酱油中的氨基甲酸乙酯检测方法研究

收稿日期 :2009 - 07 - 21 作者简介 :刘晓毅 (1977 - ) ,女 ,食品科学博士学位 ,高工 ,目前从事食品安全分析与预警工作 。
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洗脱时间 (min) 10 10 18 26
注 :上述结果为 3 次测定结果平均值 。
2. 3. 2 洗脱液洗脱体积的选择
为了最大程度的洗脱目标化合物 ,提高样品回收率 ,
采用 10 %无水甲醇2二氯甲烷连续多次洗脱的方法对其
进行洗涤 ,每次 5 mL 萃取洗脱液 ,通过洗脱 2 次 (2 ×
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2010 年第 1 期 中 国 调 味 品
总第 35 卷
CHINA COND IMENT
分析检测
10. 0 mg 氨基甲酸丁酯于 10 mL 容量瓶中 ,用丙酮溶 解并定容至刻度 ,存放在冰箱中备用 。氨基甲酸丁酯 标准工作液 :取 1. 0 mL 氨基甲酸丁酯标准储备液 ,用 丙酮稀释成 10 mg/ L 备用 。氨基甲酸丁酯内标液 :取 1. 0 mL 氨基 甲酸 丁酯 标准 工作液 , 用 丙 酮 稀 释 至 10 mL , 浓度为 1. 0 mg/ L 备用 。
根据氨基甲酸乙酯的沸点及性质 ,经过调整升温 程序 ,最终确定当进样口温度 220 ℃,不分流进样 ,进
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目前 ,我国仅有出口酒中有氨基甲酸乙酯的标准 检测方法[1 ] ,中国疾控[2 ] 和西北农林科技大学[3 ] 也都 对葡萄酒中氨基甲酸乙酯的检测方法进行了研究 。氨 基甲酸乙酯不仅存在于发酵的酒类饮料中 ,在大豆发 酵制品如酿造酱油 、腐乳中也存在 ,我国是酱油生产和 消费大国 ,但国内尚未见对酱油中氨基甲酸乙酯的检 测方法 , 也没有相关调研数据 。本文主要采用 SL E (固相支持液/ 液萃取) 结合 GC2MS 法测定酱油中的 氨基甲酸乙酯 ,通过以氨基甲酸丁酯作为内标物 ,改善 色谱条件 ,有效的排除了杂质色谱峰的干扰 。
取 5. 0 mL 样品加 100μL 氨基甲酸丁酯内标液 ,再 加 0. 4 g 氯化钠 ,混合均匀 ,加到 5. 0 g 硅藻土固相萃取柱 上 ,静止使之吸附 10 min ,先用 10 mL 正己烷淋洗除杂 , 然后用 4 ×5 mL 的 10 %(V/ V) 甲醇2二氯甲烷洗脱小柱 , 洗脱液过无水硫酸钠后在 30 ℃下旋干 ,然后用丙酮定容 至 2. 0 mL ,1μL 进样 ,做色谱分析 ,根据组分在色谱柱上 的出峰时间与标准组分比较定性 ,用内标法定量。
H P2INNOWA X 弹 性 石 英 毛 细 管 柱 ( 30 m × 0. 25 mm ×0. 25μm) 。 1. 3. 2 色谱条件
进样口温度 220 ℃,不分流进样 ,进样体积 1 μL , 色谱柱升温程序 :初温 40 ℃,保持 0. 75 min ,然后以 10 ℃/ min 速度升至 60 ℃,再以 3 ℃/ min 的速度升至 160 ℃保持 1 min ,最后 220 ℃保持 4. 25 min 。载气为 高纯氦气 (纯度 > 99. 999 %) ,恒压 ,柱前压 10 p si 。 1. 3. 3 质谱条件
氨基甲酸乙酯2氨基甲酸丁酯标准校正溶液 :用丙 酮稀释氨基甲酸乙酯标准工作液和氨基甲酸丁酯标准 工作液 ,使其浓度分别为 0. 1 mg/ L 氨基甲酸乙酯 (含 浓度为 0. 05 mg/ L 的氨基甲酸丁酯) 、0. 05 mg/ L 氨 基甲酸乙酯 (含浓度为 0. 05 mg/ L 的氨基甲酸丁酯) 、 0. 02 mg/ L 氨基甲酸乙酯 (含浓度为 0. 05 mg/ L 的氨 基甲酸丁酯) 、0. 01 mg/ L 氨基甲酸乙酯 ( 含浓度为 0. 05 mg/ L的氨基甲酸丁酯) 。 1. 3 气相色谱2质谱条件 1. 3. 1 色谱柱
图 3 酱油样品中氨基甲酸乙酯检测选择离子色谱图
图 4 酱油样品中氨基甲酸乙酯定量离子色谱图
2. 3 洗脱液的确定
2. 3. 1 洗脱液种类的选择
源自文库
由于氨基甲酸乙酯为极性物质 ,为了进一步确保
样品检测的回收效率 ,根据溶液极性 ,选择添加 5 %体
积百分比 、10 %体积百分比 、20 %体积百分比的无水甲
Determination of ethyl carbamate in soy sauce
L IU Xiao2yi , L IU Yan2qin , ZHAO Yu2qi ,S H I Wei2ni , L IU Xiao2li (China Food Q ualit y Saf t y Supervisio n and Inspectio n Center ,Beijing 100094 ,China) Abstract :Determinatio n of et hyl carbamate in soy sauce by used SL E ( solid2p hase support for liquid/ liquid ext ractio n) co mbined wit h GC2MS ,t he met hod detectio n limit is 0. 005 mg / L ,t he recovery rate is 71. 0 %～90. 5 % ,t he relative standard deviatio n. is 4. 45 %～5. 53 %.
醇2二氯甲烷洗涤液进行试验 ,结果如表 1 所示 ,当选
用 10 %无水甲醇2二氯甲烷洗脱时 ,回收率最高 。
表 1 不同洗脱液洗脱下氨基甲酸乙酯的回收率及洗脱时间
洗脱液种类 (体积百分比) 二氯甲烷
5 %无水甲醇2二氯甲烷 10 %无水甲醇2二氯甲烷 20 %无水甲醇2二氯甲烷
回收率 ( %) 70. 4 71. 1 80. 6 73. 8
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样体积 1 μL , 色 谱 柱 升 温 程 序 为 初 温 40 ℃, 保 持 0. 75 min ,然后 以 10 ℃/ min 速 度 升 至 60 ℃, 再 以 3 ℃/ min的速度升至 160 ℃保持 1 min ,最后 220 ℃保 持4. 25 min时如图 3 、图 4 所示 ,可以得到较好的分离 效果 ,氨基甲酸乙酯 24. 27 min 出峰 ,定量离子图显示 氨基甲酸乙酯与杂质峰分开 ,达到了较好的分离效果 。
氨基甲酸丁酯 (Butylcarbamate) ,分子式 :C5 H11 NO2 , 分子量 117 ,CAS 号 59223528 ,10 个最大的离子峰的离子 及丰度为 :62 (999) ,44 (728) ,56 (589) ,41 (392) ,31 (291) , 74 (227) ,55(217) ,29(200) ,45(188) ,27(184) 。
Key words : soy sauce ;et hyl carbamate ;determinatio n
2007 年 4 月 10 日 ,世界卫生组织的国际癌症研 究机构 ( IA RC) 正式将氨基甲酸乙酯 ( Et hyl Carba2 mate) 归为 2A 类致癌物 ,与丙烯酰胺同等危险 。氨基 甲酸乙酯主要产生于发酵食品和饮料中 。
氨基甲酸乙酯标准储备液 ( 1. 0 mg/ mL ) : 称取 10. 0 mg 氨基甲酸乙酯于 10 mL 容量瓶中 ,用丙酮溶 解并定容至刻度 ,存放在冰箱中备用 。氨基甲酸乙酯 标准工作液 :取1. 0 mL氨基甲酸乙酯标准储备液用丙 酮稀释至 10 mg/ L 备用 。
氨 基甲酸丁酯标准储备液 ( 1 . 0 mg/ mL ) : 称取
图 2 氨基甲酸丁酯质谱图
由图 2 也可以看出 ,m/ z 117 为分子离子 ,碎片离 子中以 m/ z 62 ,74 ,44 ,41 ,31 ,56 丰度较高 ,考虑特征 离子的特征性 ,综合考虑选择 m/ z 56 ,74 ,62 为特征离 子 ,m/ z 62 为定量离子 。 2. 2 分离条件的确定
EI 源 温 230 ℃; 电 子 能 量 70 eV ; 接 口 温 度 220 ℃;电子倍增器电压 1288 V ; 选择离子监测方式 ( sim mode) ,氨基甲酸乙酯监测离子 : 62 ,74 ,89 ,定量 离子 62 ,氨基甲酸丁酯监测离子 :62 ,47 ,56 ,定量离子 62 ;溶剂延迟 22 min 。 1. 4 分析步骤
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酱油中的氨基甲酸乙酯检测方法研究
刘晓毅 ,刘艳琴 ,赵玉琪 ,石维妮 ,刘小力
(国家食品质量安全监督检验中心 ,北京 100094)
摘要 :研究采用 SL E (固相支持液/ 液萃取) 结合 GC2MS 法测定酱油中的氨基甲酸乙酯 ,方法检出限 0. 005 mg/ L ,加标回收率 71. 0 %～90. 5 % ,相对标准偏差 RSD % 4. 45 %～5. 53 % ,满足分析方法的实 验要求 。 关键词 :酱油 ;氨基甲酸乙酯 ;检测 中图分类号 : TS264. 21 文献标识码 :B 文章编号 :1000 - 9973 (2010) 01 - 0081 - 04
1 材料与方法
1. 1 仪器 Agilent 6890N25975B 气 相 色 谱2质 谱 仪 美 国
Agilent 科技公司 ; Agilent 6890N 气相色谱仪 配备
氢火焰离子化检测器 美国 Agilent 科技公司 ; Agi2 lent Co mbi PAL 多功能自动进样器 美国 Agilent 科 技公 司 ; Milli2Q 去 离 子 水 发 生 器 Milli2Q 公 司 , ΜSA ; RE252AA 减压浓缩装置 上海亚荣生化仪器 厂。
H P2INNON WA X 石 英 毛 细 管 柱 30 m × 0. 25 mm ×0. 25μm ,美国 Agilent 科技公司生产 。 1. 2 试剂
无水硫酸钠 、二氯甲烷 、正己烷 、无水甲醇 北京 化工厂 , 分析纯 , 于 450 ℃焙烧 4 h 后备用 ; 丙酮 J . T. BA KER公司 ,色谱纯 。氨基甲酸乙酯标准品 Chem service , 99 % , 氨 基甲 酸 丁 酯 标 准 品 Beijing Giant2Carrier Co . L t d ,97 %。
2 结果与分析
2. 1 选择离子的确定 氨基 甲 酸 乙 酯 , 又 名 脲 烷 ( Urethane ) , 分 子 式
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C3 H7 NO2 ,分子量 89 ,CAS 号 5127926 ,10 个最大的离子峰 的离子及丰度为 :44(999 ) ,62 (906 ) ,45 (715) ,31 (359) ,27 (250) ,29(204 ) ,74 (141) ,43(98) ,46(93) ,61(88) 。
图 1 氨基甲酸乙酯质谱图
由图 1 也可以看出 ,m/ z 89 为分子离子 ,碎片离子 中以 m/ z 62 ,74 ,44 ,31 ,17 丰度较高 ,考虑特征离子的 特征性 ,且空气中的 CO2 也能离解成 m/ z 44 ,综合考虑 选择 m/ z 62 ,74 ,89 为特征离子 ,m/ z 62为定量离子。