金鱼胰岛素样生长因子2基因克隆与组织表达

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鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒使用说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒使用说明书【鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒试剂盒名称】鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒【鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒试剂盒用途】定量鱼血清、血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)的含量【鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。

将标准品、待测样本加入到预先包被胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。

依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)含量。

【鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL0.6mL8底物夜B6mL 2标准品：200ng/ml20mL9终止液6mL 320倍浓缩洗涤液4标准品稀释液6mL10说明书1份5样本稀释液6mL11封板膜1张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml【鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【鱼胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)ELISA检测试剂盒操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备

ＥＵＳｄＷｅｔｒｌｔＴｅｒｓｌｓｏｅａｅｅｗａｙｏｙｕｔｔｎｏｓｔｏａｅｔｅｕｎｅｒｐｒＡａｓｅｂｏ．ｈｅｕｔｈｗｄｔｔｈｒｓａｓｎｎｍｏｓｍｕａｉｆ１ｉｃｍｐｒｄｗｉｓｑｅｃｅｏ－ｎｎｈｔｏｅｈｔｄＴｅＳＳＰｅ．ｈＤ．ＡＧＥｓｏｅｈｔ出ｅｒｃｍｂｎｔｐｔｉｘｒｓｅｎｔｅｆｒｏｃｕｉｎｂｄｅｎｍｏｎｅｏ３％ｈｗｄｔａｅｏｉａｒｅｎｅｐｅｓｄｉｈｏｍｆｉｌｓｏｏｉｓａｄａｕｔｄｔ５ｎｏｎ０ｅｗｏｅｐｏｅｎｉｈｃｌｃｌ．ＥＳｓｏｅａｅｔｅｆｈｎｉｅｕｗｓ６Ｏ．ＷｅｔｒｌｔｉｄｃｔｄｔａｆｔｈｌｒｔｉｎｔｅＥｏｉｅ１ｈＵＡｈｗｄｔｔｈｉｒｏｅａｔｒｍａ４０ｈｔｔｔｓｓｅｂｏｉａｅｔｎｎｈｔｅａｔｅｍＯｌｅｃｏｔｅｒｃｍｂｎｎｒｔｉｐｃｆａｌ．ｈｎｉｒｓｕＣｕｄｒａｔｔｈｅｏｉａｔｐｏｅｎｓｅｉｃｌｉｙ
Ｒｓｒ￡ｅｈｎｓＡａｅｙｏｉｅｃｎｅ，Ｊｇｈｕｕｅ４４０）ｅａｃＪ，ＣｉｅｃｄｍＦｈｒＳｉｃｓｉｚｏ．Ｈｂｉ３００ｅｈｅｆｓｙｅｎ
Ａｂｔａｔｏｍｏａｐｉｓｌ・ｋｒ卅ｈｆｃｒ（Ｇ・ｇｎａｕｃｓｕｙｃｎｄｆｍｌｅｔＮｓｒｃ：ＣｍｎｃｒｕｉｌｅｇｏｔｓＩＦ Ⅱ）ｅｅｗｓｓｃｅｓｌｌｅｏｉｒｏｌＡ，ａｄｅ・ｎｎｉａｏｆｌｏｒｖｔａＲｎｘ

鲤鱼LGP2的基因克隆与表达

鲤鱼LGP2的基因克隆与表达王蕾;李华;高志辉;安利国;祝瑶瑶【摘要】利用反转录-聚合酶链式反应和互补脱氧核糖核酸(cDNA)末端快速扩增技术克隆得到鲤鱼的遗传和生理学实验室蛋白2(LGP2)基因的cDNA全长,并对其在鲤鱼抵抗病毒和细菌感染过程中的免疫作用进行研究.结果表明:鲤鱼的LGP2的cDNA全长共2978 bp,开放阅读框为2037 bp,编码679个氨基酸;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测鲤鱼的LGP2的信使核糖核酸(mRNA)表达于所有被测组织中,且在鳃和脑中的表达量较大,而在性腺和血液中的表达量较小;采用poly I:C和嗜水气单胞菌腹腔注射刺激鲤鱼后,各组织中LGP2的mRNA表达量均有所增大;LGP2是鲤鱼以依赖维甲酸诱导基因I样受体(RIG-like receptors,RLR)信号通路的方式进行抗病毒和抗细菌天然免疫过程中的重要调节因子.%The full length of cDNA in the laboratory of genetics and physiology 2 (LGP2)of common carp was identified using reverse transcription-polymerase chain reaction(PCR)and rapid-amplification of complementary deoxyribonucleic acid (cDNA)ends,and its function in the antiviral or antibacterial innate immune response was studied. The results show that the full length of the cDNA of LGP2 in common carp is 2978 bp,containing an open reading frame of 2037 bp, which encodes a protein of 679 amino acids. The results of real-time PCR indicate that the messenger ribonucleic acid (mRNA)of LGP2 is expressed in all tested tissues of healthy common carp,with a high level in gills and brain,while lower expressed in gonads and blood. The expession levels of mRNA in LGP2 in different tissues are significantly up-reg-ulated by poly I:C or Aeromonas hydrophila injection. LGP2 is a criticalregulator in the retinoic acid-inducible gene-like receptors signal pathway of the innate immune response after stimulation with poly I:C and bacteria in a common carp.【期刊名称】《济南大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(031)006【总页数】7页(P506-512)【关键词】鲤鱼;遗传和生理学实验室蛋白2;基因表达;嗜水气单胞菌【作者】王蕾;李华;高志辉;安利国;祝瑶瑶【作者单位】山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性生物学重点实验室,山东济南 250014;山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性生物学重点实验室,山东济南 250014;山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性生物学重点实验室,山东济南 250014;山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性生物学重点实验室,山东济南 250014;山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性生物学重点实验室,山东济南 250014【正文语种】中文【中图分类】Q939.91目前研究比较多的模式识别受体主要有3类，即Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)、NOD样受体(NOD-like receptors, NLRs)和维甲酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene I，RIG-I)样受体(RIG-like receptors, RLRs)[2]。

胰岛素样生长因子和鱼类繁殖课件

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内分泌干扰
Igf1在鱼性腺中似乎是内分泌失调复合物的目标,特别是仿雌激素罗非鱼早期发育时暴露于环境相关浓度的 17 α - 炔雌醇- 求偶素 (EE2; 5 和
25 ng EE2/L)中导致生长障碍，雌性化并改变肝脏和性腺中Igf1的表达性腺的响应模式不同于肝脏, 在两性中从刚开始的igf1 mRNA 的上升调节实现长
在人工培养的日本鳗鱼和罗非鱼的睾丸中,Igf1刺激精子形成是经11-酮睾酮 (11-KT)诱导。此外,Igf1刺激虹鳟鱼睾丸中的精子发生过程中的胸腺嘧啶核苷纳入到精原细胞和主精母细胞
基于上诉结果,Igf1被认为是鱼类精子形成过程中的自我监管机构,在一定程度上与雄激素11-KT相互作用
但更多的关于Igf及睾丸实验仍需深入研究
胰岛素样生长因子和鱼类繁殖
1
摘要
鱼类是优秀的生物医学模型
鱼类的水产养殖对全球粮食产量的影响力稳步增加鱼类繁殖与内生的集成神经内分泌(促性腺激素)、内分泌和自分泌/旁分泌信
号有关，并与外源性因素(环境)有关
主要的性腺分化和功能的内分泌监管机构是类固醇激素，最近的研究表明其他激素也参与其中
11
igf1 mRNA 和肽在雌性生殖细胞 29 DPF ( 受精后天数 ) 被检测到而在雄性生殖细胞 51~ 53DPF之前都检测不到
在罗非鱼中 , 卵巢的第一次减数分裂发生在 28 DPF 左右，在睾丸中则发生在 52 - 53 DPF左右
根据这些结果提出生殖细胞中Igf1的出现可能与减数分裂的出现有关,因此, Igf1可能参与增殖扩散
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海鲷中，向幼龄期个体施加 3.5 微克 E2 减少了卵巢 igf1mRNA ，而对 igf2mRNA 没有明显的影响

鲤RNF2基因的克隆、组织表达与生物信息学分析

摘要:以鲤肾脏组织 RNA 为模板,扩增并克隆鲤环指蛋白 2( RING Finger Protein 2,RNF2) 基因的 CDS 区全长,
分析其组织表达谱。结果显示,鲤 RNF2 基因的 CDS 区序列长 1 011 bp,编码 336 个氨基酸;该基因与鲫、斑马
第 55 卷第 3 期 2021 年 6 月
河南农业大学学报 Journal of Henan Agricultural University
Vol. 55 No. 3 Jun. 2021
引用:刘变枝,李海洁,郭家鸿,等. 鲤 RNF2 基因的克隆、组织表达与生物信息学分析[ J] . 河南农业大学学报,2021,55( 3) : 468-476. DOI:10. 16445 / j. cnki. 1000-2340. 20210506. 003
收稿日期 :2020 - 12 - 14 基金项目:国家自然科学基金项目( 31702359) ;河南省科技攻关项目( 172102110047) ;河南农业大学科技创新基金项目( KJCX2017A07) 作者简介:刘变枝 (1981—) ,女,河南开封人,讲师,博士,主要从事鱼类营养与免疫研究。通信作者:李明(1965—) ,男,河南永城人,教授,博士。
含 RING 结构域和 RAWUL 结构域,且 RING 结构域与斑马鱼、小鼠和智人完全一致;二级结构和三级结构表明,
鲤鱼 RNF2 蛋白含有 α-螺旋(35. 12% ) 、延伸链(8. 63% ) 、β-转角 ( 0. 89% ) 和无规则卷曲 ( 55. 36% ) ;泛素化底
鱼、金头鲷、海洋青鳉鱼、鳕鱼、非洲爪蟾、尖尾娇鹟、小鼠、智人的同源性分别为 98. 2% 、93. 1% 、78. 0% 、79. 2% 、

德国镜鲤基因组dna文库构建igf-ⅱ基因筛选鉴定

德国镜鲤基因组ＤＮＡ文库的构建及ＩＧＦ—ＩＩ基因的筛选与鉴定摘要德国镜鲤（ＣｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏＬ．ｍｉｒｒｏｒ）原产于德国巴伐利亚州，为鲤亚科Ｃｙｐｒｉｎａｅ鲤属Ｃｙｐｒｉｎｕｓ的鱼类，是欧洲各国池塘养殖的主要对象，以后又移植到以色列、日本及我国等亚洲国家。

尽管镜鲤是我国水产主要养殖品种，其分子生物学研究却远远滞后。

胰岛素样生长因子一ｉｌ（ＩＧＦ—ＩＩ）是ＩＧＦｓ基因家族中的一员，它在促进生长，胚胎发育，脑部发育，肿瘤形成等方面都有重要作用。

建立一个完整的基因组ＤＮＡ文库是开展分子生物学研究的一个基础工作，是分离特定基因的有效手段。

本论文构建了德国镜鲤基因组ＤＮＡ文库，并利用ＤＮＡ文库对德国镜鲤胰岛素样生长因子一ｉｌ（ＩＧＦ—ｉｌ）基因进行了筛选与鉴定。

取镜鲤肝组织５克，提取基因组ＤＮＡ。

取少量基因组ＤＮＡ利用限制性内切酶Ｓａｕ３ＡＩ进行酶消化预试验，确定得到９－－２３ｋｂ消化产物的最佳酶量和反应时间。

利用预试验获得的最佳条件，取１００ｕｇ镜鲤基因组ＤＮＡ进行大规模酶消化试验，产物经１０％－－４０％蔗糖密度梯度离心分离，回收９－－２３ｋｂ片段ＤＮＡ。

以噬菌体＾ＤＡＳＨＩＩ为克隆载体，与回收片段进行连接、包装，将包装产物与宿主菌ＬＥ３９２混合培养，构建德国镜鲤基因组ＤＮＡ文库，测试其滴度为ｌＯ＂ｐｆｕ／ｍｌ，根据公式Ｎ＝Ｉｎ（卜Ｐ）／Ｉｎ（卜ｆ），９９％的镜鲤基因组包含在该基因组文库中。

随机选取５个独立的噬菌斑，提取ＤＮＡ后用ＥｃｏＲＩ与ＢａｍＨＩ进行酶切分析，证明克隆重组率为１００％，对文库进行扩增。

用ｓＭ对基因组文库进行适当稀释，与新鲜制备的宿主菌ＬＥ３９２混合培养，制备噬菌体平板。

将噬菌体ＤＮＡ转移至硝酸纤维滤膜ｈ利用已知的鲤鱼胰岛素样生长因子一ＩＩ（ＩＧＦ—ＩＩ）ｃＤＮＡ设计探针，用”Ｐ标记ＩＧＦ—ＩＩ探针，在硝酸纤维滤膜上进行杂交，洗膜２次，放射自显影。

挑取阳性克隆，与宿主菌混合培养，进行第二轮噬菌斑原位杂交，对阳性克隆进行纯化。

哲罗鲑胰岛素样生长因子Ⅱ cDNA的克隆与组织表达分析

哲罗鲑胰岛素样生长因子Ⅱ cDNA的克隆与组织表达分析吴秀梅;徐黎明;王晓玉;纪锋;赵景壮;刘淼;曹永生;卢彤岩;尹家胜【期刊名称】《大连海洋大学学报》【年(卷),期】2015(030)006【摘要】为了研究胰岛素样生长因子-Ⅱ（insulin-like growth factors-Ⅱ,IGF-Ⅱ）在哲罗鲑Hucho taimen生长繁殖过程中所起的作用,根据Gen Bank收录的大西洋鲑IGF-Ⅱ基因开放阅读框序列（NCBI登录号：NM001123647）设计用于哲罗鲑IGF-Ⅱ开放阅读框扩增的引物,以哲罗鲑肝脏总RNA反转录成的cDNA为模板,利用PCR方法克隆获得哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的开放阅读框。

生物信息学分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的长度为645 bp,编码含有214个氨基酸残基的蛋白,该蛋白的相对分子质量为24554,等电点为9.92;哲罗鲑IGF-Ⅱ前肽由信号肽、B、C、A、D、E肽6部分构成;同源性比对和系统进化分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ与鲑科鱼类IGF-Ⅱ核苷酸序列同源性最高,聚为一支,其中与大西洋鲑的IGF-Ⅱ同源性最高（98.6%）,该基因在进化过程中有着高度保守的进化特性;用荧光定量PCR技术检测2龄哲罗鲑IGF-Ⅱ基因在不同组织中的表达,结果显示,该基因在肝脏中表达量最高,在心脏、鳃、脾、后肠、头肾、胃中的表达量次之,而在前肠和脑中的表达量最低。

【总页数】6页(P604-609)【作者】吴秀梅;徐黎明;王晓玉;纪锋;赵景壮;刘淼;曹永生;卢彤岩;尹家胜【作者单位】[1]中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;[2]上海海洋大学水产与生命学院,上海201306【正文语种】中文【中图分类】S917.4【相关文献】1.哲罗鲑胰岛素样生长因子Ⅱ cDNA的克隆与组织表达分析 [J], 吴秀梅;徐黎明;王晓玉;纪锋;赵景壮;刘淼;曹永生;卢彤岩;尹家胜2.哲罗鲑胰岛素样生长因子－I（IGF－I）cDNA 分子克隆、序列分析及组织表达[J], 王晓玉;纪锋;徐黎明;赵景壮;刘淼;曹永生;尹家胜3.牙鲆胰岛素样生长因子结合蛋白IGFBP-1cDNA全长的克隆及表达分析 [J], 翟万营;张俊玲;施志仪;李巍4.胭脂鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)cDNA的分子克隆、序列分析及组织表达[J], 郑凯迪;陈小川;李英文5.鳡胰岛素样生长因子1基因的克隆及其组织特异性表达分析 [J], 郁建锋;李建林;徐建荣;卢祥云;柏洁;顾志良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鲤胰岛素样生长因子的克隆与表达研究的开题报告

鲤胰岛素样生长因子的克隆与表达研究的开题报告1.选题的背景和意义胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor，IGF）是体内一类由肝脏和其他细胞合成的重要激素，在很多生理过程中发挥着重要作用。

IGF呈现出类似胰岛素的结构，可促进细胞增殖、分化和代谢。

其中，IGF-1是临床应用最为广泛的一种，对于细胞增殖、代谢和细胞进程中的许多重要指标具有关键作用。

目前对于IGF-1的研究已经取得了一些进展，但对于鲤胰岛素样生长因子（carp insulin-like growth factor，CIGF）的研究还相对较少。

鲤是一种常见的淡水鱼类，其生长发育和生物学特性与人类有着许多相似之处，因而被广泛用于生物学研究中。

因此，对于CIGF的研究，将有助于深入了解其在鱼类生长发育和代谢中的作用，对于鱼类养殖业的发展也具有重要意义。

2.研究的目的和内容本研究的主要目的在于对鲤胰岛素样生长因子的基因进行克隆和表达分析。

具体内容包括以下方面：（1）根据已有文献报道，设计引物克隆鲤CIGF基因；（2）利用PCR技术从鲤脂肪组织中扩增出CIGF基因片段；（3）将CIGF基因克隆到表达载体上，进行表达试验；（4）对表达CIGF基因的蛋白进行纯化和鉴定；（5）对CIGF基因的表达量和时空分布进行分析。

3.研究的方法和步骤（1）设计引物并克隆：根据鲤CIGF基因序列设计引物，用RT-PCR 技术从鲤脂肪组织中扩增出目的基因片段，进行酶切、克隆和测序。

（2）表达试验：将CIGF基因克隆到表达载体上，转化大肠杆菌E.coli BL21，并对表达条件进行优化，如诱导剂浓度和诱导时间。

利用SDS-PAGE和Western blot检测表达CIGF基因的蛋白。

（3）纯化和鉴定：通过Ni2+-NTA柱和FPLC进行蛋白纯化；利用MALDI-TOF-MS技术对蛋白质进行鉴定。

（4）表达量和时空分布的分析：利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术，对CIGF基因表达的时空分布与调控进行研究。

金鱼PP2A-B′家族δ基因cDNA的克隆及表达分析的开题报告

金鱼PP2A-B′家族δ基因cDNA的克隆及表达分析的开题报告题目：金鱼PP2A-B′家族δ基因cDNA的克隆及表达分析一、研究背景和意义：PP2A（Protein Phosphatase 2A）是广泛存在于真核细胞中的一种硫酸酯酶，其作用是促进蛋白质磷酸化反应的反向过程，从而调节细胞内蛋白质的活性和功能。

在细胞增殖、分化和凋亡等生物学过程中，PP2A 都发挥着重要作用。

而PP2A的三级结构由B、C和A三个亚基组成，其中B亚基主要起到调控PP2A活性的作用。

目前，PP2A的B亚基已经发现有多个家族，其中B′家族在真核生物中较为普遍。

然而，我们对于PP2A-B′家族在鱼类中的研究还非常有限，特别是在金鱼中还没有报道。

因此，对于这一家族基因的克隆和表达研究将有助于我们进一步了解金鱼中PP2A-B′家族基因的分子结构和生物学功能。

二、研究方法和计划：1.提取金鱼组织RNA并合成相应的cDNA模板选取成年健康的金鱼，分别从不同组织中提取总RNA，并通过逆转录反应合成cDNA模板。

2.设计PP2A-B′家族δ基因的特异性引物并PCR扩增通过NCBI数据库中已有的PP2A-B′家族基因序列，设计特异性引物并进行PCR扩增。

将扩增所得产物纯化后进行上机测序并分析。

3.利用软件工具进行分析和比对对所得的PP2A-B′家族δ基因序列进行比对和分析，并对其结构和特征进行预测和验证。

4.进行基因表达实验利用qPCR等实验方法，对PP2A-B′家族δ基因在金鱼不同组织和不同发育阶段中的表达水平进行检测，从而进一步探究其生物学功能。

5.对结果进行分析和解释对于实验结果进行统计和分析，并展开初步的讨论和解释。

三、存在的问题和挑战：1.由于PP2A-B′家族是新发现的PP2A亚基家族之一，其基因序列的检索和比对可能存在一定的困难。

2.在PCR扩增过程中，可能出现特异性引物的不良配对导致不特异扩增。

3.在基因表达实验中，由于金鱼不同组织和不同发育阶段的差异性，需要对样品数量和质量进行有效控制，以确保实验结果的可靠性和可重复性。

鳜胰岛素样生长因子-ⅡcDNA基因的克隆与表达特征

鳜胰岛素样生长因子-ⅡcDNA基因的克隆与表达特征刘俊;赵金良;张敏;代威【期刊名称】《大连海洋大学学报》【年(卷),期】2012(027)006【摘要】为全面获得鳜Siniperca chuatsi GH—IGFs生长发育轴的调控因子特征，采用RT—PCR、cDNA末端快速扩增（RACE）技术成功克隆了肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）cDNA序列。

结果表明：鳜IGF一ⅡcDNA全长为1643bp，包括5’端非翻译区103bp、3’端非翻译区892bp和开放阅读框548bp，开放阅读框编码215个氨基酸；鳜IGF一Ⅱ前肽由信号肽、成熟肽和E肽3部分组成，其中信号肽为47个氨基酸，成熟肽为70个氨基酸，E肽为98个氨基酸；鳜IGF一Ⅱ氨基酸序列与其他脊椎动物的相似度为81％～98％，与鳜IGF—I的相似度为62．5％。

运用实时荧光定量PCR技术检测了鳜成鱼不同组织以及孵化后0～22d仔稚鱼中IGF-ⅡmRNA的表达情况，结果表明：IGF-ⅡmRNA在鳜脑中表达量最高，在肌肉、心脏、胃、鳃、肾脏中表达量次之，在脾、前肠、后肠、性腺、肝脏中表达量较低；在孵化后早期发育阶段均检测到有IGF-ⅡmRNA表达，孵化当天（0d）表达量最高，之后表达量有所降低。

本研究结果可为鳜IGF-Ⅱ对生长发育的调控作用研究提供科学依据。

【总页数】7页(P495-501)【作者】刘俊;赵金良;张敏;代威【作者单位】上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海201306【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.鳜胰岛素样生长因子-Ⅱ cDNA基因的克隆与表达特征 [J], 刘俊;赵金良;张敏;代威2.翘嘴鳜NADPH氧化酶三个调节亚基cDNA的克隆及表达特征 [J], 胡宝庆;刘毅;文春根3.鳜T细胞表面受体CD4分子的克隆与表达分析 [J], 郭政;聂品4.鳜胃泌素与胆囊收缩素基因cDNA全长的克隆与表达特征 [J], 苗伟;赵金良5.草鱼碱性氨基酸转运载体y^＋ LAT2 cDNA基因克隆与表达 [J], 杨吉轩;谭青松;朱文欢;陈忱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

金鱼胰岛素样生长因子2基因克隆与组织表达

金鱼胰岛素样生长因子2基因克隆与组织表达
彭凤兰;罗琛
【期刊名称】《湖南师范大学自然科学学报》
【年(卷),期】2007(030)002
【摘要】采用PCR方法,扩增并克隆了金鱼的IGF2基因.序列分析结果显示:金鱼的IGF2基因共包括有4个外显子和3个内含子,开放阅读框长606 bp,编码201个氨基酸;编码序列与斑马鱼有85%一致性;蛋白质序列与斑马鱼的有80.9%的一致性.RT-PCR证明金鱼IGF2基因在鳃、心脏、肾、肌肉、尾鳍、雌雄性腺等组织中均有表达.
【总页数】5页(P103-107)
【作者】彭凤兰;罗琛
【作者单位】湖南师范大学生命科学学院教育部蛋白质组学与发育生物学重点实验室,中国,长沙,410081;长沙市卫生学校,中国,长沙,410100;湖南师范大学生命科学学院教育部蛋白质组学与发育生物学重点实验室,中国,长沙,410081
【正文语种】中文
【中图分类】Q78
【相关文献】
1.绵羊WNT5A基因克隆及其组织表达分析 [J], 郝志云;王继卿;罗玉柱;胡江;刘秀;李少斌
2.广灵驴DGAT2基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究 [J], 李武峰;关家伟;
孙瑜彤;邱丽霞;杜敏
3.广灵驴PPARγ基因克隆与组织表达分析 [J], 李武峰;孙瑜彤;关家伟;孙玺;杜敏
4.北美鹅掌楸LtuFPPS1基因克隆与组织表达分析 [J], 张成阁;刘换换;宗亚仙;李火根
5.草鱼褪黑激素受体Mtnr1基因克隆及组织表达分析 [J], 胡伟;吴慧;袁汉文;郜卫华;陈敦学;郭利伟;许巧情
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荷那龙罗非鱼两种胰岛素样生长因子基因(IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ)的克隆、序列分析及组织表达特征

荷那龙罗非鱼两种胰岛素样生长因子基因(IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ)的克隆、序列分析及组织表达特征高风英;卢迈新;黄樟翰;朱华平;可小丽【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2012(20)2【摘要】胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)在鱼类的生长、发育过程中起重要作用.本研究克隆了荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)两种胰岛素样生长因子(IGF)基因,并采用半定量RT-PCR方法检测了两种基因在不同组织中的表达情况.以荷那龙罗非鱼肝脏总RNA为模板,RT-PCR结合3'RACE与5'RACE法扩增IGF- Ⅰ与IGF-Ⅱ的cDNA.扩增片段插入pMD-T载体并测序.序列分析表明:IGF- Ⅰ总长1305 bp;IGF-Ⅱ总长1 091 bp.其推测氨基酸序列都具有胰岛素样生长因子基因的典型特征结构,分别包括信号肽和B、C、A、D、E5个区域,并具有6个保守的半胱氨酸,但它们之间推测氨基酸全序列的同源性较低,为26％.正常生理条件下,两种IGF在所有被检测组织中均有表达.IGF- Ⅰ在肝脏、肌肉和性腺中表达量较高,在肾脏中表达量最低；IGF-Ⅱ在肾、胃、肠、脾、垂体中表达量较高,在肌肉中表达量最低.在所有被检测组织中,IGF-Ⅱ的表达量均高于IGF-Ⅰ的表达量,但二者的表达量只有在肠、脾、胃、肾和垂体中具有显著性差异(P＜0.05).雌雄个体中除脾、胃、肾、垂体外,IGF- Ⅰ在雌性中的其它组织表达均低于雄性,其中雄性个体中肌肉组织IGF- Ⅰ的表达水平显著高于雌性个体(P＜0.05); IGFⅡ在雌雄个体相同组织间的表达水平比较差异均不显著.本研究有助于进一步了解荷那龙罗非鱼的生长调节机制和更好地理解鱼类IGFs的生理功能.%Insulin-like growth factors (IGFs) Ⅰ and Ⅱ (IGF- I and IGF- II) play important roles in fishgrowth and development. In this study, cDNAs of both IGF subtypes were cloned and sequenced from Zanzibar tilapia (Oreochromis hornornum), the expression patterns of the two IGF were detected using semi-quantitive RT-PCR. Total RNAs were isolated from liver of Zanzibar tilapia. The cDNAs encoding IGF- Ⅰ and IGF- Ⅱ were amplified by RT-PCR,3'RACE and 5'RACE. The amplified cDNA fragments were inserted into pMD-T vector. Sequence analysis revealed that the IGF- Ⅰ and IGF- Ⅱ consisted of 1 305 and 1 091 bp, respectively. They all had the characteristic landmarks of IGF, for example, they all possessed signal peptide and B, C, A, D and E domains and six cysteine residues, but their features were distinctly different from each other, the overall deduced amino acid sequence identity between IGF- Ⅰ and IGF- Ⅱ was rather low (26%). Under normal physiological conditions, both IGF- Ⅰ and IGF- Ⅱ were present in all tissues examined. IGF- I was most highly expressed in liver, muscle and gonad but lowly expressed in kidney. IGF- Ⅱ was most highly expressed in kidney, stomach, intestine, spleen and pituitary, but low in muscle. The mRNA levels of IGF- II were higher than that of IGF-1 in all tissues tested, but significantly difference (P<0.05) only observed in intestine, spleen, stomach, kidney and pituitary. IGF- Ⅰ expressions in females were lower in most tissues examined than those in males except for in spleen, stomach, kidney and pituitary. But significant difference existed in muscle (P<0.05). No significant difference was found in IGF- II expression in all the tissues of male and female Zanzibar tilapia. This observation can contribute to further investigation of growth regulation ofZanzibar tilapia, and the results will give us a better understanding for the physiologyical role of IGFs in fish.【总页数】10页(P171-180)【作者】高风英;卢迈新;黄樟翰;朱华平;可小丽【作者单位】中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380;中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380【正文语种】中文【相关文献】1.荷那龙罗非鱼两种GHSR基因的克隆与序列分析 [J], 高风英;王欢;叶星;卢迈新;黄樟翰;朱华平2.川金丝猴胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的克隆及序列分析 [J], 宋利;胡细连;张志和;岳碧松;沈富军;孟延发;赵斌3.香鱼抗凝血酶基因(AT)cDNA的克隆、序列分析及组织表达特征 [J], 李长红;陈炯;史雨红;陆新江4.撒坝猪AIDA基因编码区克隆、序列特征分析及组织表达量检测 [J], 吕敏娟;崔艺佳;李明丽;周晓霞;严达伟;董新星5.胭脂鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)cDNA的分子克隆、序列分析及组织表达[J], 郑凯迪;陈小川;李英文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备

鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备商汉桥;罗晓松;邹世平;伍晓雄;吴小平;龙良启【期刊名称】《淡水渔业》【年(卷),期】2007(37)6【摘要】从鲤(Cyprinus carpio)肝脏总RNA中成功地克隆和诱导表达了胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因,并用间接ELISA法和Western-blot对其融合蛋白的多克隆抗体的效价和特异性进行了分析.结果表明,克隆的鲤IGF-Ⅱ基因与已报道的序列相比,有1个位点发生同义突变;经SDS-PAGE电泳分析,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总量的35%.经ELISA测定,制备的抗体效价为6400.Western blot分析表明,抗血清能与重组蛋白发生特异性反应【总页数】4页(P65-68)【作者】商汉桥;罗晓松;邹世平;伍晓雄;吴小平;龙良启【作者单位】华中农业大学,武汉,430070;华中农业大学,武汉,430070;中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州,434000;华中农业大学,武汉,430070;中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州,434000;华中农业大学,武汉,430070;华中农业大学,武汉,430070;华中农业大学,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】Q785【相关文献】1.弓形虫沉默信号调节子2(TgSir2)的克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 张芳菲;曹佳欣;王晨红;毛懿杰;华倩倩;刘淑贤;谭峰;胡昕2.Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备 [J], 刘芳; 卢婷; 蔡梦迪; 吴芳草; 陈相好; 王彩霞; 崔古贞; 陈峥宏3.Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备 [J], 刘芳; 卢婷; 蔡梦迪; 吴芳草; 陈相好; 王彩霞; 崔古贞; 陈峥宏4.罗非鱼湖病毒核蛋白的克隆表达、抗体制备及其组织分布 [J], 苏国茂; 林蠡; 秦真东; 李嘉波; 周萌; 莫金凤; 张凯; 梁日深; 吴灶和; 赵丽娟5.草鱼Rab1A基因的克隆表达、抗体制备及对微囊藻毒素-LR的响应 [J], 何丽;刘林;阮记明;周颖;梁惜梅;林长高;隗黎丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鲤胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3基因启动子克隆与序列分析

鲤胰岛素样生长因子结合蛋白-2和-3基因启动子克隆与序列分析陈文波;李文笙;林浩然【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2010(034)010【摘要】胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)系统对鱼类的生长和繁殖有着重要的作用.利用PCR方法克隆获得了鲤胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP)-2和-3基因的上游启动子部分序列,长度分别是1 142 bp和1 067 bp.Igfbp-2启动子区域没有TATA框和CAAT框.同时,Igfbp-3中只含有TATA框,但没有CAAT框.研究结果表明,二者启动子不具备典型的启动子特征,同时,在二者启动子上还发现了cAMP应答元件和肝细胞核因子结合位点,以及Pit-1、Oct-1、RXR和GR等结合位点.研究认为,鲤Igfbp-2和-3基因的表达受到潜在的多因子调控.【总页数】9页(P1469-1477)【作者】陈文波;李文笙;林浩然【作者单位】中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275;河南理工大学资源环境学院,河南,焦作,454000;中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275;中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275【正文语种】中文【中图分类】Q785;S917【相关文献】1.小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白-7真核表达载体的构建及序列分析 [J], 陈勇;赵雪花;王海燕;朱汉荣;夏瑞明;成彩莲2.胰岛素样生长因子结合蛋白-1启动子的克隆与序列分析 [J], 吴志香;邵敬伟;袁凤山3.鲤胰岛素样生长因子Ⅱ的克隆表达与抗体制备 [J], 商汉桥;罗晓松;邹世平;伍晓雄;吴小平;龙良启4.奶山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)基因启动子的克隆及活性分析 [J], 姚大为;赵欣;赵淑颖;杨春蕾;李玉鹏;马毅5.玉米乙烯应答元件结合蛋白基因启动子克隆与功能验证 [J], 刘鑫;邹郁陶;牟巍;李晚忱;付凤玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鲤鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ的克隆和原核表达研究的开题报告

鲤鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ的克隆和原核表达研究的开题报告一、研究背景和意义胰岛素生长因子-Ⅰ（insulin-like growth factor-1，IGF-1）是一种多肽激素，在脊椎动物体内广泛存在，并参与多种生理过程的调节。

其中，鲤鱼是一种重要的淡水养殖鱼类，在养殖业中具有很高的经济价值。

因此，探究鲤鱼IGF-1的结构、生物学功能及其调控机制对于了解鲤鱼生长发育规律以及优化养殖管理具有重要意义。

在目前的研究中，已有部分报道了鲤鱼IGF-1的克隆和生物学特性。

然而，目前对于其分子结构和生长调控机制的了解还非常有限。

因此，本研究拟对鲤鱼IGF-1进行进一步的克隆和原核表达研究，以期进一步深入了解其分子特性和生长调控机制，并探索其在饲料添加、生长激素治疗等方面的应用前景。

二、主要研究内容和方法1. 鲤鱼IGF-1 cDNA片段的克隆利用已有的鲤鱼IGF-1序列信息，设计特异性引物进行PCR扩增，然后通过连接、克隆、测序等步骤进行序列验证。

2. 原核表达蛋白的构建将已经克隆成功的鲤鱼IGF-1 cDNA序列连接到表达载体上，构建重组表达质粒，并转化进入大肠杆菌中进行原核表达。

3. 蛋白纯化和功能鉴定利用亲和柱层析等方法对表达蛋白进行纯化，并通过 SDS-PAGE、Western blotting等方法进行鉴定。

4. 生物活性实验利用多种方法评估鲤鱼IGF-1蛋白的生物活性，包括细胞生长实验、核酸合成实验等。

三、研究预期结果1. 成功获得鲤鱼IGF-1 cDNA片段，并构建重组表达质粒。

2. 成功对鲤鱼IGF-1进行原核表达，并获得分子量符合预期的表达蛋白。

3. 成功对表达蛋白进行纯化和功能鉴定，证实其具有鲤鱼IGF-1的生物活性。

四、研究意义和应用前景本研究将系统地研究鲤鱼IGF-1的分子结构和生物学特性，深入探究其生长调控机制。

同时，该研究成果可为鲤鱼养殖业的优化提供科学依据，具有广泛的应用前景。

鳜胰岛素样生长因子基因的克隆、特征与表达分析的开题报告

鳜胰岛素样生长因子基因的克隆、特征与表达分析
的开题报告
一、选题背景与意义
鳜（Megalobrama amblycephala）是中国的一种重要经济鱼类，其肉质鲜美，受到广泛的消费者青睐。

而胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor，IGF）是一种关键的生长调节因子，对鱼类生长、发育和代谢有着重要的影响。

因此，对鲜胰岛素样生长因子基因的克隆、特征与表达分析，有助于深入了解其在鲜生长发育过程中的作用机制，为鲜类的健康养殖提供科学依据。

二、研究内容和目标
本研究拟克隆鳜胰岛素样生长因子基因，并进行基因特征分析，探究其在鲜不同发育阶段和组织中的表达情况。

旨在为后续深入探究鳜的生长发育机制提供重要基础数据。

三、研究方法
1. 根据已知鲤鱼、草鱼等鱼类IGF基因序列信息设计引物，通过RT-PCR方法从鳜基因组中扩增得到IGF基因序列；
2. 对所得序列进行生物信息学分析，包括序列相似性比对、保守域分析、多序列比对、进化树构建等；
3. 按照标准方法从不同组织中提取总RNA，并使用RT-PCR技术检测IGF基因在各组织中的表达情况，比较其在不同发育阶段间的表达差异。

四、研究预期结果
1. 成功克隆了鳜IGF基因，并获取其基本特征信息；
2. 发现鳜IGF基因的序列存在高度保守域，说明其在鱼类中具有同源性；
3. 探究鳜IGF基因在不同组织中的表达情况，初步探明其在鳜生长发育中的作用机制。

五、研究意义
通过本研究可以为鲜类育种、健康养殖提供科学依据，为其产业的可持续发展提供有力支撑。

同时，也有助于深入了解IGF基因在鱼类生长过程中的作用机制，为生物学研究提供新的实验材料和理论参考。