兽医生物制品学_第七章___实验动物、动物实验的基本技术方法

5、犬的抓取固定
狗性凶恶，能咬人，因此进行实验时第一个步 骤就是要绑住狗嘴。驯服的狗绑嘴时可从侧面 靠近轻轻抚摸其颈背部皮毛，然后迅速用布带 缚住其嘴。方法是用布带迅速兜住狗的下颌， 绕到上颌打一个结，再绕回下颌下打第二结， 然后将布带引至头后颈项部打第三个结，并多 系一个活结（以备麻醉后解脱）。
方法和步骤是否切实可行。
二、实验动物的抓取与固定
1、小鼠抓取固定方法
小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓 取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其 向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两 耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢 拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可
2、大鼠的抓取与固定 3、豚鼠的抓取与固定
四 、常见实验动物的特性及用途
1. 小白鼠：用途，半数致死量实验，药物及生物 制品实验等。注意，小白鼠对热敏感，不可超 过32℃
2. 大白鼠：用途，基本同小白鼠，并对维生素， 氨基酸敏感，可做营养实验。
3. 豚鼠：用途，做补体使用；变态反应；不合成 维生素C；对抗生素敏感；对霉变饲料和温度 敏感。
1）．头部固定：固定狗头需用一特制的狗头固 定器，狗头固定器为一圆铁圈，圈的中央有一 弓形铁，与棒螺丝相连，下面有一根平直铁闩。 操作时先将狗舌拉出，把狗嘴插入固定器的铁 圈内，再用平直铁闩横贯于犬齿后部的上下颌 之间，然后向下旋转螺丝，使弓形铁逐渐下压 在动物的下颌骨上，把铁柄固定在实验台的铁 柱上即可。
3. SPF动物（三级动物）：不存在某种病原 微生物或寄生虫的动物。通过检查淘汰 阳性动物选育。原种群多来自无菌动物 或悉生动物基础上选育。
4. 无菌动物（四级动物）：GF—germ free animals。指体内检查不出任何细菌、病 毒、寄生虫的动物。是由剖腹产，无菌 环境饲养的动物。
5. 悉生动物（gnotobiotic animals）：是有 无菌动物人工植入某种已知微生物的动 物。如单菌动物，双菌动物，三菌动物， 也可以叫X联悉生动物。
（2）腹腔和静脉给药麻醉法
非挥发性和中药麻醉剂均可用作腹腔和静脉注 射麻醉，操作简便，是实验室最常采用的方法 之一。腹腔给药麻醉多用于大小鼠和豚鼠，较 大的动物如兔、狗等则多用静脉给药进行麻醉。 由于各麻醉剂的作用长短以及毒性的差别，所 以在腹腔和静脉麻醉时，一定控制药物的浓度 和注射量。
例如把红色的记为十位数，黄色记为 个位数，那么右后腿黄斑，头顶红斑， 则表示是49号鼠，其余类推。
三、编号和标记方法
染色法多用于实验周期较短，动物数 量不多的情况。这种方法标号简单，动 物无疼痛和损伤，但由于动物之间互相 摩擦、舔毛，尿、水浸溃被毛或脱毛， 或因日久颜色自行消退等原因，不宜用 于长期的实验。
三、编号和标记方法
2．挂牌法 将号码压在金属号码牌上， 最好用铝牌，可以反复使用不生锈。将 金属牌固定在实验动物耳朵上作为标记。 使时，先将号码牌的尖端避开耳朵中央 动脉过耳壳，再由耳朵内侧面将其折曲 固定，一般用于兔、豚鼠标记。猴、猫 等动物有时可拦 颈部或笼箱上。用于犬 的金属号码牌较大，且牌上穿有小孔， 可固定在犬链条上作标记。
常用的脱毛剂配方：
（1）硫化钠3g、肥皂粉1g、淀粉7g，加水适 量调成糊状。
（2）硫化钠8g、淀粉7g、糖4g、硼砂1g,加水 75ml。
（3）硫化钠8g,溶于100ml水中
以上三种配方适合于家兔、大鼠、小鼠等小动 物的脱毛。
（4）硫化钠10g、生石灰15g，溶于100ml水中， 此配方适用于犬等大动物的脱毛。
特点：
1. 基因纯合；
2. 资料可查。 3. 遗传稳定； 4. 实验可比性。 5. 品系特殊。
缺点：近交衰退，隐形基因暴露和多基因 平衡破坏。
（二）封闭群动物：五年内不引进，群内 随机交配，一般是50—100头的群。
特点：
1. 近交系数低。
2. 生活力强。
3. 繁殖量达。
4. 成本低。
（三）突变系动物：由于正常染色体个别 基因发生突变，而导致动物性状的改变。
1．染色法 染色法是用化学剂在动物身体明 显部位如被毛、四肢等处进行涂染或用不同颜 色等来区别各组动物，是实验室最常用、最容 易掌握的方法。
常用的编号标记溶液有： ①3％一5％苦味酸溶液，涂染成黄色； ②2％硝酸银溶液，涂染成咖啡色(涂后需光照10
min)； ③0.5％中性红或品红溶液，涂染成红色； ④煤焦油酒精溶液，涂染成黑色； ⑤龙胆紫溶液，涂染成紫色。
第二节 实验动物的分类
一、根据来源和实际应用分类 1. 实验动物：小白鼠、大白鼠、豚鼠、
地鼠、家兔。 2. 家畜家禽：猪、马、牛、羊、鸡鸭鹅
等。 3. 野生动物：青蛙，蟾蜍，鱼，鸟，野
鼠。 4. 观赏动物：犬，猫，孔雀。
二、根据遗传控制程度分类：
(一）近交系动物：一般称纯系动物，近 交连续20代以上，近交系数达88、6—99、 8%，现有品系在300种以上。
（二）动物的麻醉方法
1．全身麻醉
（1）吸入法 用一块圆玻璃板和一个钟罩或 一个密闭的玻璃箱作为挥发性麻醉剂的容器， 多选用乙醚作麻药。麻醉时用几个棉球，将乙 醚倒可其中，迅速放入钟罩或箱内，让其挥发， 然后把待麻醉动物投入，约隔4-6分钟即可麻 醉，麻醉后应立即取出，并准备一个蘸有乙醚 的棉球小烧杯，在动物麻醚变浅时给套在鼻上 使其补吸麻药。
标记时用标记笔签蘸取上述溶液，在动物体表 不同部位涂上斑点，以示不同号码。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
编号原则是：先左后右，从前到后。 一般把涂在左前脚上的记为1号，左侧腹 部为2号，左后腿为3号，头顶部为4号， 腰背部为5号，尾基部为6号，右前腿为7 号，右侧腰部为8号，右后腿为9号。若 动物编号超过10或更大数字时，可使用 上述两种不同颜色的溶液，即把一种颜 色作为个位数，另一种颜色作为十位数。 这种交互使用可编到99号。
三、实验动物用途、研究与生产现状 用途： 1. 医学和兽医学。 2. 生物制品 3. 制药工业 4. 胚胎生理学 5. 食品饲料 6. 农药实验
7. 食品添加剂中有害因子
8. 武器和航天研究
9. 发展现状：
实验动物研究外国起步较早，我国晚，已 育成近交系615，津白Ⅰ号，津白Ⅱ号等 得到了国际承认。我国整体实验动物事业 在数量和质量上还处于较低水平。
四、实验动物被毛的去除方法
2、拔毛法 兔耳缘静脉注射或取血时以及大鼠、 小鼠 作尾静脉注射时，需用拇指、食指将局部 被毛轻轻拔去，需要时在拔毛处涂抹一些液体 石蜡油或凡士林使血管清晰明显以利于操作。
3、剃毛法 将所需剃毛的部位的被毛先用剪刀 粗剪一遍，然后 用温肥皂水，将此部位润湿， 用剃刀顺被毛方向剃毛。或者使用电动剃毛推， 逆被毛方向剃毛。这种方法常用于豚鼠等动物。
2．非挥发性麻醉剂 这类麻醉剂种类较多， 包括苯巴比妥钠、戊巴比妥钠等巴比妥类的衍 生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。这些麻醉剂 使用方便，一次给药可维持较长的麻醉时间， 麻醉过程较平衡，动物无明显挣扎现象。但缺
点是苏醒较慢。
3．中药麻醉剂 动物实验时有时也用到象洋金 花和东莨菪碱等中药麻醉剂，但由于其作用不 够稳定，而且常需加佐剂麻醉效果才能理想， 故在使用过程中不能得到普及，因而，多数实 验室不选用这类麻醉剂进行麻醉。
三、编号和标记方法
3．烙印法 烙印法是用刺号钳将号烙压 在动物无体毛或明显部位，如耳、面鼻 和四肢部位等。另外，有时用烧红的铁 烙在动物(多半用于大、中型动物）体表 明显的部位，烧烙出号码，然后用以酒 精为溶剂的染料涂布。此类方法应注意 烙号部位的污染和预防感染。
三、编号和标记方法
4．耳孔法 耳孔法是专用于动物编号而 直接在动物耳朵上打孔的方法，由打孔 的位置和孔的数量来标记。用剪刀++将 耳缘剪缺口也可代替此方法。打孔应注 意防止孔口愈合，可使用滑石粉涂抹在 打孔局部。
一般来说，小型动物适宜用耳孔法和 染色法，中型动物适用挂牌法和烙印法。
四、实验动物被毛的去除方法
动物的被毛常常因为会影响实验的操作和实验 结果的观察，因此实验中通常 去除或剪短动物 的被毛。去除被毛的方法有四种：剪毛、拔毛、 剃毛和脱毛。
1、剪毛法 一般将动物固定后，用弯头手术剪 紧贴手术者左手绷紧的动物皮肤，依次将所需 实验部位的被毛剪去。可先粗剪，然后再细剪， 不可用手提着动物剪被毛，这样易剪破皮肤。 剪下的毛集中放在一个容器内，不要遗留在手 术台周围，避免注射器等夹毛。
五、实验动物的麻醉
在一些动物实验，特别是手术等实验，为减少 动物的挣扎和保持其安静，并便于操作，常对 动物采用必要的麻醉。由于动物种属间的差异 等情况，所采用的麻醉方法和选用的麻醉剂亦 有不同。
(一)常用的麻醉剂
动物实验中常用的麻醉剂分为三类，即挥发性 麻醉剂、非挥发性麻醉剂和中药麻醉剂。
1．挥发性麻醉剂 这类麻药包括乙醚、氯仿 等。乙醚吸入麻醉适用于各种动物，其麻醉量 和致死量差距大，所发安全度亦大，动物麻醉 深度容易掌握，而且麻醉后苏醒较快。其缺点 是对局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液 体分泌增多，再通过神经反射可影响呼吸、血 压和心跳活动，并且容易引起窒息，故在乙醚 吸入麻醚时必需有人照看，以防麻醉过深而出 现上情况。
•4 、 家 兔 的
抓 取 与 固 定
1、2、3均为不正确的抓取方法（1．可损伤两肾， 2．可造成皮下出血，3．可伤两耳），4、5为正确的抓 取方法。颈后部的皮厚可以抓，并用手托兔体。
兔的固定：一般采用台式和马蹄形。四肢用粗 棉绳活结绑住，拉直四肢，将绳绑在兔台四周 的固定木块上，头以固定夹固定或用一根粗棉 绳挑过兔门齿绑在兔台铁柱上；
全球有350种，大鼠50种，如癫痫大鼠，高 血压大鼠，裸鼠（无胸腺），不同肿瘤多 发鼠。可用于研究病的的机理和治疗药物。
（四）杂交群动物：两品或多品系之间 有针对性的杂交，具有强的生命力和高 的生产性能。如猪三元杂交：杜洛克♂+ 长白—大约克♀→杜长大，为我国主流 商品猪品系。
（五）混杂群动物：血统不清，遗传性 能不稳定的动物。优点：适应能力强； 容易饲养，成本低。缺点：实验结果重 复性差，反应不规则。
4. 地鼠：用途，肾细胞培养用；癌症研究；对病 毒敏感。
5. 家兔：用途，生物制品制造；药品安全、效力、 热原质实验；对细菌和病毒敏感。
动物实验的基本技术方法
一、动物实验前的准备 理论准备：了解有关实验动物方面的知识 条件准备：仪器、药品、试剂、实验动物、
动物实验室 预实验：检查各项准备工作是否完善，实验
三、根据微生物学控制程度分类
农业部规定生物制品实验使用动物要求 达到清洁级动物，鸡，鸭胚胎要求达到 SPF标准。
1. 普通级动物：（一级动物），未特殊控 制的动物，但不携带人畜公患微生物， 如沙门氏菌，结核杆菌，巴氏杆菌，李 氏杆菌，钩端螺旋体，皮肤霉菌及体外 寄生虫。
2. 清洁级动物（二级动物）：种群来自剖 腹产SPF动物，饲养管理卫生，种群清楚， 微生物控制达到清洁动物标准。
2）.四肢固定：如采取仰卧位，四肢固定方法与 家兔相同。
犬的抓取与固定
6、猴的抓取与固定 7、小型猪的抓取与固定
三 实验动物的编号、标记
在动物实验中，为了观察每个实验动物的反 应情况，必须对实验动物进行编号、标记。标 记的方法应保证号码清楚、耐久、简便、易认 和适用。
现介绍几种常见标记方法：染色法、标牌法、 烙印法、耳孔法。
第七章 实验动物、动物实验 的基本技术方法
第一节 概述 一、实验动物的概念：
指人工饲养的、对携带的微生物实 行控制，遗传背景和来源清楚，用于科 研、教学、生产以及检验的动物。
二、实验动物的共同特点： 1. 进化高等与人畜生理系统相同。 2. 对理化因素敏感与人畜相同。 3. 成本低，易饲养管理。 4. 生长繁殖快。
四、实验动物被毛的去除方法
4、脱毛法 脱毛是指用化学脱毛剂将实验动物 被毛脱去，适用于无菌手术的准备以及观察动 物皮肤血液循环和病理变化。方法：将需脱毛 部位的被毛先用弯头剪子剪去，尽量剪短，不 要剪破皮肤。然后用温水将该部位润湿，再用 纱布包扎棉球的小棒蘸脱毛剂，在需要脱毛部 位涂一薄层。经2-3min后，用温水洗去该部位 脱下的毛，自然凉干备用，不要用纱布去擦， 以免损伤皮肤。