脂肪酶

8
9
10
10
20
14
38
33
五、结果与讨论
测定速度： 滴定法 稳定性： 铜皂法 铜皂法 对硝基苯酚法 对硝基苯酚法 滴定法
灵敏度：
对硝基苯酚法
铜皂法
滴定法
实际应用中，可根据不同需要选择测定方法。
三种脂肪酶活力测定方法 的比较研究
姓 名：张晶鑫 专 业:生物工程2班 指导教师:王刚
主要内容
一、前言 二、实验材料
三、实验方法 四、实验结果 五、结果与讨论
一、前言
脂肪酶在生产、科研中应用广泛，广泛用 在造纸业、食品业、药业、农业等等。 由于脂肪酶活力测定方法的多样性，脂肪酶 活力单位定义不统一，因此从市场中购得的脂肪
18.Βιβλιοθήκη Baidu2
16.98
19.23
4.953
铜皂法
对硝基苯 酚法
26.02 0.2769
25.53 0.2653
26.35 0.2673
1.114 2.812
三种方法所耗时间比较
终止及处 理时间 （min）
准备时间 （min） 滴定法
反应时间 （min）
总时间 （min）
12
10
6
28
铜皂法
对硝基苯 酚法
显色剂，均匀搅拌3min，油酸分子与Cu2+
生成绿色的络合物，4000r/min离心10min
后取上层有机相在710nm处测定吸光度。
（三）、对硝基苯酚法
1、溶液配制准备
底物溶液配制:量取对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)0.0378g，加入Triton X-100 1mL，用50mmoL/L Tris-HCL缓冲液（pH值8.0）定容100mmL。
2、p-NP吸光度标准曲线的绘制
配制p-NP标准溶液(0.03mg/mL )；将p-NP标准溶液 稀释成适当的梯度，在405nm下分别测定吸光度，绘 制吸光度一浓度关系曲线。
四、实验结果
脂肪酸浓度与OD值标准曲线图
对硝基苯酚浓度与OD值标准曲线图
三种方法所测酶活及相对标准差
酶活1 (U) 滴定法 酶活2 (U) 酶活3 (U) 相对标 准差
酶相互间无法进行正常的活力比较。本实验就酸
碱滴定法、铜皂法、对硝基苯酚法三种常用方法 进行了比较。
二、实验材料
脂肪酶，生物工程研究室提供
榨汁机，分析天平，碱性滴定管， 分光光度计，pH计，离心机，恒温水浴锅
脂肪酶活力单位
脂肪酶活力单位定义：在一定条件下，
每分钟释放出1μmoL脂肪酸的酶的量定义为
一个脂肪酶活力单位（U）。
三、实验方法
（一）、滴定法
底物溶液（乳化液）配制:量取4%PVA溶液150mL, 加入橄榄油50mL，用榨汁机处理3min，现配现用。
脂肪酶溶液配制:配制pH值为7.38的0.5mg/mL脂
肪酶溶液。
(二)、铜皂法
1、脂肪酸吸光度标准曲线的绘制
配制一系列不同浓度的油酸溶液，分别 取4mL油酸溶液置于锥形瓶中，加入1mL