒸馏水中加入氯化钙或氯化钡后，蒸出液中就会含有大量的氯化钙和氯化钡。
再如，将牛奶煮沸时，可使其中的蛋白质沉淀析出。
一般来讲，盐析作用有三种：第一种是破坏蛋白质分子内的二硫键；第二种是降低蛋白质的溶解度；第三种是使蛋白质分子间形成空间位阻。
蛋白质的盐析现象与pH值有关：当溶液中存在某种盐类时，该盐类可改变溶液的pH值。
如果某一种盐的浓度比较低，它就会使溶液中的pH值升高；如果该盐浓度比较高，它就会使溶液中的pH值降低。
例如，在牛奶煮沸时，可以加入硫酸铵来降低牛奶中蛋白质沉淀所需的pH值。
—— 1 —1 —。
蛋白质盐析
2.5 蛋白质溶解度 2.0 1.5 lgS 1.0 0.5 0 起始蛋白 -0.5 浓度 -1.0 -1.5
β S0 盐溶
碳氧血红蛋白的lgS 与(NH4)2SO4离子强 度μ的关系
盐析
1 2 3 4 5 6 μ(离子强度)
盐析区: lgS = β - Ks μ
蛋白质溶解度 常数 盐析常数 盐离子强度
MgSO4
NaH2PO4
盐析效果：阴离子 > 阳离子
尤其以高价阴离子更为明显。 常见阴离子的盐析作用顺序：
PO43- > SO42- > CH3COO > Cl > NO3 > ClO4 > I > SCN
阳离子对盐析效果的影响：
Al3+ > H+ > Ba2+ > Sr2+ > Ca2+ > Cs+ > Rb+ > NH4+ > K+ > Na+ > Li+
6.盐析法的优缺点 （1）优点：
① 室温下沉淀物在硫酸铵盐析溶液中长时间放 置不会失活，且无机盐不容易引起蛋白质变性失 活； ② 非蛋白的杂质很少被夹带沉淀； ③ 适用范围广，几乎所有蛋白质和酶都能采用 ④ 设备简单，操作方便。
（2）缺点：
① 沉淀物中含有大量盐析剂 ② 硫酸铵容易分解产生氨的恶臭味，产品不能 直接用于医药上
膜，暴露出疏水区域
+ + ++ + + ++ + ++
pH<pI,带正电， 有水膜，是稳定 的亲水胶体
中性盐 破坏水膜
蛋白质的盐析原理
蛋白质的盐析原理蛋白质的盐析原理是指通过向蛋白质溶液中加入适当的盐类，使得溶液中的盐浓度超过蛋白质溶解度，从而使蛋白质发生沉淀析出的过程。
盐析是一种常用的蛋白质纯化方法，其原理基于蛋白质溶解度的变化。
当溶液中的盐浓度增加时，盐的离子将与蛋白质的水合层相互作用，导致蛋白质的水合层被破坏，使蛋白质失去溶解的能力，从而发生沉淀析出。
蛋白质的溶解度受到多种因素的影响，包括溶剂的种类、溶液的p H值、温度和盐浓度等。
在蛋白质溶液中加入合适的盐类，可改变溶液中的离子浓度，并影响蛋白质的溶解度。
通常情况下，当溶液中加入足够多的盐类后，蛋白质溶解度会降低，使其发生沉淀析出。
蛋白质的盐析过程受到溶剂的影响较大。
蛋白质溶解度通常受溶剂的极性和离子强度的影响。
在水溶液中，离子和极性溶剂分子互相作用，形成水合层，并稳定蛋白质分子的结构，使其保持溶解状态。
而加入盐类后，盐的离子会与水分子或溶剂分子形成水合层，取代蛋白质分子周围的水分子，导致蛋白质的水合层破坏，从而使蛋白质发生沉淀析出。
盐析过程的关键是选择合适的盐类和浓度。
一般来说，常用的盐类有氯化铵、硫酸铵、硫酸钠等。
选择合适的盐类和浓度取决于目标蛋白质的特性和希望得到的纯度。
常见的策略是先选择低浓度的盐溶液，使蛋白质末能发生沉淀。
然后逐渐增加盐浓度，直到蛋白质开始发生沉淀为止。
通过逐渐增加盐浓度，可以实现分级纯化，分离不同的蛋白质组分。
除了盐类的选择和浓度的控制，溶液的p H值和温度也会影响盐析的效果。
溶液的p H值会改变蛋白质的电荷状态，从而影响其与盐的相互作用。
温度的变化会影响水合层的稳定性，进而影响蛋白质的溶解度和盐析效果。
盐析的优点包括简单、快速、操作方便和可扩展性强。
然而，它仅适用于具有明显的溶解度差异的蛋白质。
在选择盐及控制盐浓度时需要根据蛋白质的特性进行优化。
总之，蛋白质的盐析通过改变溶液中的盐浓度，在使得蛋白质溶解度降低的条件下，使蛋白质发生沉淀析出。
蛋白质的盐析与透析
蛋白质的盐析与透析一、实验目的1.了解蛋白质的分离纯化方法2.掌握蛋白质的盐析及透析方法二、实验原理在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。
盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。
蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。
蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。
透析常需较长时间，宜在低温下进行。
三、实验材料和试剂10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液。
四、实验步骤（一）蛋白质盐析取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出；取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。
（二）蛋白质的透析注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。
经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。
再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。
每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。
继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。
实验报告记录透析完毕所需的时间。
附：胶棉半透膜的制备市售5%的胶棉液，加入干燥的150mL锥形瓶中，将锥形瓶横斜不断转动，使瓶的内壁和瓶口都均匀沾有胶棉液。
蛋白质盐析
对于蛋白质，适当浓度的电解质会促进蛋白质的溶解，但是很高浓度的会导致盐析现象的发生，也就是析出蛋白质
盐溶
在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐[即稀浓度]，如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。
这种现象称为盐溶。
稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。
同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合，具有保护蛋白质不易变性的优点，因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐，一般以0.15摩尔/升浓度为宜。
缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。
盐析
向蛋白质溶液中假如高浓度的中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出的现象,叫做盐析.
原理:破坏了蛋白质在水中存在的两个因素(水化层和电荷),从而使蛋白质沉淀.
中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；
当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析.
将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。
盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。
由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。
蛋白质纯化--盐析沉淀法
以上有不当之处，请大家给与批评指正， 谢谢大家！
10
浮沉淀后，在沸水浴中煮沸3分钟，取出置-20℃冰箱 中备用； （8）制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶；按下列上样顺序向 加样孔中添加10μl 样品： 样孔 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 包涵体样20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 包涵 体 空白对照 电泳分离后，染色、脱色、观察目的蛋白质出现在何 种浓度的（NH4）2SO4盐析样孔中，以确定最佳的 盐析条件。
（1）取7支微量离心管，用记号笔在管帽 上标记20%、30%、40%、50%、60%、70% 和80%； （2）以上述离心管作容器分别称取磨细的硫 酸铵晶体末0.057克、0.088克、0.122克、 0.156克、0159克、0.235克和0.281克；
三 操作步骤
（3）分别向上述装有（NH4）2SO4粉末的离心管中 添加0.5ml细胞裂解液，充分振荡使（NH4）2SO4溶 解后，在室温下静置2小时；
（4）将离心管放置于离心机中，以1000转/分转速离 心5分钟后，倾去上清，倒立离心管，以便尽可能多 地去除上清；
（5）添加0.5ml蒸馏水及8μl30%三氯乙酸混匀,静置 10分钟后,离心,尽量去除上清；(因此步会造成蛋白作步骤
（6）将离心管置于快速干燥器中干燥30分钟； （7）向离心管中添加100μISDS-PAGE上样缓冲液悬
（4）将沉淀的蛋白质溶解于尽量小体积的磷酸盐缓冲的生理盐 水中，用Bradford试剂测定蛋白质浓度后，置-20℃冰箱中保存 备用。
四 思考题
1. 为提高蛋白质盐析分离效率，应采取哪些 措施？
2.为测定用硫酸铵盐析法分离某种蛋白质的 最佳硫酸铵浓度，除采用本讲义设计的操作 程序之外，请你设计另一种工作程序测定盐 析目的蛋白质的硫酸铵最佳浓度，并指出两 种方法的优缺点。
盐析法分离蛋白质ppt(共27张PPT)
盐析机理示意图
盐析的机理
①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解 蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏 了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降；
②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降；
③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的 极化，使水活度降低。
盐析沉淀基础
3 等电点沉淀实例
①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝，可先于左右 进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3．O)。工业 生产胰岛素(pI＝5.3)时，先调pH至除去碱性蛋白质，再调pH至除 去酸性蛋白质(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。
②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调后出现含碱性磷酸酯酶 的沉淀物，离心收集沉淀物。用的0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液重新溶
解，加入20～40%饱和度的硫酸铵分级，离心收集的沉淀TrisHCl缓冲液再次沉淀，即得较纯的碱性磷酸酯酶。
4 有机溶剂沉淀原理图
有机溶剂沉淀实例
5 选择性热变性沉淀实例
酵母干粉中加入0.066 mol/L磷酸氢二钠溶液， 37℃水浴保温2 h，室温搅拌3 h，离心收集 上清液，升温至55℃，保温20 min后迅速冷 却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳 定性较高的醇脱氢酶。
图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃） (○)NaCl; (▼)KCl; (◘)MgSO4; (▲)NH4)SO4; (●)Na2SO4; (□)K2SO4; (■)柠檬酸三钠
温度的影响
pH对β的影响
蛋白质起始浓度的影响
二次盐析
盐析操作
①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝，可先于左右进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3．O)。 ③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。 ①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝，可先于左右进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3．O)。 ①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝，可先于左右进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3．O)。 ②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调后出现含碱性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。 不同蛋白质的溶解度曲线 图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃） (○)NaCl; (▼)KCl; (◘)MgSO4; (▲)NH4)SO4; (●)Na2SO4; (□)K2SO4; (■)柠檬酸三钠 3)时，先调pH至除去碱性蛋白质，再调pH至除去酸性蛋白质(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。 ②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调后出现含碱性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。 3)时，先调pH至除去碱性蛋白质，再调pH至除去酸性蛋白质(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。 ②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调后出现含碱性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。 工业生产胰岛素(pI＝5. ②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调后出现含碱性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。 ②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调后出现含碱性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。 3)时，先调pH至除去碱性蛋白质，再调pH至除去酸性蛋白质(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。
蛋白质盐析
蛋白质盐析蛋白质盐析是一种常见的蛋白质纯化方法，通过控制盐浓度从混合物中分离出目标蛋白质。
这篇文章将介绍蛋白质盐析的原理、步骤和优缺点。
一、原理蛋白质在水中存在电离的氨基酸残基，其带正电荷的氨基和带负电荷的羧基相互作用，形成稳定的原生态结构。
而加入盐可以改变水的介电常数和离子强度，使得蛋白质的结构改变，从而通多疏水作用、静电相互作用和氢键作用，有助于部分蛋白质分子形成聚集物析出。
不同的盐对蛋白质的沉淀能力也不同，其依据是盐溶液与蛋白质中结构水分子的竞争作用，比较常用的盐有氯化铵、硫酸铵等。
在盐浓度的变化下，蛋白质分子会发生留下的析出或超滤的现象，达到分离纯化的目的。
二、步骤1. 蛋白质混合物的制备将需纯化的蛋白质溶解于缓冲液（一般pH在7.0至8.0之间），可加入少量辅酶和协因子，以增加纯化效果。
2. 混合物的钝化添加适量的饱和型盐溶液，将蛋白质混合物中所有的蛋白质不均匀地钝化。
3. 稀释接下来稀释混合物，通过逐渐减少盐浓度，使蛋白质处于可溶解的状态，均匀分散到混合物中。
4. 盐浓度逐渐上升加入比起初高一些的盐溶液，也就是盐的浓度慢慢提高，使某些蛋白质不均匀的凝聚沉淀。
5. 蛋白质析出和收集待混合物的盐浓度上升到一定程度，可以把这些在盐浓度下升高时沉淀下来的蛋白质采用分离技术分离获得。
空气干燥可在干燥器中干燥.三、优缺点盐析法是一种简单易行且成本低廉的纯化方法，常见用于生产实践中，能迅速、高效地使纯化目标蛋白质副产物最小，同时纯度在30%至90%不等。
但使用盐析技术纯化蛋白质时对应用域有一些限制，如可行性依赖蛋白质的特性和物理化学属性，大分子蛋白质脆弱，可能在盐析过程中发生脱离和失活。
此外盐析法分离任意两种蛋白质不能很好地区分,通常需要结合其他分离技术，如电泳、分子分析等，以获得更高纯度的目标蛋白质。
总的来说，蛋白质盐析作为常见的蛋白质纯化方法，能够方便高效地得到相对纯净的目标蛋白质，可广泛应用于研究和生产领域中。
蛋白质的盐溶和盐析
蛋白质的盐溶和盐析
蛋白质的盐溶和盐析是研究蛋白质溶解和沉淀过程的一种方法。
盐溶是指通过加入适量的盐类，如氯化钠，使蛋白质分子在溶液中保持稳定的可溶性状态。
在适当的盐浓度下，盐与蛋白质之间的相互作用会减小，从而减少蛋白质分子间的疏水相互作用。
这种减弱的相互作用使蛋白质能够继续保持在溶液中，而不发生沉淀。
然而，当盐的浓度超过蛋白质的耐受范围时，蛋白质会发生盐析现象。
盐析是指蛋白质在高盐浓度下失去其溶解性而发生沉淀。
这是因为高盐浓度增加了蛋白质分子间的离子相互作用，导致蛋白质分子聚集并沉淀出溶液。
盐溶和盐析的过程对于蛋白质分离和纯化具有重要意义。
通过调整盐浓度，可以控制蛋白质在溶液中的状态，以实现其分离和纯化。
《蛋白质的化学性质》幻灯片
(2) 双缩脲反响
上述产物冷却后，加1mL10%氢氧化钠 溶液，摇匀，再加2滴2%硫Βιβλιοθήκη 酮溶液，混 匀，观察有无紫色出现。
于试管中，加1mL清蛋白溶液和 1mL10%氢氧化铜溶液，再加1滴～2滴 2%硫酸铜溶液共热，由于蛋白质与硫酸铜 生成络合物而呈紫色。取1%赖氨酸溶液作 对照，观察颜色变化。
(四) 核蛋白组成的鉴定
《蛋白质的化学性质》幻 灯片
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【实验目的】
1．掌握蛋白质的重要化学性质。 2．了解核蛋白的组成。
〔一〕蛋白质【的实盐析验操作】
取1.5mL蛋白质溶液，参加等体积饱和 硫酸铵溶液〔浓度为50%饱和〕，微微摇 动试管，使溶液混合均匀后，静置数分钟， 球蛋白即析出呈絮状沉淀〔如无沉淀可再 加少许饱和硫酸铵〕，用滤纸滤取上清液， 滤液中再参加固体硫酸铵粉末至不再溶解， 析出的即为清蛋白，再加水稀释，观察沉 淀是否溶解。
1．核蛋白的水解 取20mL酵母核蛋白混悬液于离心管中
离心别离，弃去清液，将沉淀转入小烧 杯中，加15mL 5%硫酸，盖上外表皿在 水浴上煮沸约1h〔煮沸过程中保持原有 体积〕，水解毕，离心别离，取上层清 液作以下检查。
2．核糖的鉴定
于试管中，加1mL 20%间苯二酚盐酸 溶液，以小火加热至沸，迅速参加5滴水 解液，呈现红色，〔如红色不显可再稍 加热〕。
3．磷酸的鉴定 取10滴水解液，置于试管中，加5滴
7%钼酸铵溶液和2滴浓硝酸溶液，小心 于火上加热，即有黄色沉淀生成。
4．嘌呤与嘧啶的鉴定
取约4mL水解液，置于小烧杯中，参 加氨水至微碱性，过滤，在滤液中加 1mL 5%硝酸银铵溶液，静置片刻，即 有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。
实验四五、蛋白质的盐析作用和透析PPT课件
蛋白质溶液：取5ml鸡蛋清，用蒸馏水稀释 至100ml，搅拌均与后用4-8层纱布过滤，新 鲜配制。
蛋白质盐析溶液
其他试剂：0.1%硫酸铜溶液
• 3、实验器材
试管及试管架、透析袋、玻璃棒、线绳、烧杯
2021/3/12
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• 四、操作方法
（1）取1支试管，加入约1ml蛋白质溶液，加 入1%硫酸铜溶液3-4滴，观察沉淀的生成。
解毒剂？
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不可逆沉淀反应—蛋白质发生沉淀时，其 内部结构空间构象遭到破坏，蛋白质分子 由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链， 使原有的天然性质丧失，这时蛋白质已发 生变性。这种变性蛋白已不能再溶解于原 来溶剂中。
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• 三、试剂和器材
• 1、实验材料：鸡蛋
• 2、实验试剂
实验三 蛋白质的盐析作用
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1
• 一、目的要求 了解蛋白质的的沉淀反应
学习盐析操作技术
• 二、实验原理 用大量中性盐使蛋白质从溶液中沉淀析出
的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲 水胶体，蛋白质溶液在高浓度中性盐的影响 下，蛋白质分子被中性盐脱去水化层，
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2
同时所带电荷被中和，结果蛋白质的胶体 稳定性遭到破坏而沉淀析出。析出的蛋白 质仍保持其天然性质，当降低盐的浓度时， 还能溶解。因此，蛋白质的盐析作用是可 逆过程。
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5
• 四、操作方法
（1）取一个烧杯，加入10ml蛋白质氯化钠溶 液和10ml饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约 10min，则球蛋白沉淀析出；
蛋白质沉淀反应蛋白质的盐析作用
蛋白质沉淀反应蛋白质的盐析作用
蛋白质沉淀反应—蛋白质的盐析作用
【实验原理】
盐析现象是指—般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度下降，故向其溶液中加入中性盐至一定浓度时，蛋白质即自溶液中沉淀析出。
盐析作用与两种因素有关：
①蛋白质分子被浓盐脱水;
②分子所带电荷被中和。
蛋白质的盐析作用是可逆过程，用盐析方法沉淀蛋白质时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释时又可溶解。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH有关。
分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如清蛋白)易于析出。
球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中即可析出，而清蛋白需在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
【试剂】
1.鸡蛋清的氯化钠溶液(一份鸡蛋清加10份的0.9%氯化钠溶液)
2.固体硫酸铵
3.10%氢氧化钠溶液
4..1%硫酸铜溶液
【实验操作】
1.取鸡蛋清氯化钠溶液约2ml于试管中，加入硫酸铵粉末，至硫酸铵饱和不再溶解为止，此时溶液颜色为乳白色，。
蛋白质盐析和变性的比较ppt课件
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蛋白质盐析和变性的比较
概念
盐析
蛋白质溶液中加浓轻 金属盐或铵盐溶液， 使蛋白质析出
变性
蛋白质在某些条件作用下凝聚，丧失生 理活性Fra bibliotek变化条件
浓轻金属盐或铵盐溶 受热、紫外线、强酸、强碱、重金属盐，
液
某些有机物等
变化实质 物理变化（溶解度降低） 化学变化
变化过程 用途
可逆 分离，提纯
不可逆 杀菌，消毒等
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2020/10/133实验操作取小试管或离心管加蛋清稀释液1ml及饱和（NH4）SO4 （74.5%）溶液1ml混和后静置10分钟，球蛋白即沉淀 析出，离心十分钟（2000转/分）。
将离心后的上清液（含有清蛋白），吸出1ml加入另一 支小试管，逐渐加入(NH4)SO4结晶粉末，每加一次需用 细玻璃棒充分搅拌，直至粉末不再溶解而达到饱和状态 为止，静置约十分钟，离心十分钟，倾去上清液，此时 的沉淀即为清蛋白。
蛋白质的盐析作用
2020/10/13
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实验目的
掌握盐析的原理和方法 熟练使用基本仪器
2020/10/13
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实验原理
用中性盐类使蛋白质从溶液中沉淀析出的过程称 为蛋白质的盐析作用.
蛋白质是亲水胶体,当加入适量的轻金属盐类时蛋 白质分子即处于高渗透压的溶液中,使蛋白质外周 水化膜被破坏，同时盐类的离子中和了蛋白质分 子的电荷,结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉 淀;但此时蛋白质分子内部的结构没有改变,仍然保 持其天然蛋白质的性质,即可复溶解于原来的溶剂 中.
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向上述两个离心管的沉淀内各加水1ml，用细玻璃棒搅 拌沉淀，观察沉淀能否复溶，此得出什么结论。
2020/10/13
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汇报人：XXXX 日期：20XX年XX月XX日