南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心邹征云浅谈恶性肿瘤生物治疗概论
肿瘤生物治疗总论
二、肿瘤生物治疗手段简介
（四）肿瘤的内分泌治疗
肿瘤内分泌治疗机制主要包括两个重要的环节： 降低激素水平 阻断激素与受体的结合
乳腺癌内分泌治疗举例：
降低激素水平
阻断激素与 受体的结合
一、肿瘤生物治疗的分类
2.按照生物治疗作用机制不同可归为
免疫治疗 基因治疗
分子靶向治疗
内分泌治疗 诱导分化治疗
有两项基因治疗药物已获得SFDA批准在我国上市。
二、肿瘤生物治疗手段简介
（二）肿瘤基因治疗
基因治疗还有许多的理论和技术问题有待解决：怎 样提高组织和细胞的选择性；如何构建高效率的载体； 如何寻找更富杀伤力的目的基因；如何与其他肿瘤治疗
手段有机地结合起来等。
一、肿瘤生物治疗的分类
2.按照生物治疗作用机制不同可归为
Байду номын сангаас
TIL
CART
淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）、自然杀伤细胞（NK）、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）、肿瘤浸润T淋
巴细胞（TIL）、γδT细胞、自然杀伤T细胞（NK T）、CD3单抗激活的杀伤细胞（CD3AK）、供者淋巴细胞输注 （donor lymphocyte infusion，DLI）、嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T cells, CAR-T）
素瘤的治疗 Coley毒素或 Coley液 杂交瘤技术非特异性生物制剂相继被发现并应
TKI治疗CML
TP53 腺病毒应
用于鼻咽癌等
用于临床重组DNA技术和体外大容量细胞培养技
术的进步
索拉非尼治
疗晚期肾癌
经验治疗的 萌芽阶段
基于免疫学理论及技术 进步的发展阶段
浅析恶性肿瘤的诊治
目标
24小时内需要解救 药物＜3次
24小时爆发性疼 痛频率＜ 3次
WHO癌症镇痛三阶梯原则
基本原则： 1、按阶梯给药
2、口服／无创给药
3、按时给药 4、个体化 5、注意具体细节
疼痛消失
重度
强阿片类药物 ±非阿片类镇痛药 ±辅助药物
中度
弱阿片类药物 ±非阿片类镇痛药 ±辅助药物
轻度
疼痛 非阿片类药物±辅助药物
科学评估癌性疼痛
——是充分镇痛的开始
疼痛评估三要素
评估依据：相信病人的疼痛主诉
评估方法：病人自我评估为主 评估态度：动态评估疼痛
目前常用的评估疼痛的四种疼痛分级法
1、根据主诉疼痛程度分级法（VRS） 0级 ：无痛 1级（轻度）：虽有疼痛但可以忍受，能正常生活，睡眠不受 干扰。 2级（中度）：疼痛明显，不能忍受，要求服用止痛剂，睡眠受 到干扰。 3级（重度）：疼痛剧烈，不能忍受，需要止痛剂，睡眠受到严 重干扰 ，可伴有植物神经紊乱或被动体位。
2002年第10届国际疼痛大会（IASP）达成共识：
1、疼痛是继体温、脉搏、呼吸、血压后第五大生
命体征
2、慢性疼痛是一种疾病
癌症疼痛的原因
原因 比例 举例
肿瘤侵犯 肿瘤治疗相关
肿瘤相关 与肿瘤及治疗 无关
70-80% 8-10%
6-8% 6-8%
癌肿压迫，软组织浸润 手术，放化疗后损伤
便秘，褥苍 关节炎，动脉瘤，末梢 神经痛
浅析恶性肿瘤的诊治
昆明市中医医院 肿瘤科
什么是肿瘤？
肿瘤是机体已经发育成熟或正在发育过程中的正常 组织细胞在致癌因素和促癌因素的长期刺激作用下，
发生基因突变导致过度增生或异常分化而形成的机体 新生物，它丧失了正常组织细胞所具有的生长方式， 从而表现出其生长自主性、局部浸润性和远处转移性。 从分子水平看，肿瘤表现为核酸与蛋白质代谢的异常。 从细胞水平看，肿瘤是一种生长失控、分化异常的细 胞增殖病。
恶性肿瘤的生物治疗与靶向治疗
首要终点——OS
CheckMate 017 SQ
CheckMate 057 non-SQ
生存优势能 否持续？
K. Reckamp , et al. 20res, et al. 2015 ASCO, abstract LBA109
肿瘤学概论 恶性肿瘤的生物治疗与靶向治疗
第一部分
肿瘤的免疫治疗
现代免疫学奠基人
Edward Jenner 牛痘的发明者
(1796)
1926年-1930 年，印度天 花导致50万 人死亡。
肿瘤的免疫监视
DC向 APCs转化， 递呈抗原
肿瘤表达特 异性抗原
T效应细胞 活化与增殖
检查与平衡
T 和 NK 细 胞攻击杀伤 肿瘤细胞
1. Topfer, et al. 2011. 2. Nurieva, et al. 2013. 3. Mellman, et al. 2011.
T淋巴细胞表达的免疫抑制性受体
• 细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4 (CTLA4) • 程序性死亡分子1（programmed death
1,PD-1） • 程序性死亡分子配体1（programmed
2.基因灭活（Gene inactivation）：利用反义核酸技术 或核酶特异地封闭基因表达或降解转录产物
3.前体药转换（Prodrug acitvation）：采用给予前体药 物的方法减少化疗药物对正常细胞的损伤。
基因治疗的途径
1.体外途径：安全，但操作烦琐，设备要求比 较高
免疫调节
细胞毒性
ADCC CDC 凋亡
肿瘤细胞 细胞毒性
过继细胞治疗
Cancer Control 2013;20:32.
恶性肿瘤生物治疗
恶性肿瘤生物治 疗的挑战与展望
技术瓶颈
01 免疫系统识别：如何提高免疫系统对肿瘤 细胞的识别能力
02 免疫细胞激活：如何激活免疫细胞，使其 更有效地攻击肿瘤细胞
03 肿瘤微环境：如何克服肿瘤微环境的抑制 作用，提高免疫细胞在肿瘤组织中的活性
04 安全性：如何保证生物治疗的安全性，避 免对正常细胞和组织的损伤
究和解决
细胞疗法
细胞来源：自体或 异体细胞
细胞类型：T细胞、 NK细胞、DC细胞
等
细胞制备：体外培 养、基因编辑等
细胞输注：静脉输 注、局部注射等
治疗效果：提高免 疫功能，抑制肿瘤 生长，延长生存期
恶性肿瘤生物治 疗的应用
临床应用案例
免疫疗法：通过激 活免疫系统来攻击
肿瘤细胞
基因疗法：通过修 改基因来治疗肿瘤
03
监管要求：生物治疗在监管方面的要求和挑战
04
知识产权保护：生物治疗在知识产权保护方面的要求和挑战
谢谢
恶性肿瘤生物治疗
演讲人
目录
01. 恶性肿瘤生物治疗的概念 02. 恶性肿瘤生物治疗的方法 03. 恶性肿瘤生物治疗的应用 04. 恶性肿瘤生物治疗的挑战与
展望
恶性肿瘤生物治 疗的概念
恶性肿瘤的定义
1
恶性肿瘤是 一种细胞异 常增殖的疾 病，通常表 现为肿瘤。
2
恶性肿瘤细 胞具有侵袭 性，可以扩 散到其他组 织和器官。
细胞疗法：通过使 用干细胞或免疫细
胞来治疗肿瘤
疫苗疗法：通过使 用疫苗来预防和治
疗肿瘤
治疗效果评估
01
肿瘤缩小：通过影 像学检查，观察肿
瘤体积的变化
02
肿瘤标志物：通过 血液检查，观察肿
恶性肿瘤的生物治疗及其进展
干扰素(interferon，IFN)
? 张国英等γ—干扰素联合化疗治疗非霍奇金淋巴瘤 患者50例，I期Ⅱ期采用 CHOP方案，Ⅲ期Ⅳ期包 括复治患者采用 MHACOD 方案。联合治疗组加用 γ－干扰素肌肉注射， 1MU·d－1，连用10d，为1疗 程，第 2个周期化疗时再用第 2疗程。两组疗程均 在4周期以上，联合治疗组 γ—干扰素治疗均在 2个 疗程以上。联合治疗与单纯化疗相比，完全缓解 率和有效率提高，中、晚期及中、高度恶性淋巴 瘤疗效明显提高，中位缓解期及无病生存期延长， 提高了患者的生存质量。
干扰素(interferon，IFN)
?干扰素通过增强吞噬细胞、 NK细胞 和细胞毒性 T淋巴细胞的活性抑制肿 瘤细胞增殖，并诱导肿瘤细胞分化， 调节其表面抗原机制，发挥杀灭肿 瘤细胞的作用。
干扰素(interferon，IFN)
? 主要适应证： ? ①毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、恶性黑色素
瘤、非霍奇金淋巴瘤、肾癌和膀胱癌等效果较 好； ? ②与化放疗联合，应用于各种恶性实体肿瘤的 治疗。 ? 剂量与用法： 剂量每次3~6MU，每日或隔日注 射1次，10次为1疗程。通常采用皮下或肌肉注 射。不良反应有发热、寒颤、乏力、肌痛和厌 食等，一般在注射后 48 h内自行消失。
白介素(interleukin，IL)
临床应用
? IL—2用于消除 癌性胸腹腔积液 效果肯定。周玮 采用重组人白介素 —2(rlL —2)治疗恶性胸腔积 液42 例，在胸腔积液尽量排净或明显减少后将 重组人白介素 —2 0．4 MU用9g·L－1氯化钠溶液 稀释后注入胸腔内，嘱患者多次变换体位，使 药物与胸膜广泛均匀接触，胸腔闭式引流患者 注入药物后夹闭引流管， 24h后开启继续引流。 如1周后复查胸片或 B超显示胸腔积液未能控制， 排液后重复给药 1次。结果 CR 17例(占40．5％)， PRl8例(42．9％)，CR+PR83 ．4％。
什么是生物治疗技术？
什么是生物治疗技术？郑大二院肿瘤生物治疗中心21世纪是一个不断发展的时代，各行各业的发展都呈现出一片日新月异化，为世界注入了一股全新的血液。
在众多的行业中，医疗行业的发展最为瞩目，各种新型的疾病治疗技术不断的出现，为社会大众的健康营造出全新的氛围。
众所周知，癌症的治疗一直是医疗界最为关注的一大难题。
主要是因为在医疗界中，癌症并没有彻底的治愈方式，能够做到的只能够延长患者的寿命，患者最终面临的还是死亡。
而且，一旦我们患上癌症的时候，还会让很多的症状出现在患者的身体中，让患者苦不堪言。
很多的癌症患者会使用手术、放化疗进行治疗。
但是这些治疗方式却会在患者的身体中出现很多的副作用，不仅会让患者的身体健康受到严重的影响，还会影响患者疾病的治疗。
患者还可能会出现复发以及转移现象，让病情出现恶化，增加疾病的治疗难度。
为此，医疗界都希望能够研究出一种安全、有效的癌症治疗方式，帮助癌症患者解脱疾病的痛苦。
生物治疗技术是一种新兴的癌症治疗技术，为癌症患者带来了痊愈的光明。
生物治疗的原理：生物治疗就是从患者的外周血中采集单个核细胞，然后送到GMP工作室内进行培养、扩增、诱导、行肿瘤抗原刺激，从而获得能识别癌细胞的DC细胞和具有高杀瘤活性的CIK细胞，然后如同打点滴一样分次回输到患者体内，有效抑制肿瘤细胞生长、消除转移病灶，达到预防和控制肿瘤复发和转移的目的，实现延长患者生存期、提高患者生活质量的多重目标。
生物治疗的优势：与传统方法相比，生物治疗的针对性更精确，仅仅是针对肿瘤细胞本身的一种治疗。
郑大二院张中冕主任指出生物治疗技术是利用人体自身的免疫细胞、而不是传统的化学药品来杀伤肿瘤细胞的，该技术安全无毒副作用。
生物治疗为癌症患者到来了生命的希望，凭借着安全、有效的治疗特点得到了癌症患者以及医疗人士的认可，已经成为了当前医疗界中最为普遍的一种癌症治疗方式。
生物治疗的特点：1. 运用正常人赖以生存而肿瘤患者表达较低的生物细胞因子调动机体自身的免疫力量达到抗肿瘤作用，与放疗和化疗相比，副作用很小；2.通过主动免疫能够激发全身性的抗肿瘤效应，作用范围更加广泛，特别适用于多发病灶或有广泛转移的恶性肿瘤；3. 采用分子靶向药物进行治疗，目标明确，对肿瘤细胞以外的正常细胞无影响，对不宜进行手术的中晚期肿瘤患者，能够明显遏制肿瘤的进展，延长患者生命。
恶性肿瘤的生物治疗
生物治疗不同于既往的另外三种治疗方 法，即手术、放疗、及化疗以直接攻击 肿瘤为目标。生物治疗范围明显超越了 传统的免疫治疗概念，这是因为机体与 肿瘤之间的动态平衡不限于免疫反应， 还涉及各种与肿瘤增殖相关的调控基因 及细胞因子。
12
免疫活性细胞继承性输注技术
最早于1985年Rosenberg首次报道发现 IL-2 激活的淋巴细胞（LAK） 具有抗肿瘤活 性并首先应用于临床，在黑色素瘤和肾癌中取 得了显著的效果。以后相继发现了TIL 以及 CD3AK(CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞)、CIK、 DC 等具有更强抗肿瘤活性的免疫细胞。尤其 是多种淋巴因子激活的杀伤细胞（cytokineinduced kills cell，CIK）及树突状细胞 (Dendritic cell，DC) 是至今发现最有效的 抗肿瘤免疫细胞，目前已在国内外临床有大量 的应用。
20
CIK细胞抗肿瘤特点
CIK细胞是目前最新的抗肿瘤过继免疫 治疗的首选方案，该疗法具有以下特点： 1、CIK细胞增殖速度快，抗肿瘤活性细 胞可大量增殖，且细胞活性也大大增强。 2、CIK细胞具有识别肿瘤的机制，对正 常的细胞无毒性作用。 3、杀瘤谱广，可用于白血病、淋巴瘤、 肺癌、胃癌、肠癌等多种肿瘤的治疗， 对多重耐药肿瘤细胞同样敏感。
3
概
述
采用细胞工程技术可大量生产巨噬细胞、细胞 毒T细胞、NK细胞、淋巴因子活化的杀伤细胞 等细胞毒活性细胞，以及分泌单克隆抗体的杂 交瘤细胞。 基因工程技术可大量生产白细胞介素、干扰素、 肿瘤坏死因子、免疫球蛋白因子及克隆刺激因 子等BRM的数十种细胞因子。
4
肿瘤的特点
不知不觉 潜移默化 隐蔽性 恐怖性
9
什么是细胞过继免疫治疗？
个体化肿瘤疫苗用于黑色素瘤治疗的研究进展
906·综 述·欢迎关注本刊公众号《中国癌症杂志》2019年第29卷第11期 CHINA ONCOLOGY 2019 Vol.29 No.11通信作者：邹征云 E-mail: zouzhengyun001@1 概述 恶性黑色素瘤（malignant melanoma ，MM ）是恶性程度极高的实体肿瘤，易发生早期转移，预后极差。
近年来，MM 的发病率直线上升并呈年轻化趋势。
据报道，全球每年新发病例数约20万例，而中国每年新发病例数达2万例［1］。
晚期黑色素瘤的一线治疗为靶向和免疫治疗，在诸多治疗方法中，以新抗原（neoantigen）为基础的个体化肿瘤疫苗是一种前景广阔的治疗方法。
目前在美国临床试验数据库网站上注册的有关MM疫苗的研究就有300多项，有关新抗原与疫苗联合的研究有39项，可见其火热程度。
何为肿瘤疫苗？疫苗疗法属主动免疫，将肿瘤抗原以多种形式导入患者体内，激活患者自身免疫系统，产生特异性的抗肿瘤免疫应答，诱导或扩增体内预存的针对靶抗原的细胞免疫和体液免疫反应，并能形成长期的免疫记忆反应，从而达到控制或清除肿瘤的目的。
何为新抗原？2014年5月，Tran 等［2］利用体外培养扩增的、能特异性识别癌细胞基因突变产生的突变蛋白的淋巴细胞治疗了1例ERBB 2IP 基因点突变的晚期胆管癌患者，使疾病获得持久的缓解，明显延长了患者的生存期，这些突变蛋白即新抗原。
自此提出新抗原的概念，即突变蛋白产生的或致瘤病毒整合进基因组产生的抗原，属于肿瘤特异性抗原范畴，因未经胸腺阴性筛选，与T 细胞受体（T cell receptor ，TCR ）亲和力高，免疫原性强；相较于肿瘤相关抗原，不在正常组织个体化肿瘤疫苗用于黑色素瘤治疗的研究进展秦岚群1，邹征云21.南京医科大学鼓楼临床医学院肿瘤中心，江苏 南京 210008；2.南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心，江苏 南京 210008［摘要］ 恶性黑色素瘤是一种恶性程度极高的肿瘤，虽发病率低，但易发生早期转移，死亡率高。
恶性肿瘤的诊断与现代治疗
汇报人： 2023-12-01
目录
• 恶性肿瘤概述 • 现代治疗方法 • 恶性肿瘤的预防与控制 • 案例分析与实践
01
恶性肿瘤概述
定义与分类
定义
恶性肿瘤是指癌细胞异常增生并 侵犯周围组织，形成肿块，并可 发生转移的疾病。
分类
根据组织来源和生物学特性，恶 性肿瘤可分为癌和肉瘤两大类。
微创手术
现代医疗技术使得许多恶性肿瘤可 以通过微创手术进行治疗，减少了 对患者身体的损害。
放疗与化疗
01
02
03
放疗
通过高能射线对肿瘤进行 照射，破坏肿瘤细胞的 DNA，从而杀死肿瘤细胞 。
化疗
使用化学药物来干扰肿瘤 细胞的分裂和生长，从而 阻止其生长。
联合治疗
在某些情况下，医生可能 会建议同时进行放疗和化 疗，以提高治疗效果。
靶向治疗与免疫治疗
靶向治疗
通过使用特定的药物来攻击肿瘤 细胞，这些药物可以准确地找到 肿瘤细胞并对其进行攻击，减少
对正常细胞的损害。
免疫治疗
通过增强患者自身的免疫系统来 攻击肿瘤细胞，从而消灭肿瘤。
联合治疗
在一些情况下，医生可能会建议 将靶向治疗和免疫治疗联合使用
，以增强对肿瘤的治疗效果。
03
恶性肿瘤的预防与控制
健康生活方式的倡导
均衡饮食
提倡摄入新鲜、多样化的 食物，减少高热量、高脂 肪和高糖分的食物，以降 低癌症风险。
适量运动
定期进行适量的体育锻炼 ，帮助控制体重，提高免 疫力，预防癌症。
戒烟限酒
烟草和酒精都是致癌物质 ，戒烟限酒可以降低患癌 症的风险。
早期筛查与预防
定期体检
定期进行体检，包括癌症筛查，有助于早期发现 肿瘤，提高治愈率。
肿瘤生物治疗的概念
肿瘤生物治疗的概念肿瘤的生物治疗是应用现代生物技术及其产品进行肿瘤防治的新疗法。
肿瘤生物治疗它通过调动宿主的天然防卫机制或给予天然（或基因工程）产生的针对性靶向性很强的物质来取得抗肿瘤的效应。
肿瘤生物治疗包括体细胞疗法与细胞因子疗法，肿瘤疫苗与树突状细胞疗法，肿瘤分子靶向治疗方法，抗EGFR人/鼠嵌合单克隆抗体疗法，新型的抗血管内皮生长因子受体的人源化单克隆抗体疗法等治疗方法，随着科学技术的进展，会有越来越多的治疗肿瘤的方法。
生物治疗泛指用大分子生物制剂进行的治疗。
目前生物治疗在临床上使用比较普遍，按操作模式分类主要分为细胞治疗和非细胞治疗。
非细胞治疗，常见的三类包括抗体、疫苗和基因治疗。
抗体治疗目前常用的是单克隆的抗体，也就是靶向治疗，靶向治疗目前在肿瘤的治疗上效果相对明显。
疫苗治疗是最常见的，比如乙肝疫苗、卡介苗等。
基因治疗常用于治疗基因缺陷类疾病，通过某些遗传物质转移到患者体内，使其在体内的表达从而达到治疗某种疾病的方法的效果，基因治疗难度相对较高。
细胞治疗目前临床上常用的有自体树突状细胞疫苗（DC细胞）、自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）、DC刺激CIK细胞（DC-CIK 细胞）和自体自然杀伤细胞生物治疗指的是使用一些生物反应调节剂进行治疗。
生物治疗往往用于肿瘤的治疗，通过生物治疗方法，例如生物制剂、化学制剂以及生物技术方法等，能够激活患者体内的免疫系统，同时还可以增加人体免疫细胞对肿瘤细胞的识别能力以及杀伤能力，达到治疗肿瘤的目的。
生物治疗和传统的手术治疗、放疗、化疗等治疗方法相比，杀伤肿瘤特异性比较强，而且毒副作用小。
生物治疗主要适合多种实体肿瘤，例如前列腺癌、恶性黑色素瘤、膀胱癌、肾癌等，治疗之后可能会出现一些不良反应，例如皮肤发红、硬斑等，若不良反应明显，可能需要暂停治疗。
生物治疗是指利用新型生物技术制备的，以细胞、生物大分子（核酸、蛋白质和肽）或调节生物反应的小分子等作为特殊“药物”的手段。
恶性肿瘤生物治疗及临床应用 PPT【98页】
粒)的释放,导致靶细胞调亡。
与肿瘤免疫有关的细胞--2
• 突状细CD胞4以+T及细表胞达与H特L异A性II的类抗分原子提的呈B淋细巴胞细(A胞P相C)互如作巨用噬。细H胞L、A 树II 类分子是具有12~20个氨基酸的长肽,由APC细胞摄取与加工外源 性蛋白而来。CD4(+)T细胞的特异性T细胞受体被活化后,细胞就 开始产生细胞因子,以增强B细胞抗体的产生、支持T细胞应答及 激活其他免疫细胞。基于细胞因子产生的方式和刺激他们的抗原 以及它们所支持的免疫应答,T辅助细胞能够进一步分为两个亚 类:Th1细胞促进细胞毒性细胞应答、迟发超敏反应以及通过分泌 白介素(IL)-2、干扰素(IFN)-r及肿瘤坏死因子(TNF)-b而激活巨 噬细胞;Th2细胞支持B细胞应答,并通过分泌IL-4、IL-5、IL-6与 IL-10,支持IgG、IgA与IgE的产生。这两个亚类的CD4(+)细胞都 产生TNF-a、IL-3和例细胞巨噬细胞及落刺激因子(GM-CSF)。 TH1细胞通常接受病毒和细菌等感染因素的刺激。而Th2细胞对 过敏源和寄生虫发生反应。
与肿瘤免疫有关的细胞--3
•
自然杀伤细胞(NK)是一些大颗粒细胞毒性淋巴细胞,与 T、B
淋巴细胞明显不同。 NK细胞参与宿主的第一线防御,是非特异性
的,这些细胞是 CD3(-)细胞,不表达 T细胞受体。 NK细胞表达促进
细胞粘附和免疫球蛋白受体( FcR)的 CD56分子。 NK细胞参与抗
体依赖性细胞介导的细胞毒性 (ADCC), NK细胞不是靶细胞特异
3、即使是早期病变,不少肿瘤仍有较高的转移率 (早期胃癌淋巴结转移率3%~24、9%;I期恶性 黑色素瘤复发转移率11%);
4、放射治疗和化疗对多种晚期恶性肿瘤均有较 高的近期有效率,但对存活改善不满意;
自体胸腔积液上清作为培养液对肿瘤浸润淋巴细胞生长的影响
第18卷 第7期医学研究生学报Vol.18 No.7 2005年7月Journal of Medical Postgraduates Jul.2005·论 著·自体胸腔积液上清作为培养液对肿瘤浸润淋巴细胞生长的影响邹征云, 刘宝瑞(南京大学医学院附属南京市鼓楼医院肿瘤科,江苏南京210008)摘要: 目的:观察自体胸腔积液上清作为培养液对肿瘤浸润淋巴细胞(TI L)生长的影响. 方法:恶性胸腔积液中的TI L经贴壁法分离后,分别采用含有细胞因子白细胞介素22(I L22)、CD3单克隆抗体(OKT3)及植物血球凝集素(PHA)的自体胸腔积液上清及含10%人AB型血清的RP M I1640进行培养,比较两种培养液对TI L的增殖速度、培养前后免疫表型变化和对自体肿瘤细胞的杀伤活性。
结果:培养2周,经统计学比较发现,自体胸腔积液上清作为培养液对TI L的生长速度、免疫表型和对自体肿瘤细胞杀伤活性的影响与应用含10%人AB型血清的RP M I1640培养液培养无差异。
结论:自体胸腔积液上清作为培养液培养TI L是可行的。
为自体TI L疗法治疗恶性胸腔积液提供理论基础。
关键词: 培养液; 恶性胸腔积液; 肿瘤浸润淋巴细胞; 肿瘤免疫治疗中图分类号: R730.51 文献标识码: A 文章编号: 100828199(2005)0720585203The use of autologous supernatant of malignant pleura effusioni n culturi n g human tumor i n filtrati n g lymphocytes in vitroZ OU Zheng2yun,L I U Bao2rui(D epart m ent of O ncology,Gulou Hospital,School of M edicine,N anjing U niversity,N anjing210008,J iangsu,China)Abstract: O bjective:T o study the effect of aut ol og ous supernatant of malignant p leura effusi on and RP2 M I1640with10%AB+seru m on the culture of tu mor infiltrating ly mphocytes(TI L)in vitro. M ethods: Is olated by the attach ment method we established,TI L was cultured in either aut ol og ous supernatant of ma2 lignant p leura fluid or RP M I1640with10%AB+seru m,and vari ous types of cyt okines such as I L22, PHA and antibody against C D3(OKT3)were added int o both cultures.The p r oliferati on as well as the killing activity and the phenotype changes of TI L cultured in the t w o kinds of cultures were co mpared. Resu lts:There was no difference in the p r oliferati on or the killing activity in vitro as well as the phenoty pe changes of TI L bet w een the t w o kinds of cultures. Conclusion:Aut ol og ous supernatant of malignant p leu2 ra fluid could be used as TI L culture mediu m.The method described here made it possible f or TI L t o be cultured in vitro f or a short ti m e,and then reinfused back t o thorax for further ex panding and contr olling the malignant p leura effusi on in the p resence of I L22,and it als om ini m ized the risks of conta m inati on.Key words: Culture medium; Malignant p leura fluid; Tumor infiltrating ly mphocyte; Tumor i m2 munotherapy0 引 言 肿瘤浸润淋巴细胞(tu mor infiltrating ly mpho2 cyte,TI L)是继淋巴因子激活杀伤细胞(ly mphokine2activated killer cell,LAK)之后的第二代抗肿瘤效应细胞,能特异性杀伤肿瘤细胞,抗肿瘤活性较LAK 强50～100倍。
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心邹征云浅谈恶性肿瘤生物治疗概论
23例，5例发稿时持续缩小中， 5CR,2PR，3例SD
Juan F.Vera Ph.D. *Assistant Professor *Center for Cell and Gene Therapy *Baylor College of Medcine, *Texas Children Houston, TX 77030
肿瘤生物治疗的主要途径
调节肿瘤细胞生物学行为：
增殖、凋亡、分化、血管生成、侵袭、转移等
调节宿主的抗肿瘤免疫反应：
肿瘤生物治疗的特点
具有肿瘤特异性（高度选择性） 作用机理及毒副作用与常规治疗不同 不容易产生耐药 毒副作用较小
生物治疗分类
被动免疫治疗
非特异性免疫治疗-------LAK细胞回输疗法 CD3AK回输疗法 NK细胞回输疗法 T细胞回输疗法 特异性免疫治疗 -- 靶向治疗（抗体治疗，小分子化合 物等），基因治 疗 TIL疗法，CTL疗法
恶性肿瘤的生物治疗概论
（tumor biotherapy）
邹征云
Zou Zhengyun Ph.D
MD
南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心
Drum Tower Hospital Cancer Center,Nanjing University Medical School
南京大学临床肿瘤研究所
Clinical Cancer Institute of Nanjing University
Adoptive transfer of EBV-specific T cells results in sustained clinical responses in patients with locoregional nasopharyngeal carcinoma. J Immunother. 2010 ; 33(9): 983–990.
肿瘤新趋势
结肠癌------------------------------------------------------直肠癌------------------------------------------------------胃癌---------------------------------------------------------食管癌------------------------------------------------------胰腺癌------------------------------------------------------肝癌---------------------------------------------------------胆囊（胆管）癌------------------------------------------乳腺癌------------------------------------------------------非小细胞肺癌---------------------------------------------小细胞肺癌-------------------------------------------------
Dosing schedules for concurrent RCT: RT+5-FU civ: 5-FU225mg/2 over24h 7d/wk during RT RT+FCF: 5-FU 400mg/m2+CF 20mg/m2 for 4d during wk 1 and 5 of RT
结肠癌化疗方案（推荐）
Nanjing University Nanjing University
恶性肿瘤生物治疗
Choi标准或RECIST标准判定有效和无
效与TTP相关性
Choi标准
RECIST标准
如何提高疗效
• 目前分子靶向治疗疗效尚不理想，局部单用效果 欠佳，如单用贝伐单抗有效率低，现常用方法为： 与化疗、放疗联合；靶向药物联合等。如：
• 在RCHOP根底上联合抗CD22单抗治疗IPI≥3分者5 年生存率从40%提高到60%左右。
• 晚期或转移患者起始或挽救治疗均可 选择化疗±C225或帕尼单抗〔KRAS野 生型〕，或化疗±贝划单抗或单用 C225或帕尼单抗〔KRAS野生型〕。
2021NCCN指南关于NHL靶向治疗
• 美罗华可用于B细胞淋巴瘤，包括CLL/SLL、FL、 粘膜相关性、大B、伯基特淋巴瘤、原发皮肤B细 胞、艾滋病相关B细胞淋巴瘤〔CD20+〕
疗效评价
•临床获益率 •PET-CT •CT的肿瘤密度 •MRI的功能成像 •……
FDC-PET
• 以检测肿瘤组织的代谢改变为根底,利用肿 瘤组织代谢旺盛的特点而与周围组织区分 显像
• 常可及时反映MTT治疗的有效性,对早期疗 效的评价具有较高的敏感性,通常比CT提早 数周发现治疗起效,及时发现无效病例
• 抗HERB2单抗对HERB2阳性乳腺癌单用有效率2535%,与化疗连用可提高到70%左右。
• 贝伐单抗常与化疗联合用于治疗恶性肿瘤。 • 但最正确联合方法尚不清楚，序贯或同时？前后
顺序？
• 分子靶向治疗 • 免疫效应细胞治疗
理想的免疫治疗模式
• 必须能诱导大量有效的抗肿瘤特异性T细胞 反响；
并且HU改变不符合PR标准;出现新病灶;瘤 内新生结节或已存在的瘤内结节体积增加
Choi标准与RECIST标准比较
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MD Anderson GMP Facility
Manipulated Processing Suites (GMP)
Ma nipulated Storing Suites (GM P)
Ma nipulated Processing Suites (GM P)
Manipulated Sorting Suites (GMP) Produc tion Sui tes (GM P)
Waterfall plot of tumor regression in first 31 treated patients
48% response rate (>50% decrease in tumor burden)
Progression-free and Overall Survival (as of October 17, 2011)
树突状细胞疫苗治疗肿瘤
> 机体内抗原呈递能力最强的细胞 > 占正常人外周血白细胞的1％左右 > 联合应用细胞因子体外培养大量DC获得成功，为其功能及 分化状态的深入研究和在肿瘤生物治疗领域中的应用创造了条件
斯德哥尔摩时间2011年10月3日11时30分（北京时间3日17时30分），瑞典卡罗林 斯卡医学院宣布，美国科学家布鲁斯·巴特勒（Bruce A. Beutler）和卢森堡科 学家朱尔斯·霍夫曼（Jules A. Hoffmann）“因在先天免疫激活方面的发现”、 加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼（Ralph M. Steinman）“因发现树突细胞及其在获 得性免疫中的作用”而获得2011年诺贝尔生理学或医学奖。前两者和后者分别分 享一半的奖金。
苗
2011年：CTLA-4单抗上市 LAK„TIL„CD3AK„CIK„DC„CTL-
肿瘤细胞疗法
肿瘤与机体免疫间的相互作用（三个阶段）
肿瘤免疫监视 -肿瘤免疫平衡 -肿瘤免疫逃逸
肿瘤细胞免疫逃逸的机制
抗原丢失 肿瘤细胞MHC分子表达下调 协同刺激因子表达缺失 肿瘤产生抑制性的微环境
DC疫苗制备与临床应用
抽50ml外周血
分离单核细胞，体外诱导DC细胞
DC细胞负载自体肿瘤抗原，通过静脉回输或经皮 下注射给病人
经肿瘤抗原负载DC细胞能刺激自体T细胞
产生抗肿瘤免疫应答
DC疫苗制备与临床应用
抽50ml-60ml外周血 分离单核细胞，体外诱导DC细胞 DC细胞负载自体肿瘤抗原并与自体的淋巴细胞混合---CTL
抗肿瘤免疫及免疫逃逸机制
肿瘤免疫逃逸机制
肿瘤抗原丢失， MHC分子表达下调，肿瘤产生抑制性递质
免疫抑制分子
IL-10, IL-4, TGF-β CTLA-4
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
免疫抑制细胞
regulatory T cells, Treg myeloid-derived suppressor cells, MDSCs tumor-associated macrophages, TAM regulatory NK cells
蛋白/多肽疫苗
通过遗传工程的方法更换肿瘤抗原上的抗原决定基的氨基酸序 列可以增强肿瘤抗原肽与MHC I类分子结合的能力，导致免疫应 答的加强
核酸疫苗（或称DNA/RNA疫苗、基因疫苗）
将编码某种抗原蛋白的外源基因直接导入体细胞（单核细胞或 成纤维细胞）内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白， 诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答
NCI 恶黑治疗模式TIL治疗
Dudley ME,et al. Science, 2004,298(5594): 850–854. Dudley ME, et al. J Clin Oncol, 2005, 23(10): 2346–2357. Dudley ME, et al. Clin Cancer Res 2010;16:6122-6131. Steven A. Rosenberg, Clin Cancer Res 2011;17:4550-4557.
肿瘤生物治疗的主要途径
调节肿瘤细胞生物学行为：
增殖、凋亡、分化、血管生成、侵袭、转移等
调节宿主的抗肿瘤免疫反应：
肿瘤生物治疗的特点
具有肿瘤特异性（高度选择性） 作用机理及毒副作用与常规治疗不同 不容易产生耐药 毒副作用较小
生物治疗分类
被动免疫治疗
非特异性免疫治疗-------LAK细胞回输疗法 CD3AK回输疗法 NK细胞回输疗法 T细胞回输疗法 特异性免疫治疗 -- 靶向治疗（抗体治疗，小分子化合 物等），基因治 疗 TIL疗法，CTL疗法
Minimally Manipula ted Processing Room Production Suites (GMP)
8例，1CR,2例SD
Complete response after lymphodepletion and EBV-specific CTL infusion.
PET images of patient (P1740) before and 8 weeks after CD45 mAbs/EBVCTL infusion.
肿瘤生物治疗的进程
1894年：美国医师Coley用细菌毒素治疗肉瘤- 肿瘤生物治疗的鼻祖 1986年：美国FDA批准重组IFNα 上市- 现代肿瘤生物治疗起点 1997年：CD20单抗Rituximab上市 2001年：Glivec上市- 分子靶向药物治疗的起点 2009年：宫颈癌预防性疫苗Cervarix上市- 肿瘤疫苗治疗的起点 2010年：前列腺癌治疗性疫苗Provenge上市- FDA批准的首个治疗性疫
实体肿瘤TIL治疗
Growing Network of TIL Therapy Centers
Copenhagen, DK NKI, NL NCI, MD MDACC, TX
Uppsala, Sweden
Moffitt, FL
Sheba, Israel
NCI – Rosenberg, Yang, Dudley MDACC – Hwu, Radvanyi Sheba – Schachter, Besser Moffitt – Mule, Weber Uppsala – Ullenhag, Trotterman Copenhagen – Svane and Straten
Phase II autologous TIL therapy scheme
Lymphodepletion
cytoxan fludarabine
TIL infusion
Day
-7
-5
-1
High-dose IL-2
High-dose IL-2
0
1
5
21
22
26
• Stage IIIc-IV M1a/M1b/M1c • All HLA subtypes • ECOG 0-1 • Target enrollment = 200 patients
23例，5例发稿时持续缩小中， 5CR,2PR，3例SD
Juan F.Vera Ph.D. *Assistant Professor *Center for Cell and Gene Therapy *Baylor College of Medcine, *Texas Children Houston, TX 77030
Adoptive transfer of EBV-specific T cells results in sustained clinical responses in patients with locoregional nasopharyngeal carcinoma. J Immunother. 2010 ; 33(9): 983–990.
Mark E. Dudley
Current TIL therapy trials at MDACC (all with prior NMA lymphodepletion)
• Phase II autologous TIL in all HLA subtypes (Target accrual = up to 200 patients) • Phase II autologous TIL with MART-1 peptide-pulsed mDC co-vaccination in HLA-A0201+ patients (Target accrual = 48 patients) • Phase II autologous TIL transduced with CXCR2 (Target accrual = 48 patients) • Phase II autologous TIL transduced with dominantnegative TFG-bR II (Target accrual = 48 patients)
主要内容
概 念 肿瘤生物治疗的进程 肿瘤与机体免疫间的相互作用 肿瘤生物治疗的分类 实体肿瘤生物治疗--免疫活性细胞回输治疗 实体肿瘤生物治疗--药物治疗
概念
一、 肿瘤的传统治疗模式
手术 放疗 化疗
二、肿瘤生物治疗：
利用生物反应调节剂（biological response modifier， BRM），如生物大分子（细胞、核酸、蛋白质和肽）或小 分子化合物，直接或间接地修饰宿主与肿瘤的关系，激发 或增强机体对肿瘤的生物应答，达到控制或消灭体内微小 残留病灶，甚至使晚期肿瘤得到部分或完全缓解的治疗方 法。
Dudley ME等采用采用化疗序贯TIL/高剂量IL-2治疗晚期恶黑治疗效果
Surgery Branch Head, Cell Production Facility Staff Scientist National Cancer Institute Building 10 - Hatfield Clinical Research Center, Room 3-5752 10 Center Drive Bethesda, MD 20892-1201 Phone: 301-496-1436 Fax: Fax Number not listed E-Mail: dudleym@