托佩克猪SLA-2基因克隆与表达
猪白细胞介素-2基因的克隆与表达
（ ｉ ｌ ｕ ｂ ｎ ｒ ｎ ｔｒｎ ｒ ｓａ ｃ ｎ ｔｔ ｔ Ｓ Ａｎ ｍａ ｓａ ｄ ｙ ａ ｄ Ｖｅｅｉ ａ ｙ Ｒｅｅ ｒ ｈ Ｉ ｓｉｕ ｅ， ＡＡＳ， ｈ ｎ ｈ ｉ ０ １ ６， ｈ ｎ ） Ｈ Ｓ ａ ｇ ａ １ ０ Ｃ ｉ ａ ２ Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ｂａ ｅ ｎ ｔ ｅｐ ｂ ｉｈ ｄ ｎ ｃｅ ｔｄ ｅ ｕ ｎ ｅｏ ｏ ｃｎ ｔ ｒｅ ｋ ｎ ２ Ｉ ・ ） ｅ ｅ ａｐ ｉ ｆ ｓ ｄｏ ｈ ｕ ｌ ｅ ｕ ｌｏ ｉｅｓ ｑ ｅ ｃ ｆｐ ｒｉ ｅｉ ｅ ｌｕ ｉ－ （ Ｌ ２ ｇ ｎ ， ａｒｏ ｓ ｎ
ｐｈ ｙ ｅ ｒ ｓ ｄ ａ ａ ｅ ｉ ｓ ａｎ ｈｅ ｓ ｃｆ ｃ ｆ ａ ｍ ｅ ｔ ｆ ４ ４ ｐ ｗｅｒ ｍｐｌｆｅ ｒ ｏｃ ｔ ｓ ｗｅ ｅ ｕ ｅ ｓ ｍ ｔ ｒａｌ ， ｄ ｔ ｐｅ ｉｉ ｒ ｇ ｎ ｓ ｏ ８ ｂ ｅａ ｉｉ ｄ ｆ ｏｍ ｔ ｏｔ ｌ ｈｅ ｔ ａ ＲＮＡ ｄ ｃ ｏｎ ｄ ｉ ｏ ＧＥＭ － ｅ ｓ ｅ ｔ ｙ ＲＴ－ ａｎ ｌ ｅ ｎｔ ｐ Ｔ ａ ｙ ｖ ｃ ｏｒ ｂ ＰＣＲ ． Ｔｈｅ ｓ ｑｕ ｎｃ ｅ ｅ ｍｉ ｔｏ ｈｏｗｅ ｈａ ｈｅ ｅ ｅ ｅ ｄ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｓ ｄ ｔ ｔｔ
９９． ８％ ｉ ｃ ｅ ｉ ｅ ｅ ｅ． ｅ ｄ ｒ ｃ ｉ ａ ｌ ｎ ｈｅ ｆ ａ ｎ ｎｕ ｌ ｏｔｄｅ ｓ ｑｕ ｎｃ Ｔｈ ｉｅ ｔｏｎ ｌｃ ｏｎｉ ｇ ｏｆｔ ｒ ｇｍｅ ｎ ｏ ｔ ｏｋ ｒ ｏｔｃ ｅ ｎｔｉ ｔ ｈｅ ｐｒ ａ ｙ ｉ ｘｐｒ ｓｉ ｅ ｓｏｎ ｖ ｃ ｏｒｐＥＴ３ ｏｎ ｔ ｕ ｔ ｄ ａ ｇ ｎｅ ｉａｌｙ ｅｎ ｉ ｅ ｒ ｄ ｓ ｒ ｉ ｘｐｒ ｓｉ ｇ ｒ ｃ ｍ ｂｉ ａｎ ｏｒ ｉ Ｌ－ ｅ ｅ， ｅｔ ２ａ ｃ ｓ ｒ ｃ ｅ ｅ ｔｃ ｌ ｇ ｎ ｅ ｅ ｔ ａ ｎ ｅ ｅｓｎ ｅ ｏ ｎ ｔ ｐ ｃ ｎｅ Ｉ ２ ｇ ｎ ａ ｈ ｕｒｆｅ ｅ ｏｍｂ ｎ ｎｔｐｏ ｃ ｎｅ Ｉ ・ ｒ ｅ ｎ ｗａ ｂｔ ｉ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｗｉｈ Ｉ ｎｄ ｔ ｅ ｐ ｉｉ ｄ ｒ ｃ ｉ ａ ｒ ｉ Ｌ・ ｐ ｏｔ ｉ ｓｏ ａ ｎ ｄ ｂｙ ｉ ｄｕ ｔｏ ｔ ＰＴＧ ｎ ｈｒ ２ ａ ｄ ｃ ｏｍａ－ ・
猪SOCS-2基因的克隆及序列分析
猪SOCS-2基因的克隆及序列分析杜宝文;杨公社;孙超【期刊名称】《生物工程学报》【年(卷),期】2007(23)6【摘要】从中国地方猪品种八眉猪(BaMei)肾脏组织中提取总RNA,采用RT-PCB 方法克隆了猪SOCS-2(suppressor of cytokine signaling-2,细胞因子信号转导抑制因子-2)基因的cDNA序列,经T/A克隆,插入到pMD19-T载体上,导入大肠杆菌DH-5α,阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,将测序结果与GenBank中已登录的人、大鼠和小鼠SOCS-2基因的序列进行同源性比较,利用生物信息学和分子生物学软件对猪SOCS-2基因编码的蛋白进行结构预测.结果表明:首次成功克隆了猪SOCS-2基因的cDNA序列(GenBank登录号为EF121242),其长度为822 bp,该基因ORF区核苷酸序列与其他物种相比同源性达到93%以上,氨基酸同源性则达到89%以上,生物信息学分析表明该蛋白分子量为22.25kD,等电点pI=8.30,包含199个氨基酸残基.该基因cDNA序列的克隆,有利于进一步研究SOCS-2调节机体发育的分子机理.【总页数】6页(P1091-1096)【作者】杜宝文;杨公社;孙超【作者单位】西北农林科技大学,动物脂肪沉积与肌肉发育实验室,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学,动物脂肪沉积与肌肉发育实验室,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学,动物脂肪沉积与肌肉发育实验室,陕西杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.猪SOCS-2基因cDNA 全长序列的克隆与组织表达 [J], 杜宝文;杨公社;孙超2.家蚕SOCS-2基因的克隆与序列分析 [J], 杨李阳;彭景琨;薛仁宇;曹广力;贡成良3.抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体重链基因的克隆及序列分析 [J], 张新涛;李洪涛;刘明;刘春国;杜金玲4.猪垂体中猪生长激素基因的克隆和部分序列分析 [J], 杨青;朱宝利5.猪SMYD3基因的克隆、序列分析及其对猪成纤维细胞增殖的影响 [J], 佘春;张艳;张彩玉;尹桂军;石德顺;李湘萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪ApoER2与VLDLR基因的克隆、组织表达及功能特征研究的开题报告
猪ApoER2与VLDLR基因的克隆、组织表达及功能特征研究的开题报告题目: 猪ApoER2与VLDLR基因的克隆、组织表达及功能特征研究一、研究背景ApoER2和VLDLR是细胞膜上的两种受体，与神经元迁移和突触塑性等过程有关。
它们在哺乳动物和家禽中的结构和功能已有较深入的研究，但在猪中的研究尚不足够。
同时，猪是重要的经济动物，其神经系统发育和认知能力等方面的研究对于提高猪的生产效益和研究人类疾病具有重要意义。
二、研究目的本研究旨在克隆猪ApoER2和VLDLR基因的全长cDNA序列，分析其基因结构和表达特点，并进行功能鉴定，以进一步深入了解其在猪神经系统发育和认知能力等方面的作用。
三、研究方法1. 克隆猪ApoER2和VLDLR基因的全长cDNA序列，进行生物信息学分析和基因结构预测。
2. 利用RT-qPCR技术检测猪不同组织中ApoER2和VLDLR基因的表达水平，并进行差异分析。
3. 利用CRISPR/Cas9技术建立ApoER2和VLDLR基因敲除的细胞系，检测其对神经元迁移和突触塑性的影响。
4. 构建ApoER2和VLDLR基因的过表达重组质粒，转染至细胞系中进行功能鉴定。
四、研究意义1. 构建猪ApoER2和VLDLR基因的全长cDNA序列并分析其基因结构可进一步了解其在猪神经系统发育和认知能力等方面的作用和机制。
2. 通过RT-qPCR技术检测不同组织中ApoER2和VLDLR基因的表达水平，可以研究它们在不同组织和疾病中的作用。
3. 利用CRISPR/Cas9技术建立ApoER2和VLDLR基因敲除的细胞系可深入了解其在神经元迁移和突触塑性等方面的作用和机制。
4. 构建ApoER2和VLDLR基因的过表达重组质粒并进行功能鉴定，可以研究它们对神经系统发育和认知能力等方面的作用和机制。
五、研究进展及展望目前，已完成了猪ApoER2和VLDLR基因的克隆和序列鉴定，正在进行基因结构预测和表达分析。
猪Toll样受体2基因的克隆和序列分析
中图分 类 号 ：￥５ ． ８２ ２ ４
文 献标 识 码 ：Ａ
文章 编 号 ：１０—５９２０ ）４０８—５ ０８ ８（０８０． ００ ０ ２
Ｃｌｎｎ ｎ ｅ ｕ ｎ ｉｇ ｏ ｏ ｃｎ ｌｌ ｅ ｒ ｃ ｐ ｏ ｅ ｅ ｏ ｉｇ ａ ｄ ｓ ｑ ｅ ｃｎ ｆｐ ｒ ｉｅ Ｔｏｌｉ ｅ ｅ ｔ ｒ２ ｇ ｎ —ｋ
ｔ ｎ（ ＴＰ Ｒ ｆ ｍ ｒ ｅｍｅｅｔ ｉ ｌ ｈｎｄ ｓ（ Ｎｓ． ｅ ｕｎ ｅａａｙｉ ｓｏ ｅ ａ ｔｅｐ Ｌ ２ ｇｎ ｓ２３ ８ｂ ｉ Ｒ －Ｃ ） ｒ ｐ ｃ ｓｎｅ ｃ ｙ ｏ ｏ ｏ ｉ ｎ ｒ ｍｐ ｏ ｅ ＭＬ ） Ｓｑ ｅ ｃ ｎｌｓ ｈ ｗ ｄｔ ｔｈ Ｔ Ｒ ｅｅｗａ ５ ｐｉ ｓ ｈ ｎ
猪 Ｔ ｌ 受体 ２基 因的克 隆和序 列分 析 ｏｌ 样
．
房 永 祥 ，景 志 忠 ， 陈 国华 ， 窦永 喜 ，蒙 学 莲
（ 中国农业 科学 院兰州兽 医研 究所 家畜疫 病病原 生物学 国家重 点实验 室 ／ 甘肃 省动物 寄生 虫病重 点实验 室 ，甘 肃 兰州 ７０４） ３０６
摘 要 ：本 研 究从 猪 肠 系膜淋 巴细 胞 中 ，克 隆 了猪 Ｔ ｌ样 受体 ２ 因（Ｔ Ｒ ） ｏ ｌ 基 ｐ Ｌ ２ 。基 因序 列 分析 表 明 ，克 隆 的 ｐ Ｌ ２ 因 Ｏ Ｆ为 ２ ５ ，编 码 ７５ 氨基 酸 ，合 １．１ ＴＲ 基 Ｒ ８ｐ ３ ｂ ８个 ５ ％的 亮氨 酸 ，合 有 一段 ２ 个氨 基 酸 的信 号 肽序 列 ；与 ０ １ Ｇ ｎ ａｋ中登 录 的 ｐ Ｌ ２ 列 （Ｍ １７ １的 同 源性 为 ９ ．％ ；与牛 、马 、绵 羊 和人 的 同源性 较 高 ，与 家 鼠 、 中 ｅＢ ｎ Ｔ Ｒ 序 Ｎ ２３ ６） ９２ 国仓 鼠相 比 次之 ，而与 鱼 类的 最低 。蛋 白分子 结 构预 测表 明 ，该 分子 由胞 外 区（８ ． ５８个氨 基 酸） 、跨 膜 区（３个氨基 ２ 酸） 和胞 内 区（７ 个 氨 基 酸） １４ 组成 ，其胞 外结 构域 由 多个 串联 重 复 的 Ｌ Ｒ基 序 （ Ｌ ＸＬ Ｌ Ｘ） ． ，而胞 内 区合 有 Ｒ Ｘ Ｘ Ｘ Ｘ ￣成 与人 白细胞 介 素 １受体 （ －Ｒ 高度 同源 的 区域 即 Ｔ Ｌ ／ 广 Ｉ １） Ｌ ０ ＬＩ １受体 同源 区（Ｉ） Ｌ ＴＲ ，说 明 ｐ Ｌ ２分 子具 有病 原 分 子模 ＴＲ 式识 别和信 号传 导 的作 用 ，这 为其 结 构与 功 能的 进 一步研 究 奠定 了基 础 。
猪2型链球菌MRP基因的克隆及表达的开题报告
猪2型链球菌MRP基因的克隆及表达的开题报告一、研究背景和意义猪2型链球菌是一种引起猪类疾病的重要致病菌，其病情严重影响了猪类的健康和养殖业的发展。
MRP（M protein-related protein）是猪2型链球菌表面群A蛋白家族中的一种，广泛存在于许多猪2型链球菌菌株中。
MRP蛋白具有抗原性，是猪2型链球菌的重要表面抗原之一，也是猪2型链球菌的一种重要毒力因子，参与了细菌的菌体黏附、侵入和避免免疫反应等过程。
因此，对MRP蛋白的研究对于了解猪2型链球菌的致病机制、开发疫苗、制定防治策略等具有重要意义。
二、研究内容本研究旨在克隆猪2型链球菌MRP基因，并进行表达研究，为进一步研究MRP在猪2型链球菌中的功能和应用奠定基础。
具体研究内容包括以下三个方面：1. MRP基因的克隆通过对猪2型链球菌基因组序列分析，设计合适的引物序列，PCR 扩增出MRP基因全长，并进行序列分析和验证。
2. MRP基因的重组表达将克隆得到的MRP基因亚克隆至真核表达载体上，转染至CHO细胞中，利用Western blot等方法检测MRP蛋白表达情况。
3. MRP蛋白的功能研究利用FACS等方法，研究MRP蛋白在猪2型链球菌中的功能及其与宿主细胞相互作用的机制。
三、研究方法1. MRP基因的克隆采用PCR技术，设计合适的引物，扩增出MRP基因的全长，利用DNA Gel Extraction Kit纯化PCR产物，得到MRP基因的亚克隆。
2. MRP基因的重组表达将MRP基因亚克隆至真核表达载体pCDNA3.1+上，经限制性内切酶切割、酶切位点验证和测序确认后，转染至CHO细胞中，采用Western blot等方法检测MRP蛋白表达情况。
3. MRP蛋白的功能研究采用FACS技术，利用CHO细胞表达的MRP蛋白和猪2型链球菌菌株，研究其贴附、侵入及免疫逃逸等功能。
四、预期成果1. 成功克隆出猪2型链球菌MRP基因，并扩增得到全长序列。
猪2型链球菌氨基甲酸激酶与鸟氨酸转氨甲酰酶的克隆与表达的开题报告
猪2型链球菌氨基甲酸激酶与鸟氨酸转氨甲酰酶的克隆与
表达的开题报告
猪2型链球菌（Streptococcus suis）是一种致病性较强的细菌，可引起猪类和人类的疾病。
研究发现，猪2型链球菌氨基甲酸激酶（Formylglycinamide ribonucleotide amidotransferase，FGARAT）和鸟氨酸转氨甲酰酶（Aspartate aminotransferase，AAT）在该菌的生长、代谢和致病中起重要作用。
因此，克隆和表达这两种蛋白质对于深入研究猪2型链球菌致病机制具有重要意义。
本研究旨在克隆猪2型链球菌FGARAT和AAT基因，并通过大肠杆菌表达重组蛋白进行纯化和鉴定。
具体实验步骤如下：
1. 提取猪2型链球菌总RNA，用反转录酶-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增FGARAT和AAT基因；
2. 将扩增产物与表达载体pET-28a(+)连接，构建重组质粒；
3. 将重组质粒转化至大肠杆菌Escherichia coli（E.coli）BL21(DE3)中，经过IPTG诱导表达目的蛋白；
4. 采用亲和纯化技术在Ni-NTA树脂中纯化重组蛋白；
5. 通过SDS-PAGE电泳和Western blot检测目的蛋白的分子量和纯度，同时进行ELISA鉴定蛋白功能。
预计本研究的结果将对研究猪2型链球菌致病机制和开发相关疫苗、治疗药物具有一定的理论和实践意义。
中国合作猪SLAⅠ类和Ⅱ类分子的克隆及基因结构与多态性分析
中国合作猪SLAⅠ类和Ⅱ类分子的克隆及基因结构与多态性分析专业品质权威编制人：______________审核人：______________审批人：______________编制单位：____________编制时间：____________序言下载提示：该文档是本团队精心编制而成，期望大家下载或复制使用后，能够解决实际问题。
文档全文可编辑，以便您下载后可定制修改，请依据实际需要进行调整和使用，感谢!同时，本团队为大家提供各种类型的经典资料，如办公资料、职场资料、生活资料、进修资料、教室资料、阅读资料、知识资料、党建资料、教育资料、其他资料等等，想进修、参考、使用不同格式和写法的资料，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you!And, this store provides various types of classic materials for everyone, such as office materials, workplace materials, lifestyle materials, learning materials, classroom materials, reading materials, knowledge materials, party building materials, educational materials, other materials, etc. If you want to learn about different data formats and writing methods, please pay attention!中国合作猪SLAⅠ类和Ⅱ类分子的克隆及基因结构与多态性分析中国合作猪SLAⅠ类和Ⅱ类分子的克隆及基因结构与多态性分析摘要：猪类的主要组织相容性复合体分子，猪类输血史抗原（Swine Leukocyte Antigen, SLA）对于免疫应对和器官移植具有重要意义。
版纳微型猪近交系SLA-DOA基因克隆、mRNA表达及蛋白质功能生物信息学分析
［ 摘
要］ 目的 ： 克隆版纳微型猪近交 系（ Ｂ ａ ｎ ｎ ａ ｍ ｉ ｎ ｉ － ｐ ｉ ｇ ｉ ｎ ｂ ｒ ｅ ｄ ｌ ｉ ｎ ｅ ， Ｂ Ｍ Ｉ ） 白细胞抗原 Ｄ Ｏ座位 ａ ｌ ｐ ｈ ａ 亚基 （ Ｓ Ｌ ４ ． ＤＯ Ａ） 的
编码 序列 ， 并对其 ｌ ９ 个 重要 组织 ｍ Ｒ Ｎ Ａ表达作Ｓ Ｄ Ｉ — ＤＯ Ａ的全长 ｅ Ｄ Ｎ Ａ序 列 ； 半定量 Ｒ Ｔ ．
Ｃｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ，Ｉ ｎＲＮＡ ｅ ｘ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｆ ｕ ｎｃ ｔ ｉ ｏ ｎａ ｌ ｂ ｉ ｏ ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｓ ａ ｎａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ
Ｓ Ｌ Ａ－ ＤＯ Ａ ｉ ｎ Ｂａ ｎ ｎ ａ ｍｉ ｎ ｉ － ｐ ｉ ｇ ｉ ｎ ｂ ｒ ｅ ｄ ｌ ｉ ｎ ｅ
王 配 王淑燕② 霍金龙 李罗刚 张永云③ 李卫真④ 朱宏涛④ 姚茂东④
（ 云 南农 业 大学 云 南省版 纳微 型猪 近 交系 重 点实验 室 ， 昆明 ６ ５ ０ ２ ０ １ ）
中图分类号 ￥ ８ ５ ２ ． ４ 文献标 志码 Ａ 文章编 号 １ ０ ０ ０ － ４ ８ ４ Ｘ（ ２ ０ １ ７ ） ０ ６ － ０ ８ ７ ３ － ０ ６
４个外显子和 ３个 内含子构成 ； 其ｍ Ｒ Ｎ Ａ高表 达于淋巴结和 胃， 低 表达 于心 脏 、 皮 肤和 十二 指肠 ， 在其 他 １ ４种 组织 中不表 达 ；
Ｓ Ｌ Ａ － Ｄ Ｏ Ａ蛋白存 在 １ 个 信号肽 ， １个跨膜螺旋 ， ３个保守域 ， ４个 Ｏ连接 的糖基化位点 ， １ ８个磷酸化位点 ， 位 于细 胞质 的概 率是 ９ ４ ． １ ％； 系统进化分析表 明 ， 在所选择 的 ６个物种 中 ， Ｂ ＭＩ （ 猪） 与牛 的亲缘关 系最近 。结论 ： 本 研究成 功克 隆了版纳 微型猪 近 交系 Ｓ Ｉ Ａ－ Ｄ Ｏ Ａ基 因并进行 了生物信息学功能分析和多种组织表达分析 ， 为版纳微 型猪 近交 系的异种器官移植研究奠定基础 。 ［ 关 键词］ 猪 白细胞抗原 Ｄ Ｏ座位 ａ ｌ ｐ ｈ ａ 亚基 ； 版纳微型猪近交 系； 组织表达 ； 生物信息学
实验用SPF大白猪和长白猪SLAⅡ类基因多态性研究
Ｈ
Ｅ
【 关键词 】 猪 白细 胞抗 原 ； Ｓ Ｐ Ｆ大 白 猪 ； Ｓ Ｐ Ｆ长 白猪 ； Ｓ Ｌ Ａ Ｉ Ｉ 类 等位 基 因 ； 多 态 性
Ｎ
【 中 图分 类 号 】Ｑ ９ ５ — ３ ３
【 文献 标 识 码 】Ａ
【 文 章 编 号 】１ ０ ０ ５ ． ４ ８ ４ ７ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ４ — ０ ４ ０ ４ ． １ ０
Ｙｏ ｒ ｋｓ ｈ ｉ ｒ ｅ ａ ｎｄ Ｌａ ｎｄ ｒ ａ ｃ ｅ ｐｉ ｇ ｓ
●
Ｇ
Ｃ
ｎ Ｕ ｎ
—
Ｊ Ｉ ＡＮＧ Ｘｉ ｎ — ｊ ｉ ｅ 一，ＱＵ ＡＮ Ｊ ｉ ｎ — ｑ ｉ ａ ｎ ｇ ，Ｌ Ｉ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ — ｗ ｅ ｎ
ＧＡ０
进行测序 ， 分析获得 的 Ｓ Ｌ Ａ Ｉ Ｉ 类等位基因序列多态性。结果
个Ｄ Ｒ Ｂ １ 和 ７个 Ｄ Ｑ Ａ， 全部获得 Ｉ Ｓ Ａ Ｇ Ｓ Ｌ Ａ命 名 委 员 会 的 官 方 命 名 ， 其 中 ３个 等 位 基 因 首 次 提 交 完 整 序 列 ， 命 名 为
ＤＱ Ｂ １ ０ ２ ： １ ２ （ Ｋ Ｕ ７ ５ ４ ５ ９ ０ ） 、 Ｄ Ｑ Ｂ １ ０ ２ ： ０ ３ （ Ｋ Ｕ ７ ５ ４ ５ ９ １ ） 和 Ｄ Ｒ Ｂ １ ０ ６ ： ０ ７ （ Ｋ Ｕ ７ ５ ４ ６ ０ １ ） ， ３个 ＤＱ Ａ等 位 基 因为 新 发 现
Ｋｅ ｙ Ｌａ ｂｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｂｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ，Ｈａ ｒ ｂ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ
猪SLA-DRB基因第二外显子多态性分析
猪病原体的相关免疫研究提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料 试验材料采自吉林长春某猪场共计 ２０头成年长白猪血
液。将采集的猪血置于抗凝管并混匀，低温冻存以备试验。 １．２ 基因组的提取及 ＰＣＲ扩增
利用 Ａｘｙｐｒｅｐ血基因组提取试剂盒，从猪的血液样本中 提取基因组。大约 １μＬ基因组 ＤＮＡ模板，各 ０．２μＬ猪 Ｐ１ 和猪 Ｐ２引 物［１５］（猪 Ｐ１：５′－ＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＴＧＴＣＣＡ－ ３′，猪 Ｐ２：５′－ＴＡＧＧＡＴＣＣＣＴＣＡＣＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＴＴ －３′）， １０μＬＰｒｅｍｉｘＴａｑ（ＴａＫａＲａＴａｑＴＭ Ｖｅｒｓｉｏｎ２．０ｐｌｕｓｄｙｅ）加 ｄｄＨ２Ｏ至 ２０μＬ反应 体 系。ＰＣＲ扩 增 体 系 为：９４℃ 预 变 性 ５ｍｉｎ，９４℃变性 ３０ｓ，６４．５℃退火 ４５ｓ，７２℃延伸 ４５ｓ，４０个 循环；７２℃ ７ｍｉｎ终止延伸，４℃保存。 １．３ 目的基因的克隆测序
ＳＬＡ基因多态性对于免疫反应的研究是至关重要的［１１］。 ＳＬＡⅡ 类基因能够调控外来病原和疫苗的免疫应答反应［１２］， 即控制传染病的反应及影响疫苗的特异性和有效性 。 ［１３］ 据 证实 ＳＬＡⅡ 类基因的匹配度是实体器官同种异体移植和骨髓 细胞移植成功与 否 的 重 要 条 件 ［１４］。 本 研 究 通 过 直 接 测 序 法 从 ＤＮＡ水平对 ＳＬＡⅡ －ＤＲＢ１座位第二外显子的多态性进 行了分析，且从多方面解析猪的 ＳＬＡⅡ 类分子基因特征，为抗
２ 结果与分析
２．１ 血液基因组 ＤＮＡ 由图 １可见，提取得到的电泳图条带清晰，无明显拖带，
可用作后续扩增模板。
江苏农业科学 ２０１８年第 ４６卷第 １２期
— ２８—
江苏农业科学 ２０１８年第 ４６卷第 １２期
14397555_托佩克猪SLA-1-632-TPK基因的矫正及重组质粒SLA-l-TPK
中国畜牧兽医!!"#$!%%"&#$#&%'!#&'#!"#$%&$#'%()*+,%$-./01232.#$%./42-#5#$2"#$$%&'%()*%%+',-.$'%(/%!/0*('0&%/'&('&%&托佩克猪1$0T#T&E!T9;#基因的矫正及重组质粒V N?T#T;0A I5>#(T;的构建翟晓鑫 高!花 韩!勇 高凤山""大连大学生命科学与技术学院!基因和蛋白质工程实验室!大连%%((00#摘!要 猪白细胞抗原"V H$-Q D Q F.#,E U Q C-U$R Q-!9>6#在猪免疫系统中起递呈抗原作用!对其展开研究可为猪相关传染病的预防提供依据&研究发现!托佩克猪:9&!%!(*0!=E P基因编码序列发生碱基缺失"距离:9&!%!(*0!=E P基因<h端(*0X Y处丢失%个碱基,@-#!导致移码突变&为矫正:9&!%!(*0!=E P基因!设计0对矫正引物!以原重组质粒9>6!%!(*0!:5]%Y27%1!:为模板!利用剪切重叠延伸5@8"V Y D$,$-R#W Q N D C Y Q G U Q-U$#-5@8!94A!5@8#技术分别扩增9>6!%!(*0!:5]<h和*h端!之后进行拼接!最后扩增全序列从而矫正目的基因!并进一步连接Y27%=!:9$B Y D Q载体!通过单菌落5@8筛选阳性克隆并测序!并通过L A K A:?MW Q N V$#-='&软件对所测序列进行分析&结果显示!94A!5@8成功扩增得到<h和*h端片段!大小约为(<&和<=&X Y!与理论设计值大小"()1和<1<X Y#接近!经过拼接以后!得到全长约%0&&X Y!与理论设计值%00*X Y接近&菌落5@8结果显示!矫正基因成功克隆入Y27%=!:9$B Y D Q载体&序列分析结果显示!托佩克猪:9&!%!(*0!=E P基因距离<h端(*0X Y处丢失的碱基,@-得到矫正并正确编码&本研究成功矫正了:9&!%!(*0!=E P基因!并构建其重组质粒9>6!%!:5]% Y27%=!:!为下一步研究9>6!%!:5]蛋白表达和相关功能奠定基础&关键词 托佩克猪(:9&!%基因(基因矫正(剪切重叠延伸5@8"94A!5@8#中图分类号 ;/1文献标识码 6文章编号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b F Q-,Q"CV$-R D QX C V Q,@-H C V D#V U$-(*0X Y3N#BU I Q<h Q-"#3U I Q :9&!%!(*0!=E P R Q-Q#!H I$,ID Q C"U#3N C B Q V I$3UB F U C U$#-'T-#N"Q N U#,#N N Q,U U I Q:9&!%!(*0!=E P R Q-Q!U H#Y C$N V#3R Q-Q!,#N N Q,U$#-0V Y N$B Q N VH Q N Q"Q V$R-Q"U#,#N N Q,U U I Q R Q-QX E U I Q V Y D$!,$-R#W Q N D C Y Q G U Q-V$#-5@8"94A!5@8#$-U Q B Y D C U Q#3N Q,#B X$-C-U Y D C V B$"#39>6!%!(*0!:5]% Y27%1!:'[$N V U D E!U I Q<h C-"*h Q-"V#3:9&!%!(*0!=E P R Q-QH Q N Q C B Y D$3$Q"!N Q V Y Q,U$W Q D E!U I Q-X#U I#3U I Q B H Q N Q V Y D$,Q"C-"C B Y D$3$Q"U#3#N BC-$-U C,U:9&!%!(*0!=E P R Q-Q'63U Q N"Q U Q,U Q"X E C R C N#V Q Q D Q,U N#Y I#N Q V$V!U I Q$-U Q N Q V U#3U I Q Y N#"F,UH C V3F N U I Q N,D#-Q"$-U#Y27%=!:9$B Y D Q W Q,U#N':I Q Y#V$U$W Q,D#-Q VH Q N Q V,N Q Q-Q"X E,#D#-E5@8C-"U I Q-V Q b F Q-,Q"':I Q N Q V F D U V I#H Q"收稿日期 0&%(!%0!&(基金项目 国家自然科学基金项目$猪源病毒@:>多肽表位与9>6!#结晶研究"*%%/0*&)#(国家自然科学基金项目$@8T958%@C V=技术构建9:0细胞系筛选猪源病毒9>6!#限制性@:>表位的研究"*%(/0<0<#(辽宁省教育厅重点实验室项目">S0&%<&&*#作者简介 翟晓鑫"%==*!#!男!山西晋中人!硕士!研究方向$动物分子免疫学!A!B C$D$G$C#G$-Z I C$!b b',#B"通信作者 高凤山"%=/%!#!男!河北怀安人!博士!教授!研究方向$基因和蛋白质工程!A!B C$D$R3V I&(0(!%0(',#BCopyright©博看网. All Rights Reserved.中!国!畜!牧!兽!医))卷!U I C U U I Q<h C-"*h Q-"V#3U I Q:9&!%!(*0!=E P R Q-QH Q N Q C D D C B Y D$3$Q"V F,,Q V V3F D D E X E94A!5@8!H$U I U I Q Y N#"F,U V#3C X#F U(<&C-"<=&X Y!H I$,I H Q N Q,#-V$V U Q-UH$U IU I Q U I Q#N Q U$,C D W C D F Q#3 ()1C-"<1<X Y!N Q V Y Q,U$W Q D E'63U Q N V Y D$,Q"!U I Q$-U C,U V Q b F Q-,Q#3:9&!%!(*0!=E P R Q-QH C V#X!U C$-Q"H$U I U I Q Y N#"F,U#3C X#F U%0&&X Y!H I$,IH C V,D#V Q U#U I Q U I Q#N Q U$,C D W C D F Q#3%00*X Y':I Q,#D#-E5@8N Q V F D U V I#H Q"U I C U U I Q,#N N Q,U Q"R Q-QH C VV F,,Q V V3F D D E$-V Q N U Q"$-U#Y27%=!:9$B Y D Q W Q,U#N'63U Q N U I Q V Q b F Q-,QH C V C-C D E Z Q"X E L A K A:?MW Q N V$#-='&!$UH C V V I#H-U I C UU I Q-F,D Q#U$"Q,@-$-(*0X Y-F B X Q N Q"3N#BU I Q<h Q-"#3U I Q R Q-QH C V C""Q"C-"U I Q:9&!%!(*0!=E P R Q-QH C V,#"Q",#N N Q,U D E'T-U I$VV U F"E!U I Q9>6!%!(*0!:5]H C V,#N N Q,U Q"V F,,Q V V3F D D E!C-"U I Q N Q,#B X$-C-U Y D C V B$"9>6!%!:5]%Y27%=!:H C V,#-V U N F,U Q"!H I$,IH#F D"D C E C3#F-"C!U$#-U#3F N U I Q N V U F"E U I Q Y N#U Q$-Q G Y N Q V V$#-C-"C V V#,$C U Q"3F-,U$#-#39>6!%!:5]'A*B C1-7+$:#5$R V Y$R(:9&!%R Q-Q(R Q-Q,#N N Q,U$#-(94A!5@8!!猪的主要组织相容性复合体也称为猪白细胞抗原"V H$-Q D Q F.#,E U QC-U$R Q-!9>6#!主要分为*个类群!即9>6!#'9>6!$和9>6!0*%!0+!其中#类分子存在于所有有核细胞的表面!负责将抗原降解肽递呈到细胞表面!进而经@71j:细胞识别启动免疫反应&9>6!#类包含*类基因!分别是T C'T X' T,!一共包含%*个基因座!其中!9>6!%'9>6!0和9>6!*是*个功能基因**+&猪作为人类生活中重要的经济牲畜之一!对其开展2J@分子的研究有利于预防一些主要的传染性疾病!并对提高猪的生产性能具有积极的作用*)+&:9&!%基因具有很强的多态性!目前已经有%)&多种9>6!%等位基因被报道!多于其他两个功能基因!因而推测在生物体内9>6!%的利用率可能高于其他两个功能基因!其研究价值更高*<+&研究表明!模拟多肽表位与9>6!#重链分子在体内的结合方式!在体外也可以实现限制性表位与2J@!#类分子的结合*(+!相关研究正在展开!如S I C-R等*/+报道了猪9>6!#类分子9>6!%"&)&%与多肽结合的机理特点!即其%<(位的精氨酸使抗原结合槽形成一个较小的带正电口袋!从而决定了其结合多肽的类型&目前!国内外研究9>6!%等位基因蛋白表达'多肽结合及蛋白结晶的报道较少&托佩克猪是世界第二大种猪公司荷兰国际种猪公司在0&世纪(&年代培育的品系!该品系猪生长快'抗病力强'遗传性能稳定!且已在国内大量饲养*1+&为丰富:9&!%基因功能的研究!本课题组已经克隆了多个国内外品系猪的9>6!%等位基因!包括托佩克猪&由于托佩克猪:9&!%!(*0!=E P基因序列靠近<h端(*0X Y处丢失%个碱基,@-!导致移码突变!影响今后对其基因表达功能的研究!故需对托佩克猪:9&!%!(*0!=E P基因进行矫正&研究报道!剪切重叠延伸5@8"94A!5@8#技术可以定点突变目的基因*=+!因此也可以用来进行基因矫正&本试验利用94A!5@8技术对托佩克猪:9&!%!(*0! =E P基因进行矫正!获得正确编码基因!并成功构建其全基因克隆载体9>6!%!:5]%Y27%=!:!为下一步进行该基因结构和相关功能的研究奠定基础&#!材料与方法#D#!材料原重组质粒9>6!%!(*0!:5]%Y27%1!:由大连大学分子免疫实验室构建并保存(克隆载体Y27%=!:9$B Y D Q购自宝生物工程"大连#有限公司(大肠杆菌:#Y%&菌株由大连大学分子免疫学实验室保存&A G=%S酶':)7K6连接酶'7>0&&&7K6 2C N.Q N均购自宝生物工程"大连#有限公司(9C-! 5N Q Y柱式7K6胶回收试剂盒'9C-5N Q Y柱式质粒7K6小量抽提试剂盒'胰化蛋白胨'甘氨酸酵母提取物'K C@D'琼脂粉等均购自上海生工生物工程技术服务有限公司&#D!!引物设计以:9&!%!(*0!=E P基因为模板!针对缺失碱基位点!利用4D$R#('&设计0对引物!分别扩增:9&!%!(*0!=E P基因<h和*h端!该0对引物通过相互交叉部分将缺失碱基修正!引物序列见表%&()(%Copyright©博看网. All Rights Reserved.!(期翟晓鑫等$托佩克猪:9&!%!(*0!=E P基因的矫正及重组质粒9>6!%!:5]%Y27%=!:的构建表#!托佩克猪V N?T 重链分子1$0T#T&E!T9;#基因矫正引物设计;,@8*#!>*+623.1--*.4632I-6F*-,@1:41$0T#T&E!T9;#2*3*1=V N?T /*,P B./,63F18*.:8*+1=;1062+I62名称K C B Q引物序列5N$B Q N V Q b F Q-,Q V%"<h#*h#片段大小5N#"F,U D Q-R U I%X Y退火温度6--Q C D$-R U Q B Y Q N C U F N Q%g<h端<h Q-"Y2!%[$6:L L L L@@:L L6L@@@:@::@Y2!%80()1(1*h端*h Q-"Y2!%[*Y2!%8$::6L L6:L@:@6:6L L66@6@6<1<(1<h端的下游引物Y2!%80和*h端的上游引物Y2!%[*有碱基互补序列即下划线标出部分(方框内的碱基为矫正部位:I QF-"Q N D$-Q"Y C N U$VU I Q,#B Y D Q B Q-U C N E V Q b F Q-,QX Q U H Q Q-U I Q<h Q-""#H-V U N Q C B Y N$B Q N Y2!%80C-"U I Q*h Q-"F Y V U N Q C B Y N$B Q N Y2!%[*!N Q V Y Q,U$W Q D E(6-"U I Q Y C N U#3U I QX#G$V U I QX C V Q U#X Q,#N N Q,U Q"#D E!1$0<#T&E!T9;#基因']和E]端0H)扩增以原重组质粒9>6!%!(*0!:5]%Y27%1!:为模板!分别以Y2!%[%Y2!%80'Y2!%[*%Y2!%8为引物对!扩增基因链9>6!%!(*0!:5]的<h端和*h 端&5@8反应体系<&(>$9>6!%!(*0!:5]% Y27%1!:"%&e#0(>!A G=%S a F33Q N"%&B B#D%># <(>!"K:5"%&(B#D%>#%(>!上'下游引物"0<(B#D%>#各%(>!A G=%S酶"<P%(>#&'<(>! J04*='<(>&5@8反应程序$=)g预变性*B$-( =)g变性*&V!(1g退火)<V!/0g延伸)<V!*&个循环(/0g延伸%&B$-&5@8产物进行%'&\琼脂糖凝胶电泳!凝胶成像系统拍照保存&用9C-! 5N Q Y柱式7K6胶回收试剂盒分别对<h和*h端产物进行回收并检测&#D%!1$0T#T&E!T9;#基因']和E]端序列拼接由于扩增<h端的下游引物Y2!%80和扩增*h端的上游引物Y2!%[*有碱基互补序列!通过5@8即可将矫正后的基因片段连接成完整链!故将<h和*h端回收产物混合!并以其为模板!不加任何引物!通过5@8将<h和*h端片段进行拼接&5@8反应体系<&(>$A G =%S a F33Q N"%&B B#D%>#<(>!"K:5"%&(B#D%># %(>!<h和*h端回收产物各%(>!A G=%S酶"<P%(># &'<(>!J04)%'<(>&5@8反应程序$=)g预变性*B$-(=)g变性*&V!(<g退火)<V!/0g延伸)<V! %1个循环(/0g延伸%&B$-&5@8产物中含有完整的:9&!%!(*0!=E P基因链&以5@8拼接产物为模板!以Y2!%[%Y2!%8为引物对!扩增基因链9>6!%!:5]!获得全基因& 5@8反应体系<&(>$拼接产物0(>!A G=%S a F33! Q N"%&B B#D%>#<(>!"K:5"%&(B#D%>#%(>!上'下游引物"0<(B#D%>#各%(>!A G=%S酶"<P%(>#&'<(>!J04*='<(>&5@8扩增条件$ =)g预变性*B$-(=)g变性*&V!(1g退火)<V! /0g延伸)<V!*&个循环(/0g延伸%&B$-&5@8产物进行%'&\琼脂糖凝胶电泳!凝胶成像系统拍照保存&用9C-5N Q Y柱式7K6胶回收试剂盒对目的片段进行回收并检测!将扩增的序列命名为9>6! %!:5]&#D'!基因的亚克隆将9>6!%!:5]回收产物连接至Y27%=!: 9$B Y D Q载体!并转化大肠杆菌:#Y%&感受态细胞!涂布含氨苄青霉素的平板!*/g过夜培养!挑选阳性单菌落至新鲜>a培养基!过夜培养*%&+&采用单菌落5@8来检测托佩克猪9>6!%!:5]是否插入到Y27%=!:9$B Y D Q载体!该检测方法简单有效&以上述单菌落为模板!以Y2!%[%Y2!%8为引物对进行5@8&5@8反应程序$=)g预变性*B$-( =)g变性*&V!(1g退火)<V!/0g延伸)<V!*&个循环(/0g延伸%&B$-&5@8产物进行%'&\琼脂糖凝胶电泳!凝胶成像系统拍照保存&阳性菌液送上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序!序列同源性用L A K A:?M W Q N V$#-='&进行分析*%%+&!!结!果!D#!1$0T#T&E!T9;#基因']和E]端0H)扩增经%'&\琼脂糖凝胶电泳检测到:9&!%!(*0! =E P基因<h端为一条约(<&X Y的条带!*h端为一条约<=&X Y的条带!与预期片段大小"()1'<1<X Y#相符"图%#&/)(%Copyright©博看网. All Rights Reserved.中!国!畜!牧!兽!医))卷!2!7>0&&&7K 62C N .Q N (%!:9&!%!(*0!=E P 基因*h端5@8扩增产物(0!:9&!%!(*0!=E P 基因<h 端5@8扩增产物2!7>0&&&7K 62C N .Q N (%!:I Q*h Q -"5@8C B YD $3$,C !U $#-Y N #"F ,U #3:9&B %!(*0!=E P R Q -Q (0!:I Q <h Q -"5@8C B YD $3$,C U $#-Y N #"F ,U #3:9&!%!(*0!=E P R Q -Q 图#!1$0T #T &E !T 9;#基因E ]和']端扩增结果962D #!;/*E ]*37,37']*370H ),F I86=6.,46131=1$0T #T &E !T 9;#2*3*!D !!1$0T #T &E !T 9;#基因']和E ]端拼接经拼接和5@8扩增后!%'&\琼脂糖凝胶电泳检测到一条约%0&&X Y 的条带!与理论设计值%00*X Y 大小相符"图0#&图!!1$0T #T &E !T 9;#基因的0H )拼接结果962D !!;/*+I 86.6321$0T #T &E !T 9;#2*3*7*4*.4*7@B 0H )!D E !单菌落0H )检测托佩克猪V N ?T #T ;0A 插入I 5>#(T ;V 6F I8*载体经单菌落5@8扩增后!%'&\琼脂糖电泳检测到一条约%0&&X Y 的条带!与理论设计值%00*X Y 相符"图*#&2!7>0&&&7K 62C N .Q N (%")!单菌落5@8筛选阳性克隆2!7>0&&&7K 62C N .Q N (%!)!:I Q Y #V $U $W Q,D #-Q VX E ,#D #-E 5@8图E !单菌落0H )筛选V N ?T #T ;0A 阳性克隆962D E !V .-**36324/*I 1+646P *.813*+=1-V N ?T #T ;0A @B .1813B 0H )!D %!序列分析托佩克猪V N ?T #T ;0A 的矫正情况阳性克隆经测序后!发现在原序列(*0X Y 处插入缺失的碱基,@-!并使后面的编码序列可以读通!说明原序列基因得到矫正!将重组质粒命名为9>6!%!:5]%Y27%=!:!序列分析见图)&E !讨!论课题组前期研究中成功构建了:9&!%!(*0!=E P 基因的相关质粒!但是在传代及菌种保存过程中发生了突变!即靠近<h 端(*0X Y 处缺失了%个碱基,@-!导致相应编码的氨基酸序列发生了错误!使后续对蛋白的研究无法进行&为了能使后续的表达研究进行下去!需要对突变的:9&!%!(*0!=E P 基因进行矫正&1)(%Copyright ©博看网. All Rights Reserved.!(期翟晓鑫等 托佩克猪:9&!%!(*0!=E P 基因的矫正及重组质粒9>6!%!:5] Y27%=!:的构建图%!序列分析托佩克猪1$0T #T 9;#基因矫正情况962D %!V *O :*3.*+,3,8B +6+1=4/*.1--*.46131=1$0T #T 9;#2*3*=-1F;1062+I 62=)(%Copyright ©博看网. All Rights Reserved.中!国!畜!牧!兽!医))卷! !!矫正基因有多种方法!比较成熟的方法是定点突变试剂盒!但是价格相对昂贵&研究发现!通过94A!5@8技术能够将两个片段重构为一条编码链!从而实现了复合体的构建*%0+&该技术主要通过0对引物之间的重叠部分实现基因的连接&推测通过该方法也可以实现目的基因的定点突变!利用具有互补序列末端的引物将5@8产物形成重叠链!通过5@8将位点进行两次突变延伸重叠链!从而将不同扩增片段拼接起来!最终实现基因定点突变&刘昌华等*%*+利用94A!5@8技术将,0'基因的羧基端(=位苯丙氨酸"5I Q#突变为半胱氨酸"@E V#!成功获得了该基因(=位苯丙氨酸突变体!引入了生物素识别位点!构建了,0B四聚体前体链&最近!许多研究者利用94A!5@8技术进行了基因定点突变的研究*%)!%=+&因此!可以尝试利用5@8技术进行缺失基因的矫正&本试验利用这项技术!针对缺失碱基位点设计了0对引物!分别扩增了:9&!%!(*0!=E P 基因<h和*h端的片段!因为扩增<h端的下游引物与扩增*h端的上游引物存在重叠部分!因此扩增出来的两个片段可以交叉互补!在不加引物的情况下可以将两个片段拼接!然后用扩增<h端的上游引物与扩增*h端的下游引物可以把整个片段扩增出来!且可以将突变的位点进行校正&结果发现!经拼接后进行5@8扩增!得到的7K6片段大小和理论值%00*X Y相符!初步证实了94A!5@8技术可以用于基因矫正&通过序列分析!发现托佩克猪:9&!%! (*0!=E P基因靠近<h端(*0X Y处缺失的碱基,@-得到矫正!从而使9>6!%!:5]能够编码*(%个氨基酸!与报道中9>6!%编码的氨基酸数目一致*0&+!说明利用94A!5@8技术可以成功校正缺失的基因位点!而且方法简单'可行!可以进行推广&国内外报道了单菌落5@8技术可以用于检测目的基因是否成功插入相应载体*0%!0<+!此项技术可以省去双酶切鉴定技术中抽提质粒等步骤!简单快捷同时又不缺乏准确性&本试验利用单菌落5@8技术验证了托佩克猪:9&!%!=E P基因成功插入了Y27%=!:9$B Y D Q载体!并成功导入了大肠杆菌:#Y%&感受态细胞&%!结!论本研究成功矫正了托佩克猪:9&!%!(*0!=E P 基因!并构建了重组质粒9>6!%!:5]%Y27%=!:!为下一步进行基因表达研究奠定基础&参考文献*%+!6-"#6!]C H C U CJ!9I$R Q-C N$6!Q U C D'L Q-Q U$,Y#D E!B#N Y I$V B#3U I Q V H$-QB C+#NI$V U#,#B Y C U$X$D$U E,#B Y D Q G"9>6#,D C V V#R Q-Q V!9>6!%!!0C-"!**^+'T''*$672B$23#5+!0&&*!<<"=#$<1*!<=*'*0+!`C$B C-2!8Q-C N"@!>C3C R Q5!Q U C D'A W$"Q-,Q3#N CI$V U#,#B Y C U$X$D$U E V E V U Q B$-V H$-Q"9>!6#*^+'=.%$+K(%$3%3#6$!%=/&!%&"0#$%<<!%()'**+!冯!磊!赵!德!高凤山'猪主要组织相容性复合体研究进展*^+'生命科学!0&%0!0)"(#$=0!=('*)+!5C N.@'7$V V Q,U$#-#3Y#N,$-Q2J@Y#D E B#N Y I$V B V U#$B!Y N#W Q Y$R0V N Q V$V U C-,Q#-Y C U I#R Q-$,,I C D D Q-R Q*6+'T-U Q N-C!U$#-C D5D C-U C-"6-$B C D L Q-#B Q@#-3Q N Q-,Q6V$C*@+'0&%*' *<+!L C#@!^$C-R;!L F#7!Q UC D'@I C N C,U Q N$Z C U$#-#3 V H$-Q D Q F.#,E U QC-U$R Q-"9>6#Y#D E B#N Y I$V BX E V Q!b F Q-,Q!X C V Q"C-"5@8!995B Q U I#"V$-@I$-Q V Qa C B CB$-$C U F N Q Y$R V*^+'J2?2(6K'2$3%(0!6'K%.%3#?2T''*$6(67/!0&%)!)<"%#$1/!=('*(+!于!辉!李!彬!李!华!等'9>6与免疫抗病的研究进展*^+'中国畜牧杂志!0&&=!)<"<#$(&!()'*/+!S I C-R K!;$^![Q-R9!Q UC D'@N E V U C D V U N F,U F N Q#3 V H$-QB C+#N I$V U#,#B Y C U$X$D$U E,#B Y D Q G,D C V V#9>6!%"&)&%C-"$"Q-U$3$,C U$#-#30&&=Y C-"Q B$,V H$-Q!#N$!R$-$-3D F Q-Z C6J%K%W$N F V,E U#U#G$,:D E B Y I#,E U QQ Y$U#Y Q Y Q Y U$"Q V*^+'H6*.$%(681#.6(67/!0&%%!1<"00#$%%/&=!%%/0)'*1+!余文富!王龙钦!付娟林!等'托佩克种猪"约克夏大白猪#的引进与利用*^+'中国猪业!0&%(!%%")#$)*!)<'*=+!郭紫芬!轩贵平!陈方方!等'用改进的重叠延伸5@8技术构建三位点突变载体*^+'生物技术通讯!0&%)!0<"0#$0)1!0<%'*%&+!苟东洲!戴!琳!杨!杰!等'中国0个地方品系猪9>6!*原核表达载体构建及表达*^+'中国畜牧兽医!0&%<!)0"0#$0=1!*&0'*%%+!姜!平!高凤山!额尔敦木图'荷包猪:9&B J F%基因的克隆及序列分析*^+'中国畜牧兽医!0&%<!)0"0#$0()!0(='*%0+!陈兆华!周巧妮!刘昌华!等'托佩克猪9>6!0与,0B 复合体的构建*^+'动物医学进展!0&%%!*0"%%#$%&!%*'*%*+!刘昌华!刘!筏!张!晶!等'猪,0B四聚体前体链重组表达载体的构建和表达*^+'中国畜牧兽医!0&%*!)&")#$//!1&'*%)+!@C N Q E2[!5Q U Q N V#-@>!9B C D Q9:'5@8!B Q"$C U Q"V$U Q!"$N Q,U Q"B F U C R Q-Q V$V*^+'!6(-:K.#$7)%.,6.E.63656(+!0&%*!0&%*"1#$/*1!/)0'&<(%Copyright©博看网. All Rights Reserved.!(期翟晓鑫等$托佩克猪:9&!%!(*0!=E P基因的矫正及重组质粒9>6!%!:5]%Y27%=!:的构建*%<+!]C N.I C-Q66!?C.I,I C D$a
102猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2019年36卷第4期遗传改良GENETIC IMPROVEMENT 北京顺鑫农业小店种猪分公司协办猪SLA 基因多态性研究进展韦思婷，程一飞，舒星富，韦 体，梁丽彬，刘丽霞*（西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730030）摘 要：猪的MHC 也叫猪的白细胞抗原（SLA ），不仅在抗原递呈、机体器官移植、免疫应答与调控方面有重要的作用，而且还与其他的生物学功能如抗病力、生长、繁殖等有关。
文章主要论述猪SLA 基因多态性研究进展，包括猪SLA 基因结构和生物学功能、SLA-Ⅰ基因多态性研究、SLA-Ⅱ基因多态性研究，希望为今后的研究提供理论依据和参考。
关键词：SLA 基因；生物学功能；多态性基金项目：西北民族大学本科生科研创新项目（项目编号Y18014）作者简介：韦思婷（1997-），女，壮族，广西来宾人，在读本科，研究方向：生物化学与分子生物学，E-mail: 1395352137@ 联系方式：180*********通信作者：刘丽霞（1983-），女，甘肃陇南人，高级实验师，研究方向：动物遗传育种，E-mail:skllx@动物识别自己、排除非己以维持机体正常生理活动和抗疾病的能力是免疫系统的核心职能，这种能力在很大程度上由主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex ，MHC ）基因所决定[1]。
MHC 基因系统是个高度多态的系统，它的高度多态性使它成为很好的遗传标记，且有可能作为分子标记进行辅助选择。
1 猪SLA 基因结构和生物学功能猪的MHC 也叫猪的白细胞抗原（SLA ）。
Viza 等[2]在1970年首次发现猪的MHC 不仅在抗原递呈、机体器官移植、免疫应答和调控方面有着很重要的作用，而且还与其他的生物学功能如抗病力、生长、繁殖等有关。
SLA 基因主要位于猪7号染色体着丝粒的两端，其基本结构与功能上存在差别，一般可分为三大类：Ⅰ类基因、Ⅱ类基因和Ⅲ类基因[3]。
猪抗病基因SLA的研究进展
钱艺璠，孙海潮，关轩承，等 . 猪抗病基因 SLA 的研究进展［J］. 南方农业，2021，15（24）：181-184.
猪抗病基因SLA的研究进展
钱艺璠 1，孙海潮 1，关轩承 1，杨明华 1，唐佳睿 2，赵彦光 3，赵素梅 1*
（1. 云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201； 2. 景洪市动物卫生监督所，云南景洪 666100；
3. 云南省畜牧兽医科学院养猪与动物营养研究所，云南昆明 650244）
摘 要 猪白细胞抗体SLA是猪主要相容性复合体MHC基因的编码产物，分为SLA-I、SLA-Ⅱ和SLA-Ⅲ 3大 类，在猪的机体免疫应答及异种器官、组织的移植研究中起着非常重要的作用。对近年来国内外关于SLA分 类、功能、多态性及抗病性研究进展进行阐述，以期对以后猪的抗病育种及异种器官和组织的移植等研究提供 理论参考。 关键词 猪白细胞抗原；分类；功能；多态性；抗病性 中图分类号：S828 文献标志码：A DOI：10.19415/ki.1673-890x.2021.24.085
早 在 1970 年， 科 学 家 VIZA D 等 就 首 先 提 出 了 猪 的 MHC 这 一 概 念［3］， 因 于 MHC 基 因 产 物 分 布 于 白 细胞的表面，故又称为猪白细胞抗原（Swine Leukocyte Antigen，SLA）。SLA 是一个复杂的遗传系统，它为研 究基因组的表达调控和遗传多样性提供了非常多的模型 系统［4］。SLA 是一组不连续的、连锁不平衡的基因，其 遗传方式为单倍型遗传，并且具有高度的多态性与特异 性。经过科学家们大量研究发现，SLA 基因的结构和功 能紧密地联系着动物对疾病的抵抗能力及动物的生产性 能，并且由它编码细胞表面的糖蛋白在抗原呈递、器官 的移植、免疫应答及调控方面起着重要的作用［5］。
大约克猪 SLA-1原核表达载体的构建及表达
大约克猪 SLA-1原核表达载体的构建及表达张秀娟;杨杰;孙永强;高凤山【摘要】In order to construct the prokaryotic expressing vector of SLA-1 derived form York-shire pig and express the interest of protein,a pair of primers was designed to amplify the extra-cellular domain of SLA-1 gene from Yorkshire pig (named SLA-1-DYKe)by PCR.Then the PCR product was cloned into pMD® 1 9-T Simple Vector and transformed into Escherichia coli TOP10. After cleaved by Nde Ⅰ and Xho Ⅰ,the positive clones were selected to be sequenced.Analy-zing by biological soft,the fragment from positive clone with correct sequence was inserted into pET-28a (+)and transformed into E .coli BL21 (DE3).After induction and expression,the in-terest of protein was detected by SDS-PAGE.The results showed that the extracellular domain of SLA-1-DYKe was successfully amplified with the fragment length of 837 bp.The interest of SLA-1 gene was successfully cloned into pMD® 1 9-T Simple Vector and the positive recombinant plasmids with correct sequences were obtained.The SLA-1-DYKe from positive recombinant plasmids was further inserted into pET-28a(+).After transformed into E .coli BL21(DE3)and induction,the SLA-1-DYKe was successfully expressed.The molecular weight of the protein was about 34 ku.It was concluded that the prokaryotic expressing vector of SLA-1 was constructed successfully from Yorkshire pigs and then the expressed protein was obtained,which would lay a base for studying on the structure and function of SLA-1 from Yorkshire pig in the future.%为构建大约克猪SLA-1胞外区的原核表达载体及表达目的蛋白,试验设计1对引物,经 PCR 扩增获得大约克猪 SLA-1胞外区基因(命名为 SLA-1-DYKe),将此片段克隆至pMD®19-T Simple Vector,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,经Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切筛选阳性克隆菌并测序,将目的基因插入到原核表达载体 pET-28a (+)中,转化至宿主菌 BL21(DE3)进行诱导表达,用 SDS-PAGE 检测目的蛋白的表达情况,大量诱导提取包涵体并检测。
猪—人异种移植相关实验研究——中国猪种SLA基因序列分析及人NK细胞通过胞吐途径杀伤猪内皮细胞的机制探讨
猪—人异种移植相关实验研究——中国猪种SLA基因序列分析及人NK细胞通过胞吐途径杀伤猪内皮细胞的机制探讨同种异体移植已在临床广泛开展，并成为根治许多终末期器官功能衰竭疾病的唯一手段。
目前面临的问题是：人器官移植物来源十分有限，且获得供体的时机极为随机，以至临床需求缺口日益扩大，并成为制约临床开展移植术的主要因素。
为解决供体器官严重短缺的难题，应用异种动物(主要是猪)为供体的异种移植成为近年移植免疫学领域的研究热点之一。
由于灵长类动物(包括人)体内存在针对猪组织细胞表面α-半乳糖苷的天然抗体，故猪→人异种移植中，人天然抗体可与猪组织细胞表面抗原结合，通过激活补体而导致供者移植物细胞溶解，并引发超急性排斥反应。
国内外均已报道：通过抑制受者补体系统激活等手段，可成功克服超急性异种移植排斥反应。
因此，异种移植后的急性血管性排斥反应和急性细胞性排斥反应成为人们关注的重点。
目前有关异种移植的实验研究主要集中于如下领域：①猪的主要组织相容性复合体(SLA)；②NK细胞ADCC效应对异种靶细胞的杀伤作用，以及人CD4~+和CD8~+T细胞介导异种细胞移植排斥反应的机制。
本课题分析中国猪种SLA基因结构特征，以及人NK细胞杀伤异种靶细胞过程中的胞吐作用及其机制，其立题依据是： 1．猪MHC(SLA)分子是引发急性和慢性异种移植排斥反应的关键抗原，分析比较SLA与人HLA复合体遗传结构的异同，有助于探讨异种移植排斥反应的发生机制，并为选择猪种和制定临床干预方案提供重要线索。
2．人NK细胞是参与异种移植排斥反应的重要效应细胞，其被靶细胞(即猪血管内皮细胞)触发，通过杀伤性胞吐(脱颗粒)过程而释放颗粒酶、穿孔素等，可对猪血管内皮细胞发挥杀伤效应，此乃猪→人异种器官移植急性排斥反应中最早发生和最关键的病理过程。
一、异种移植备选中国猪种的经典SLA基因序列分析近二十余年，国外已分析了多个实验猪种的SLA复合体及其抗原系统，为探讨人类免疫系统识别SLA抗原的机制奠定了理论基础。
猪OASL2基因克隆与序列分析
猪OASL2基因克隆与序列分析
胡妍璇;杨佳纯;袁帅;刘洋;余金丽;程思贝;沙惠阳;赵孟孟
【期刊名称】《现代牧业》
【年(卷),期】2022(6)3
【摘要】克隆猪OASL2基因并对其进行序列分析。
采用PCR技术扩增猪OASL2基因,连接至pCE2 TA/Blunt-Zero载体并将其转化至DH5α化学感受态细胞,测序获得猪OASL2基因CDS全长,对其进行生物学功能预测以及构建系统进化树。
结果显示,猪OASL2基因全长为633 bp,编码211个氨基酸,蛋白分子质量为23.94 ku,理论等电点为8.16。
与猪OASL1相似性为98.1%,氨基酸相似性为97.6%,与其它物种OASL相似性为52.3%~72.0%,氨基酸相似性为9.8%~58.1%。
系统进化树表明猪OASL2与猪OASL1位于同一分支,与牛OASL位于同一亚分支,亲缘关系较近。
氨基酸序列比对结果表明猪OASL2包含P-loop、D-box以及保守位点LLRL。
【总页数】7页(P14-20)
【作者】胡妍璇;杨佳纯;袁帅;刘洋;余金丽;程思贝;沙惠阳;赵孟孟
【作者单位】佛山科学技术学院生命科学与工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65
【相关文献】
1.绵羊Oct4基因启动子序列的克隆及其与猪和牛序列的比较分析
2.广西巴马小型猪肥胖基因(leptin)成熟肽序列的cDNA克隆、序列分析
3.猪Lmbr1基因部分cDNA序列的克隆及序列分析
4.猪圆环病毒2型甘肃兰州株全基因组序列的克隆及序列分析
5.抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体重链基因的克隆及序列分析
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
载体 ， 转化 Ｂ Ｌ ２ １ （ Ｒ ｏ ｓ ｓ ｅ ｔ ａ ） 进行 诱 导 表 达 ， Ｓ Ｄ Ｓ － Ｐ ＡＧ Ｅ检 测 目的 蛋 白。Ｐ Ｃ Ｒ 结果 显 示 ， Ｓ Ｌ Ａ－ ２ 一 Ｔ Ｐ Ｋｅ大 小约 为
８ ５ ０ ｂ ｐ ， 并成功 克隆入 ｐ ＭＤ ￣ １ ９ 一 Ｔ Ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ Ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ， 双酶切 后 大小为 ８ ３ ４ ｂ ｐ 。酶切 后 的 Ｓ Ｌ Ａ － ２ 一 Ｔ Ｐ Ｋｅ 成功与 ｐ Ｅ Ｔ －
作 者简 介 ： 刘腾 飞 （ １ ９ ９ ２ 一） ， 男， 山 东菏 泽人 ， 学士， 主要 从 事 动物 分 子 免 疫 学研 究 。 ＊通 讯 作 者
Ｓ ａ ｆ ｅ ｔ ｙ Ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ａ ｍｙ ｌ ｏ ｌ ｉ ｑ ｕ ｅ ｆ ａ ｃ ｉ ｅ ｎ ｓ
Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ， ２ ２ ２ ０ ４ ４ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；２ ．Ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｆ ｏ ｒ Ａｑ ｕ ａ ｔ ｉ ｃ Ａｎ ｉ ｍ ａ ｌ ｓ ，Ｓ ｈ ａ ｒ ， ｃ ｇ ｈ ａ ｉ Ｏ ｃ ｅ ａ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ，Ｓ ｈ ａ ｈ ｇ ｈ ａ ｉ ， ２ ０ １ ３ ０ ６ ，Ｃ ｈ ｉ ａ） ｎ
ＡＮ Ｊ ｉ ａ ｎ ， Ｃ ＡＯ Ｈａ ｉ － ｐ ｅ ｎ ｇ ｚ ， Ｃ ＨＥＮ Ｂ ａ ｉ － ｙ ａ ｏ ， Ｆ Ｕ Ｇｕ ａ ｎ ｇ － ｈ ｕ ｉ ， Ｌ Ｕ Ｌ ｉ — ｑ ｕ ｎ ｚ
（ １ ．Ｌ ｕ ｘ ｕ ｒ ｙ Ｓ ｅ ａ ｆ ｏ ｏ ｄ Ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｌｉ ａ ｎ ｙ ｕ ｎ ｇ ａ ｎ ｇ， Ｍａ ｒ ｉ ｎ ｅ ａ ｄ ｎ Ｆｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｌ ｉ ａ ｎ ｙ ｕ ｎ ｇ ａ ｎ ｇ， Ｌ ｉ ａ ｎ ｙ ｕ ｎ ｇ ａ ｎ ｇ，
为最佳 密码子 （ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍａ ｌ ｃ ｏ ｄ ｏ ｎ ｓ ） ， 那 些 不被经 常利 用的 称为稀 有或利用 率低 的密码子 （ ｒ ａ ｒ ｅ ｏ ｒ ｌ ｏ ｗ － ｕ ｓ ａ ｇ ｅ Ｃ Ｏ －
为研究 托佩克猪 Ｓ Ｌ Ａ ＿ ２的结构和 功能 ， 课题组 前 期 已经 通 过 ｐ Ｅ Ｔ － ２ １等 表 达 系 统 构 建 了 托 佩 克 猪 Ｓ Ｌ Ａ － ２ 胞外 区重组表 达系 ， 但 发现 一个 最大 的问题就
是Ｓ Ｌ Ａ － ２蛋 白表达 量非常少 ， 不足 以进行 下一步 的蛋 白纯 化或 多肽结合试 验 。经过分 析 ， 发现在 Ｓ Ｌ Ａ － ２基 因中存在较 多 的稀 有 密码 子 ， 尤其 是 在 ５ 端， 这 可能
是导 致基பைடு நூலகம்因表 达量少 的主要原 因 。
ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ， Ｓ Ｌ Ａ） ２ 基 因的简称 ， 与 白细胞抗 原 １ （ Ｓ Ｌ Ａ ＿ １ ） 和
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ２ — ０ ８ — ３ １ 基金项目： 国 家 自然科 学基金 项 目（ ３ １ １ ７ ２ ３ ０ ４ ） ； 辽 宁省 大 学 生创 新 创 业 训 练 计 划 项 目（ ２ Ｏ １ ２ １ １ ２ ５ ８ Ｏ Ｏ ６ ） ； 大 连 大 学本 科 生创
新 教 育基 金 重 点 项 目（２ ０ １ １ ０ １ ８ ）
关键 词 ： 托佩 克猪 ； Ｓ Ｌ Ａ－ ２基 因 ； 密码子优化 ； 表达
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ４ ； Ｑ７ ８ ６ 文献 标 识 码 ： Ａ
文章 编号 ： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ — ０ ０ １ ９ — ０ ５
Ｓ Ｌ Ａ － ２基 因是 猪 白细胞 抗原 （ ｓ ｗ ｉ ｎ ｅ ｌ ｅ ｕ ｋ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ａ ｎ —
３ （ Ｓ Ｌ Ａ － ３ ） 基 因所分 别编 码表 达 的蛋 白一 起 构成 猪 白
细胞抗原Ｉ 类 分子 （ Ｓ Ｌ Ａ － Ｉ ） ， 这 些基 因属 于重 要 的免疫
应答基 因［ １ － ４ ］ 。
遗传 密码有 ６ ４种 ， 但 是 绝 大 多数 生 物倾 向 于利 用这些 密码 子 中的一 部 分 那 些 被 最频 繁 利用 的称
２ １ ａ 链接 ， 重 组菌经诱 导后 目的蛋 白大 小为 ３ ０ ， ９ ｋ ｕ ， 与 密码子 优 化前 重组 菌相 比 ， 目的蛋 白相 对表 达含 量提 高
约４ Ｏ 。研 究证 明 ， 密码子优 化可 明显提 高蛋 白的表达 量 ， 为进行其 他蛋 白表 达研 究提供 了参考 。
动 物医学进展 。 ２ ０ １ ３ ， ３ ４ （ １ ） ： １ ９ — ２ ３
Ｐｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎｅ
托 佩克 猪 Ｓ Ｌ Ａ － ２基 因克 隆与 表 达
刘腾 飞 ， 冯 磊 ， 田永发 ， 刘 畅 ， 姜 巍 ， 严婷婷 ， 高凤 山
（ 大 连 大 学 生命 科 学 与 技 术 学 院 ， 辽宁大连 １ １ ６ ６ ２ ２ ）
摘
要： 为提 高托佩克猪 Ｓ Ｌ Ａ － ２ 一 Ｔ Ｐ Ｋ基 因胞 外 区在 ｐ Ｅ Ｔ － ２ １ ａ的表达量 ， 对其 ５ 端进行 密码 子优化 ， 并设计
表 达 引物 ， Ｐ Ｃ Ｒ扩增 Ｓ Ｌ Ａ － ２ 一 Ｔ Ｐ Ｋ 胞外 区 ， 然后 克 隆入 ｐ ＭＤ ￣ １ ９ 一 Ｔ Ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ Ｖｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ， 经酶切 鉴 定后 连接 至 ｐ Ｅ Ｔ － ２ １ ａ