酶联免疫吸附测定法

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酶联免疫吸附测定法(elisa法)

特点二：特异性
其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。
例如乙肝病毒中的表面抗原（HBsAg）、e 抗原（HBeAg）和核心抗体（HBcAg），虽来源于同一病毒，但仅与其相应的抗体结合，而不与另外两种抗体反应。抗原抗体反应的这种特异性使免疫测定能在一非常复杂的蛋白质化合物（例如血清）中测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
显色反应
橘红色黄色棕色兰色蓝绿色
测定波长
492 460 449 425 642 400 500 405 420 360,450 420
碱性磷酸酯酶葡萄糖氧化酶 β-Ｄ－半乳糖苷酶
黄色红色黄色深蓝色荧光黄色
ELISA的种类和变化
（一）双抗体夹心法（二）间接法（三）竞争法（四）双位点一步法（五）捕获法测IgM抗体（六）应用亲和素和生物素的ELISA
生物体系中的化学测量
酶联免疫吸附测定法
裴丹青03081152
复杂生物体系中生命物质的化学测量是揭示生命奥秘的重要手段，在食品检验、疾病诊断和预防的过程中也日益凸现其重要作用。经典的化学分析方法（滴定分析、重量分析、简单的吸光光度法）是以简单离子或分子为检测对象的常量或微量分析，面对生物体系成分复杂且待测物浓度较低的测试条件则往往无能为力。于是，一系列针对生物体系中化学成分的测量方法应运而生。免疫化学分析即其重要成员，它将免疫学知识与化学分析手段有机结合，为生命体系中高特异性、超微量的分析提供了解决方法。

酶联免疫吸附试验操作步骤

1. 溶解标记抗体。以适量的磷酸缓冲液()稀释已标记的酶标记抗体,让其浓度为每盘20-30μ。

2. 溶解待检标样。以液体或稀释液将待检的血清或其他体液样品进行适量稀释,一般为1:100-1:1000。

3. 加样。分别将稀释后的标记抗体和稀释后的待检标样溶液加入相应位置的试验板孔中,孔内最好包含20-30μ的液体。

4. 导入保护液。加入或体液作为阻断剂,防止非特异结合,每孔加入100μ。

5. 导入抗原。加入不同浓度的抗原作为定量标准曲线,以及未加抗原的对照孔。

6. 导入待检血清或体液。将稀释后的待检标样加入对应位置的试验板孔内。

7.孵育。将试验板封口后,室温孵育30分钟-2小时。

8.清洗。用液体洗盘,每孔加入300μ,强力清洗5-10次。

9.加显色底物。加入显色底物,避光孵育10-30分钟。

10.终止反应。加入终止液,如2/浓硫酸停止显色反应。

11.读取光密度值。以未加样对照孔为零点,在450波长下读取各孔吸光值。

12.计算结果。根据标准曲线计算样本或比对阳性比负性 - 值判断结果。

酶联免疫法;酶联免疫吸附试验法

酶联免疫法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）

是一种常用的免疫学实验技术，用于检测样本中特定蛋白质或其他

分子的存在。酶联免疫法通过利用特异性抗体与特定抗原结合的原

理来进行检测。这种方法的原理是将待检测的抗原或抗体与特定的

酶标记的抗体或抗原结合，然后通过酶的底物来检测酶的活性，从

而确定待检测物质的存在或浓度。

酶联免疫法主要分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间

接竞争ELISA等几种类型。直接ELISA直接将被检测的抗原或抗体

吸附在固相载体上，然后加入与其特异性结合的酶标记的抗体或抗原，通过酶的底物来检测酶活性。间接ELISA则是在固相载体上吸

附抗原后，再加入特异性抗体和酶标记的抗体，以增强检测的灵敏度。竞争ELISA则是将待检测的抗原与酶标记的抗原竞争结合，通

过竞争程度来检测待检测物质的浓度。间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的特点，可以用于检测抗体的浓度。

酶联免疫吸附试验法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种高度敏感和特异性的实验技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药工业等领域。它的优点包括操作简便、成本

低廉、高通量性和可定量性等，因此被广泛用于检测疾病标志物、药物残留、植物病原体和基因工程产品等。同时，酶联免疫法也有一些局限性，比如可能受到干扰物质的影响、需要一定的实验条件和设备等。因此，在使用酶联免疫法时需要综合考虑其优缺点，并结合具体的实验要求来选择合适的方法和条件。

酶联免疫吸附法实验步骤

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，其实验步骤大致如下：

1.准备所需的试剂和设备，如酶标板、酶标抗体、抗原、洗涤液等。

2.将抗原或抗体与酶标记物结合，形成酶标抗原或酶标抗体。

3.在酶标板中加入酶标抗原或酶标抗体，并使其与待测样本中的相应抗体或抗

原发生反应。

4.洗涤酶标板，去除未结合的酶标抗原或酶标抗体。

5.加入底物溶液，使酶催化底物生成有色产物。

6.洗涤酶标板，去除未结合的底物。

7.加入终止液，使反应停止。

8.在酶标仪中测量各孔的光密度值，根据标准曲线确定待测样本中的抗原或抗

体的浓度。

需要注意的是，具体的实验步骤可能会因不同的实验需求和试剂而有所差异。在进行实验前，建议仔细阅读试剂说明书和实验指南，确保正确操作。

酶联免疫吸附测定名词解释

酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种用于检测生物样本中特定抗原或抗体的定量分析方法。该方法结合了免疫学技术和酶学技术，可广泛应用于临床诊断、药物研发和生物学研究等领域。

ELISA的基本原理是利用特异性抗体与待测物质（抗原或抗体）结合，在固定的固相支持物上进行特异性结合。通常情况下，ELISA方法包括四个主要步骤：涂覆、孵育、洗涤和检测。

1.涂覆：将特异性抗体或待测物质固定在微孔板的底部或其他固相材料上。涂覆后，待测物质能够与后续加入的样本中的抗原或抗体结合。

2.孵育：将待测样本加入到涂覆好的微孔板中，样本中的抗原或抗体能够与固定在底部的特异性抗体结合。

3.洗涤：通过反复加入缓冲液并倒掉的方法，去除非特异性结合的物质，以减少干扰。

4.检测：加入与被测抗原或抗体结合的酶标记抗体，形成免疫复

合物。随后，再加入酶底物，使酶催化产生反应物。根据反应物的产

生量，可以定量测定待测物的浓度。

ELISA方法使用方便、操作简单，能够高效地进行大规模样本的处理和分析。根据具体的检测目的和待测物质性质的不同，ELISA方法可分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA、夹心ELISA等不同类型。

此外，近年来还发展了一些改进的ELISA方法，如荧光ELISA和化学

发光ELISA等。

ELISA方法在临床诊断中广泛应用，可以用于检测感染性疾病、自身免疫病、肿瘤标记物等。此外，ELISA方法还可以用于药物研发，如筛选药物靶点、评估药物吸收、分布、代谢和排泄等。在生物学研究中，ELISA方法可以用于分析蛋白质相互作用、表达水平的检测和鉴定、细胞因子测定等。

酶联免疫吸附测定法

几种酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪 DNM-9602 标配酶标分析仪
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最适吸收波长为492nm TMB经HRP作用后共产物显蓝色，用HCL或H2SO4
终止后，由蓝色呈黄色，最适吸收波长为405nm 2、AP为磷酸酯酶
一般采用对硝基苯磷酸酯(p-NPP)作为底物。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应
阳性对照品(positive control)和阴性对照品 (negative control)
05%吐温20的磷酸盐缓冲液。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。 1ml于已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
实验原理双抗体夹心法
双抗体夹心法，属于非竞争结合测定。它是检测抗原最常用ELISA，适用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原。其基本工作原理是：利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。复合物的形成量与待测抗原的含量成正比。测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质量(OD值)，即可确定待测抗原含量。
实验器材和药品
固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器。最常用的是聚苯乙烯和聚氯乙烯。它们有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。微量滴定板，量滴定板为8×12的96孔式。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性增加。

酶联免疫吸附法标准

一、概述

酶联免疫吸附法是一种常用的生物检测方法，用于测定抗原或抗体。该方法具有高灵敏度、特异性和准确性等特点，广泛应用于临床诊断、食品安全、环境监测等领域。本文将介绍酶联免疫吸附法的原理、试剂和操作步骤等标准要求。

二、原理

酶联免疫吸附试验（ELISA）是基于抗原抗体反应的检测方法。在固相载体上标记特异性抗原或抗体，与样品中的靶分子结合后，再加入酶标记的抗靶分子抗体，最后通过底物显色反应观察结果。根据颜色深浅程度可以判断样本中靶分子的浓度。

三、试剂

1. 特异性抗原或抗体的纯化溶液：需经过质量控制，确保其准确性和特异性。

2. 酶标抗体的纯化溶液：应选择合适的酶标记抗体，以增强颜色反应的敏感性。

3. 洗涤液：用于去除实验过程中产生的非特异性结合物质。

4. 底物及终止液：用于颜色反应，可根据需要配置不同颜色的底物和终止液。

5. 其他所需辅助试剂：如缓冲液、防腐剂等。

四、操作步骤

1. 准备试剂和设备：按照试剂说明书准备好所有试剂和设备，并确保仪器正常运行。

2. 包被抗原或抗体：将特异性抗原或抗体包被在固相载体上，制备成酶标板。

3. 加样：分别加入待测样品、标准品和阴性对照品，每个样品需设复孔。

4. 温育：将酶标板放置在恒温水浴中保温一定时间，使抗原抗体反应充分进行。

5. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板表面，去除非特异性结合物质。

6. 添加底物：加入酶标抗体，继续温育并洗涤。

7. 显色反应：加入底物溶液，观察并记录颜色变化。

8. 终止反应：加入终止液，停止显色反应。

9. 检测与分析：用酶标仪测量各孔的光密度值，根据标准曲线的绘制得出待测样品中靶分子的浓度。

酶联免疫吸附法实验步骤

酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测样品中特定的抗原或抗体。以下是ELISA实验的基本步骤。

步骤1：制备试样

首先，需要准备样品，可以是血清、细胞上清、尿液等。样品可能含有目标抗原或抗体，也可能含有其他干扰物质。样品的准备过程通常包括离心、稀释等步骤，以获得适合实验的样品。

步骤2：涂布固相材料

ELISA试验通常使用微孔板（96孔板），每个孔都涂布有特定的抗原或抗体。涂布的过程包括将抗原或抗体溶液加入每个孔中，并在适当的条件下孵育一段时间，使其吸附在固相材料上。

步骤3：阻断非特异性结合

为了降低非特异性背景信号，需要在涂布后阻断孔中未被特异性结合的部分。常用的阻断剂包括牛血清蛋白（BSA），牛阴离子解脂磷

酸酰胆碱（BSA-PIPC），非脂阻断剂（Nonfat blocking reagent）等。阻断剂溶液通常加入每个孔，孵育一段时间，然后将其倒出。

步骤4：加入样品与控制品

经过阻断后，样品和控制品被加入每个孔中，以检测其中的特定

抗原或抗体。每个孔可以添加不同浓度的样品和控制品，以建立浓度-

效应曲线。

步骤5：孵育与洗涤

样品和控制品孵育的时间和温度因实验设计而异。在孵育过程中，抗原或抗体与样品中的目标分子发生特异性结合。完成孵育后，需要

进行洗涤以去除未结合的物质，减少背景干扰。洗涤缓冲液通常用洗

板机进行，该步骤重复数次。

步骤6：加入检测抗体

经过洗涤后，需要加入与样品中目标分子特异结合的检测抗体。

酶联免疫吸附试验(双抗夹心法)原理

酶联免疫吸附试验（ELISA），又称酶联免疫吸附测定法，是目前广泛用于生物化学和免疫学领域的一种重要实验方法。该技术结合了免疫

学和生物化学的原理，能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，对临床诊断、生物医学研究以及生物制药等领域有着广泛的应用。在

本文中，我们将深入探讨酶联免疫吸附试验的原理、方法和应用。

一、酶联免疫吸附试验原理

酶联免疫吸附试验的原理主要是利用酶标记抗体、抗原和底物的相互

作用来检测特定物质的存在。在双抗夹心法中，试验基本步骤如下：

1. 用待测抗原溶液在固相酶标记抗体包被的微孔板上，充分接触和结合。

2. 经洗涤后，底物溶液被加入，并与酶标记抗体包被的复合物结合。

3. 底物受酶催化分解后，生成有色产物，通过比色法测定其光密度，

间接测定抗原的含量。

在实验过程中，我们不能忽视的是标本处理、试剂选用、仪器操作等

一系列实验细节，这些都对实验结果的准确性和重复性有着重要的影响。

二、酶联免疫吸附试验的方法

不同类型的酶联免疫吸附试验方法包括间接法、夹心法、竞争法和直

接法等。在这次我们重点讨论的是双抗夹心法。该方法通过将待测抗

原与固相酶标记抗体和液相抗体结合，从而提高了对待测抗原的灵敏度和特异性。这种方法在免疫学研究、传染病诊断和药物检测等方面具有重要的应用价值。

除了双抗夹心法，间接法通过检测待测抗体也是常用的酶联免疫吸附试验方法。在实验设计中，根据不同的研究目的和样本特性，我们可以选择不同的方法来进行实验设计和操作。

三、酶联免疫吸附试验的应用

酶联免疫吸附试验在临床诊断、疫苗研制、传染病监测、生物药品开发等领域有着广泛的应用。它能够高灵敏、高特异地检测抗原或抗体的存在，为疾病诊断和药物研发提供了重要的技术支持。

简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤

简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和数量。其原理基于抗原-抗体的特异性结合作用以及酶的催化作用。

酶联免疫吸附试验的原理：

酶联免疫吸附试验主要利用酶作为标记物，将待检测的抗原或抗体与其特异性抗体或抗原结合，再用酶标记抗体或抗原与待检测物结合，形成酶-抗原-抗体或酶-抗体-抗原复合物。最后通过酶反应产生的色素变化或发光信号，来间接或直接定量分析待检测物的含量。

酶联免疫吸附试验的基本步骤：

1.固相抗原或抗体的吸附：在反应板的孔中吸附抗原或抗体。一般采用多孔吸附板作为载体，将抗原或抗体溶液加入孔中，经过一段时间的孵育后，以使抗原或抗体与孔板表面结合。

2.无特异性位点的封闭：将未被吸附的非特异性蛋白质如牛血清蛋白（BSA）添加到孔中，对未被特异性抗原或抗体吸附的区域进行封闭，防止非特异性结合的发生。

3.加入标记物：加入被标记的抗体或抗原，使其与孔中的特异性抗原或抗体发生特异性结合。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。

4.洗涤：用缓冲液洗涤孔中多余的未结合抗体或抗原，降低非特异性背景。

5.底物反应：加入适当的酶底物，酶底物与酶结合发生催化反应，使底物产生颜色或发光等可检测的反应产物。

6.反应终止：加入终止剂，停止底物的反应，防止颜色或发光信号进一步变化。

7.读取结果：使用酶标仪或光度计测定标记物的颜色或发光强度，根据标准曲线计算出待检测物的浓度。

酶联免疫吸附测定法

特点二：特异性
其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。
例如乙肝病毒中的表面抗原（HBsAg）、e 抗原（HBeAg）和核心抗体（HBcAg），虽来源于同一病毒，但仅与其相应的抗体结合，而不与另外两种抗体反应。抗原抗体反应的这种特异性使免疫测定能在一非常复杂的蛋白质化合物（例如血清）中测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
是elisa成败的关键试剂它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应还具有酶促反应显示出生物放大作用但不同的酶选用不同的底物显色反应测定波长辣根过氧化物酶四甲替联苯胺氨基水杨酸邻联苯甲胺22连胺基23乙基唑啉磺酸6铵盐橘红色黄色棕色蓝绿色492460449425642碱性磷酸酯酶硝基酚磷酸盐pnp萘酚asmx磷酸盐重氮盐黄色红色400500葡萄糖氧化酶abtshrp葡萄糖葡萄糖黄色深蓝色405420甲基伞酮基半乳糖苷4mug硝基酚半乳糖苷onpg荧光黄色360450420elisa的种类和变化一双抗体夹心法二间接法三竞争法四双位点一步法五捕获法测igm抗体六应用亲和素和生物素的elisa一双抗体夹心法此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原获得待分析物的未标定抗体将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体洗涤除去未结合的抗体及杂质加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点洗涤并除去未结合的封闭蛋白加受检标本抗原形成固相抗体抗原复合物洗涤除去其他未结合的物质加酶标抗体生成抗体待测抗原酶标记抗体的复合物彻底洗涤未结合的酶标抗体加底物进行酶催化反应根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定间接法是检测抗体最常用的方法其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体故称为间接法

生物化学实验技术酶联免疫吸附剂测定法

酶联免疫吸附剂测定法

检测步骤：
ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，
然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳
性对照，还有就是质控品（这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内）。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。
⑶加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。 ⑷加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竞争吸附而影响包被效果。间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。

酶联免疫吸附测定技术

技术简介

酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay），简称ELISA，是实验室最常用的检测方法。酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有人造催化剂。ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因此ELISA 具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批标本的检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。

核心原理：

ELISA必须遵守以下3个核心原理：1）抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性；2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。在ELISA中酶起到很关键的作用，常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。

应用方向：

ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。按照待测物性质的不同，ELISA反应可以分为抗原检测反应及抗体检测反应。

酶联免疫吸附测定法

肝纤维化指标的检测一直以来都是肝脏疾病的重要检测项目之一，主要包括肝纤维化指标α2-MG和ALT等，其中，酶联免疫吸附测定法（ELISA）已经成为肝纤维化指标检测的首选方法。

酶联免疫吸附测定法是一种利用特异性抗原抗体对特异宿主物质（如肿瘤酶，血清蛋白等）的特异性结合作用，再用活性抗体对特异物质的抗体进行检测，从而测定样品中某特异物质的浓度的实验技术。

酶联免疫吸附测定法的实验流程主要分为七个步骤。摘要：

第一步：将 Elisa 的板子放在石英培养皿里，用微量移液器从管内取出特异宿主物质（如肿瘤酶，血清蛋白等），将其缓慢移液至 Elisa 板子上（有多种不同形式的Elisa 板，根据測试物质的种类和浓度来决定板子的类型），使得每个池中均有特定数量的特异宿主物质。

第二步：用抗宿主物质抗体制备样品，将样品中的宿主物质与板中的宿主物质结合，产生免疫复合物。

第三步：用抗免疫复合物抗体，将免疫复合物增强，更好地复合到抗体上。

第四步：在抗免疫复合物抗体与免疫复合物的结合上加入适量的碳酸钠溶液，将特异宿主物质从免疫复合物中沉淀出来。

第五步：在强酸性溶液中，将沉淀出来的特异宿主物质，用标准物质进行校准，以确定当前特异宿主物质的浓度。

第六步：加入酶襵显剂，将样品中的特异宿主物质評估出来，再将其与标准物质的浓度做比较，可以得出结果。

第七步：通过计算、整理得出最终结果。

总之，酶联免疫吸附测定法是一种可靠而且高效的肝纤维化指标检测方法，其简便易行的实验流程、灵敏度高和结果准确精确。应用范围广，且常用于癌症诊断，肝纤维化活性变化诊断，以及肝纤维化指标的检测等等。

酶联免疫吸附法实验步骤

酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测特定的抗原或抗体。

以下是一般的酶联免疫吸附法实验步骤：

1. 准备实验材料和试剂：包括抗原、抗体、控制样品和待测样品等。

2. 预处理样品：将待测样品加入适当的缓冲液，如PBS（磷

酸盐缓冲液）进行稀释和预处理。

3. 涂布抗原：将抗原溶液加入到孔板的孔中，并尽量避免产生气泡。

4. 孵育：将孔板放置在温度适宜的湿润箱中，孵育一段时间，使抗原与孔板表面结合。

5. 洗涤：将孔板倒置并轻轻敲打使液体排尽，然后用洗涤缓冲液（如PBS-T）冲洗孔板孔中的未结合的物质。

6. 加入第一抗体：将稀释好的第一抗体加入到孔板孔中，与抗原结合。

7. 洗涤：重复第5步，洗涤孔板孔中的未结合的第一抗体。

8. 加入酶标记的第二抗体：将酶标记的第二抗体加入到孔板孔

中，使其与第一抗体结合。

9. 洗涤：重复第5步，洗涤孔板孔中的未结合的酶标记的第二抗体。

10. 加入底物：加入染色底物，使酶催化底物发生颜色反应。

11. 反应停止：通过加入停止溶液，停止酶的催化作用，阻止底物继续反应产生颜色。

12. 测量吸光度：使用酶标仪或光度计，测量样品孔板中的吸光度。

13. 数据分析：根据吸光度值，分析样品中的抗原或抗体的浓度或相对含量。

以上是一般的酶联免疫吸附法实验步骤，具体的步骤可能会根据实验目的和试剂的不同有所调整。

酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)是一种测定有机物，

如抗原、抗体及其相互作用的实验方法，这种方法具有快速、简便以及具有可靠性和重复

性的特点，经过不断的发展和完善，成为迅速灵敏的一种实验方法，广泛应用于临床诊断

和血清学、分子遗传学、免疫学等生物学领域。

ELISA是一种通过生物反应检测抗原还是抗体的技术。它利用抗原和抗体相互作用，

具有特异性地传导信号，进而加以测定。从实验步骤上来看：将待检样品经过酶处理及离

心等步骤放入酶联免疫反应杯内，先把杯内的物质表面包覆一层特异性抗体，留存为有特

定特征的抗原受体网；然后将样品加入杯中进行反应，引起免疫反应；最后检测反应结果，依据结果来判断抗原是否存在于样品中。

传统的ELISA号称半定量技术，利用快速、简便、可靠重复性等一系列优点，在临床

医学及航空航天、环境监测等尤其受到重视，且其可以检测到比免疫印迹(immunoblotting)、放射免疫分析(RIA)轻量级微量抗原能量及比色试验更低等浓度的抗原。

ELISA也可以在针对一种抗原和多种抗体检测时使用，因为反应杯上可以印刷多种抗体，形成多个反应区域，检测样品中的抗原分布情况，该方法常称为靶向ELISA。一般情况，本试验不会受样品的干扰而影响检测结果，因此适合检测各种样品。

ELISA的缺点在于相对RIA，其测定结果范围较窄，量程较短，因此其在被检样品浓

度范围较大时，检出限不能够满足检测要求。