HPLC反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇比较
四种原花青素含量测定方法比较
四种原花青素含量测定方法比较
一、本文概述
原花青素(Procyanidins)是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物,因其强大的抗氧化和生物活性,近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。其中,四种主要的原花青素——儿茶素(Catechin)、表儿茶素(Epicatechin)、没食子儿茶素(Gallocatechin)和表没食子儿茶素(Epigallocatechin)的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法,包括高效液相色谱法(HPLC)、紫外可见分光光度法(UV-Vis)、荧光光谱法(Fluorometry)和质谱法(MS),以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣,我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。
二、方法概述
原花青素(Procyanidins)是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物,具有强效的抗氧化性能,对多种疾病具有预防和治疗作用。由于其生物活性的重要性,对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。
目前,常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、紫外可见分光光度法、薄层色谱法(TLC)和毛细管电泳法(CE)。
这些方法各有优缺点,适用于不同的样品类型和实验条件。
高效液相色谱法(HPLC)具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点,可以同时分离和测定多种原花青素。但是,该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员,且样品处理过程繁琐,分析时间较长。
HPLC反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇比较
HPLC反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇比较
1,首先,乙腈价格高乙腈,特别是HPLC级的价格很高,但是,文献或LC厂家所示的条件,多用乙腈,这是为什么呢?现就此谈谈。
2,吸光度,乙腈HPLC级的小。乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中,乙腈HPLC 吸收最小(特别是在短波长上小)。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质,在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时,产生的噪声小,因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外,在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少,虽然,其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样,但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。另外,甲醇的HPLC级和优级,虽然所得的光谱相差不大,但是优级不能保证吸光度,有可能产生偏差,价格也相差不大,所以尽量使用HPLC级。
3,压力,乙腈低.柱内承受的压力,根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同样的流速下不在柱内加上多余的压力.从上述两项,可以确认使用乙腈的意义,那么,甲醇除了价格以外,还有没有其化优点呢?
4,洗脱能力,一般而言,乙腈较强.乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强.特别是混合比率低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强.混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些.溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小.
254nm波长流动相选择
254nm波长流动相选择
254nm波长通常是紫外线(UV)光谱中的一条特定波长。在液相色谱(Liquid Chromatography,LC)等分析技术中,选择适当的流动相是十分重要的,特别是在UV检测器下。
在254nm波长下,常见的流动相选择通常是有机溶剂,例如:
1.甲醇(Methanol):甲醇是一种常用的有机溶剂,对254nm波
长的UV光谱有较好的透过性。它在一些分析中可以提供较好
的灵敏度。
2.乙腈(Acetonitrile):乙腈是另一种常用的有机溶剂,也具有
对254nm波长的透过性。它在某些情况下可能比甲醇更适合。
3.混合溶剂:有时,也可以使用甲醇和乙腈的混合物,以在某些
分析中取得平衡的性能。
选择合适的流动相不仅涉及到对254nm波长的透过性,还需要考虑样品的性质、分离要求以及仪器的要求。在选择流动相时,通常也需要进行一些预实验,以找到最适合你具体应用的条件。此外,还要确保所选用的溶剂对仪器和柱的兼容性,以避免对仪器和柱的损害。
甲醇乙腈区别
高效液相(HPLC)流动相乙腈与甲醇的区别
HPLC, 液相, 甲醇, 乙腈
摘自:/shiyan/safe/1970.html
1.吸光度:乙腈HPLC吸收最小(特别是在短波长上小)。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质,在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时,产生的噪声小,因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外,在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少,虽然,其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样,但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。
2.压力:乙腈低。根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同样的流速下不在柱内加上多余的压力.从上述两项,可以确认使用乙腈的意义,那么,甲醇除了价格以外,还有没有其化优点呢?
3.洗脱能力:一般而言,乙腈较强.乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强.特别是混合比率低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强.混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些.溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小.
乙腈的化学性质、用途与生产方法
乙腈的化学性质、用途与生产方法
称氰化甲烷或甲基腈,化学式CH3CN。乙腈是无色透明液体,极易挥发,有类似于醚的特殊气味,是最简单的有机腈,伴有明亮的火焰。与水、甲醇、四氯化碳、乙酸甲酯、乙酸乙酯、二氯乙烷及许多非饱和烃类溶剂互溶。有毒,可化氢及硫氰酸。乙腈有优良的溶剂性能,是一个重要的有机中间体。并广泛用作极性非质子溶剂。
大的用途就是做溶剂,可用于合成维生素A,可的松,碳胺类药物及其中间体的溶剂,还用于制造维生素B1和氨基溶剂。可代替氯化溶剂。用于乙烯基涂料,也用作脂肪酸的萃取剂,酒精变性剂,丁二烯萃取剂和丙烯腈合成纤维的染色,照明工业,香料制造和感光材料制造中也有许多用途。
危害
通过加热乙酰胺和冰醋酸混合液而制备,是重要的工业溶剂,主要用作有机合成(如苯乙酮、1-萘醋酸、硫胺素等)的作脂肪酸萃取剂、酒精变性剂等。生产过程中可因接触其液体或蒸气而引起中毒。
表现】
业性乙腈中毒并不少见,国内外均屡见报道。乙腈蒸气具轻度刺激性,故在浓度较高情况下能够引起一定程度的上状。与氰化氢相比,乙腈虽然也出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻、胸闷、胸痛、疲倦、乏力等症状,严重时也出现呼吸降、昏迷、抽搐等表现,但起病较缓,潜伏期多在4H以上;病情亦不如氰化氢剧烈严重,极少引起猝死;其脉搏心率皆较慢,面色多呈苍白,常引起蛋白尿等肾脏损伤表现。表现乙腈的毒性除与其在体内释出的CN-有关外,其本身及硫产物的作用也有不容忽视的作用。目前尚无慢性乙腈中毒临床产品。
及鉴别诊断】
腈中毒的诊断主要根据可靠的乙腈大剂量接触史及临床特点,共同接触者出现类似表现有明显提示作用;及时测定血N-及乙腈含量具有提示作用,是乙腈接触的生物标志物,但不能提示有无中毒及其程度。急性乙腈中毒需注意与工在的其他工业毒物中毒相鉴别,如有机溶剂、窒息性气体,并应与脑血管意外、糖尿病昏迷等鉴别。
色谱专用溶剂
色谱专用溶剂
色谱专用溶剂主要用于色谱分析中,作为流动相,帮助分离样品中的各个组分。以下是一些常见的色谱专用溶剂及其应用:
1. 水:在高效液相色谱(HPLC)中,水是最常用的溶剂,尤其在生物化学和环境分析中。它可以与许多有机化合物混溶,有助于样品的分离。
2. 甲醇:在气相色谱(GC)和液相色谱(HPLC)中,甲醇是一种常用的强溶剂,尤其适合分离极性化合物。
3. 乙腈:在液相色谱中,乙腈是一种常用的中等强度溶剂,适合分离多种有机化合物。
4. 丙酮:在气相色谱中,丙酮是一种常用的溶剂,特别适合分离含氮和含硫的化合物。
5. 二甲基甲酰胺:在液相色谱中,二甲基甲酰胺是一种常用的强溶剂,尤其适合分离多肽和蛋白质。
6. 醋酸:在液相色谱中,醋酸常被用作添加剂,调节流动相的pH值,影响样品的离子状态,从而实现更好的分离效果。
以上就是一些常见的色谱专用溶剂及其应用。需要注意的是,选择合适的溶剂需要考虑到样品的性质、分析的目标以及色谱仪的性能等因素。
流动相用甲醇乙睛各自特点
在反相色谱中, 甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂,二者性质的差异表现在LC性能上的区别。
(1)价格,乙腈高于甲醇
在分析成本上,HPLC级的乙腈,价格比HPLC级的甲醇高的多。因此,一般的LC分析有机试剂首选甲醇为多。但文献所示的条件多用乙腈。
(2)吸光度,乙腈低于甲醇
所谓的HPLC级是指除去具有吸收UV的物质, 在规定的吸收波长上的吸光度小于规格值, 但并不是指绝对的纯度高。从这四种试剂的吸收光谱看,HPLC级的乙腈吸收最小,尤其在低波长范围。因此在UV检测时,其产生的噪音最小,在低波长尤其明显。在UV低波长检测时,高灵敏度检测用HPLC级乙腈最合适。另外,在梯度分析用UV检测时,HPLC级乙腈产生的鬼峰最少,同时由于其低的吸收值,梯度变化使吸收值变化最小,较大范围内的反相有机试剂梯度用HPLC乙腈最适宜。
HPLC级和优级甲醇的吸收光谱相差不大,但优级不能保证低吸光度,因此还是尽量使用HPLC级甲醇。
(3)压力,乙腈低于甲醇
色谱柱的压力降同很多因素有关,包括柱长度、内径、填料颗粒大小、填料性质、流速、温度及流动相组成等。但在实际分析过程中,色谱柱确定后,影响压力变化的因素主要是流动相中有机溶剂和缓冲液混合比例的不同,甲醇与水混合后随着甲醇比例的增大压力先增高后降低,而乙腈以同样比例与水混合并不如此,乙腈明显优于甲醇。同时我们也看到温度对压力的影响,温度升高,压力下降。
(4)流动相脱气,乙腈要注意。这里只讨论预先混合的流动相配置问题。甲醇与水混合时会发热,温度升高,多余溶解的空气较易变为脱出气泡,容易脱气。而乙腈与水混合是吸热反应,随着温度慢慢回到室温,产生气泡,所以要考虑脱气。
反相HLPC
reversed phase chromatography 根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的情况,称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛,现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。
色谱特性反相液相色谱柱效高、分离能力强、保留机理清楚,是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种,对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析,反相液相色谱正受到越来越多的关.反相色谱法是以表面非极性载体为固定相,面以比固定相极性强的溶剂为流动相的—种液相色谱分离模式.反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离.在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸件水溶液,添加一定量乙腈、异内醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相.普通的反相色谱固定相和孔径大于300Å的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍,聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用.
反相色谱中样品的保留值主要由固定相比表面积、键合相种类和浓度决定,保留值通常随链长增长或键合相的疏水性增强而增大,对于非极性化合物通常遵循以下规则:(弱)非键合硅胶<< 氰基< C1(TMS) < C3 < C4 < 苯基< C8 ≈C18(强).溶质保留值与固定相表面积成正比,普通载体(80Å)的表面积约为250m/g,而300Å孔径载体的比表面积约为60m/g。当其他条件相同时,溶质在300Å孔径(低表面积)色谱柱上的保留值大约为80Å孔径色谱柱上保留值的1/4(60:250),小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨碳柱有利于强亲水性样品洗脱.样品的保留值也可以通过改变流动相组成或溶剂强度来调整,溶剂强度取决于有机溶剂的性质和其在流动相中的浓度.在反相色谱中,采用高溶剂强度、低极性的流动相时可获得较低保留值.固定相的不同也可以导致选择性发生变化,氰基、苯基、C8、C18等柱的选择性有很大差异,一般应优先考虑C8、C18柱,然后是氰基柱,再次是苯基柱.
反相色谱法中流动相和溶剂选择的一些经验
反相色谱法中流动相和溶剂选择的一些经验
色谱分析中积累了一些经验,分享给大家。
1.反相色谱法分析,乙腈和甲醇哪个更好?
甲醇和乙腈是反相色谱法中最常用的有机溶剂,二者的极性和溶剂强度相差不大,但它们还是有一些差异,在此详细阐述一下。
(1)UV检测器上的响应值:在紫外区尤其是远紫外区(靠近200 nm),乙腈的吸收远低于甲醇,这一区别产生的影响在等度条件下也许还不明显,但若使用梯度,乙腈所引起的基线漂移则远小于甲醇,这样使用乙腈做流动相,得到的色谱图不仅美观,样品的检出限也低得多,所以该指标乙腈占优;
(2)洗脱强度:乙腈的洗脱能力稍强于甲醇。如果查阅溶剂参数表,能够发现乙腈的极性指数(5.8)稍高于甲醇(5.1),受此表启发,我曾固执地认为在反相色谱法中甲醇与水混合所调出的溶液的洗脱范围要宽于乙腈,然而实践证明与水混合时,乙腈的洗脱能力更强,随着有机相比例的升高,这种区别逐渐减小,如果是纯溶剂二者趋于一致,也就是说,混合水以后乙腈的洗脱能力还是强于甲醇的;但洗脱能力不能用作评价溶剂好坏的标准,不过对于某一项分析,如果用甲醇替代乙腈,相应的有机相比例应调高一些。
(3)选择性:二者的选择性各具特点。色谱分析中的选择性往往无法给出普遍适用的参数,这就需要实践经验支持。我喜欢进行多组分分析,在某些情况下,使用乙腈-水洗脱分离情况优于甲醇-水,比如PAEs、PAHs、酚类化合物等等,选择乙腈得到了较优的分离效果,而甲醇则不行;其他一些应用中,甲醇的选择性也会优于乙腈,比如羰基类化合物-DNPH分析和氟喹诺酮类药物(沙星类药物),其他同行使用了乙腈,化合物并未完全分离,我进行分析时改用了甲醇,所有化合物全部分开了。这是由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性,乙
反相液相色谱常用的流动相
反相液相色谱常用的流动相
反相液相色谱常用的流动相有以下几种:
1. 酸性条件下的有机溶剂:例如甲醇、乙醇、丙酮等。在这些溶剂中,大多数非极性化合物溶解度较高,因此适用于分离非极性化合物。
2. 硷性条件下的有机溶剂:例如乙腈、二甲酮等。这些溶剂在碱性条件下能够提供稳定的流动相,适用于分离极性化合物。
3. 混合有机溶剂和水:通过调节有机溶剂和水的比例,可以改变流动相的极性。例如甲醇-水混合溶剂系统在反相色谱中广泛应用,可以有效分离中、极性和多环芳烃类化合物。
4. 缓冲液:通过添加缓冲盐可以调节流动相的酸碱性。例如添加磷酸盐缓冲液可以实现对酸性和碱性化合物的分离。
总之,反相液相色谱中常用的流动相种类多样,选择合适的流动相取决于待分离化合物的性质和色谱柱的特性。
反相色谱法用的乙腈与甲醇的区别
反相色谱法用的乙腈与甲醇的区别
乙腈又名甲基腈,无色液体,极易挥发,有类似于醚的特殊气味,有优良的溶剂性能,能溶解多种有机、无机和气体物质。有一定毒性,与水和醇无限互溶。
1、首先,乙腈价格高乙腈,特别是HPLC级的价格很高,但是,文献或LC厂家所示的条件,多用乙腈,这是为什么呢?现就此谈谈。
2、吸光度乙腈HPLC级的小。乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中,乙腈HPLC吸收最小(特别是在短波长上小)。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质,在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时,产生的噪声小,因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外,在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少,虽然,其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样,但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。另外,甲醇的HPLC级和优级,虽然所得的光谱相差不大,但是优级不能保证吸光度,有可能产生偏差,价格也相差不大,所以尽量使用HPLC 级。
3、压力乙腈低,柱内承受的压力,根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合且并不如此。所以,乙腈一方,在同样的流速下不在柱内加上多余的压力。从上述两项,可以确认使用乙腈的意义,那么,甲醇除了价格以外,还有没有其化优点呢?
4、洗脱能力一般而言,乙腈较强。乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强。特别是混合比率低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强。混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些。溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小。
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法(HPLC)是一种常用的分离和分析技术,其流动相的选择对分离效果至关重要。常用的流动相分为以下几种:
1. 甲醇:甲醇是一种常用的有机溶剂,具有良好的溶解性和极性。在反相色谱中,甲醇常与水混合作为流动相,以实现对极性物质的分离。
2. 乙腈:乙腈是一种有机溶剂,具有较高的极性。与甲醇类似,乙腈也可以与水混合作为流动相,用于反相色谱中对极性物质的分离。
3. 水:水是一种无机溶剂,具有良好的极性。在正相色谱中,水常与有机溶剂(如甲醇、乙腈等)混合作为流动相,以实现对极性物质的分离。
4. 乙酸乙酯:乙酸乙酯是一种有机溶剂,具有较弱的极性。在正相色谱中,乙酸乙酯可以与水混合作为流动相,用于分离弱极性物质。
5. 庚烷:庚烷是一种非极性有机溶剂,适用于分离非极性物质。在反相色谱中,庚烷可以与甲醇或乙腈混合作为流动相。
6. 混合溶剂:根据被测物的极性和分离需求,可以选用两种或多种溶剂混合作为流动相。例如,甲醇与水混合用于反相色谱,乙腈与水混合用于正相色谱等。
流动相的选择应考虑以下因素:
1. 被测物的极性:根据被测物的极性选择相应的流动相,以实现良好的分离效果。
2. 固定相的选择:根据固定相的极性,选择与之匹配的流动相。
3. 检测器的要求:某些检测器对流动相的极性有要求,需根据检测器类型选择合适的流动相。
4. 实验条件:如流速、柱温等实验条件,也会影响流动相的选择。
在高效液相色谱法中,常用的流动相包括甲醇、乙腈、水、乙酸乙酯、庚烷等,具体选择需根据被测物的极性、固定相、检测器要求等因素综合考虑。
高效液相色谱流动相选择
高效液相色谱流动相选择
流动相
流动相的性质要求:一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
流动相选择
1:由强到弱:一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验,这样可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。2:三倍规则:每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量,保留因子约增加3倍,此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中,注意观察各个峰的分离情况。 3:粗调转微调:当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。
选择流动相时应考虑以下几个方面:
①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩,从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关,特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时,所用流动相在检测波长下应没有吸收,或吸收很小。当使用示差折光检测器时,应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相,以提高灵敏度。④粘度要低(应<2cp)。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质,降低柱效,还会使柱压降增加,使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳,样品会在柱头沉淀,不但影响了纯化分离,且会使柱子恶化。⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。
流动相选择技巧
流动相的选择技巧
常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈,甲醇有其性价比的优势,可是甲醇
活性高,可能与某些样品发生反响,并且甲醇在低波长下有紫外汲取,会降低分
析方法的敏捷度 ; 乙腈固然价钱很高,毒性比甲醇大,可是洗脱能力比甲醇强,
极少与样品发生反响,用作流动相系统常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈,
甲醇有其性价比的优势,可是甲醇活性高,可能与某些样品发生反响,并且甲醇
在低波长下有紫外汲取,会降低剖析方法的敏捷度; 乙腈固然价钱很高,毒性比
甲醇大,可是洗脱能力比甲醇强,极少与样品发生反响,用作流动相系统压力要
比甲醇低好多,且截止波长比甲醇低20nm,增添了检测出在低波长下才有汲取
的杂质的可能性,所以我们一般偏向于多用乙腈,少用甲醇。可是有时样品峰
形不好或许分别不好,改换溶剂试一试是一个很好的选择,毕竟不一样的溶剂供给不同的选择性。
对流动相的优化主要在水相上下功夫,水里能够加酸、加碱、加盐,进而改
善峰形、提升分别度。流动相里加碱的状况比较少,主要仍是加酸,常用的酸有
磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等,此中最常用的是磷酸和三
氟乙酸,磷酸在低波长下没有紫外汲取,而三氟乙酸在低波长下有,可是三氟乙
酸易挥发而磷酸不可以,所以纯真做液相,低波长下磷酸最适合,三氟乙酸有汲取,
运转梯度时基线漂移很严重,而做液质就要考虑首选三氟乙酸了,近些年还比较
流行加甲酸或乙酸。一般状况下这几种酸没有太大差异,我们更多的是考虑经过
加酸改变流动相的pH 值,进而改良样品的分别度和峰形。
相同进样量样品峰越高则意味着峰形越好,从图中能够看出多半样品在低pH
流动相乙腈与甲醇的区别
流动相乙腈与甲醇的区别Post By:2007-2-14 10:00:00
1.吸光度:乙腈HPLC吸收最小(特别是在短波长上小)。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质,在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV 检测时,产生的噪声小,因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC 级最适宜。另外,在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少,虽然,其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样,但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。
2.压力:乙腈低。根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同样的流速下不在柱内加上多余的压力.从上述两项,可以确认使用乙腈的意义,那么,甲醇除了价格以外,还有没有其化优点呢?
3.洗脱能力:一般而言,乙腈较强.乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强.特别是混合比率低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强.混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些.溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小.
4.分离(洗脱)的选择性.两者的差异:乙腈和甲醇在分离的选择性上不同.由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性,乙腈和四氢呋喃是非质子性)不同所致.因此,在用乙腈类不能获得分离的选择性,就试用甲醇类看看.
甲醇和乙腈混合作为液质流动相的原理
甲醇和乙腈混合作为液质流动相的原理
在液相色谱中,流动相是非常重要的组成部分。流动相的选择会直接影响分离效果。常见的流动相有水、甲醇、乙腈等有机溶剂及其混合物。通过调节流动相的组成,可以有效控制待测物质在固定相和流动相之间的分配,从而实现理想的分离效果。
甲醇和乙腈混合液作为流动相具有以下优势:
1. 低粘度和低背景值
与水相比,甲醇和乙腈混合液具有较低的粘度,这有利于降低系统背压,可以使用较高的流速,缩短分析时间。同时,它们也具有较低的紫外吸收背景值,有利于检测具有紫外吸收的目标物质。
2. 较强的溶解能力
甲醇和乙腈都是极性溶剂,可以溶解较多的极性和中等极性化合物。同时,通过调节二者的比例,可以调控混合液的极性,适用于更广泛的待测物质。
3. 与反相填料相容性好
反相填料是液相色谱中常用的固定相,由于具有疏水性,与甲醇和乙腈混合液有着良好的亲和力,可以实现高效的反向分配色谱。
4. 易于梯度洗脱
在进行梯度洗脱时,甲醇和乙腈与水的混溶性好,可以实现无间断的梯度变化,获得更好的分离效果。
需要注意的是,在使用甲醇和乙腈混合液时,必须考虑溶剂的纯度、对仪器零件的腐蚀性以及对环境的影响等因素,并根据实际情况进行优化,以获得最佳的分离效果。
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HPLC反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇比较
1,首先,乙腈价格高乙腈,特别是HPLC级的价格很高,但是,文献或LC厂家所示的条件,多用乙腈,这是为什么呢?现就此谈谈。
2,吸光度,乙腈HPLC级的小。乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中,乙腈HPLC 吸收最小(特别是在短波长上小)。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质,在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时,产生的噪声小,因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外,在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少,虽然,其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样,但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。另外,甲醇的HPLC级和优级,虽然所得的光谱相差不大,但是优级不能保证吸光度,有可能产生偏差,价格也相差不大,所以尽量使用HPLC级。
3,压力,乙腈低.柱内承受的压力,根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同样的流速下不在柱内加上多余的压力.从上述两项,可以确认使用乙腈的意义,那么,甲醇除了价格以外,还有没有其化优点呢?
4,洗脱能力,一般而言,乙腈较强.乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强.特别是混合比率低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强.混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些.溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小.
5,分离(洗脱)的选择性.两者的差异,乙腈和甲醇在分离的选择性上不同.由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性,乙腈和四氢呋喃是非质子性)不同所致.因此,在用乙腈类不能获得分离的选择性,就试用甲醇类看看.
6,峰形,用时出现差异.像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈类时拖尾大,用甲醇类可抑制.可是,一般情况下,聚合物类反相柱,与硅胶柱相比,更具有峰形宽的倾向,特别是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等时常见.这在流动相是甲醇时非常显著,而用乙腈时不明显.为此,用聚合物类反相用柱时建议采用后者(乙腈类),这是因为乙腈使凝胶膨润.
7,流动相的脱气,乙腈类要注意.混合溶剂的置制,不说在LC装置内,只谈预先在流动相瓶内进行时,(等浓度系统).甲醇与水混合时发热,多余的溶解空气较易变为脱出气泡(脱气容易).而乙腈由于吸热冷却,随着慢慢回到室温,产生气泡,所以要考虑脱气(加温搅拌,过滤膜,He 脱气等).
8,结论
以上反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇进行了比较.粗略地讲是,使用乙腈HPLC级最好,
在选择性,峰形差时试用甲醇HPLC,但根据各种不用性质设计分析条件也是必要的.
选择流动相是我们要考虑的因素:1能够适当的溶解样品,并且与非样品不发生反应2与其他使用的流动相能混合3粘度低,不为柱子增添其他负担4用UV检测器时,样品的检测波长里没有UV吸收5用RI检测器时样品的曲折率与流动相的曲折率差别明显6沸点与分析温度之间要有一定差距,避免产生气泡7不容易引燃,爆炸8对人体无害9廉价
UV检测器或荧光检测器使用的时候需要注意的是,由于溶剂的不同可测定的波长范围也有所不同,使用的溶剂自身也有吸收特性,导致基线漂移,或者样品不出峰的情况。在下图中列出了HPLC常用的一些有机溶剂的紫外吸收特性,如果说UV检测中最普遍被用到的波长为254nm的话,苯(倒数第三行)与甲苯(倒数第二行)的透过率就很显然不符合要求。而乙腈(第一行)和甲醇(第三行)都能符合要求
液相色谱柱的保存
1.反相色谱柱每天实验后的保养:
使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱:
如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
色谱柱的保存方法
A.几天之内的短期放置,应先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗) ,再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。
B.如果色谱柱长期不用,应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱,再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。
C.色谱柱应贮存在4℃-室温下,如果放置于0℃以下的环境里,柱内就会结冰,这也将导致柱效的降低。
D.注意溶剂的PH值,一般硅胶基质的色谱柱控制在2~8范围内。
贴心提示:
①首先柱子必须清洗干净后才能贮存,柱子不能贮存在水或水性溶剂中,否则会引起微生物的滋生。
②如果您使用的流动相中含有盐,请首先用高比例水冲洗(3%-5%有机相,1ml/min流速,冲洗30至40分钟),然后再用纯乙腈冲洗30分钟
③一定要将色谱柱的两端封严, 以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象,引起柱子结构的几何学改变,这可导致柱效的严重降低。
不同的色谱柱,采用不同的流动相保存的,反相色谱柱,就直接用甲醇。正相色谱柱就用正已烷了,如手性手色谱柱,不同的型号,要根据柱子的要求进行存放的。
如果长时间不用的话,最好是找个容器,用甲醇或乙腈把色谱柱浸泡起来。1,反相色谱柱一般都用纯乙腈饱和放置
2,正相色谱柱用正己烷饱和放置;
3,手性色谱柱一般用90HEX:10IPA,也有用90HEX:10EtOH的,针对柱子;4,反相手性色谱柱用40ACN:60H2O饱和放置;
总之柱子要保存在溶剂中,不然柱子干了,基本就没什么用了!