流式细胞仪在临床检验中的应用 PPT
合集下载
流式细胞仪分析技术及应用(课件)
流式细胞仪分析技术及应用第一节概述第二节数据的显示与分析第三节流式细胞仪技术要求一、工作原理一、参数一、免疫检测样品制备二、散射光的测定二、数据显示方式二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色三、荧光测量三、设门分析技术三、免疫胶乳颗粒的应用四、细胞分选原理四、流式细胞技术的质量控制第四节流式细胞仪技术的要求第五节、流式细胞仪的科研应用第六节流式细胞术在临床检测中的主要应用✧流式细胞术(flow cytometry, FCM)亦称荧光激活细胞分选器(fluorescence-activated cell sorting, FACS):是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。
/是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。
/广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等。
✧流式细胞术发展史1930年Caspersson和Thorell开始致力于细胞计数的研究1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化，用光电仪记录流过一根毛细管的细胞1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计数粒子的方法的专利1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理，成功设计红细胞光学自动计数器1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计1972年Herzenberg研制出细胞分选器1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为细胞研究提供大量的特异免疫试剂目前国内主要流式细胞仪厂家：Beckton Dickinson(BD)公司；BACKMAN COULTER公司✧流式细胞术的特点：最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。
流式细胞的原理及临床应用课件
•流式细胞的原理及临ห้องสมุดไป่ตู้应用
PerCP/CD19 APC
•流式细胞的原理及临床应用
恶性肿瘤患者T 细胞亚群和SIL22R 的变化及意义卢香兰1 ,李 霞1 ,王萍萍1 ,李玲2 ,李艳1· 3 4 2 · 中国医科大学学报 J Chin Med Univ 第33 卷 第3 期 2004 年6 月
•流式细胞的原理及临床应用
疾病
T 细胞亚群
CD4+/CD8+
•流式细胞的原理及临床应用
• CD8+T细胞又称细胞毒性T细胞，Tc或CTL，它在T细胞免 疫应答中发挥重要功能。
• Tc细胞识别抗原活化后释放胞浆内颗粒毒素：穿孔素 perforin和颗粒酶granzyme，杀伤靶细胞。
•流式细胞的原理及临床应用
B淋巴细胞
▪ B淋巴细胞是免疫系统中的抗体产生细胞。 ▪ 1，产生的抗体可与抗原起特异性的结合，如中
就目前的研究文献而言，HLA-B27 与 AS 并非绝对相关，有些AS 患者表现 为HLA-B27阴性，而且并非所有HLA•流式细胞的原理及临B床2应7 用阳性者均出现AS 症状。
HLA-B27诊断的临床意义
▪ 强直性脊柱炎－90-100% 的强直性脊柱炎患者HLA－B27为阳性。但 是HLA-B27阳性的人群中只有8－20％是强直性脊柱炎。
•流式细胞的原理及临床应用
2、淋巴细胞亚群分析
•流式细胞的原理及临床应用
淋巴细胞亚群基础知识
▪ T淋巴细胞：主要杀伤病原体感染细胞及肿瘤细胞。 ▪ 表面标志物：CD3，与TCR形成复合体，是T细胞识
别抗原和转导信号的主要单位。 ▪ CD3+/CD4+：辅助性T细胞 ▪ CD3+/CD8+：杀伤性T细胞
PerCP/CD19 APC
•流式细胞的原理及临床应用
恶性肿瘤患者T 细胞亚群和SIL22R 的变化及意义卢香兰1 ,李 霞1 ,王萍萍1 ,李玲2 ,李艳1· 3 4 2 · 中国医科大学学报 J Chin Med Univ 第33 卷 第3 期 2004 年6 月
•流式细胞的原理及临床应用
疾病
T 细胞亚群
CD4+/CD8+
•流式细胞的原理及临床应用
• CD8+T细胞又称细胞毒性T细胞，Tc或CTL，它在T细胞免 疫应答中发挥重要功能。
• Tc细胞识别抗原活化后释放胞浆内颗粒毒素：穿孔素 perforin和颗粒酶granzyme，杀伤靶细胞。
•流式细胞的原理及临床应用
B淋巴细胞
▪ B淋巴细胞是免疫系统中的抗体产生细胞。 ▪ 1，产生的抗体可与抗原起特异性的结合，如中
就目前的研究文献而言，HLA-B27 与 AS 并非绝对相关，有些AS 患者表现 为HLA-B27阴性，而且并非所有HLA•流式细胞的原理及临B床2应7 用阳性者均出现AS 症状。
HLA-B27诊断的临床意义
▪ 强直性脊柱炎－90-100% 的强直性脊柱炎患者HLA－B27为阳性。但 是HLA-B27阳性的人群中只有8－20％是强直性脊柱炎。
•流式细胞的原理及临床应用
2、淋巴细胞亚群分析
•流式细胞的原理及临床应用
淋巴细胞亚群基础知识
▪ T淋巴细胞：主要杀伤病原体感染细胞及肿瘤细胞。 ▪ 表面标志物：CD3，与TCR形成复合体，是T细胞识
别抗原和转导信号的主要单位。 ▪ CD3+/CD4+：辅助性T细胞 ▪ CD3+/CD8+：杀伤性T细胞
流式细胞术的临床应用ppt课件
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
设门（gating）：
根据某些特性将分析细胞群
圈起来。
淋巴细胞：FSC/SSC CD45++/SSCdim T淋巴细胞：CD3+/SSCdim
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
直方图
单参数分析
横坐标：信号强度
纵坐标：细胞数量
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
散点图
双参数分析 横、纵坐标代表的均是信号强度 UL: cd3-cd4+ LL: cd3-cd4UR: cd3+cd4+ LR: cd3+cd4-
实验诊断科 分子诊断组
标本染色的一般方法
FCM的临床应用
已开展的临床项目 其他临床应用
实验诊断科 分子诊断组
标本染色的一般方法
标本来源：
外周血、骨髓、组织块、培养细胞、脑脊 液、胸腹水、肺泡灌洗液(BALF)及其脱落细 胞。 血清和各类体液样本（可溶性蛋白）
实验诊断科 分子诊断组
前期处理
CSF、BALF、胸腹 水等：
结合淋巴细胞绝对数来看待百分比的改变
AIDS
实验诊断科 分子诊断组
已开展的项目
HLA-B27
试剂：BD HLA-B27 Kit 标本：外周血 检测指标： T (CD3+)淋巴细胞上HLA-B27 定性检测
实验诊断科 分子诊断组
实验诊断科 分子诊断组
HLA-B27
临床意义：强直性脊柱炎（高度相关） 遗传性关节炎
数量的检测 采集时机的确定
某些肿瘤
实验诊断科 分子诊断组
已开展的项目
白血病和淋巴瘤（L&L）免疫分型
流式细胞仪分析技术及应用PPT课件
14
光学系统：主要由多组透镜、滤光片和分 光镜等光学元件组成，将不同波长的光信 号送入不同的探测器
滤片
1）长通滤片（long pass filter，LP ) 2）短通滤片（short pass filter，SP ) 3）带通滤片（band pass filter，BP）
15
只允许特定波长以上的光通过 ，如LP500
带电细胞液滴通过静电场而 发生偏转，落入收集器中， 其他液体则被当作废液抽吸 掉，完成细胞分选的目的。
23
（二）FCM分选技术要求
细胞分选对仪器的性能要求较高 分选是流式细胞仪的重要功能之一 分选功能的装置较为复杂
► 分选指标
分选速度
分选纯度 分选收获率
24
分选速度
1
每秒可分离所要细胞的个数，一般要求分 选速度至少达5000个/秒左右。
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生 物及人工合成微球等
3
第一节 流式细胞术的分析及分选原理
液流 系统
光学 系统
流式 细胞仪
光学 原理
光电转 换原理
电子 系统
测试 原理
4
激光
光电 倍增管
放大电路
流式细胞仪是集
多种技术为一体的 新型高科技仪器
激光技术 单克隆抗体技术 细胞荧光化学技术 光电测量技术 电子物理技术 电子计算机技术
1、散射光信号：分为前向散射光（forward scatter，FSC）和侧向散射光（side scatter， SSC）。
散射光不依赖于任何细胞样品的制备技术， 被称为细胞的物理参数，反映的是细胞的大小 的内部结构。
2、荧光信号
27
前向散射光检测器
流式细胞术及其临床应用课件(1)
光源与光学系统
➢ 激发光源 ➢ 光学系统
信号收集与光电转 换系统
计算机与分析系统
细胞分选与浓缩系统
激发光源 滤光片
流动室、鞘 液和样本流
信号检测器
计算机分析
（二）激光光源与光学系统
（一）激发光源 ：激光器
气体激光器：氩离子(488nm、355nm)、氦氖(633nm)、氪离子 (647nm)、氪氩(568nm)；
（四）计算机和分析系统
十字门
线性门
流式细胞仪特点
流式细胞术的最大特点是能在保持细胞及细胞器或微 粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的 协助，从分子水平上获得多种信号对细胞进行定量分 析或纯化分选
细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量
目前国内主要流式细胞仪厂家 Beckton Dickinson(BD) BACKMAN COULTER
淋巴细胞亚群分析
试剂：BD Multitest IMK Kit 标本：外周血（常用） 配色：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC
（三）荧光信号
目前常用FCM配置（BD Calibar） 488nm激光管常用染料有 第一通道（FL1）：FITC (Fluorescein Isothiocyanate) 第二通道（FL2）：PE (Phycorey- thrin) 第三通道（FL3）：PerCP (Peridinin Chlorophyll Protein) PE-Cy7、PE-Cy5、 PerCP-Cy5.5 633nm激光管常用染料有
1
10
2 700
3 720
4
15
……
Counts
0…………101…………102…………103
➢ 激发光源 ➢ 光学系统
信号收集与光电转 换系统
计算机与分析系统
细胞分选与浓缩系统
激发光源 滤光片
流动室、鞘 液和样本流
信号检测器
计算机分析
（二）激光光源与光学系统
（一）激发光源 ：激光器
气体激光器：氩离子(488nm、355nm)、氦氖(633nm)、氪离子 (647nm)、氪氩(568nm)；
（四）计算机和分析系统
十字门
线性门
流式细胞仪特点
流式细胞术的最大特点是能在保持细胞及细胞器或微 粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的 协助，从分子水平上获得多种信号对细胞进行定量分 析或纯化分选
细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量
目前国内主要流式细胞仪厂家 Beckton Dickinson(BD) BACKMAN COULTER
淋巴细胞亚群分析
试剂：BD Multitest IMK Kit 标本：外周血（常用） 配色：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC
（三）荧光信号
目前常用FCM配置（BD Calibar） 488nm激光管常用染料有 第一通道（FL1）：FITC (Fluorescein Isothiocyanate) 第二通道（FL2）：PE (Phycorey- thrin) 第三通道（FL3）：PerCP (Peridinin Chlorophyll Protein) PE-Cy7、PE-Cy5、 PerCP-Cy5.5 633nm激光管常用染料有
1
10
2 700
3 720
4
15
……
Counts
0…………101…………102…………103
流式细胞仪在临床检验中的应用共54页
流式细胞仪在临床检验中的应用
46、法律有权打破平静。——马·格林 47、在一千磅法律里，没有一盎司仁 爱。— —英国
48、法律一多，公正就少。——托·富 勒 49、犯罪总是以惩罚相补偿；只有处 罚才能 使犯罪 得到偿 还。— —达雷 尔
50、弱者比强者更能得到法律的保护 。—— 威·厄尔
ห้องสมุดไป่ตู้
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
46、法律有权打破平静。——马·格林 47、在一千磅法律里，没有一盎司仁 爱。— —英国
48、法律一多，公正就少。——托·富 勒 49、犯罪总是以惩罚相补偿；只有处 罚才能 使犯罪 得到偿 还。— —达雷 尔
50、弱者比强者更能得到法律的保护 。—— 威·厄尔
ห้องสมุดไป่ตู้
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
流式细胞仪分析技术应用ppt课件
40
荧光抗体的选择
种属来源：人 •正常造血干细胞分选标记：Lin-CD34+CD38CD45RA-CD90+CD49f+Rholow •白血病干细胞的分选标记：CD34+CD38-CD71CD90-CD117-CD123+CD96+CD47+ 种属来源：鼠 •F正lk2常- 或造者血干Li细n-S胞ca分-1选+c-标Ki记t+C: LDi1n5-S0c+aC-D1+4c8--Kit+CD34•SMcaL-1L--cA-KFi9t+ACMDL1白6/3血2+病CD干3细4+胞或的c-分K选it+G标r-记1-: Lin•BCR-ABL CML 白血病干细胞的分选标记: LinSca-1+c-Kit+
胞的总量，再经分选后得到目的细胞的实际得率。 与分选速度成反比。
7
第二节 数据的显示与分析
• 参数：FS,SS,FL • 数据显示方式 （单参数直方图 、双
参数散点图 、二维等高图 、假三维 等高图 、三参数散点图 ） • 设门分析技术
8
一、 参数
FS：反映颗粒的大小 SS：反映颗粒的内部结构复杂程度 FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少
液流断裂成液滴
空白液滴 不充电
弃去
含细胞的液滴 充电
偏转落入收集器
6
（二）分选的技术要求
• 分选速度：单位时间内分选的细胞数量。与悬
液中细胞的含量成正比。
• 分选纯度：分选出的目的细胞占所有收获细胞
的百分率。
• 分选收获率：实际收获的分选细胞与设定通过
测量点的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。
荧光抗体的选择
种属来源：人 •正常造血干细胞分选标记：Lin-CD34+CD38CD45RA-CD90+CD49f+Rholow •白血病干细胞的分选标记：CD34+CD38-CD71CD90-CD117-CD123+CD96+CD47+ 种属来源：鼠 •F正lk2常- 或造者血干Li细n-S胞ca分-1选+c-标Ki记t+C: LDi1n5-S0c+aC-D1+4c8--Kit+CD34•SMcaL-1L--cA-KFi9t+ACMDL1白6/3血2+病CD干3细4+胞或的c-分K选it+G标r-记1-: Lin•BCR-ABL CML 白血病干细胞的分选标记: LinSca-1+c-Kit+
胞的总量，再经分选后得到目的细胞的实际得率。 与分选速度成反比。
7
第二节 数据的显示与分析
• 参数：FS,SS,FL • 数据显示方式 （单参数直方图 、双
参数散点图 、二维等高图 、假三维 等高图 、三参数散点图 ） • 设门分析技术
8
一、 参数
FS：反映颗粒的大小 SS：反映颗粒的内部结构复杂程度 FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少
液流断裂成液滴
空白液滴 不充电
弃去
含细胞的液滴 充电
偏转落入收集器
6
（二）分选的技术要求
• 分选速度：单位时间内分选的细胞数量。与悬
液中细胞的含量成正比。
• 分选纯度：分选出的目的细胞占所有收获细胞
的百分率。
• 分选收获率：实际收获的分选细胞与设定通过
测量点的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
健康人（左）和强直性脊柱炎患者（右）的HLA-B27的检测结果 （上：同型对照，下：测试样本）
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
目 录
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
迈瑞流式细胞仪及配套试剂
BriCyte E6流式细胞仪及配套试剂
人性化设计—降低临床操作难度
临床常规项目全自动软件 双向LIS连接 全中文操作界面
诊断与鉴别诊断 疾病临床分期 治疗效果评估 指导临床用药 。。。
TBNK淋巴细胞检测在临床科室中的应用
流式在肿瘤的应用 流式在感染科的应用 流式在风湿免疫科的应用 流式在健康体检的应用 流式在血液科的应用 流式在移植中心的应用 流式在心血管内科的应用 流式在其他科室的应用
胃癌及其不同临床分期淋巴细胞亚群的变化
四川省人民医院 中心实验室主任
张剑波
THANKS！
谢谢
HLA-B27检测与AS辅助诊断
1984年修订的纽约标准 ；
1991年欧洲脊柱关节病 研究组（ESSG）标准；
2009年国际脊柱关节病 评估工作组（ASAS） SpA诊断标准标准—增 加HLA-B27作为重要的 诊断指标
Rudwaleit M. Curr Opin Rheumatol. 2010,22:375-380）
食品工业
临床诊断、 研究
血液，肿瘤， 药理，免 疫…
农业畜牧业
选种，育种…
环境研究
湖泊、海洋生态 研究…
制药工业
药物筛选，疫苗 研究…
总结
flow cytometry flow cytometry + Autoimmune diseases
flow cytometry+leukemia
flow cytometry + Transplant
flow cytometry +tumor
可以预计未来流式细胞仪在临床上的应用一定会有更大的发展！
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
目 录
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
流式细胞术在临床检验中的应用
∞ 淋巴细胞亚群分析
∞ HLA-B27检测
∞ 白血病免疫分型和MRD
急性白血病、 慢性淋巴增生性疾病（CLD)
HLA-B27检测在AS中的诊断价值
HLA-B27+ HLA-B27+ 的AS
HLA-B27- 的AS
• 临床意义：
1.辅助疾病早期确诊,早期治疗; 2.鉴别诊断症状相似的疾病; 3.对高危人群进行预测;
约5-10%的AS患者为HLA-B27AS患者中HLA-B27+达90~95%
HLA-B27阳性率在我国为2~7%，AS的患病率为0.1%， 因此大部分HLA-B27+并不患AS
临床需要监测免疫功能的常见疾病
（Kuby Immunology, 7th,2013）
TBNK淋巴细胞亚群检测
CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC
HLA-B27检测与脊柱关节病
脊柱关节病（Spondyloarthritis, SpA）
淋巴瘤
∞ 造血干细胞分析
造血干细胞绝对计数；
∞ 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）
CD55/CD59/FLAER检测
∞ 血小板相关分析
血小板计数、血小板免疫表型分析
∞ 细胞周期与DNA倍体分析
2010年全国三级医院检验科流式项目分布
。。。
流式细胞术分析淋巴细胞亚群的原理
TBNK淋巴细胞的检测及临床指导意义
肺部疾病的鉴别诊断
（中华检验医学杂志. 2000, 23: 214-216）
利妥昔单抗治疗效果监测
外周血B细胞百分比显著下降 而骨髓B细胞略下降 利妥昔单抗(美罗华)： 针对B细胞特异性抗原CD20的人-鼠嵌合单克隆抗体 用于复发或耐药的CD20 阳性滤泡性淋巴瘤 是首个以B细胞为靶标治疗类风湿性关节炎的药物
1. 手工输入病人信息 2. 人工转移数据实现单向连接
灵活进样系统，负压吸样兼容多种上样管，珍 贵标本直接上机检测
单一进样模式，正压吸样只支持标准流式管
内置高精度流量传感器，无需内标微球直接计 算绝对计数
必需额外内标微球间接换算绝对计数
1.将清洗液和纯水放入指定位置，仪器自动完 成关机过程 2.无
1. 将清洗液和纯水放入指定位置，仪器进行清洗 2. 再进行真空管路清洗后关机
强直性脊柱炎
• 强直性脊柱炎（AS）定义：
一种慢性、进行性和炎性疾病，也是血清阴性脊柱关节病（SpA）中最具代表性的 疾病。主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环 结缔组织的骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。
• 实验室检查：
CRP升高 血沉加快 HLA-B27阳性 类风湿因子阴性
不同HLA-B27检测方法比较
HLA-B27检测的敏感性和特异性
与其他指标相比，HLA-B27在SpA鉴别和诊断上具更高的敏感性、特异性
（ Rudwaleit M, Sieper J. Nat Rev Rheumatol. 2012,8:262-268 ）
HLA-B27检测配套试剂
FITC-HLA-B27/PE-HLA-B7双色
488/10
SS
tv
FSC
t
488/10
FS
530/30
740LP
785/60
FL6
488/10
645LP 660/20
(APC-cy7)
550LP
FL4
v
FL4
(APC)
v
491/LP
t
t
流式细胞仪与常用检验仪器的比较
生命科学领域的应用
生物学研究
遗传，生殖，微 生物，细胞生物，
毒理，分子生 物…
(Arthritis Research & Therapy 2009,11；R131)
移植病人免疫抑制剂治疗指导
A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天 69例（50例没有排斥，19例发生排斥） CD4在移植后有一个缓慢的下降过程 CD4如果升高，预示发生排斥反应，需要调整免疫抑制药的治疗方案
BD FACSCanto II 检测305A八峰粒子
PE<50 MESF
淋巴细胞亚群分析临床评估
北京协和医院
临床评估病人； 42例 对照仪器： BCI FC500
北医三院
临床评估病人； 30例 对照仪器： BD FACSCanto II
四川省人民医院
临床评估病人； 34例 对照仪器： BCI FC500
采用陶瓷泵负压吸样形成有效“双闭环”，稳定 控制样本流；
简洁稳定-光学系统
智能温度控制 15℃到32℃无需调整光路
全封闭防尘设计
方便快捷-多种进样方式
12×75 mm试管 1.5mL、2mL微量离心管
12×75 mm试riCyte E6 检测305A八峰粒子 PE<50 MESF
肿瘤术后淋巴细胞亚群的变化
乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群变化
传染病信息. 2011. 24. 206-210
乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群变化
（World J Gastroenterol. 2008,14:3710-8.）
HIV/AIDS病人的诊断与分期
（WS 293-2008 艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准）
HLA-B27检测临床评估
北医三院
临床评估病人： 30例 对照仪器： BD FACSCanto II
四川省人民医院
临床评估病人； 33例 对照仪器： BCI FC500
项目
软件界面 仪器开关机 仪器质控
LIS连接 进样系统 绝对计数 仪器关机 常规检测
BriCyte E6
传统流式细胞仪
全中文操作软件，模块化设计，可见即所得， 英文界面，菜单式设计，需要长时间熟悉菜单功能
- 中华医学会检验分会委员兼副秘书长 上海医学会检验医学分会副主委-
沈立松
-易学医用 -自动化程度高 -适用临床检验科使用
-性能参数可媲美国外品牌 -价格优势明显 -临床服务好
专家精彩点评
王小林
-半天熟悉流式软件 -体积小，噪音小 -绝对计数精度高
北医三院检验科副主任
-激光器温控范围宽 -体积小，运行安静 -临床软件非常实用
传统流式检测流程图
Nat Rev Immunol. ; 12(3): 191–200.
流式细胞仪工作原理模拟图
SSC FL2 FL5
FL6
v v
v
t
FL3
FL5
FL1
v t
v t
FL1 (FITC)
t
FL2 (PE)
FL3 (PerCP)
(PE-cy7)
585/40
785/60
670LP
反光镜 反光镜
老年人身体状况评估
（ Neuroimmunomodulation. 2014, 214:206-12.）
慢性疲劳综合征与淋巴亚群分析
（ Clinical and Applied Immunology Reviews. 2002, 2:129–139. ）
体育锻炼对淋巴亚群的影响
（ Mechanisms of Ageing and De6elopment. 1998, 100: 121–132.）
两小时掌握仪器操作
位置
1.开机（10分钟以内）； 2.关机（7分钟以内）
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
目 录
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
迈瑞流式细胞仪及配套试剂
BriCyte E6流式细胞仪及配套试剂
人性化设计—降低临床操作难度
临床常规项目全自动软件 双向LIS连接 全中文操作界面
诊断与鉴别诊断 疾病临床分期 治疗效果评估 指导临床用药 。。。
TBNK淋巴细胞检测在临床科室中的应用
流式在肿瘤的应用 流式在感染科的应用 流式在风湿免疫科的应用 流式在健康体检的应用 流式在血液科的应用 流式在移植中心的应用 流式在心血管内科的应用 流式在其他科室的应用
胃癌及其不同临床分期淋巴细胞亚群的变化
四川省人民医院 中心实验室主任
张剑波
THANKS！
谢谢
HLA-B27检测与AS辅助诊断
1984年修订的纽约标准 ；
1991年欧洲脊柱关节病 研究组（ESSG）标准；
2009年国际脊柱关节病 评估工作组（ASAS） SpA诊断标准标准—增 加HLA-B27作为重要的 诊断指标
Rudwaleit M. Curr Opin Rheumatol. 2010,22:375-380）
食品工业
临床诊断、 研究
血液，肿瘤， 药理，免 疫…
农业畜牧业
选种，育种…
环境研究
湖泊、海洋生态 研究…
制药工业
药物筛选，疫苗 研究…
总结
flow cytometry flow cytometry + Autoimmune diseases
flow cytometry+leukemia
flow cytometry + Transplant
flow cytometry +tumor
可以预计未来流式细胞仪在临床上的应用一定会有更大的发展！
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
目 录
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
流式细胞术在临床检验中的应用
∞ 淋巴细胞亚群分析
∞ HLA-B27检测
∞ 白血病免疫分型和MRD
急性白血病、 慢性淋巴增生性疾病（CLD)
HLA-B27检测在AS中的诊断价值
HLA-B27+ HLA-B27+ 的AS
HLA-B27- 的AS
• 临床意义：
1.辅助疾病早期确诊,早期治疗; 2.鉴别诊断症状相似的疾病; 3.对高危人群进行预测;
约5-10%的AS患者为HLA-B27AS患者中HLA-B27+达90~95%
HLA-B27阳性率在我国为2~7%，AS的患病率为0.1%， 因此大部分HLA-B27+并不患AS
临床需要监测免疫功能的常见疾病
（Kuby Immunology, 7th,2013）
TBNK淋巴细胞亚群检测
CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC
HLA-B27检测与脊柱关节病
脊柱关节病（Spondyloarthritis, SpA）
淋巴瘤
∞ 造血干细胞分析
造血干细胞绝对计数；
∞ 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）
CD55/CD59/FLAER检测
∞ 血小板相关分析
血小板计数、血小板免疫表型分析
∞ 细胞周期与DNA倍体分析
2010年全国三级医院检验科流式项目分布
。。。
流式细胞术分析淋巴细胞亚群的原理
TBNK淋巴细胞的检测及临床指导意义
肺部疾病的鉴别诊断
（中华检验医学杂志. 2000, 23: 214-216）
利妥昔单抗治疗效果监测
外周血B细胞百分比显著下降 而骨髓B细胞略下降 利妥昔单抗(美罗华)： 针对B细胞特异性抗原CD20的人-鼠嵌合单克隆抗体 用于复发或耐药的CD20 阳性滤泡性淋巴瘤 是首个以B细胞为靶标治疗类风湿性关节炎的药物
1. 手工输入病人信息 2. 人工转移数据实现单向连接
灵活进样系统，负压吸样兼容多种上样管，珍 贵标本直接上机检测
单一进样模式，正压吸样只支持标准流式管
内置高精度流量传感器，无需内标微球直接计 算绝对计数
必需额外内标微球间接换算绝对计数
1.将清洗液和纯水放入指定位置，仪器自动完 成关机过程 2.无
1. 将清洗液和纯水放入指定位置，仪器进行清洗 2. 再进行真空管路清洗后关机
强直性脊柱炎
• 强直性脊柱炎（AS）定义：
一种慢性、进行性和炎性疾病，也是血清阴性脊柱关节病（SpA）中最具代表性的 疾病。主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环 结缔组织的骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。
• 实验室检查：
CRP升高 血沉加快 HLA-B27阳性 类风湿因子阴性
不同HLA-B27检测方法比较
HLA-B27检测的敏感性和特异性
与其他指标相比，HLA-B27在SpA鉴别和诊断上具更高的敏感性、特异性
（ Rudwaleit M, Sieper J. Nat Rev Rheumatol. 2012,8:262-268 ）
HLA-B27检测配套试剂
FITC-HLA-B27/PE-HLA-B7双色
488/10
SS
tv
FSC
t
488/10
FS
530/30
740LP
785/60
FL6
488/10
645LP 660/20
(APC-cy7)
550LP
FL4
v
FL4
(APC)
v
491/LP
t
t
流式细胞仪与常用检验仪器的比较
生命科学领域的应用
生物学研究
遗传，生殖，微 生物，细胞生物，
毒理，分子生 物…
(Arthritis Research & Therapy 2009,11；R131)
移植病人免疫抑制剂治疗指导
A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天 69例（50例没有排斥，19例发生排斥） CD4在移植后有一个缓慢的下降过程 CD4如果升高，预示发生排斥反应，需要调整免疫抑制药的治疗方案
BD FACSCanto II 检测305A八峰粒子
PE<50 MESF
淋巴细胞亚群分析临床评估
北京协和医院
临床评估病人； 42例 对照仪器： BCI FC500
北医三院
临床评估病人； 30例 对照仪器： BD FACSCanto II
四川省人民医院
临床评估病人； 34例 对照仪器： BCI FC500
采用陶瓷泵负压吸样形成有效“双闭环”，稳定 控制样本流；
简洁稳定-光学系统
智能温度控制 15℃到32℃无需调整光路
全封闭防尘设计
方便快捷-多种进样方式
12×75 mm试管 1.5mL、2mL微量离心管
12×75 mm试riCyte E6 检测305A八峰粒子 PE<50 MESF
肿瘤术后淋巴细胞亚群的变化
乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群变化
传染病信息. 2011. 24. 206-210
乙型肝炎患者体内淋巴细胞亚群变化
（World J Gastroenterol. 2008,14:3710-8.）
HIV/AIDS病人的诊断与分期
（WS 293-2008 艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准）
HLA-B27检测临床评估
北医三院
临床评估病人： 30例 对照仪器： BD FACSCanto II
四川省人民医院
临床评估病人； 33例 对照仪器： BCI FC500
项目
软件界面 仪器开关机 仪器质控
LIS连接 进样系统 绝对计数 仪器关机 常规检测
BriCyte E6
传统流式细胞仪
全中文操作软件，模块化设计，可见即所得， 英文界面，菜单式设计，需要长时间熟悉菜单功能
- 中华医学会检验分会委员兼副秘书长 上海医学会检验医学分会副主委-
沈立松
-易学医用 -自动化程度高 -适用临床检验科使用
-性能参数可媲美国外品牌 -价格优势明显 -临床服务好
专家精彩点评
王小林
-半天熟悉流式软件 -体积小，噪音小 -绝对计数精度高
北医三院检验科副主任
-激光器温控范围宽 -体积小，运行安静 -临床软件非常实用
传统流式检测流程图
Nat Rev Immunol. ; 12(3): 191–200.
流式细胞仪工作原理模拟图
SSC FL2 FL5
FL6
v v
v
t
FL3
FL5
FL1
v t
v t
FL1 (FITC)
t
FL2 (PE)
FL3 (PerCP)
(PE-cy7)
585/40
785/60
670LP
反光镜 反光镜
老年人身体状况评估
（ Neuroimmunomodulation. 2014, 214:206-12.）
慢性疲劳综合征与淋巴亚群分析
（ Clinical and Applied Immunology Reviews. 2002, 2:129–139. ）
体育锻炼对淋巴亚群的影响
（ Mechanisms of Ageing and De6elopment. 1998, 100: 121–132.）
两小时掌握仪器操作
位置
1.开机（10分钟以内）； 2.关机（7分钟以内）