生化实验复习.docx

合集下载

(完整word版)生化复习提纲(word文档良心出品)

（2）谷氨酸的脱羧作用产生r-氨基丁酸。
（3）组氨酸的脱羧作用产生组胺。
12、酶的竞争性抑制剂，非竞争性抑制剂对酶的Km和Vmax有什么影响？
①竞争性抑制剂存在时，Km增大，且Km随[I]的增加而增加，Vmax的数值不变；
②非竞争性抑制剂的动力学特点为：a:当有I存在时，Km不变而Vmax减小，Km/Vmax增大；b：Vappmax随[I]的加大而减小；c:抑制程度只与[I]成正比，而与[S]无关。
12、第二信使：水溶性激素不能自由的通过细胞膜，当他们与靶细胞表面膜上相应的受体结合后形成激素和受体复合物，通过某种手段激活定位在细胞膜内侧特定的酶导致某些小分子物质的合成，被合成的小分子物质可以看成是第二信使。
第二信使有：cAMP、cGMP、IP3、二酰甘油、神经酰胺、花生四烯酸、NO等
13、级联放大：在体内的不同部位，通过一系列酶的酶促反应来传递一个信息，并且初始信息在传递到系列反应的最后时，信号得到放大，这样的一个系列叫做级联放大。
4、必需氨基酸：机体需要但机体不能合成或合成量少，不能满足要求，必须由食物供给的氨基酸
5、酮体：肝脏中一些脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸，ß-羟丁酸及丙酮的统称。
蛋白质一级结构：构成蛋白质的氨基酸的种类、数量和排列顺序，又称共价结构或基本结构。
6、酶的活性中心：酶与底物结合并发挥其催化作用的部位。
是糖、脂肪、氨基酸三大营养素的最终代谢通路
是糖、脂肪、氨基酸代谢联系的枢纽，在提供生物合成的前提中其重要作用。
16、简述调节血糖水平的几种激素的作用机理
胰岛素：体内唯一降低血糖的激素，唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。血糖升高—>胰岛素分泌。
促进肌肉、脂肪组织等的细胞膜葡萄糖载体将葡萄糖转运入细胞

生化复习提纲(统一打印)

第一章蛋白质化学名词解释氨基酸的等电点肽键结构域四级结构蛋白质等电点蛋白质变性作用蛋白质的复性二．思考题1.氨基酸的分类2.常见氨基酸种类、英文简写、一般结构特点3.蛋白质二级结构种类及特点4.维持蛋白质二级结构及三级结构的作用力5.蛋白质的紫外吸收特点第二章核酸的化学一．名词解释DNA双螺旋结构减色效应增色效应Tm DNA变性复性退火二．思考题1．嘧啶、嘌呤核苷所形成的糖苷键是怎样相连的？假尿嘧啶核苷与尿嘧啶核苷的区别？2．核酸的种类及分布，核酸的组成3．DNA的二级结构是怎样的？其稳定因素是什么？4．DNA双螺旋结构的多态性是怎样的？5．RNA的种类及作用？6．原核与真核细胞的mRNA在结构上的差异（一级结构）？7．tRNA二级结构有那些特点？其作用如何？三级结构？第三章酶学一．名词解释酶全酶多酶体系（多酶复合体）活性中心必需基团 Km 别构酶酶活力比活力同工酶二思考题1．酶作用的专一性可分为哪几类？2．酶的化学本质是什么？近年来对酶的化学本质有何新的看法（补充）？3．影响酶促反应速度的因素有哪些？4．辅助因子按其化学本质分哪两类？在酶促反应中起什么作用？5．举例说明竞争性、非竞争性、反竞争性抑制剂的动力学作用特点。

（如丙二酸，磺胺类药物等）6．诱导锲合学说的内容是什么？其解决了什么问题？7．Km有什么意义？怎样求法？影响Km值变化因素有哪些？8．国际生化协会酶学委员会将酶分为哪几类？醛缩酶、葡萄糖异构酶、谷丙转氨酶各属于第几类酶类？9．别构酶（变构酶）是否属于米氏酶？在调整细胞内各个酶促反应中有何生理学意义？维生素一．名词解释Tpp NAD+ NADP+ NADPH+H+ coASH FH4 FAD FADH2二．思考题1．FAD，FMN，NAD+，NADP+，Tpp是何种维生素的衍生物，在催化反应中起什么作用？2．泛酸、磷酸吡哆醛、生物素、四氢叶酸是哪种辅酶组成成分，这些辅酶有何作用？3．糖酵解过程中需要哪些维生素参与？4．为什么说维生素，尤其是B族维生素对机体新陈代谢很重要？5．脱羧酶、羧化酶、转氨酶的辅酶是什么？熟记书中所列的B族维生素的名称，辅酶形式及生理作用第五章糖代谢1．简述蔗糖的合成与降解途径2．简述淀粉的合成与降解途径3．糖酵解过程定义？是否需要O2，是否发生氧化还原反应？其关键酶是什么？写出关键酶催化的反应结构式。

生化检验复习资料

生化检验复习资料1. 血浆的脂类包括：胆固醇及胆固醇酯、磷脂、甘油三脂、游离脂肪酸；2. 运输内源性胆固醇的脂蛋白主要是LDL；3. VLDL中含有甘油三酯、胆固醇、磷脂、胆固醇酯，是血液中第二种富含甘油三脂的脂蛋白；在肝脏合成；其中的ApoCII激活LPL促进VLDL的代谢；4. 进行预染标脂蛋白琼脂糖电泳后，自阴极脂蛋白区带依次为：CM、β-脂蛋白、前β-脂蛋白、α-脂蛋白；5. 血气分析中表示代谢性酸碱平衡的指标是[HCO3-]；6. 实际碳酸氢盐（AB）等于标准碳酸氢盐（SB），二者小于正常，表明为代谢性酸中毒；7. 甲胎蛋白不是血浆中分子量最大的蛋白、80%的原发性肝癌患者血清中含量增高、主要在医学.敎育.网收集整理胎儿肝内合成、用于胎儿产前监测、不参与物质的运输；8. 癌基因产物包括：生长因子、P12蛋白、DNA结合蛋白、蛋白激酶、不包括化学致癌物质；9. 肝硬化不会引起血尿酸增高；10. 普通实验室常规测定香草扁桃酸（VMA）使用的方法是：化学显色法；11. 精密度是指：对同一样品重复进行检测时所得结果的符合程度；12. 酶法测定血清胆固醇中用到的酶有：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶；13. 磷钨酸—镁试剂可选择性地沉淀VLDL和LDL；14. PH计中的电极是属于玻璃电极；15. 活化蛋白C的主要作用是：灭活FVa和FVIIIa；16. 黄疸的发生机制：红细胞破坏过多、肝细胞摄取医学.敎育.网收集整理胆红素能力下降、肝细胞处理胆红素能力下降、胆道梗阻；17. 可以引起血磷降低的情况有：甲状旁腺机能亢进，维生素D缺乏，肾小管性酸中毒；18. 实际碳酸氢盐（AB）大于标准碳酸氢盐（SB）提示为呼吸性酸中毒；19. 能反映肝内或肝外胆汁淤积的试验是血清胆红素测定、血清总胆汁酸测定、血清ALP及其同工酶、血清GGT；20. 区带电泳有：滤纸电泳、琼脂糖电泳、PAGE电泳、琼脂电泳、醋酸纤维素薄膜电泳；21. 影响酶活性的因素有：底物、样品存放时间、温度、PH值、缓冲液的浓度；22. 发射光谱分析法是火焰光度法的原理；23.丁泽尔现象见于：散射光谱法分析；24.高速离心机的最高转速成可达25000转/分；25.凝胶层析的作用：用于研究生物大分子的沉降特性和稀溶液的浓缩；26.血浆蛋白中白蛋白的主要生理功能是：营养作用、运输作用、维持胶体渗透压作用、缓冲作用；27.尿β2微球蛋白主要用于监测肾小管功能；肾移植后如排斥反应影响肾小管功能时，尿β2微球蛋白可出现增高；存在于所有有核的细胞表面；急性白血病有神经浸润时，脑脊液中β2微球蛋白或增高；28.白蛋白参与调节激素和药物的代谢，维持血浆胶体渗透压，具有缓冲酸与碱的能力，是血液中主要的载体，占血浆蛋白的40～60%.29. 药物浓度测定的常见技术有：光谱法、色谱法、放射免疫法、荧光免疫法、酶免疫法；30. 将凝胶电泳与免疫化学方法结合起来的电泳技术为转移电泳；31. 诊断试验的诊断效率是所有实验结果中医学.敎育.网收集整理正确结果的百分数；32. 最早的使用的电泳技术是自由电泳；33. 区带电泳包括：滤纸电泳、琼脂糖电泳、PAGE电泳、琼脂电泳、醋酸纤维素薄膜电泳；34. 发射光谱分析是火焰光度法测定是原理；35. 甲状腺功能减退表现为：反应迟钝、心动过缓、性腺功能减退、非凹陷性黏液性水肿。

生化复习要点.doc

I.蛋白质的一级结构就是蛋白质多肽链中氨棊酸残基的排列顺序蛋白质的二级结构是指多肽链屮主链原子的局部空间排布即构象蛋白质的三级结构多肽链中所有院子的空间排布蛋白质的四级结构亚基Z间的立体排布，接触部位的布局等2.简单蛋白质完全有氨基酸组成结合蛋口质除氨基酸外，还含有其他非氨基酸成分单体寡聚蛋白3.全陋即结合酶，由酶蛋白和辅助因子构成。

寡聚酶寡聚酶由2个或多个相同或不相同亚基组成的酶多酶复合体多种酶靠非共价键相互嵌合催化连续反应的体系4.醜的活性中心酶分子中直接与底物结介，并和酶催化作用直接冇关的区域廨活力是指晦催化一定化学反应的能力比活力代表酶制剂的纯度5.酶的激活剂一些物质可以改变一个无活性酶前体，使之成为有活性的酶，或加快某种酶反应的速率产生酶激活作用酶的抑制剂酶抑制剂是一类可以结合酶并降低其活性的分子6.蛋白质的等电点蛋白质溶液处于某一pH溶液时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等, 即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点氨基酸的等电点在某一PH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等, 成为兼性离了，呈电屮性，此时的溶液ph称该氨基酸的等电点7.盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程盐溶在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。

8.核酸由核百酸或脱氧核苜酸通过3’ , 5’ ■磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。

核酸的一级结构是指核酸屮核廿酸的排列顺序9.高能化合物指体内氧化分解小，一些化合物通过能量转移得到了部分能量，把这类储存了较高能量的化合物10.氧化磷酸化作用是指冇机物包括糖、脂、氨基酸等在分解过程中的氧化步骤所释放的能量，驱动ATP合成的过程.在真核细胞屮，氧化磷酸化作用在线粒体屮发牛渗与氧化及磷酸化的体系以复合体的形式分布在线粒体的内膜上，构成呼吸链，也称电了传递链.其功能是进行电子传递、H+传递及氧的利用，产生H2O和ATP.II•乳酸发酵：指糖经无氧酵解而生成乳酸的发酵酒梢发酵：是在无氧条件下，微生物(如酵母菌)分解葡萄糖等有机物，产生酒楮、二氧化碳等不彻底氧化产物，同时释放岀少量能量搜索的过程12.脂肪酸B氧化第一步：CH3-(CH2) 14-COOH+ATP+CoASH 在软脂酰硫激酶催化生成了CH3-(CH2)14-CO~SCoA+AMP+PPi第二步：CH3・(CH2)14-CO〜SCoA在FAD作用下脱氢生成了CH3・(CH2)12・C=C・CO~SCoA 第三步：CH3-(CH2) 12-C=C-CO~SCoA 水化成CH3-(CH2) 12-CH(OH)-CH2-CO~SCoA笫四步：CH3-(CH2) 12-CH(OH)-CH2-CO-SCoA在NAD作用卞再脱氢生成了CH3・(CH2) 12・CO-CH2・CO 〜SCoA+3 ATP第五步：在辅酶A作用下硫解生成了CH3・（CH2）12・CO・CH2・CO〜SCoA+综上，一次脂肪酸B—氧化脱去两个碳分子生成5分了ATP,16酸经过7次B —氧化生成8个CH3・CO〜SCoA （乙酰辅酶A ）总过程：脱氢-水化-再脱氢-硫解酮体是脂肪酸在肝代谢的中间产物13.生糖氨基酸能通过代谢转变成葡萄糖的氨基酸牛酮氨基酸分解代谢过程屮能转变成乙酰乙酰辅酶A的氨基酸转氨基作用指的是一种―氨基酸的―氨基转移到一种―酮酸上的过程联合脱氨基作用转氨某与谷氨酸氧化脱氨或是嚓吟核昔酸循环联合脱氨，以满足机体排泄含氮废物的需求14.酶分了对底物有选择性，那种学说解释，要点？诱导契合沖说当酶与底物分子接近时，酶蛋口受底物分子诱导，其构像发牛有利于底物结合的变化，酶与底物在此基础上互补契合反应15.酶原激活由无活性的酶原，通过水解1个或儿个特定肽键，构象改变，成为冇活性的酶。

生物化学实验复习总结资料(全)

生化实验五大技术一.分光光度技术1.定义：根据物质对不同波长的光线具有选择性吸收，每种物质都具有其特异的吸收光谱，而建立起来的一种定量、定性分析的技术。

2.基本原理：透光度T=It / Io吸光度A=l g (Io/ It)朗伯-比尔(1ambert-Beer)定律 :A ＝KLc 【K 为吸光率，L 为溶液厚度（cm ），c 为溶液浓度（mol/L ）】摩尔吸光系数ε：1摩尔浓度的溶液在厚度为1cm 时，在某一特定波长下的吸光度。

c=A/ε3.定量分析：（1）标准曲线(工作曲线)法（2）对比法（3）计算法： c=A/ε（4）差示分析法（适用于浓度过浓或过稀）（5）多组分混合物测定4.技术分类分子吸收法&原子吸收法；可见光（400~760 nm ）&紫外光（200～400 nm ）&红外光（大于760 nm ）分光光度法；5.应用方向有机物成分分析&结构分析——红外分光光度法测定人体内的微量元素——原子吸收分光光度法二.电泳技术1.定义：带电荷的供试品在惰性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电图1-1 光吸收示意图极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。

2.基本原理：球形质点的迁移率与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。

ν=Q/6πrη3.影响电泳迁移率的因素：电场强度：电场强度大，带电质点的迁移率加速溶液的pH值：溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大溶液的离子强度：电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低电渗：在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗4.技术分类：自由电泳（无支持体）区带电泳（有支持体）：滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等5.电泳分析常用方法及其特点：小分子物质——滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质——凝胶电泳（1）醋酸纤维素薄膜电泳①这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，消除纸电泳中出现的“拖尾”现象②分离速度快，电泳时间短③样品用量少④经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化，有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存→特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测（胰岛素、溶菌酶、胎儿甲种球蛋白）（2）琼脂糖凝胶电泳①琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用②琼脂糖凝胶弹性差，不适合管状电泳→用于等电聚焦、免疫电泳、血清脂蛋白等蛋白质电泳，以及DNA、RNA、核苷酸的分析（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳①可调节孔径大小②机械强度好，有弹性③分辨率高，用途广④无电渗→用于不同分子量蛋白质的电泳分离（4）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳该种电泳使蛋白分子相对迁移率(Rf)的大小完全取决于分子量的高低，因此可从已知分子量的标准蛋白的对数和相对迁移率所作的标准曲线中求出供试品的分子量→最常用定性分析蛋白质的电泳方法，特别用于蛋白质纯度检测&分子量测定（5）等电聚焦电泳技术利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质→由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分，适合研究蛋白质的微观不均一性（6）毛细管电泳①高灵敏度②高分辨率③高效快速④样品少⑤成本低→符合对多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等生物大分子的分离条件三.层析技术固定相：固体物质或者是固定于固体物质上的成分；流动相：可以流动的物质，如水和各种溶媒1.原理：当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随流动相向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。

生化实验期末考资料

● 氨基酸的分离鉴定（纸层析法）分配层析：是一种连续抽提法。

一种溶剂通常是被结合在固定的惰性支持物（柱、膜、纸）上的水，另外一相由流动的被水饱和的有机溶剂构成，它流过固定相。

如果某一混合物的各组分在这两相中的分配系数有足够的差异，它们就可以被分离。

（固定相和流动相）分配系数：在一定条件下，某一组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值。

纸层析法：是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。

层析溶剂由有机溶剂和水组成。

物质被分离后在纸层析图谱上的位置使用R ƒ值（比移）来表示：影响Rf 值的因素：在一定的条件下某种物质的Rf 值是常数。

Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。

纸层析过程：点样，扩展，显色，计算扩展剂（展层剂）：4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。

将20mL 正丁醇和5mL 冰醋酸放入分液漏斗中，与15mL 水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层，上层即为扩展剂。

显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液● 蛋白质的性质实验（等电点测定和显色反应）等电点：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。

当溶液的pH 达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH 值称为此种蛋白质的等电点（pI ）。

蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。

（水化层和双电层）蛋白质的沉淀反应可分为两类：可逆的沉淀反应（蛋白质分子的结构尚未发生变化。

如盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。

）不可逆的沉淀反应（蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，如加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类)0.4%酪蛋白醋酸钠溶液：称取0.4g 酪蛋白（干酪素），加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬浮液移入200mL 锥形瓶内，用少量40～50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。

生化实验复习题及答案

生化实验复习题及答案一、选择题1. 酶的催化作用通常受哪些因素影响？A. 温度B. pH值C. 底物浓度D. 所有以上答案：D2. 以下哪个不是蛋白质的功能？A. 催化生化反应B. 储存能量C. 运输物质D. 作为细胞结构的组成部分答案：B3. 核酸的组成单位是什么？A. 氨基酸B. 核苷酸C. 脂肪酸D. 单糖答案：B二、填空题1. 酶的活性中心是酶分子上能够与________结合并催化反应的区域。

答案：底物2. DNA的双螺旋结构是由________和________两条链组成。

答案：脱氧核糖核苷酸磷酸3. 细胞色素c是细胞呼吸链中的一个重要组分，它主要参与________的传递。

答案：电子三、简答题1. 简述酶的专一性原理。

答案：酶的专一性原理是指一种酶只能催化一种特定的底物或一类结构相似的底物进行特定的化学反应。

这种专一性主要由于酶的活性中心的结构与底物分子的结构高度匹配，只有当底物分子与酶的活性中心结合时，才能触发催化反应。

2. 描述细胞呼吸的基本过程。

答案：细胞呼吸是细胞内有机物氧化分解释放能量的过程，主要包括糖酵解、三羧酸循环和氧化磷酸化三个阶段。

糖酵解在细胞质中进行，将葡萄糖分解成两个丙酮酸分子，释放少量能量；三羧酸循环在细胞线粒体中进行，将丙酮酸进一步氧化分解，释放更多的能量；氧化磷酸化是细胞呼吸的最后阶段，通过电子传递链将电子传递给氧气，同时合成大量的ATP。

四、计算题1. 如果一个酶促反应的Vmax是10 mmol/分钟，Km是0.1 mM，当底物浓度是0.05 mM时，计算酶的催化速率。

答案：根据米氏方程，催化速率 V = (Vmax * [S]) / (Km + [S])，代入数值得 V = (10 * 0.05) / (0.1 + 0.05) = 0.5 mmol/分钟。

五、论述题1. 论述DNA复制的基本原理及其在生物体中的重要性。

答案：DNA复制是生物体细胞分裂过程中，将遗传信息从亲代DNA分子精确复制到子代DNA分子的过程。

生化实验复习题及答案

生化实验复习题及答案一、单项选择题1. 酶的催化作用主要依赖于其活性中心中的哪种基团？A. 疏水基团B. 极性基团C. 金属离子D. 氨基酸残基答案：B2. 以下哪种物质不是蛋白质的组成单位？A. 氨基酸B. 核苷酸C. 多肽D. 糖类答案：D3. DNA复制过程中，以下哪种酶负责解开双螺旋结构？A. DNA聚合酶B. DNA连接酶C. 拓扑异构酶D. 解旋酶答案：D二、填空题1. 蛋白质的一级结构是指_________的线性排列顺序。

答案：氨基酸2. 脂质体是一种由_________构成的球形结构。

答案：磷脂双层3. 核酸分子中的碱基配对遵循_________原则。

答案：互补配对三、简答题1. 描述糖酵解过程中的关键酶及其作用。

答案：糖酵解过程中的关键酶包括己糖激酶、磷酸果糖激酶-1和丙酮酸激酶。

己糖激酶催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸，磷酸果糖激酶-1催化果糖-6-磷酸磷酸化生成果糖-1,6-二磷酸，丙酮酸激酶催化磷酸烯醇丙酮酸转化为丙酮酸，同时生成ATP。

2. 简述细胞呼吸过程中的三个主要阶段及其能量产生。

答案：细胞呼吸的三个主要阶段包括糖酵解、柠檬酸循环和电子传递链。

糖酵解在细胞质中进行，产生少量ATP和NADH；柠檬酸循环在细胞线粒体基质中进行，产生NADH、FADH2和少量ATP；电子传递链在线粒体内膜上进行，通过氧化NADH和FADH2产生大量的ATP。

四、计算题1. 如果一个DNA分子中有1000个碱基对，其中腺嘌呤占20%，那么该DNA分子中鸟嘌呤的含量是多少？答案：由于DNA中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）配对，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）配对，且A+T=G+C，所以如果A占20%，则T也占20%，G 和C各占30%。

因此，鸟嘌呤的含量是1000个碱基对的30%，即300个鸟嘌呤。

生物化学实验技术复习总结重点汇编详细.doc

、八—1—前B1.本课程主要讲述了哪些实验技术，其中被称为生化实验室中三大实验技术的是？答：层析技术、电泳技术、离心技术、分光光度技术、免疫化学技术。

其中层析技术、电泳技术、离心技术是生物学的三大实验技术。

第一章生物化学基本操作与要求1 •洗涤液的种类配置与应用答：（1）钻酸洗液（称取5g重絡酸钾粉末置于250mL烧杯中，加水5mL,尽量使其溶解, 慢慢加入浓硫酸lOOmL,边加边搅拌。

冷却后贮存备用，若颜色变绿，表示洗液已失效。

）用于洗涤玻璃器皿。

（2）浓盐酸，洗去水垢或某些无机盐沉淀。

（3） 30%硝酸，洗涤CO? 测定仪器及微量滴管（4） 45%尿素，洗涤蛋白制剂、血样（5）有机溶剂，洗涤油脂、脂溶性染料（6）去污粉，一般污染物2.化学试剂的分级答：第二章层析技术1.层析技术及其原理答：层析技术是一种基于被分离物质的物理、化学、生物学特性的不同，使它们在某种机制中移动速度不同而进行分离和分析的方法。

O2.层析法的分类答：按流动相的形式分：气相色谱法1.气固色谱法2.气液色谱法，液相色谱法1.液固色谱法2.液液色谱法；按固定相的形式分：1 .柱层析法2.纸层析法3.薄层层析法。

3.几种主要凝胶的中英文名称、型号、及型号数字代表的含义答：葡萄糖凝胶（dextran型号Sephadex G・10〜200数字代表凝胶的吸水率）聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide主要型号有Bio-Gel P-2〜30（）,数字代表它们的排阻极限的10'3）琼脂糖凝胶（agarose Sepharose,Bio-Gel A）4.凝胶层析及其基本原理、操作过程和主要应用答：是利用凝胶把物质按分子大小不同进行分离的一种方法。

原理：由于被分离物质的分子大小不同，洗脱时，大分子物质由于直径大于凝胶网孔不能进入凝胶内部，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随溶剂向下移动，因此流程短，首先流出层析柱，而小分子物质，由于直径小于凝胶网孔，能自由进出胶粒网孔，使之洗脱流程增长，移动速度慢而后流出层析柱。

生化实验复习资料

名词解释凝胶等电聚焦电泳：在电场作用下，两性电解质载体在凝胶中移动，形成PH梯度，蛋白质在凝胶中迁移至其PI的PH处，即不再泳动而聚焦成带。

离子交换层析：简称为IEC 是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。

SDS-PAGE ：SDS带有大量负电荷，当其与蛋白质结合时，所带的负电荷大大超过了天然蛋白质原有的负电荷，因而消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异，使蛋白质均带有相同密度的负电荷，因而可利用分子量差异将各种蛋白质分开。

透析与超滤: 透析是利用蛋白质等大分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质如无机盐单糖等分开。

超滤是利用压力、抽滤或离心力等多种形式，强行使水和其它小分子溶质通过半透膜，而蛋白质被截留在膜上，以达到浓缩和脱盐目的。

亲和层析: 亲和层析是利用生物分子间所具有的专一而又可逆的亲和力而使生物分子分离纯化的层析技术。

吸附层析:以吸附剂作为固定相，选择适当的溶剂作流动相。

由于各种物质的极性不同，被吸附剂吸附的程度和在流动相中的溶解度不同。

层析时，当流动相从固定相上流过时，各组分也就不同程度地被溶解（解吸），然后又再被吸附、再溶解再吸附，从而以不同速度随流动相向前移动。

凝胶过滤:凝胶层析，又称为凝胶过滤、分子排阻层析或分子筛层析。

是以各种凝胶为固定相，利用流动相中所含各物质的相对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术。

Rf值: 溶质在滤纸上移动的速率Rf= a/ b式中a：溶质斑点中心的移动距离b：溶剂前沿移动的距离分配系数: K=固定相中溶质的浓度/流动相中溶质的浓度是指一种溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解达到平衡时，该溶质在两相溶剂中的浓度比值问答题问答题1、试设计利用离子交换剂分离一种含等电点分别为4.0、6.0、7.5和9.0蛋白质混合液的方案，并简述理由。

答：先用PH为6。

8的缓冲液平衡阴性离子交换剂，再用这种缓冲液来洗脱蛋白质，则等电点为4。