高效液相色谱定性定量分析方法PPT课件

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【精品课件】高效液相色谱定性定量分析方法

【精品课件】高效液相色谱定性定量分析方法
• 标样的可靠性及其配制的准确度 • 色谱方法的可靠性 • 色谱泵的精确度(GPC的影响更大) • 进样器的准确度,进样技术
定量分析基本要求
• 要有纯物质做标准 • 被定量组分峰要与其他组分达到基线分离 • 符合定性参数要求 • 选择合适定量方法
定量分析基本公式
• 在某些限定条件下,被测组分的浓度与检测器的 响应值成正比的关系。(蒸发光散射检测器浓度 与峰面积不成线性,分别取对数后呈线性。)
两谱联用技术
1 如果标准物质缺乏或难以获得;或由于结构、理 化性质相似,很多物质具有十分接近,甚至相同 的保留值,则保留值定性准确度存在疑问。
2 可以运用红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱和 质谱对化合物进行定性,目前两用技术有: HPLC-紫外光谱,HPLC-红外光谱,HPLC-MS, HPLC-NMR等。
高效液相色谱定性定量分析方法
色谱分析的目的:
对未知组分进行定性分析 对已知组分进行定量分析
根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰 在检测器上的响应信号强度,对该谱峰进行初步定性 定量分析。
液相色谱定性分析 液相色谱定量分析 影响定量分析的因素
色谱峰的定性鉴别:
通过保留值(通常指保留时间)进行定性 需要制定保留时间误差范围
• 相关系数—用来表示线性关系的好坏程度;
• 相关系数越接近1,说明线性关系越好;
• 绘制标准工作曲线时一般选取3-6个不同浓度 的标准样品,相关系数起码应在0.95以上。
如达不到要求,可பைடு நூலகம்存在以下原因:
1 所选浓度范围使检测器的响应值超出了该检测器
2
响应值的线性范围;
2 实验数据的精密度太差,过于分散。
3 无论何种原因,都应重新绘制标准工作曲线 。

高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt

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色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法的分类示意图
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪ 高压梯度洗脱(高压混合,高压进柱,2个 泵。)
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪安捷伦泵:小视频 ▪色谱学堂:泵
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett(茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器:
①固定波长:254nm , 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 : 190 ~ 800mm , 钨灯,氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器: 190~700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的,因 此,篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统

高效液相色谱法3

高效液相色谱法3

2.内标法 内标法分为 工作曲线法 内标一点法 内标二点法 内标对比法 校正因子法 在HPLC中最常用内标对比法。 选择内标物的三个条件(纯、样品中不含有、保留时 间接近),在HPLC中的要求与GC完全一致。一般可选择 一个化学结构与待测物质相似、物理性质相近的纯物质作 为内标物,加到待测样品溶液中,经过样品前处理后进样。 使用内标法可抵消因仪器稳定性差、进样量不够准确等原 因带来的实验误差。
(一) 多环芳烃的分析 一 多环芳烃的分析(图21-18) 多环芳烃的分析,可用反相或吸附色谱法分析。反 相色谱法用ODS柱,用乙腈−水或甲醇−水为流动相。但用 甲醇−水时,保留时间较长,因此多采用梯度洗脱。多环 芳烃也可用硅胶(YWG等)柱,以不含水的正己烷为流动相, 也能获得较好的分离效果,但需注意溶解样品的溶剂应与 流动相的性质相近。许多多环芳烃是致癌物质,其含量监 测在食品分析与环境保护监测中都有实用意义。
(1)内标对比法: 这种方法不需知校正因子又具有内标法的定量准确 度与进样量无关的特点,方法简便实用。在药物分析中分 析结果(含量)常用标示量%表示:
( Ai / As )样品 (ms )样品 W 标示量% = × × ×100% ( Ai / As )对照 (ms )对照 m
(21.13)
式中(ms)样品与(ms)对照分别是内标物在试样溶液及对照溶液 中的量,W为平均片重(或丸重等),m是取样量,其它符 号的含义同GC章。若试样溶液与对照溶液中加人内标物 的量相等,所称取的样品重与平均片重相同,则上式的后 二项均等于1。
A的标示量%=(178024/202694)÷(154856/171222)×100%=97.l% P的标示量%=(820968/202694) ÷(692272/171222)×100%=100.l% C的标示量%=(407792/202694) ÷(372221/171222)×100%=92.5%

高效液相色谱法 (HPLC)ppt课件

高效液相色谱法 (HPLC)ppt课件
Chromatography)
总之,HPLC与经典LC相比, 使用时更方便, 对操作者的依赖性更小。HPLC的高重现性和 连续的定量检测导致了定性和定量分析结果具 有较高的准确性和精密度。
经典LC的特点:简精便选课件,PPT填料一次使用。 9
高效液相色谱仪基本装置
进样阀 色谱柱
检测器
流动相 高压泵
● 通用检测器与选择型检测器
● 浓度型检测器和质量精选型课件检PPT测器
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检测器的线性、灵敏度和柱外效应三个基本特性直
接影响色谱定量分析的准确度、精密度和再现性。
◆ 检测器的线性范围
大部分厂商都声称它们的检测器在一定的浓度范围内是线性
响应。实际上检测器的线性方程可表示为:y = a c , 只有在三 个数量级的浓度范围内满足0.98 1.02的线性响应的检测器 才是线性的。
高效液相色谱(HPLC) 、毛细管电色谱(CEC) 、微柱液相色
谱(μ- HPLC) 、固相萃取等系统上, 成功地应用于生命科学、药
物学、环境科学等领域的分精离选分课件析PP。T
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精选课件PPT
何为无死 体积柱头 连接?
无限直径 效应(无 限直径 柱)?
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柱填料
硅胶和硅基仍是目前最广泛应用的液相色谱柱填料。 此外还有高分子多孔微球、高疏水表面的多孔碳、无 机金属氧化物等。
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● 基线校正和重叠峰的分离
在色谱分析中,经常会遇到基线漂移和色谱峰不能
完全分离的情况。通常采用谷—谷规则或预设基线漂
移值参数来解决
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色谱仪自动定性和定量分析
定量计算是把各种计算公式编制成应用软件存入计算机,通 过键盘来选择所需方法。微处理机在定量计算时, 一般通过保留 值来识别峰。但由于各种因素的影响, 在重复多次分析中, 保留 值会有一定的变化, 可采用下述两种方法确定保留值的变化范围。

高效液相色谱仪使用与操作规程(学生用PPT培训课件

高效液相色谱仪使用与操作规程(学生用PPT培训课件
高效液相色谱仪使用与操作 规程(学生用ppt培训课件
目录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的安装与调试 • 高效液相色谱仪的使用步骤 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 安全注意事项 • 高效液相色谱仪的发展趋势与展

01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器, 广泛应用于化学、制药、食品、 环保等领域。
检测器技术升级
发展高灵敏度、高稳定性和高可 靠性的检测器,提高检测精度和
可靠性。
应用领域拓展
新药研发
高效液相色谱技术在药物分析、药物代谢和药物 动力学等领域发挥重要作用。
环境监测
用于检测水体、土壤和空气中的污染物和有害物 质,为环境保护提供有力支持。
食品安全
用于检测食品中的农药残留、添加剂、毒素等有 害物质,保障食品安全。
确保实验室环境干燥、 清洁,避免仪器受潮 或落尘。
操作时应避免剧烈振 动仪器,以防损坏内 部组件。
仪器安全
定期检查仪器管路是否漏液,若 有漏液应及时处理。
仪器应放置在通风橱内,以防气 体泄漏对实验人员造成危害。
仪器使用完毕后应关闭所有电源, 并按照仪器说明书进行保养。
数据安全与保密
操作过程中避免无关人员靠近 仪器,以防误操作导致数据丢 失或损坏。
仪器保养与校正
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02
03
04
定期对仪器进行全面检查,包 括泵、进样阀、色谱柱和检测
器等部件。
根据仪器使用情况,适时清洗 或更换泵内滤网、色谱柱和检
测器。
按照厂家推荐,使用专用工具 和材料进行保养和校正。
定期对仪器进行性能验证,确 保其准确性和可靠性。

《高效液相色谱仪》课件

《高效液相色谱仪》课件
《高效液相色谱仪》ppt课件
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器, 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。

食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初,基于经典液 相柱色谱的原理,开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代,出现了填充柱 和柱切换技术,提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代,出现了高效微 粒固定相和新型检测器,提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度,以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡,以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ,确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求,选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测,并将信号记录下来 ,形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力(如 范德华力、氢键等)影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。

高效液相色谱法培训PPT课件

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注意事项与常见问题解答
样品处理注意事项
01
避免样品污染、损失或变质,确保处理过程的准确性和可重复
性。
常见问题及解决方法
02
针对样品处理过程中可能出现的问题,如回收率低、干扰物质
多等,提供相应的解决方法。
安全与防护
03
注意有毒有害试剂的使用安全,做好个人防护和环境保护工作。
04 方法开发与优化策略
梯度洗脱程序设计思路
初始比例确定
根据待测组分的极性差异,选 择合适的初始流动相比例。
梯度斜率设置
根据组分的分离情况,调整梯 度斜率,使各组分在合适的保 留时间内洗脱出来。
梯度时间设置
确保梯度洗脱过程中,各组分 能够充分分离,同时避免过长 的分析时间。
梯度曲线类型
根据实际需求选择合适的梯度 曲线类型,如线性梯度、凹形
梯度或凸形梯度等。
方法验证内容及标准
精密度
准确度
通过添加回收率试验,验证方法 的准确度,确保测定结果可靠。
考察方法的重复性和中间精密度, 确保测定结果的稳定性。
线性范围
确定方法的线性范围,确保待测 组分浓度在该范围内时,测定结 果准确可靠。
专属性
考察方法对待测组分的选择性, 确保其他共存物质不干扰测定。
长期稳定性
考察样品在规定的储存条件下放置一定时间后的稳定性,以确定 样品的保质期和储存条件。
方法学考察
对分析方法本身进行稳定性考察,包括方法的耐用性、重复性和 中间精密度等指标的评估。
质量控制图绘制和应用
质量控制图绘制
根据长期稳定性考察数据,绘制质量控 制图,包括平均值、标准差和控制限等 指标。
VS
发展历程及应用领域

现代色谱法分析技术—高效液相色谱法(分析化学课件)

现代色谱法分析技术—高效液相色谱法(分析化学课件)

分析乙苯及二甲苯三个异构体的样品,用归一化法定量结果如下,计 算各组分百分含量。
组分 峰面积A 重量校正因子
乙苯 120 0.97
对二甲苯 75 1.00
间二甲苯 140 0.96
邻二甲苯 105 0.98
(乙苯21.15%;对二甲苯17.50%;间二甲苯31.35%;领二甲苯24.00%)
高效液相色谱定量分析方法 ——内标法
高效液相色谱定量分析方法
目录
01 面积归一化法
02 外标法
03 内标法
高效液相色谱定量分析方法
什么是定量分析方法
实质是搞清楚样品里各组分含量有多少的问题 。
高效液相色谱法:能将组分分离后再分析含量 。
高效液相色谱定量分析方法—案例
怎样测出食品中的添加剂是符合标准的呢?
高效液相色谱定量分析方法—案例
高效液相色谱定性分析方法
目录
01 高效液相色谱法定性分析原理
02 高效液相色谱法定性分析方法
高效液相色谱定性分析方法
天麻为天麻片的主药,怎么鉴别 天麻片里是否真正含有天麻呢?
功效 祛风除湿 舒筋通络 活血止痛
医学用途 治疗肢体拘挛 治疗手足麻木 治疗腰腿酸痛
高效液相色谱定性分析方法 01.定性分析原理
高效液相色谱定性分析方法
课后思考
复方感冒片里主要有伪麻黄碱、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、右美沙芬这四种成份,请你结合
前面所学知识,说一说如何采用高效液相色谱法定性鉴别这四种成份呢? 如下图所示,这个样品中是否含有这四种有效成份呢?
高效液相色谱法概念
高效液相色谱法概述
一、高效液相色谱法简介
液相色谱分析是在经典的液体柱色 谱基础上,引入了气相色谱的理论;

定性分析用高效液相色谱法确定未知样中的成分课件

定性分析用高效液相色谱法确定未知样中的成分课件

液相色谱仪工作原理图
三. 仪器和试剂:
1. 高效液相色谱仪,VWD(254nm)检测仪。 2. 色谱柱:C18 3. 超声波发生器或水泵(用于过滤或排气) 4. 注射器:50微升
5. 流动相: 80%甲醇+20%的水,制备 前,先调节水(用酸或缓冲盐)的PH=3.5, 进入系统色谱前,用超声波发生器或水 泵脱气。
3、哪些条件会影响浓度测定值的准确性?
4.、为什么流动相和样品要进行脱气,否 则会产生什么影响?
注意:
关机前,用过缓冲盐溶液必须先用100% 的水冲洗系统(打开排液阀,调流速为 5ml/min,冲洗约5 min,然后调流速为 1ml/min,待流速降下来后,关闭排液阀, 再冲洗冲洗约20 min);
在分配色谱中,组分在色谱柱上的保留程度取决 于它们在固定相和流动相中的分配系数K:
K=(组分在固定相中的浓度)/(组分在流
动相中的浓度)
显然,K值越大,组分在固定相上的停留时间 越长,容易理解:溶质流经色谱柱时,K值越大停 留的时间也越长,K值越小,停留的时间也越短, 当组分在固定相的K不同,就会出现差速迁移,从 而达到分离的目的。
一. 实验目的:
1. 学习高效液相色谱仪的基本操作方法;
2. 学习用高效液相色谱法确定未知样中的 组分,掌握采用高效液相色谱法对物质进行定性分析。
二. 实验原理:
液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分, 由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子 交换等作用的不同,随流动相在色谱柱中运行时,在 两相间进行反复多次(103~106次)地分配过程,使 得原来分配系数具有微小差别的各组分,产生了保留 能力明显差异的效果,进而各组分在色谱柱中的移动 速度就不同,经过一定长度的色谱柱后,彼此分离开 来:

《高效液相色谱HPL》课件

《高效液相色谱HPL》课件
食品添加剂分析
检测食品中添加的色素、防腐剂等物质,确保食品质量和安全。
食品农药残留分析
通过高效液相色谱法测定食品中农药残留量,控制食品安全。
环境样品分析案例
水中有机物分析
利用高效液相色谱法对水中的有机污染物进行分析,了解水体污 染状况。
大气中气态有机物分析
通过高效液相色谱法对大气中的挥发性有机物进行分析,评估空气 质量。
高效液相色谱法是20世纪60年代后期发展起来的一种分离分析技术,具有高分离效能、 高灵敏度、高选择性等优点。
HPLC的原理
高效液相色谱法的基本原理是利用不同组分在固定相和流动相之间的分 配平衡差异进行分离。
当混合物溶液随流动相通过固定相时,各组分在固定相中的吸附、溶解 等作用不同,导致各组分在流动相和固定相之间的分配平衡发生变化,
色谱柱安装
按照色谱柱说明书正确安装色谱 柱,确保其稳定且不受损坏。
色谱柱平衡
在进样前,确保色谱柱达到平衡 状态,以提高分离效果。
检测器操作
检测器选择
根据待测物质的性质和检测需求,选 择合适的检测器类型(如紫外、荧光 、电化学等)。
检测器参数设置
根据待测物质的最大吸收波长、响应 时间等参数进行检测器参数的设置。
定期检查仪器设备的 运行状态,确保其正 常工作。
HPLC仪器设备维护与保养
定期更换易损件,如过滤器、密封圈等。 HPLC仪器设备保养
对仪器设备进行定期的全面保养,包括清洗、润滑和校准等。
HPLC仪器设备维护与保养
01
保养过程中应注意细节,如清洗 管路时要使用适当的溶剂,润滑 部位要使用合适的润滑剂等。
性和可靠性至关重要。
色谱柱
色谱柱是HPLC中进行样品分 离的关键部件,由固定相和流
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