病毒TCID50测定的病毒接种`
病毒TCID50测定的标准操作规程
病毒TCID50测定的标准操作规程（编号：014）
1、目的及适用范围
该SOP 适用于病毒滴度测定，即病毒半数感染量TCID 50的测定。
2、主要仪器及试剂
倒置显微镜、细胞培养箱、微量移液器、DMEM 细胞培养液、小牛血清、0.1M PBS 、胰酶
3、操作步骤
3.1准备细胞：取生长良好的细胞，按常规方法消化，运用10%FBS DMEM 制备细胞悬液；对细胞进行计数，调整细胞浓度为1×10个/mL 的悬液，然后加入到96 孔细胞培养板上，100µL/孔。
37℃，5%CO 培养一定时间使其铺满单层。
523.2准备病毒：将待测定病毒进行10倍梯度稀释，选取6-8个梯度进行试验。
3.3感染病毒：96孔板中细胞长满单层后，将培养液吸出，加入稀释好的病毒也，每个梯度8-16孔，每孔100μL ，置37℃，5%CO 培养一定时间后观察病变孔数并记录。
23.4 根据如下方法计算
3.4.1Reed －Muench 氏法
例：某病毒其稀释度及接种细胞后观察到的CPE 结果如下： 病毒稀释度
出现CPE 的孔数 103
16/16 104
16/16 105
16/16 106
13/16 107
7/16 108
1/16 109
0/16
1010 31。
病毒TCID50测定
病毒TCID50测定病毒TCID50测定是一种常见的病毒滴度测定方法。
下面将介绍具体的操作步骤。
首先，需要准备好细胞。
取出一块细胞培养板，每个孔铺成单层大约60％丰度即可接种病毒。
对照选取16个孔即可。
注意不要窜孔，保证实验条件一致。
其次，稀释待测病毒液。
可以采用A法或B法。
在A法中，向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液，依次10倍系列稀释至适宜浓度。
在B法中，可以根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数，并根据接种的孔数稀释病毒。
接下来，进行接种。
用多道加样器吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液。
将稀释好的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据观察的惯，一般从右到左，从上到下，从高稀释度到低稀释度到原液加样。
切记要设置正常的细胞对照，每次实验要重复4次，计算标准差。
最后，进行培养。
37℃CO2培养箱中孵育1h，取出培养板吸去病毒液，加入维持液200µl继续在37℃CO2培养箱中培养。
实验方法将待检病毒接种于细胞培养物中，培养时间为5天，培养温度为37℃，CO2浓度为5%。
测定结果取出培养板，使用显微镜观察细胞病变情况。
根据病变程度，计算出病毒的浓度。
计算方法1) ___-Karber法利用病变程度计算出病毒的50%细胞传染量（CCID50），计算公式为：LgCCID50/0.2ml= -（X-d/2 + d×∑R1/N1）,其中X代表全部病变最低稀释度对数，d代表稀释因数对数，N1代表每个稀释度所种的孔数，R1代表病变孔数，∑代表积和。
2) Reed-Muench法观察细胞病变情况，找出能引起半数细胞感染的病毒稀释倍数，按照Reed和Muench公式计算出该病毒液的50%细胞传染量（TCID50）。
根据实验结果，能使50%细胞感染的病毒稀释度在10^-4~10^-5之间，根据Reed和Muench公式计算出TCID50.。
TCID50测定方法
查看文章病毒TCID50测定（组织半数感染量）方法步骤2009-11-27 21:50操作步骤(1) 准备细胞取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。
每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。
滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。
也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法B法参照书将液体量减少后的结果病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。
向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。
首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl 加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl 孵育液中。
若接种8个孔，则相应增加液体量。
上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。
使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。
使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。
】(3) 接种取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。
病毒TCID50测定PDF.pdf
病毒TCID50测定操作步骤(1) 准备细胞取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。
每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。
滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。
也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法B法参照书将液体量减少后的结果病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。
向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。
首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl孵育液中。
若接种8个孔，则相应增加液体量。
上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。
使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。
使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。
】(3) 接种取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。
将稀释好的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据观察的习惯，一般从右到左，从上到下，从高稀释度到低稀释度（10-1，10-2 ）到原液加样。
病毒TCID50测定方案
TCID50测定方案391 简介TCID50(Tissue Culture Infective Dose)，半数组织培养感染量，又称50%组织细胞感染量，指能在半数细胞培养板孔或试管内引起细胞病变(Cytopathic effect，CPE)的病毒量。
将不同稀释度的病毒接种到96孔板上培养的单层细胞上。
观察细胞病变，待细胞不再病变时记录每个稀释度出现病变和未出现病变的孔数，按照Reed-Muench公式计算TCID50值。
2 试剂试剂来源保存条件DMEM-basic培养基Gibco，上海4℃保存胰蛋白酶Gibco，-20℃冻存胎牛血清Fetal bovine serum Hyclone，-20℃冻存PBS Hyclone，-20℃冻存3 仪器与耗材仪器规格耗材规格CO2培养箱细胞培养瓶25cm2生物安全柜无菌离心管15mL，50mL倒置显微镜一次性移液管1mL，2mL，5mL，10mL显微照相系统细胞培养板96孔高速冷冻离心机电子天平移液器液氮罐电冰箱4 细胞及培养基DF-1细胞株细胞生长液（500mL）：20%FBS（胎牛血清）+1%双抗（青链霉素）+剩余用DMEM100mL 5mL 395mL细胞维持液（50mL）： 1%双抗（青链霉素）+ DMEM（无血清）+1%FBS 49mL细胞冻存液（50mL）：70%DMEM-basic + 20%FBS + 10%DMSO35mL 10mL 5mL4℃保存备用5 病毒株及培养方法禽流感病毒（Avian influenza virus ，AIV），H5N1株；禽白血病病毒（Avian leukosisvirus ，ALV），HPRS-103株；禽传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus ，IBV），H52株；禽传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus ，IBDV），B87株。
病毒TCID50测定的标准操作规程
病毒TCID50测定的标准操作规程
病毒TCID50测定的标准操作规程（编号：014）
1、目的及适用范围
该SOP 适用于病毒滴度测定，即病毒半数感染量TCID 50的测定。
2、主要仪器及试剂
倒置显微镜、细胞培养箱、微量移液器、DMEM 细胞培养液、小牛血清、0.1M PBS 、胰酶
3、操作步骤
3.1准备细胞：取生长良好的细胞，按常规方法消化，运用10%FBS DMEM 制备细胞悬液；对细胞进行计数，调整细胞浓度为1×10个/mL 的悬液，然后加入到96 孔细胞培养板上，100μL/孔。
37℃，5%CO 培养一定时间使其铺满单层。
523.2准备病毒：将待测定病毒进行10倍梯度稀释，选取6-8个梯度进行试验。
3.3感染病毒：96孔板中细胞长满单层后，将培养液吸出，加入稀释好的病毒也，每个梯度8-16孔，每孔100μL ，置37℃，5%CO 培养一定时间后观察病变孔数并记录。
23.4 根据如下方法计算
3.4.1Reed －Muench 氏法
例：某病毒其稀释度及接种细胞后观察到的CPE 结果如下：病毒稀释度
出现CPE 的孔数 103
16/16 104
16/16 105
16/16 106
13/16 107
7/16 108
1/16 109
0/16
1010 31。
病毒半数致死量、感染量(LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50)测定法
/0.1 ml。表示该病毒悬液作 10
－ 5 .64
稀释后，每孔（瓶）细胞接种 0.1 ml，
可以使 50％的细胞产生细胞病变（ CPE） 。
2010 年版兽药典三部增、修订品种
品名 中国兽药典(2010 年版三部)
半数保护量（PD50）测定法
将样品按适宜的倍数进行倍比稀释，取至少 3 个剂量组，按产品推荐的使用途径，每个剂 量组接种 1 组动物，同时设 1 组动物作为对照。接种一定时间后，连同对照动物，每头（只） 攻击一定剂量的强毒，观察一定时间。记录各组动物的发病情况，动物发病即判为不保护。计 算各剂量组免疫动物保护的百分率。对照动物的发病率应符合规定。按 Reed-Muench 法计算 PD50。 表 XX. 口蹄疫灭活疫苗的试验示例 疫苗接种 剂量 观察结果 发病数 0 2 4 保护数 5 3 1 距离比例= 保护比例 5/5 3/5 1/5 高于50%－50% 高于50%－低于50% 发病数 0 2 6 累计结果 保护数 9 4 1 保护率 （％） 100 67 14
－
6 5 2 0
0 1 4 6
100 83 33 0
பைடு நூலகம்13 7 2 0
0 1 5 11
100 88 29 0
距离比例=
高于50%-50% 高于50%-低于50%
=
88%-50% 88%-29%
= 0.64
10 倍系列稀释的稀释系数的对数为－ 1。高于 50％感染时（上例中为 88％）病毒稀释度 － （ 10 5）的对数值为 － 5。 log TCID50= － 5+0.64（ － 1） = 5.64 则：TCID50=10
病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50）测 定法
病毒TCID50测定
病毒TCID50测定（组织半数感染量）操作步骤(1)准备细胞取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。
每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。
滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。
也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法B法参照书将液体量减少后的结果病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。
向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。
首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl孵育液中。
若接种8个孔，则相应增加液体量。
上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。
使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。
使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。
】(3) 接种取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。
病毒半数致死量、感染量(LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50)测定法
2010 年版兽药典三部增、修订品种
品名 中国兽药典(2010 年版三部)
半数保护量（PD50）测定法
－
6 5 2 0
0 1 4 6
100 83 33 0
13 7 2 0
0 1 5 11
100 88 29 0
距离比例=
高于50%-50% 高于50%-低于50%
=
88%-50% 88%-29%
= 0.64
10 倍系列稀释的稀释系数的对数为－ 1。高于 50％感染时（上例中为 88％）病毒稀释度 － （ 10 5）的对数值为 － 5。 log TCID50= － 5+0.64（ － 1） = 5.64 则：TCID50=10
病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50）测 定法
将病毒悬液作 10 倍系列稀释，取适宜稀释度，定量接种实验动物、胚或细胞。由最高稀 病毒半数 ，观察记录实验动物、胚或细胞的 致死量、 释度开始接种，每个稀释度接种 4～6 只（枚、管、瓶、孔） 感 染 量 死亡数或病变情况，计算各稀释度死亡或出现病变的实验动物（胚、细胞）的百分率。按 。 （LD50、 Reed-Muench 法计算半数致死（感染）量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50） 计算公式为： ELD50 、 log TCID50=高于 50％的病毒稀释度的对数+距离比例稀释系数的对数 ID50 、 表 XX 试验示例（以 TCID50 为例，接种量为 0.1 ml） EID50 、 病毒稀释 观察结果 累计结果 TCID50） 度 CPE 数 无 CPE 数 CPE（％） CPE 数 无 CPE 数 CPE（％） 测定法 10 4 － 10 5 － 10 6 － 10 7
tcid50计算方法
tcid50计算方法TCID50计算方法。
TCID50是一种用于测定病毒活力的方法，它是一种半数组织培养感染病毒的终点稀释法。
TCID50的全称是50%组织培养传染病毒量，它是通过对病毒进行一系列的稀释，然后观察感染细胞的情况来确定病毒滴度的一种方法。
下面我们将详细介绍TCID50的计算方法。
首先，我们需要准备好所需的实验材料和设备，包括细胞培养基、细胞培养皿、吸头、离心管、移液器等。
在进行实验前，需要将所有实验材料进行消毒处理，确保实验环境的无菌。
接下来，我们需要进行病毒的稀释。
首先取一定量的病毒悬液，然后按照一定的比例将其与细胞培养基进行稀释，得到一系列不同浓度的病毒溶液。
通常情况下，我们会进行10倍的稀释，直到最后得到一定量的病毒溶液。
然后，我们需要将稀释后的病毒溶液接种到细胞培养皿中，使其感染细胞。
接种后，需要将细胞培养皿放置在恒温培养箱中，让病毒与细胞进行相互作用。
在一定的时间内，观察细胞的情况，记录下感染细胞的数量。
最后，我们可以利用统计学的方法来计算TCID50。
根据感染细胞的数量，可以利用Probit分析或者其它统计学方法来确定病毒的滴度。
通过计算，我们可以得到病毒的TCID50值，这个值代表了病毒的活力和浓度。
在进行TCID50的计算过程中，需要注意以下几点。
首先，实验过程中需要严格控制实验条件，确保实验的准确性和可重复性。
其次，需要对细胞培养基、细胞培养皿等实验材料进行严格的消毒处理，避免外源性污染对实验结果的影响。
最后，需要在实验过程中进行详细的记录和数据统计，确保实验结果的准确性和可靠性。
总之，TCID50是一种重要的病毒活力测定方法，通过对病毒的稀释和感染细胞的观察，可以确定病毒的滴度和活力。
在进行实验时，需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
希望本文对您了解TCID50的计算方法有所帮助。
tcid50法
tcid50法TCID50法是一种常用的病毒滴度测定方法，用于评估病毒溶液中的活性病毒数量。
TCID50是指病毒的50%组织细胞传染性滴度。
病毒滴度是指病毒溶液中含有多少活性病毒颗粒的浓度。
确定病毒滴度的目的是为了量化病毒溶液中的活性病毒数量，从而为研究人员提供准确的病毒浓度信息，用于病毒研究、疫苗制备和药物筛选等领域。
TCID50法是通过对细胞培养物进行稀释接种，然后观察细胞的病毒感染情况来测定病毒滴度的一种方法。
具体操作过程如下：将细胞培养物均匀地分配到培养皿中。
然后，将病毒溶液进行一系列的稀释，每次稀释一倍，得到一系列的稀释液。
接下来，将每个稀释液滴加到培养皿中的不同孔上。
然后，将培养皿放入恒温培养箱中，让病毒与细胞进行接种。
接种一段时间后，观察培养皿中细胞的感染情况。
可以通过显微镜观察细胞形态的变化，或者通过染色等方法来观察病毒感染的细胞。
根据感染细胞的数量和稀释液的稀释倍数，计算出病毒的TCID50值。
通常，TCID50值是通过统计病毒感染和未感染细胞的比例来计算的。
TCID50值越高，表示病毒的传染性越低；而TCID50值越低，表示病毒的传染性越高。
因此，通过TCID50值可以评估病毒的感染能力和传播能力。
TCID50法具有操作简单、结果可靠的优点，因此被广泛应用于病毒研究和疫苗制备过程中。
通过测定病毒的TCID50值，可以帮助研究人员评估病毒的传播能力和感染能力，从而指导病毒研究和疫苗制备的实验设计。
TCID50法是一种常用的病毒滴度测定方法，通过对细胞培养物进行稀释接种，然后观察细胞的病毒感染情况来测定病毒滴度。
通过测定病毒的TCID50值，可以评估病毒的传播能力和感染能力，为病毒研究和疫苗制备提供准确的病毒浓度信息。
TCID50的测定方法
实验病毒感染力的滴定（TCID50的测定）滴度：在半定量或定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。
根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱。
滴度（抗体的多少）越高，受传染的机会就越小。
一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步骤1、在离心管中用MEM将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-6。
2、将稀释好的病毒接种到96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排，共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法。
五、TCID50的计算方法1、Reed-Muench两氏法（CPE：Cytopathic effect细胞病变影响）距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝0.8lg TCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数=0.8×(-1)+(-3)=-3.8TCID50=10-3.8/0.1ml含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。
病毒感染力的滴定(TCID50的测定)
病毒感染力的滴定（TCID50的测定）概念：半数感染量（median infective dose， ID50）表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。
一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步骤1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
lgTCID50=L-d(s-0.5)L：最高稀释度的对数D：稀释度对数之间的差S：阳性孔比率总和lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml含义：将该病毒稀释103.875接种100µl可使50%的细胞发生病变。
实例1鸡新城疫活疫苗（一）培养病毒将鸡新城疫病毒（la sota株）接种于9～11d鸡胚的尿囊腔中，接种后48～72h收获病毒，供检测与制苗用。
病毒感染力的滴定(TCID50的测定)
病毒感染力的滴定（TCID50的测定）概念：半数感染量（median infective dose， ID50）表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。
一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数细胞培养物(tissue,组织)感染量TCID50（50% tissue culture inf ective dose)：用细胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步骤1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10 -10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
lgTCID50=L-d(s-0.5)L：最高稀释度的对数（-1）D：稀释度对数之间的差（lg10-1-lg10-2=1）S：阳性孔比率总和（1+1+0.875+0.375+0.125=3.375）lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml含义：将该病毒稀释103.875接种100µl可使50%的细胞发生病变。
病毒感染力的滴定（TCID50的测定）
病毒感染力的滴定（TCID50的测定）病毒感染力的滴定（TCID50的测定）概念：半数感染量（median infective dose，ID50）表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。
一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数细胞培养物(tissue,组织)感染量TCID50（50% tissue culture inf ective dose)：用细胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步骤1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10 -10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl。
3、在每孔加入细胞悬液100μl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100μl生长液+100μl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
lgTCID50=L-d(s-0.5)L：最高稀释度的对数（-1）D：稀释度对数之间的差（lg10-1-lg10-2=1）S：阳性孔比率总和（1+1+0.875+0.375+0.125=3.375）lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml含义：将该病毒稀释103.875接种100μl可使50%的细胞发生病变。
组织培养半数感染量－TCID50滴定的具体步骤
组织培养半数感染量－TCID50滴定的具体步骤组织培养半数感染量－TCID50滴定的具体步骤：(1)流感病毒制备利⽤鸡胚尿囊腔接种法制备流感病毒，收获尿囊液，⾎凝实验测定病毒的存在，分装后－70℃冻存。
(2)病毒的稀释1)取1管冻存病毒尿囊液，1:100稀释（100微升病毒液+9.9毫升稀释液）2)第1排孔加⼊146微升1:100稀释过的病毒液，然后做系列半对数稀释，使之成10-2、10-2.5、10-3、10-3.5……10-7。
每孔含100微升病毒液，每个稀释度重复4孔，详细操作参见图1。
* ⼈流感病毒⼀般在胰酶存在的条件下才能感染MDCK细胞，因此病毒稀释液中需加⼊2微克/毫升的TPCK－胰酶。
某些毒性很⾼的禽流感病毒在⽆胰酶存在的条件下即可感染MDCK细胞，因此在测定新病毒滴度时，最好配制含有和不含有胰酶的两种稀释液，以获得最佳结果。
(3)MDCK细胞的准备1)使⽤前2天将MDCK细胞1:100传代，使之70~90%成⽚，处于对数⽣长期的细胞对病毒具有最⼤的敏感性，细胞过度⽣长以及代数太⾼（⼤于30代）将使细胞对病毒的敏感性降低。
2)弃去细胞培养液，⽤5毫升胰酶 / EDTA洗细胞⼀次，然后弃去。
3)加4到5毫升胰酶 / EDTA覆盖细胞（162cm2的细胞培养瓶）37℃ 5%CO2温箱中消化10~20分钟。
4)待细胞开始脱落时，加5~10毫升MDCK细胞培养液，吹打分散细胞，并将细胞转⼊离⼼管中，⽤PBS洗2次，以去除⽜⾎清。
5)将细胞悬浮于病毒稀释液中，⽤1毫升吸管充分吹打分散细胞，在细胞计数板上计数细胞数量。
6)⽤病毒稀释液将细胞稀释成1.5×105细胞/毫升。
7)加100微升细胞（1.5×104细胞/孔）于已稀释好病毒的微量细胞培养板中。
8)在37℃ 5%CO2温箱中培养18－22⼩时。
(4)测定组织细胞半数感染剂量（TCID50）1)弃去微量培养板中的细胞液，250微升PBS洗细胞⼀次。
tcid50计算方法
tcid50计算方法一、什么是tcid50tcid50是一种用于测定病毒感染力的计算方法，全称为50%组织培养传染量（50% tissue culture infectious dose）。
简单来说，tcid50是表示50%感染组织培养细胞所需的病毒数量。
要计算tcid50，需要进行以下步骤：1. 首先，将待测病毒样品进行一系列稀释。
通常，会进行10倍的稀释，如1:10、1:100、1:1000等。
每个稀释液通常都设置3个或更多的重复。
2. 将每个稀释液分别接种到细胞培养板中的细胞上。
细胞培养板通常分为96孔板，每孔有一定数量的细胞。
3. 在接种后，将细胞培养板放入恰当的条件下培养，让病毒感染细胞。
4. 一段时间后，观察细胞的变化。
如果细胞被病毒感染，细胞会出现病毒感染的特征，如细胞形态改变、细胞死亡等。
5. 根据观察结果，记录每个稀释液中感染细胞的情况，包括阳性孔和阴性孔的数量。
6. 使用统计学方法，计算出50%感染组织培养细胞所需的病毒数量。
这个数量就是tcid50值。
三、tcid50的应用tcid50是一种常用的病毒感染力测定方法，广泛应用于医学、生物学、农业等领域的研究中。
它可以用来评估病毒的感染力，研究病毒的病原性、传播途径等。
在疫苗研发中，tcid50可以用来评估疫苗的有效性。
疫苗通常会被稀释后接种到细胞上，通过计算tcid50可以确定疫苗的效果，以及需要接种多少疫苗才能达到预期的免疫效果。
tcid50还可以用于病毒感染的流行病学研究。
通过测定不同病毒株的tcid50值，可以比较它们的感染力，从而了解病毒的传播途径、传播速度等信息。
总结：tcid50是一种常用的病毒感染力测定方法，通过稀释病毒样品、接种细胞培养板、观察细胞变化等步骤，计算出50%感染组织培养细胞所需的病毒数量。
tcid50的应用广泛，可以用于评估疫苗的有效性，研究病毒的病原性和传播途径等。
通过tcid50的计算，可以更好地了解病毒的特性，为疫苗研制和疾病防控提供科学依据。
病毒TCID50测定方案
TCID50测定方案20121123391 简介TCID50(Tissue Culture Infective Dose)，半数组织培养感染量，又称50%组织细胞感染量，指能在半数细胞培养板孔或试管内引起细胞病变(Cytopathic effect，CPE)的病毒量。
将不同稀释度的病毒接种到96孔板上培养的单层细胞上。
观察细胞病变，待细胞不再病变时记录每个稀释度出现病变和未出现病变的孔数，按照Reed-Muench公式计算TCID50值。
2 试剂试剂来源保存条件DMEM-basic培养基Gibco，上海4℃保存胰蛋白酶Gibco，-20℃冻存胎牛血清Fetal bovine serum Hyclone，-20℃冻存PBS Hyclone，-20℃冻存3 仪器与耗材仪器规格耗材规格CO2培养箱细胞培养瓶25cm2生物安全柜无菌离心管15mL，50mL倒置显微镜一次性移液管1mL，2mL，5mL，10mL显微照相系统细胞培养板96孔高速冷冻离心机电子天平移液器液氮罐电冰箱4 细胞及培养基DF-1细胞株细胞生长液（500mL）：20%FBS（胎牛血清）+1%双抗（青链霉素）+剩余用DMEM100mL 5mL 395mL细胞维持液（50mL）：1%双抗（青链霉素）+ DMEM（无血清）+1%FBS 0.5mL49mL 0.5mL细胞冻存液（50mL）：70%DMEM-basic + 20%FBS + 10%DMSO35mL 10mL 5mL4℃保存备用5 病毒株及培养方法禽流感病毒（Avian influenza virus ，AIV），H5N1株；禽白血病病毒（Avian leukosis virus ，ALV），HPRS-103株；禽传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus ，IBV），H52株；禽传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus ，IBDV），B87株。
tcid50计算方法
tcid50计算方法TCID50计算方法。
TCID50是一种用于测定病毒感染力的方法，它是一种常用的病毒滴度测定方法，也是一种间接滴度测定方法，其全称为50%组织培养传染病毒感染量。
TCID50的计算方法对于病毒学研究和病毒治疗具有重要意义。
下面将介绍TCID50的计算方法。
首先，准备一系列含有不同稀释度的病毒悬液，通常是10倍稀释。
然后将这些病毒悬液分别接种到一系列细胞培养物中，每种稀释度接种若干个孔。
接种后，将培养皿放入恒温箱中培养一段时间，等到细胞出现病毒感染的特征，如细胞变形、溶解等。
接下来，观察每个孔中细胞的感染情况，记录下每个稀释度下有感染的孔数。
然后，根据每个稀释度下的感染孔数，利用统计学方法计算出病毒的滴度。
TCID50的计算方法是根据每个稀释度下的感染孔数，利用统计学方法计算出病毒的50%感染量。
具体计算方法是通过对每个稀释度下的感染孔数进行Log10转换，然后利用线性插值法计算出50%感染量对应的稀释度。
最后，根据插值计算出的稀释度，可以得出病毒的TCID50值。
在进行TCID50计算时，需要注意以下几点。
首先，稀释度的选择要合适，一般需要选取一系列不同浓度的病毒悬液，以便可以观察到感染孔数的变化。
其次，接种细胞的方法和条件要统一，以保证实验结果的可比性。
最后，对于每个稀释度下的感染孔数，需要进行统计学分析，确保计算出的TCID50值准确可靠。
总之，TCID50的计算方法是一种重要的病毒滴度测定方法，通过对不同稀释度下的感染孔数进行统计学分析，可以计算出病毒的50%感染量，从而评估病毒的感染力。
这种方法在病毒学研究和病毒治疗中具有重要意义，可以为疾病的预防和控制提供重要依据。
因此，研究人员在进行病毒感染力的测定时，可以选择TCID50的计算方法，以获得准确可靠的实验结果。
tcid50法
tcid50法TCID50法是一种常用的病毒感染力测定方法，用于评估病毒的感染力和浓度。
TCID50法全称为50%细胞传染病毒感染量法，是通过观察细胞感染情况来确定病毒的感染量。
下面将介绍TCID50法的原理、步骤和应用。
一、原理TCID50法是通过连续稀释病毒悬液，将其与细胞共培养，观察细胞感染情况，最后根据感染阳性和阴性的比例计算病毒的感染量。
具体原理如下：1. 取一定量的病毒悬液，进行连续稀释。
2. 将不同稀释度的病毒悬液与细胞共培养。
3. 观察培养后的细胞，根据细胞的感染情况判断阳性和阴性。
4. 根据阳性和阴性的比例，使用统计学方法计算出病毒的感染量。
二、步骤TCID50法的操作步骤如下：1. 准备好所需的培养基、细胞和病毒悬液。
2. 进行病毒的连续稀释，一般为10倍稀释。
3. 将不同稀释度的病毒悬液分别与细胞共培养，通常为96孔板形式。
4. 培养一定时间后，观察细胞的感染情况，记录阳性和阴性的孔数。
5. 根据阳性和阴性的比例，使用统计学方法计算出病毒的感染量。
三、应用TCID50法广泛应用于病毒学研究和生物制品生产中，具有以下几个方面的应用：1. 评估病毒的感染力：通过TCID50法可以确定病毒的感染力大小，对于病毒学研究和防控具有重要意义。
2. 测定病毒的浓度：通过TCID50法可以估算病毒的浓度，为病毒制备和应用提供参考。
3. 监测疫苗效果：通过TCID50法可以评估疫苗的效果，判断其对病毒的抑制作用。
4. 生物制品质量控制：TCID50法可以用于生物制品的质量控制，保证产品的安全有效性。
总结：TCID50法是一种常用的病毒感染力测定方法，通过观察细胞的感染情况来评估病毒的感染量。
其原理简单易懂，步骤清晰明了。
TCID50法在病毒学研究和生物制品生产中具有重要应用价值，可以评估病毒的感染力和浓度，监测疫苗效果，并用于生物制品的质量控制。
通过TCID50法的应用，可以更好地了解和控制病毒的感染过程，为病毒学研究和疫苗生产提供科学依据。
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1.单层细胞的制备 Hela细胞于指形管中37℃培养，待长成单 层后备用 2. 病毒液的稀释 病毒液作10倍稀释，先将稀释液分装于10 个EP管中，每管0.9ml，取0.1ml病毒悬液加入第 一管中，摇匀后为10－1，从中取0.1ml混合液加入 第二管，依次倍比稀释至10－9
3.病毒接种 将20个单层细胞培养管中的培养液倒掉， 取已经稀释好的病毒液接种于细胞单层， 10－1至 10－9每个稀释度分别接种2瓶细胞，每 瓶0.4ml。再取2瓶细胞分别接种0.4ml培养基 作为正常细胞对照，接种完后放入37瓶细胞中加入0.5ml细胞维 持液，置37℃培养，24小时后观察结果，并记 录好结果。