编制说明鸭肝炎病毒1型和3型双重RT PCR检测方法
应用RT-PCR方法检测鸭病毒性肝炎新型和Ⅰ型病毒
应用RT-PCR方法检测鸭病毒性肝炎新型和Ⅰ型病毒柴顺秀;马花;韩英;赵隆寿【摘要】鸭病毒性肝炎病毒是危害养鸭业的重要病毒性传染病,主要感染低日龄雏鸭,临床上分离到的病原主要为鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒和鸭病毒性肝炎新型病毒,为了加快本病的检测速度,尽快确诊病原,根据GeneBank上两种毒株的基因组序列,选择两种毒株的差异基因序列分别设计了一对特异性的检测引物,将两对引物放在一个PCR反应体系中,两种毒株分别进行特异性扩增,根据扩增片段的大小进行鉴别,建立了可以同时检测鸭病毒性肝炎病毒Ⅰ型和新型毒株的复合RT-PCR方法,该检测方法快速,特异性强,灵敏性高,可以用于鸭病毒性肝炎病毒的分型鉴别检测.【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P64-67)【关键词】RT-PCR;检测;鸭病毒性肝炎新型病毒;鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒【作者】柴顺秀;马花;韩英;赵隆寿【作者单位】青海省湟中县动物卫生监督所,青海湟中811600;青海省湟中县动物卫生监督所,青海湟中811600;青海省湟中县动物卫生监督所,青海湟中811600;青海省湟中县动物卫生监督所,青海湟中811600【正文语种】中文【中图分类】S811.6鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis，DVH)是由鸭病毒性肝炎病毒(duck hepatitis virus，DHV)引起的、主要危害雏鸭的一种重要病毒性传染病，该病发病迅速，发病率高，死亡率高，给养鸭业带来巨大的经济损失，严重制约了养鸭业的健康、可持续发展[1-5]。
由于鸭病毒性肝炎病毒存在毒株变异，且变异程度较大，2007年台湾和韩国学者先后证实新型DHV与典型的DHV-I在基因序列上表现出很大差异，且新型DHV与DHV-I不产生血清学交叉反应[6-12]，增加了鸭病毒性肝炎综合防控的难度。
为了加快本病的病原检测，本研究在分析I型和新型鸭病毒性肝炎病毒基因组序列的基础上，选取两种毒株的变异区分别设计了特异性检测引物，建立了可以同时检测鸭病毒性肝炎I型病毒和新型病毒的复合RT-PCR鉴别检测方法，实现了鸭病毒性肝炎I型病毒和新型病毒的快速鉴别诊断，将为该鸭病毒性肝炎的快速检测与诊断提供有效帮助。
用RT—PCR检测鸭肝炎病毒
脏［ 。３ 待 检 病 料 ＨＢ 、 Ｊ ２ ］ 份 ３ Ｂ ５和 Ｔ ｌ 分 别 来 自河 Ｊ， 北、 北京和天津 ， 是从 暴发 鸭病 毒性 肝 炎 的鸭场采集
的有 明显 出血 点 的 病 死 鸭 肝 脏 。５种 病 毒 作 为 对 照 ，
５ ０ 肚 。反 应 程 序 为 ：４ ｌｍｉ 性 ，４ ３ 、 ． Ｌ ９ ℃ ｎ变 ９ ℃ ５Ｓ ４ ℃ ３ 、 ２ ４ ，５个 循 环 后 ７ ℃ 延 伸 ５ｍｉ。 ９ ０Ｓ７ ℃ ５Ｓ３ ２ ｎ 取 Ｐ Ｒ 产 物 ５肚 在 ｌ 琼 脂 糖 凝 胶 中 电 泳 。 以 工 Ｃ Ｌ，
８ ３ ５ｕ ｄ ． ） Ｌ、 ＮＴＰ（ ０ ｍｍｏ ／ ２ ５ ｕ ＲＮａ ｉ （ ０ １ ｌＬ） ． Ｌ、 ｓｎ ４
株是本 室培育 的鸡 胚 化弱 毒疫 苗株 ， 含 毒 鸡胚 尿 为
囊 液 。Ｉ Ｄ ｌ 株 来 源 于 一 株 Ｔ Ｃ 毒 ， 型 ＨＶ Ｃ Ｈ 气Ｃ 为 人 工 病 例 的病 变 肝 脏 。工 Ｄ Ｍ Ｈ 株 、 Ｄ 株 和 型 ＨＶ Ｎ Ｓ Ｈ Ｂ ２ 株分 别 分 离 自 内 蒙 、 东 和 北 京 ，Ｖ 型 Ｄ ＪＨ 山 工 ＨＶ Ｊ Ｈ 分 离 自江 苏 ， 些 毒 株 均 为 人 工 病 例 的 病 变 肝 Ｓ 这
实验室前 期测序 结果 ， 建立 了检测 ＤＨＶ ＲＮＡ 聚合 酶基 因的特异 性 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ方法 。
１ 材 料 与 方 法 １ １ 毒 株 工型 ＤＨＶ ０株 和 工Ｖ 型 ＤＨＶ ３ ． Ｃ８ Ｅ６
Ｌ反 转 录体 系 ： 述 混 合 液 ６ Ｌ、 ×ｂ ｆ ｒ（ Ｈ 上 ５ ｕｆ Ｐ ｅ
Ｕ／ Ｌ Ｌ Ｍ— Ｌ 反 转 录 酶 （ ｇ Ｌ、 ｕ ）ｌ 、 Ｍ Ｖ ５Ｕ／ Ｉ）ｌ
应用RT—PCR技术快速检测鸭I型病毒性肝炎
收稿 日期 ：０ ８ ０ — ７ ２ ０ — ５ ２
作者简介 ： 张祥 斌 （ ９ ７ ） 男 ， 士 ， 理 研 究 员 １６一 ， 硕 助 通 讯 作 者 ： 青梅 （ ９ ２ ） 女 ， 士 ， 教 授 ， — ａｌ ｍ ＠ 谢 １７ － ， 博 副 Ｅ ｍ ｉｑ ｘ ：
ｓ ａ ．ｄ ． ｏ ｕｅ ｕｏ ｎ
妊 毫 － ｝毫 垂 ：ｌｒ 圭 辜 专 壹 辜 毫 奎 、妇 — ， —妊ｒ 圭 窜； 毫 ｝：ｌｒ 圭 ：ｌｒ 鲁、妇 奎 ， ：ｌｒ 鲁壹 船
Ⅱ型 、 Ⅲ型 仅 在英 国和美 国有 报道 ［ 且 这 ２种 血 清型 １ Ｊ ，
沙 门氏菌 生长 ， 并可 改 善动 物肠 道 的微 生 物 区系 。
束 整个 畜产 品生 产链 所有参 与 者 的行 为 ，尽量 避免 因 沙 门氏菌污 染 的畜产 品而 导致 的食 物 中毒 。 只有这 样 ，
才 能确保 畜 产 品在 到 达消 费者 手 中时是 安全 的 。
参考文献 ：
５３２ 合 理使 用抗 菌 剂 内 肉禽 日粮 甲酸钙 添加 量 大 ．． 于０２ ． ％时 ， 使 生 长 和饲料 效 率 下 降 ； 添 加 ０５ ７ 可 而 ． ％～ １ ％的富 马酸 可 以显著 （ ＜ ．５ 促 进 肉禽 生 长 。饲 料 中 Ｐ ００ ） 添 加抗 菌剂 已证 实 能有 效地抑 制 沙 门 氏菌 。中 国农 业 大 学研 究 了各种 抗菌 剂包 括球 虫 药对 口服沙 门 氏 鼠伤 寒 杆菌 培养 物 的雏禽 的影 响 ，发 现各种 抗 菌 剂结 合使 用 能 有效地 减 少沙 门 氏菌在 盲肠 中繁 殖 ５３３ 加 热 处理 ．． 制 粒 过程 中饲 料所 受 到 的热足 以杀 死 沙 门 氏菌 。在 实 际生 产 中 发 现 ，当 饲 料 含 水 量 为 １ ％，加 热到 ８ ℃时 可完 全将 沙 门 氏菌杀 灭 调 查表 ５ ８ 明 ，１ ４ ％的 肉禽 开 食 料 和 ５ ％的蛋 用 种 禽 日粮 样 品都 ８ 有 沙 门 氏菌 存在 ， 蒸汽调 质 和压 粒后 ， ２种 日粮大 经 这 约 只有 ４ ％的 ｝毫 奎 — ， 毫妊ｒ 圭毫 － 毫 圭 ｝，妊 ， ：ｌｒ
鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT—PCR诊断方法的建立
上 海交 通大 学学 报（ 业 科 学版） 农
Ｖ Ｌ６Ｎ 、 ｏ２ ｏ ２
Ａｐ ．０ ｒ２ ０８
文 章编 号 ：６ １９ ６ （０ ８０ － １４ ０ １７ — ９ ４２ ０ ）２ ０ ２ － ３
鸭肝炎病毒 Ｉ 型的 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ诊断方法的建立
高 骏１ ， 孙凤萍 ｔ胡建华 ２王胜 昌２易建 中 ， ，
ｍｅ ｏ ． Ｉ ｗ ｓ ｓ ｏ ａ ｅ ＤＨＶ— ｈ ｔ ｄ ｔ ａ ｈ ｗｎ ｔ ｔ ｈ ｔ ｈ ｌ ＲＮＡ ｏ ｅ ｉｏａｅ Ｏ ｌ ｅ ａ ｌ ｉ ｄ ｂ Ｔ— ＣＲ ａ ｄ ｗｅ ｓ ｑ ｅ ｃ ｄ ｔｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｏ ｆ ｓ ｌｔｓ Ｃ ｕｄ ｂ ｍｐｉ ｅ ｙ Ｒ Ｐ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ ｒ ｄ ｃｓ ｆ ｈ ｔ ｆ ｈ ＲＴ—
关键词 ： 鸭肝炎病毒 Ｉ ；Ｈ 一 ；Ｔ Ｐ Ｒ 型 Ｄ Ｖ １Ｒ — Ｃ
中图 分 类 号 ：８ ８３６５ ￥５． ． ２ 文 献 标识 码 ： Ａ
ＲＴ・ ・ － ＰＣＲ ｅｈ ｄ ｆ ｒ Ｄｅｅ ｔｏ ｆＤｕ ｋ Ｈｅ ａ ｉｉ ｒ ｓＩ Ｍ ｔ ｏ ｏ ｔ ｃｉ ｎ ｏ ｃ ｐ ｔｔｓＶｉｕ
（． 海农业科 学 院 畜牧 兽医研究所 ， １上 上海 ２ １０ ；． ０ １６ ２ 上海 实验动物 研究 中心 ， 上海 ２０ ３） ００ ２
摘
要 ： 据 Ｇ ｎ ｂｎ 根 ｅ ｅａｋ上发表的鸭肝炎病毒 Ｉ Ｄ Ｖ １ 的部分序 列设计 了 １ 引物 Ｄ ／ ２通 过对反应条件 的优化 ， ￣（ Ｈ 一 ） 对 １ ， Ｄ 建立起
Ｇ ｕ １Ｓ Ｎ ｅ ｇ ｐ ｎ Ｈ Ｕ 帆 一 ｕ ＷＡＮＧ Ｓ ｅ ｇ ｃ ａ ｇ，Ｙ ｉｎ ｚ ｏ ｇ Ａ０ Ｊ ｎ， Ｕ Ｆ ｎ － ｉｇ ， ＾ ｈ ｎ － ｈ ｎ ￣ ＩＪａ － ｈ ｎ ＇
用RT-PCR诊断Ⅰ型鸭肝炎病毒
ＴＡ Ｌ Ｈ ＮＷａ． ｌ ， Ｈ ＵＹ ．ｎ ＩＮ ｕ，Ｃ Ｅ ｎｍＩ２ Ｚ Ｏ ｕｅ ｇ ｓ
（． ｐｒ ｎ ｏ ｎｍａ Ｈｕｂ ｎ ｒ Ｖ ｔ ｉａｙ Ｂ ｉｎ ｒ ｕｔｒ ｏａ ｏ ａ Ｃ ｌ ｇ ，ｅｉｇ１２４ 。Ｃ ｉａ １ ａ ｍｅｔ ｆ ｉ ｌ ｓａｄｙ＆ ｅ ｒ ｒ， ｅ ｉｇＡｇｉ ｌ ａ Ｖ ｃｔ ｎｌ ｏｌ ｅ ｉｎ ０ ４ ２ ｈｎ ； Ｄｅ ｔ Ａ ｅｎ ｊ ｃ ｕｌ ｉ ｅ Ｂｊ ２Ｂ ｉｎ ｓ ｔｔｏ Ｍｉ ｏ ｉｌｇ ｎ ｐｄ ｍ ｏｏ ｙ ｅ ｉｇ１０ ７ ，Ｃ ｉａ ．ｅｉｇＩ ｔｕｅ ｆ ｃ ｂ ｏ ｙａｄＥ ｉｅ ｉｌ ，Ｂ ｉｎ ００ １ ｈｎ） ｊ ｎｉ ｒ ｏ ｇ ｊ
ｄ ｓ ａ ｅ ｕ ｋ ｄ ｌ ｕ ｄ ｏ ｌ ｔ ｉ ａ ｉ ｆｄ ｃ ’ ｍ ｂ ｏ ｂ Ｔ Ｐ ｉｅ ｓ ｄ ｄ ｃ ｓａ ｑ ｉ ｆａ ａ ｏ ｄ ｃ ｖｔ ｏ ｕ ｋ Ｓｅ ｒ ｙ Ｒ － ＣＲ ｉ ｎ ｔ ｔ ａ ｅｉｏ ａ ｅ ｉ ｓｗａ ｅ ｎ ｉ ｌｎ ｙ ｙ ｄ ｍｏ ｓｒ ｅ ｔ ｔｔ ｓ ｌｔｄ ｖｒ ｓｔ ａｄ ｈ ｈ ｕ ｈ
Ａ ｓｒｃ ： ｉｅｓ ｆ ｉ ａｅ ｕｋ ｅ ｉｇ ｉｒ ｔ ｒ ｄ ｉ ａｅ ｔ ａ ． ｓａｅ ｔ ａ ｅｅｉ ｃｌ ｅ ｂ ｔａ ｔ Ｌｖｒ ｏ ｓ ｓｄｄ ｃｓ ｎ ｉｎ ｓ ｉ ｅ ｄｅ ｉ Ｂ ｊ ｄ ｔｃ ｗｅ ｍａ ｅ ｓ ｓ ｅ ｌ Ｄｉ ｓ ｅ ｌ ｗ ｒ ｏ ｕａ ｄｉ ｄ ｅ ｍａ ｒ ｓ ｅ ｍａ ｒ ｓ ｉ ｉ ｎ ｔ ｎ
维普资讯
第３ ４卷第 ３ 期
《乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(1 2型)核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)操作规程》.
乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1+2型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）操作规程1.目的规范核酸检测试验操作，确保检测结果的准确性。
2.原理2.1 汇集：吸取8份（或以下）样品到指定的汇集管。
2.2提取：病毒核酸提取的方法为磁珠法。
试剂盒提供之内对照(IC)为不具感染性的假病毒，在进行样品核酸提取前加入样品中，监控提取、扩增和分析的全过程。
标本经裂解液处理后会将病毒外鞘膜破坏，蛋白质变形，使病毒裂解释放出病毒基因组核酸。
加入表面包被有二氧化硅的磁珠颗粒，在高盐环境下带负电荷的核酸吸附到带正电荷的的磁珠颗粒表面。
洗液可以洗去未结合的物质，如变性的蛋白、细胞碎片、PCR抑制物等并降低盐浓度。
纯化的病毒在特定的环境下从磁珠颗粒表面洗脱下来成为扩增的模板。
2.3扩增：采用PCR扩增TaqMan荧光探针标定技术同时对HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV（RNA）进行检测。
在反转录酶的作用下HCVRNA、HIVRNA反转录成cDNA，再与HBVDNA一同通过TaqDNA聚合酶的作用扩增病毒核酸的保守区域，TaqDNA聚合酶5`—3`外切酶活性切割反应系统中带荧光标记的TaqMan探针，随着PCR的进行，荧光信号不断积累。
通过PCR仪的检测血液标本达到和超过荧光阈值的信号给出样品的阴阳性结果。
选择性PCR扩增：采用UNG-dUTP抗污染系统。
在PCR扩增系统中采用UTP代替TTP，产生大量U-DNA片段。
UNG酶特异识别U-DNA片段中含UTP的位点并进行切割，U-DNA被降解后不能作为再次扩增的模板，系统选择性的扩增天然的核酸分子，从而防止了PCR扩增产物的污染。
2.4 质量控制原理为监控实验进行，保证实验结果的准确，在每次检测过程依靠阳性、阴性质控品以及内标进行监测。
2.4.1阴性质控品监控系统性假阳性，如果阴性质控品检测结果为阳性，说明实验存在假阳性的风险，因此实验中的阳性结果需复查。
1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立
河南农业科学，2017，46(2) :116-119Journal of Henan Agricultural Sciences d〇i：10. 15933/ki. 1004-3268.2017.02.024 1型鸭肝炎病毒RT - P C R快速检测方法的建立王永娟，朱善元，王安平，吴双，洪伟鸣，左伟勇(江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏泰州225300)摘要：为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒（D H A V -1)感染的方法，根据D H A V -1的叩7基因 序列设计1对引物，以D H A V -1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板，建立了D H A V -1的特异性R T-P C R检测方法；以10倍梯度稀释的D H A V-1R N A为模板，测定该方法的灵敏度；采 集江苏多地的疑似D H A V - 1感染病料，提取基因组进行R T - P C R扩增，产物经测序鉴定后判断 所建立方法的检测率。
结果显示，建立的方法可以特异性扩增D H A V -1基因保守区360 b p的序列，最低可检测1fg基因组模板，对临床样品检测率为100%。
表明，成功建立了特异性强、灵敏 度高且可以用于临床快速诊断D H A V -1感染的方法。
关键词：鸭；1型鸭肝炎病毒；反转录P C R;检测中图分类号：S855.3 文献标志码：A文章编号：1004 -3268(2017)02 -0116 -04Establishment of RT-PCR Method for Detection ofDuck Hepatitis Vims Type 1W A N G Yongju a n,Z H U Shanyuan,W A N G A n p i n g,W U S h u a n g,H O N G W e i m i n g,Z U O Weiyong (Jiangsu Agri-animal H u s b a n d r y Vocational College/Jiangsu Provincial K e y Laboratory of VeterinaryBio-pharmaceutical H i g h T e c h R e s e a r c h,Taizhou 225300,China)Abstract：In order to establish a rapid detection method for dicnical duck hepatitis virus type l(D H A Y-l) infection,a pair of primers based on v p l gene sequence was designed. Using D H A Y-1or other c o m m o n disease virus genome as template,a specificity R T-P C R method was established. The template was ten times diluted for sensitivity detection. Some suspected D H A Y-1 infected epidemic materials were collected from Jiangsu province. G e n o m e of the materials were extracted and detected followed with sequence determination. The results showed that the established method could specifically amplify v p l conservative region 360 bp sequence. The sensitivity and specificity results showed that the detection limitation was1 fg,and there was no cross reactions with other duch virused. The detection rate of clinical samples was100% . The results showed that a high specificity and high sensitivity R T-P C R method for rapid clinical diagnosis of duck D H A Y-1infection was successfully established.Key words：d u c k；duck hepatitis virus type 1 ;R T-P C R;detection1型鸭病毒性肝炎是由1型鸭肝炎病毒（duck hepatitis virus type 1，D H A V - 1)引起的一种以维鸭肝脏为主要病理变化的急性高度致死性传染病，死 亡率可达90%以上，是危害养鸭业的主要传染病之r[i]*等[2]首次分离并确定，2006年Knn等[3]首次报道其 全基因组序列，2012年其被国际病毒分类委员会(ICTV)列为小核糖核酸病毒科、禽肝炎病毒属[4]。
鸭呼肠孤病毒基因Ⅰ型与Ⅱ型鉴别诊断RT-PCR方法的建立与应用
出大 小分 别 为 ２ ４ ９ 和５ ０ ５ ｂ ｐ 单 一 特 异性 片 段 ， 从 两 种 病 毒基 因组 混合 物 中可 同 时扩 增 出两 条 特 异性 片 段， 而对 鸭源 常见病 毒及 正常 细胞 基 因组在 同等 条件 下检测 均为 阴性 ； 该方 法具 有较 高 的敏 感 性 ， 其 最低 病 毒 检 出量 分 别 为 ０ ． ４ ７ 和Ｏ ． ６ ２ 个 半 数 组 织培 养 感 染剂 量 （ ５ ０ ％ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｄ ｏ ｓ ｅ ， Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ 。 ） ； 对 不 同代 次 、 不 同 时 间提取 的病 毒 Ｒ ＮＡ样 品重 复检 验 ３ 次， 结 果 均 一致 。对 浙江 省 ２ ０ １ １ － ２ ０ １ ５ 年采 集 的 ２ ３ ９ 份 疑似 临床 病料 进 行检 测 ， Ｃ — Ｄ Ｒ Ｖ与 Ｎ— Ｄ Ｒ Ｖ 的阳性 率 分别 为 ２ ． ５ ％（ ６ ／ ２ ３ ９ ） 和３ １ ． ４ ％（ ７ ５ ／ ２ ３ ９ ） ； 通 过 对 阳性 病料Ｐ １ ０ 和Ｐ １ ８ 扩增 序 列 的测 序 也证 实检 测结 果 的准确 性 。本研 究建立 的双 重一 步法 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ可 以有 效 区分两 种基 因型 ＤＲ Ｖ， 且 临床 样 品检测 表 明 Ｎ— ＤＲ Ｖ是 浙江 省流 行 的优 势基 因 型 。本 研 究为 鉴别 诊 断 Ｃ —
鸭呼肠孤病毒基 因 Ｉ型与 Ⅱ型鉴别诊断 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ方法 的建立与应用
鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR诊断方法的建立
鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR诊断方法的建立高骏;孙凤萍;胡建华;王胜昌;易建中【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2008(026)002【摘要】根据Genebank上发表的鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-1)的部分序列设计了1对引物D1/D2,通过对反应条件的优化,建立起了有效的鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR 诊断方法.并应用此方法对近年在上海及周遍地区分离到的2株DHV-1分离毒进行了检测和测序鉴定,结果证实此株分离毒为DHV-1病毒.结果显示建立的DHV-1的PCR诊断方法具有快速、准确的优点.【总页数】3页(P124-126)【作者】高骏;孙凤萍;胡建华;王胜昌;易建中【作者单位】上海农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106;上海农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106;上海实验动物研究中心,上海200032;上海实验动物研究中心,上海200032;上海农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106【正文语种】中文【中图分类】S858.326.5【相关文献】1.1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立 [J], 王永娟;朱善元;王安平;吴双;洪伟鸣;左伟勇2.Ⅰ型鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 [J], 魏雪涛;张晓勇;李银;刘宇卓;张敬峰3.I型鸭肝炎病毒 TaqMan 荧光定量 RT－PCR 方法的建立及初步应用 [J], 刘海燕;赵丽丽;牛银杰;祝明皓;刘胜旺;陈洪岩4.Ⅰ型鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用 [J], 党龙;邓舜洲;张文波;戴一民;陈松昌5.Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒和新型鸭肝炎病毒鉴别RT-PCR检测方法的建立 [J], 何冉娅;罗玉均;孙伟;何逸民;于淼;张桂红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用RT-PCR技术快速检测鸭I型病毒性肝炎
应用RT-PCR技术快速检测鸭I型病毒性肝炎张祥斌;冀君;左珂菁;蓝赐华;马静云;毕英佐;谢青梅【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2008(000)007【摘要】根据Genbank收录的I型鸭肝炎病毒(DHV-I)的VPI基因保守序列,设计合成特异性引物,建立了检测DHV-I的RT-PCR方法.并确定了该方法的特异性与灵敏性;对DHV-I分离毒株进行RT-PCR检测均得到阳性扩增结果.而作为阴性对照的常见4种鸭病病原如鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、鹅副粘病毒均未成功扩增;对DHV-I临床病料进行RT-PCR检测,检测结果与病毒分离结果一致.结果表明,建立的DHV-I的RT-PCR技术具有快速、特异、灵敏的特点.【总页数】3页(P111-113)【作者】张祥斌;冀君;左珂菁;蓝赐华;马静云;毕英佐;谢青梅【作者单位】华南农业大学动物科学学院,广东,广州,510642;华南农业大学动物科学学院,广东,广州,510642;华南农业大学动物科学学院,广东,广州,510642;广东温氏集闭有限公司莆田分公司,福建,莆田,351100;华南农业大学动物科学学院,广东,广州,510642;华南农业大学动物科学学院,广东,广州,510642;华南农业大学动物科学学院,广东,广州,510642【正文语种】中文【中图分类】S858.325.3【相关文献】1.鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR检测方法的建立 [J], 谢丽基;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;范晴2.应用实时荧光定量RT-PCR技术快速检测基因Ⅱ型诺如病毒的价值探讨 [J], 姚秀林3.美洲型和欧洲型PRRSV一步法二重RT-PCR快速检测方法的建立和应用 [J], 于新友;李天芝;王金良;唐娜;李峰;沈志强4.应用套式RT-PCR快速检测鸭坦布苏病毒 [J], 颜丕熙;李国新;吴晓刚;闫丽萍;滕巧泱;李泽君5.荧光定量RT-PCR在快速检测流感病毒A型和B型上的应用研究 [J], 陈传德;黎剑华;卓菲;冷霜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR检测方法的建立
鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR检测方法的建立谢丽基;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;范晴【摘要】为建立可同时鉴别检测鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,根据基因库中鸭Ⅰ型肝炎病毒、番鸭细小病毒和鸭圆环病毒的基因序列,分别设计3对特异性引物,通过三重RT-PCR扩增条件优化、敏感性和特异性试验,建立了鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR方法.使用该方法对同一样品中的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒模板进行扩增,结果均得到与试验设计相符的202 bp(鸭Ⅰ型肝炎病毒),351 bp(鸭圆环病毒)和474 bp(番鸭细小病毒)的特异性扩增条带,对小鸭温病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性.敏感性试验结果表明,该方法最低能检测到1pg的鸭Ⅰ型肝炎病毒RNA、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒DNA.建立的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒感染的检测.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2012(021)011【总页数】5页(P29-33)【关键词】鸭Ⅰ型肝炎病毒;鸭圆环病毒;番鸭细小病毒;三重RT-PCR【作者】谢丽基;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;范晴【作者单位】广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,南宁530001【正文语种】中文【中图分类】S852.6鸭Ⅰ型肝炎病毒（Duck hepatitis virus typeⅠ，DHVⅠ）是雏鸭的一种高度致死的病毒性传染病病原［1］。
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4 附件安徽省地方标准编制说明
检测方型双RT-PC鸭肝炎病型标准名安徽省市场监督管理局下发《关于下201年第一批安徽省地方标准制修订任务来划的函》（皖市监函20151号），编号2019-1-10
安徽省农业科学院畜牧兽医研究负责起草单
安徽省合肥市庐阳区农科南4单位地
参加起草单安徽省动物疫病预防与控制中心
标准起草
序姓单职职电
编制情况
、编制过程简
2011日，收到《安徽省市场监督管理局关于下2019年第一批安徽省地方标准制修计划的函（皖市监[2019] 51号）后，立即成立了标准编制工作小组，分工协作，进行标准制订编工作
标准起草过程标准编制小组成立后，明确了组员间的分工协作，在查阅相关资料和总结前期试研究的基础上由潘孝成牵头编制了标准初稿并将初稿分别发给每位标准起草人进行修改完善202月中旬完成标准送审稿第一版
征求意见情况2022日在安徽省农业科学院网站公开征求意见并发送电子稿至安徽农大学、安徽省兽药饲料监察所及部分市、县疫控中心专家征求意见
、制定标准的必要性和意
鸭肝炎病毒Duck Hepatitis Virus, DHV是一种引起雏鸭鸭病毒性肝(Duck viral hepatitis, DVH主要病原。
鸭病毒性肝炎主要以雏鸭发生肝炎为病理特征，具有高度传染性和接触性，发病迅速死亡高呈世界性分布DH可分三个血清型在我国主要流行的血清型DHV-DHV-感雏鸭发病后的临床症状和病理变化非常相似，并且二者混合感染情况也比较普遍，给该病的正确诊断防治带来了极
大的困难
200年《中华人民共和国农业部公告》112号将鸭病毒性肝炎列为二类动物疫病。
本标准建立RT-PC方法将有助于对鸭肝炎病型型的快速诊断以及有效区分，以达到在准确的诊断基础上展鸭病毒性肝炎的防控工作
、制定标准的原则和依据，与现行法律法规、标准的关系，特别是强制性标准的协调
本标准依据生产中鸭病毒性肝炎诊断需要遵《中华人民共和国动物防疫法及相关法律法规遵守执行国家强制性标准及编制规则
目前尚无“鸭肝炎病型型双RT-PC检测方法”的国家或行业标准
、主要条款的说明，主要技术指标、参数、试验验证的论述（详细说明4．
本标“引物设计为根genban上已发布DHV-DHV-保守序列设计即考虑到引的广泛代表性，又考虑到引物的特异性，且经实际验证，符合设计要求
）本标准中“结果判定PC结果判定，当阳性对照出720b左右642b左右扩增条带阴性对照未出现目的条带时实验结果成立被检样品出720b左右扩增条带DHV-核酸阳性被样品出642b左右扩增条带DHV-核酸阳性
、标准中如果涉及专利，应有明确的知识产权说
、采用国际标准或国外先进标准的，说明采标程度，以及国内外同类标准水平的对比情
、重大分歧意见的处理经过和依
、贯彻标准的要求和措施建议（包括组织措施、技术措施、过渡办法、实施日期等
本标准作为推荐性地方标准，应自本标准发布之日起在省内动物疫病诊断机构、规模鸭场全面推施行
安徽省农业科学院畜牧兽医研究所有安徽省目前唯一一家获CM认证的动物疫病检测机“安省农科院兽医临床诊断指导中心”，该中心对外开展疫病诊断和检测服务，标准获批后，中心利用该准进行鸭病毒性肝炎的诊断，并指导养鸭场开展鸭病毒性肝炎的预防和控制；另外通过各种途径向省动物疫控检测部门等宣贯该标准，建议它们将“鸭肝炎病型型双RT-PC检测方法”列为其诊鸭病毒性肝炎PC诊断方法
、废止现行相关标准的建
1、其它应予说明的事
注：没有的请填写．。