生化实验复习.docx

—、离心技术

1.概念:根据物质的质量、沉降系数及浮力因素等不同，应用高速旋转产生强大的离心力，使物质分离、浓缩、提纯的方法称为离心(centrifugation)技术。

2.离心的基本术语

①离心力(F)：在一定角速度下作圆周运动的任何物体都受到一个向外的离心力。F=co2r

(3是旋转角速度，以弧度/秒为单位；r是离心转子的半径，以cm为单位)

②相对离心力(RCF)：离心力转化为重力加速度(g)的倍数。RCF= o2r/g= (1.119X10-5) n2r n为转子每分钟的转数(rpm)

一般情况下，低速离心时常以转速“rpm”来表示，髙速离心时则以“g”表示。

③沉降系数(S)：颗粒在单位离心力作用下粒子移动的速度。

S的物理意义是颗粒在离心力作用下从静止状态到达等速运动所经过的吋间，单位为秒。S在实际应用屮常在10-13秒左右,即10-13S为IS o文献屮常用沉降系数以描述某些生物大分子或亚细胞器大小。

3.离心机分类

(1)普通离心机：最大转速6000 rpm左右，分离形式是固液沉降分离，转子有角式和外摆式，其转速不能严格控制，通常不带冷冻系统，于室温下操作，用于收集易沉降的大颗粒物质，如红血球、酵母细胞等。(2)高速冷冻离心机：最大转速为20000?25000 rpm,分离形式是固液沉降分离，一般都有制冷系统，通常用于微生物菌体、细胞碎片、大细胞器、硫镀沉淀和免疫沉淀物等的分离纯化工作，但不能有效地沉降病毒、小细胞器(如核蛋白体)或单个分子。

(3)超速离心机：转速可达50000?80000 rpm,分离的形式是差速沉降分离和密度梯度区带分离，离心管平衡允许的误差要小于0.1克。超速离心机的出现，使生物科学的研究领域有了新的扩展，它能使过去仅仅在电子显微镜观察到的亚细胞器得到分级分离，还可以分离亚细胞器、病毒、核酸、蛋白质和多糖等。

4.离心管的选用

离心管主要用玻璃、塑料和不锈钢制成

(1)玻璃离心管绝对不能在高、超速离心机上使用。

(2)塑料离心管常用材料有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)等，其中PP管性能较好。具体如下：

A、PA管：化学性能稳定，半透明，能耐高温消毒。

B、PP管：化学性能稳定，半透明，能耐高温消毒。

C、PC管：透明度好，硬度大，能耐高温消毒。但不耐强酸强碱及某些有机溶剂。主要用于5万(转/分) 以上离心。

D、CN管：质地较软，透明，但不耐强酸强碱及某些有机溶剂，不能高压消毒。适合于蔗糖、廿油等密度梯度离心。因透明，利于收集。

(3)不锈钢离心管强度大，不变形，能抗热，抗冻，抗化学腐蚀。但用时也应避免接触强腐蚀性的化学药品，如强酸、强碱等。

5.离心机的使用注意事项

(1)离心机要置水平位置，以保证旋转轴与地面水平面垂直。保持良好的通风环境，避免阳光和热源直接照射。

(2)使用前应检查离心机转头转速，不得过速使用。禁止离心机不加转子空转且确认转子己放稳，一定要选择适宜的转子。

(3)样品倾入离心杯后应与离心管套一起两两平衡(台称)，平衡后把它们放置于转子的对称位置，严禁装载奇数的离心管。严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。

(4)离心机工作前一定要检查离心机盖是否盖严，之后打开电源开关，调整离心时间。

(5)启动离心时转速应由小至大，缓慢升速，达到预定转速后再调整离心时间至预定时间。

(6)在使用过程屮，若发现声音不正常，应立即停机。

(7)离心结束，要等到转速为零时才能打开离心机盖，取出样品。调整调速旋钮至零位，同时关闭电源。

（8）每次使用后，要仔细检查转头，及时清洗、擦干。长期不使用，应将转子取下擦拭涂油并妥善保管。

二、光谱技术（分光光度技术）

1.分光光度法的概念:利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱，利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分光光度法或分光光度技术，使用的仪器称为分光光度计。

2.常用光谱分析术语

①光吸收：当一定波长的光通过某介质吋，该介质有选择地吸收某一波长的光，使入射光的强度减弱，这种现象称为光吸收。

②吸光度（A）（absorbance）：又称光密度（OD）或消光度（E）,表示光被吸收的量度。它与被测溶液

的浓度（C）,液层的厚度（L）成正比，消光度越高，溶液对光吸收的程度越大。

③透光度（T）（transmittance） -- 表示光线透过的量度。通常以百分数表示。

④消光系数（￡ ）：是溶液对光吸收的比例常数，消光系数的物理意义是吸光物质在单位浓度以及单位厚度时的吸光度值，用￡表示。

￡值取决于溶质性质、入射光波长和温度。￡越大，吸收光的能力越强，相应的分光光度法测定的灵敏度就越髙。

4?分光光度计种类

（1）可见分光光度计：在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。

（2）紫外分光光度计：紫外光/可见光分光光度计基本装置中采用高强度的钩灯作为光源，能够在可见光范围（400?700nm）调节。氛灯用于紫外分光光度测量（200?400nm）；使用氛灯时要用石英杯，因为紫外线不能透过玻璃。

（3）红外分光光度计：

（4）原子吸收分光光度计：

其屮紫外光区，波长范围为200?400nim可见光区，波长范闱为400?700nim红外光区，波长范围为700nm-500g m；无线电波区，波长范围为l?5m。在生物化学领域里，应用最多的是波长区域是可见光和紫

外光。

5.分光光度计的组成及测定原理

组成：（1）光源；（2）单色光器（包括产生平行光和把光引向检测器的光学系统）；（3）样品室（比色杯）; （4）接收检测放大系统；（5）显示或测量仪表。

光源单色器样品室检测放大系统显示器

测定原理：光源发生的光经单色光器变为一定波长的单色光，此光通过吸收池，被吸光物质所吸收，吸收

后，透出的光照到接受器上产生电流，电流推动测量仪表以光密度或透光率表示出来。

7200型可见分光光度计的使用方法★

1.开机前的检查：开机前打开样品室盖，检查样品室内是否有物品挡在光路上。光路上有阻挡物将影响仪器的自检，甚至造成仪器故障。

2.接通仪器电源，预热20?30分钟后，用波长选择旋钮设置测试所需波长。

3.将校正黑体置于光路，用〈MODE〉键选择“T”测试方式，调节T为“000.0”。

4.将空白溶液与待测溶液分别倒入比色皿中，把盛有溶液的比色皿放入比色架中（注意比色皿的光面和毛面不要放反），盖上样品室盖，使空白溶液对准光路，用〈MODE〉键选择“T”测试方式，按“100%”键调节光度计读数为“100.0”。用〈MODE〉键选择“A”测试方式,看光度计读数是否为“0.000”。如是，则可以开始测定待测溶液的吸光度值。

5.轻轻拉或推动比色架固定拉杆，使第二个比色皿溶液处在光路中，此时读数即为该溶液的吸光度。

6.依次拉或推出第三，第四个比色111L,分别读取溶液的吸光度值。

7.测定完毕，先打开样品室盖，再关闭电源。将比色皿取出洗净，并将比色皿座架及暗箱用软纸擦净。

三、层析技术

1.概念和原理：又称色谱技术。利用被分离混合物中各组分的物理、化学及生物学特性(主要指吸附能力、溶解度、分子大小、分子带电性质及带电量的多少、分子亲和力等)的差异，当它们通过一个由互不相溶的两相一一固定相和流动相组成的体系时，由于混合物各组分在两相之间的分配比例、移动速度不同而将混合成分分开的技术。层析法是近代生物化学最常用的分析方法2—，运用这种方法可以分离性质极为相似，而用一般化学方法难以分离的各种化合物，如各种氨基酸、核苛酸、糖、蛋白质等。

2.层析分类

(1)按固定相分类：根据固定相的形式不同，可分为：纸层析、薄层层析和柱层析。

纸层析：用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开。

薄层层析：将适当粘度的固定相均匀铺在薄板上，点样后，用流动相展开；

柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离；

(2)按流动相分类，可分为：气相层析和液相层析。

气相层析：是指以气体为流动相的层析方法。根据固定相的性质不同又可以分为气■固层析(GSC)和气?液层析(GLC)o

液相层析：是以液体为流动相的层析方法，称Z为液相层析。同理，根据固定相的性质不同又可以把液相层析分为液■固层析(LSC)和液■液层析(LLC)o

(3)按分离原理分类，可分为：

①凝胶层析(gel chromtography)：凝胶层析又称为凝胶过滤、分子筛过滤、凝胶渗透层析等。其基本原理是利用被分离物质分子大小不同及固定相(凝胶)具有分子筛的特点，将被分离物质各成分按分子大小分开从而达到分离的方法。

分子筛效应：凝胶颗粒具有多孔网状结构，小分子易进入凝胶网孔，流程长而移动速度慢，而大分子物质不能进入凝胶网孔，沿凝胶颗粒间隙流动，流程短移动快。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量由大到小的顺序流出层析柱，凝胶表现分子筛效应，凝胶层析又称分子筛层析。

②离子交换层析(Ion exchange chroma tography)：离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相屮的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。

③吸附层析(absorption chromatography)：吸附层析是指待分离混合物随流动相通过由吸附剂组成的固定相时，由于吸附剂对待分离混合物中不同组分的吸附力不同，从而使混合物中各组分得以分离的一种层析方法。

吸附层析常应用于：

A.生物大分子物质的分离、纯化与分析；

B.小分子化合物的分离、纯化及分析；

C.稀溶液的浓缩

④分配层析(partition chroma tography)：被分离组分在固定相和流动相屮不断发生吸附和解吸附的作用，在移动的过程中物质在两相之间进行分配。利用被分离物质在两相中分配系数的差异而进行分离的一种方法,称Z为分配层析。

⑤亲和层析(afinity chromatography)：在固定相载体表面偶联具有特殊亲和作用的毗基，这些配基可以与流动相中溶质分子发生可逆的特异性结合而进行分离的一种方法，称之为亲和层析。

⑥金属螯合层析(metal chelating chromatography)利用固定相载体上偶联的亚胺基乙二酸为配基与二价金屈离子发生螯合作用，结合在固定相上，二价金屈离子可以与流动相中含有的半胱氨酸、组氨酸、咪卩坐及其类似物发生特异螯合作用而进行分离的方法，称之为金属螯合层析。

⑦疏水层析(hydrophobic chromatography):^用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离的方法，称之为疏水层析。

⑧反向层析(reverse phase chromatography)利用固定相载体上偶联的疏水性较强的配基，在一定非极性的溶剂中能够与溶剂中的疏水分子发生作用，以非极性配基为固定相，极性溶剂为流动相来分离不同极性的物质的方法，称Z为反相层析。

⑨聚焦层tJf(focusing chromatography)利用固定相载体上偶联的载体两性电解质分子，在层析过程中所

形成的pH梯度，并与流动相中不同等电点的分子发生聚焦反应进行分离的方法，称之为聚焦层析。

⑩灌注层析（perfusion chromatography）利用刚性较强的层析介质颗粒中具有的不同大小贯穿孔与流动相中溶质分子分子量的差异进行分离的方法，称之为灌注层析。

2.层析分类

亲和层析特点：亲和层析是利用生物分子间所具有的专一而又可逆的亲和力而使生物分子分离纯化的层析技术。具有专一而又可逆的亲和力的生物分子是成对互配的。主要的有：酶和底物、酶与竞争性抑制剂、酶和辅酶、抗原与抗体、DNA和RNA、激素和其受体、DNA与结合蛋白等。在成对互配的生物分子中, 可把任何一方作为固定相，而对样品溶液屮的另一方分子进行亲和层析，达到分离纯化目的。例如，酶与其辅酶是成对互配的，既可把辅酶作为固定相，使样品中的酶分离纯化，也可把酶作为固定相，使样品中的辅酶分离纯化。

亲和层析应用：亲和层析可用于纯化生物大分子：稀溶液的浓缩；不稳定蛋白质的贮藏；从纯化的分子屮除去残余的污染物；用免疫吸附剂吸附纯化对此尚无互补配体的生物大分子；分离核酸是亲和层析应用的一个重要方面。

3.与层析法有关的仪器

①自动部分收集器

②核酸蛋白检测仪:是层析时监测层析洗脱液浓度变化的仪器。洗脱液从柱的出口流出，通过细管被引向一个置于适当波长的石英玻璃流通池内，光吸收的变化通过一个光电管來检测，并在图表记录仪上被描绘出来。核酸一蛋白检测仪是柱层析时的眼睛。

③电脑釆集器、电脑

④恒流装置一一恒流泵

四、电泳技术

（一）、基本概念和原理：概念带电粒子在电场中向其与自身电荷相反的电极移动的现象称为电泳（electrophoresis）o以此为原理衍生出的各种电泳方法称为电泳技术。

任何物质由于其本身的解离作用或表面上吸附其他带电质点，在电场中便会向一定的电极移动。

当蛋白质溶液处于某一PH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的PH称为蛋白质的等电点（PI）。

如果溶液的pH大于pl,则蛋白质分子和核酸分子会解离出H+而带负电，在电场中向正极移动；如果溶液的pH小于pl,则蛋白质分子和核酸分子结合一部分H+而带正电，在电场中向负极移动。

（二）、电泳的分类

（1）平板式电泳：电泳支持物（如凝胶）制成水平板状，是最常用的电泳方式。

（2）垂直板式电泳：如聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳。

（三）、影响电泳的内外界因素

内因：①净电荷；②质点大小；③质点形状

外因：

①电场强度

②缓冲液的pH值（pH恒定）若溶液pH处于等电点碱侧，即pH>pI,则质点带负电荷，向正极移动。若溶液pH处于等电点酸侧，即pH

③溶液的离子强度：电泳液中的离子浓度增加吋会引起质点迁移率的降低。（最适：0.02-0.2）

其原因是带电质点吸引相反负荷的离子聚集其周围，形成一个与运动质点负荷相反的离子氛（ionic atmosphere）,离子氛不仅降低质点的带电量，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。

④电渗现象：在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗（electro-osmosis）o

其产生的原因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电，故移动。

⑤支持物的影响：对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测，故戢好透明，无紫外吸收。常用的支持物有滤纸，醋酸纤维素薄膜，淀粉凝胶，聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糠凝胶等。

⑥焦耳热的影响：电泳时会产生焦耳热，使介质粘度下降，分子运动加快，迁移率增加，同时温度过高会使样品中的生物大分子变性失活，因此电泳时，要控制电压或电流，也可安装冷却散热装置。

（四）、几种常见的电泳方式及应用

1.醋酸纤维素薄膜电泳

2.琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳主要用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等，为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段。

3.聚丙烯酰胺凝胶电泳：PAGE应用广泛，可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量及少量的制备，还可测定分子量、等电点等。

4.SDS-PAGE

5.等电聚焦电泳

6.二维聚丙烯酰胺凝胶电泳

7.毛细管电泳

&免疫电泳

（五）、电泳技术的应用

1.分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等

2.分析某种物质的纯度及分子量

3.电泳技术与层析法结合对用于物质的结构分析

4.免疫电泳可提高对蛋白质的鉴别能力

1?吸量管的使用

（1）正确拿法中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。

（2）取液用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。

（3）调刻度吸量管与地而保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。

（4）放液吸量管移入准备接受溶液的容器中，仍使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。

2 ?微量移液器的使用

调节体积选取钮至所需值，套上吸头，旋紧。垂直持握移液器，用大拇指按下液体吸放钮至第1档，将吸头插入待吸溶液，松开大拇指使吸放钮冋复原位。将移液器移入准备接受液体的仪器，用大拇指再次按下液体吸放钮，至第1档后继续至第2档以排空液体。

组织匀浆：指将动物组织细胞在适当的缓冲溶液中研磨，使细胞膜破坏，细胞内容物溶解或悬浮于缓冲液中形成的混悬液。

考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595 mn波氏处比色测定。2?5分钟即呈最大光吸收，至少稳定1 小吋。10?100 Ug/ml蛋白质范围内均可。

丙二酸的结构与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞相结合琥珀酸脱氢酶的活性中心，从而抑制该酶的活性，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。这种抑制作用即属酶的竞争性抑制作用。

1:4磷钳酸溶液加至25刻度处后，用橡皮塞塞紧管口颠倒混匀，用空白管调“0”点，在420nm波长处进行比色

核酸定量测定技术包括紫外分光光度法、定磷法、定糖法三种。

核酸中的嘿吟、喀喘碱基具有共轨双键系统(一C=C—C=C—),能够强烈吸收250-280nm波长的紫外光。核酸(DNA或RNA)的最大吸收峰在260nm波长处，不同浓度的核酸含量其在260nm的紫外吸收不一样，因而可以从紫外吸收的变化来测定核酸物质的含量。

增色效应与减色效应：

增色效应：不同形式DNA紫外吸光度不同，因为DNA具有双螺旋结构，当过量的酸、碱或加热使DNA 变性，使得DNA或RNA溶液对紫外光的吸收明显增加，即￡值(吸光系数或称消光系数)显著升高，此现象称为增色效应。在核昔酸量相同情况下，e (P) 260nm有以下关系：单核昔酸〉单链DNA> 双链DNAo 减色效应：在一定的条件下，变性的核酸又可以复性，此时￡ (P) 260nm值又明显减少，冋复到原来的核酸分子￡值较低的水平，即此吋DNA或RNA溶液的紫外光吸收显著降低，此现象称为减色效应。

RNA的A260nm与A280nm之比在2.0以上，DNA的A260/A280之比为1?9左右(该比值在1.8-2.0 之间表示DNA样品较纯)。

标准管法:A测定管/A标准管=C测定管/C标准管;则C测定管=A测定管/A标准管XC标准管消光系数

法(公式法)

DNA的质量浓度(P g/mL)=A260/(0.020XL) X稀释倍数

RNA的质量浓度(Pg/mL)=A260/(0.024XL) X稀释倍数

溶血：红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。可由多种理化因素和毒素引起。在体外, 如低渗溶液、机械性强力振荡、突然低温冷冻(-20°C??25°C)或突然化冻、过酸或过碱，以及酒精、乙瞇、皂碱、胆碱盐等均可引起溶血。

2.加入200ul结合液CB,立刻剧烈颠倒轻摇，充分混匀，再加入20 ul蛋白酶K (20mg/ml),颠倒轻摇充分混匀，70°C放置10分钟，每隔2分钟颠倒混匀几次，之后溶液应变清亮，颜色偏黑色。

血清、全血及血浆的区别★

全血：血液经抗凝处理后的全部血液为全血。

血浆：抗凝血离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体为血浆。

血清：如血液不经抗凝处理，让其自行凝固，则在抽血后的一段吋间内，血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，血液首先凝固成一个整体，再经过一段时间或用离心机离心，血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开，这些液体称为血清。

染色质、染色体、DNA和基因的概念及其之间的关系？★

染色质：在细胞核中，有一种易被碱性染料染上颜色的物质，叫做染色质。

染色体：染色体是由DNA和蛋白质组成的，一般存在于细胞核中，是DNA的载体。，染色体只是染色质的另外一种形态。它们的组成成分是一样的。

DNA：脱氧核糖核酸，DNA和蛋白质组成染色质。基因：带有遗传信息的DNA片段称为基因，基因在

DNA上。

染色体和染色质是同种物质在不同时期的两种表现形式，一般细胞核中是以细丝状的染色质状态存在的，在细胞有丝分裂前期染色质高度螺旋化变粗变短，成为染色体。基因是DNA上具有遗传效应的片段, DNA的基因呈线性排列，有的片段有遗传效应，有的没有，而具有遗传效应的DNA片段才叫基因。基因在DNA上，DNA在染色体上°

DNA的变性和复性

加热或强酸、碱性作用可以使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离，形成单链DNA,这称为DNA的变性，

解除变性的条件后，变性的单链可以重新结合起來，形成双链，其原有的特性和活性可以恢复，这称DNA复性，也叫退火。

PCR (Polymerase Chain Reaction)9即聚合酶链反应，是一种体外基因扩增技术，是在引物和四种脱氧

核昔三磷酸存在下，利用DNA聚合酶反复作用，使微量的特定片段得以大量扩增的反应过程。

Tm值：Tm值就是DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半吋的温度。不同序列的DNA, Tm

值不同。DNA中G?C含量越高，Tm值越高，成正比关系。

PCR所需的条件：①模板②引物(决定扩增产物的特异性)PCR反应中，所设计引物的长度一般为15?30个核昔酸③dNTPs④Taq聚合酶⑤Mg2+

本次实验中的变性、退火和延伸温度分别为94°C、55 °C和72 °C

电泳：是指带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。

琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理、使用方法、适用范围以及它们的相同和不同之处：琼脂糖凝胶电泳原理：琼脂糖是从琼脂中提纯出来的，主要是由D■半乳糖和3,6脱水L?半乳糖连接而成的一种线性多糖。琼脂糖凝胶的制作是将干的琼脂糖悬浮于缓冲液屮，通常使用的浓度是1%-3%,加热煮沸至溶液变为澄清，注入模板后室温下冷却凝聚即成琼脂糖凝胶。琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质。琼脂糖之间以分子内和分子间盘键形成较为稳定的交联结构，这种交联的结构使琼脂糖凝胶有较好的抗对流性质。琼脂糖凝胶的孔径可以通过琼脂糖的最初浓度来控制。低浓度的琼脂糖形成较大的孔径。而高浓度的琼脂糖形成较小的孔径。琼脂糖凝胶可以用于蛋白质和核酸的电泳支持介质，尤其适合于核酸的提纯、分析。

聚丙烯酰胺凝胶电泳原理：聚内烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE (Polyacrylamide gel electrophoresis)是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺(Acrylamide)和甲叉双丙烯酰胺(N,N '?methylenebisacrylamide)聚合而成，这一聚合过程需要有自由基催化完成。常用的催化聚合方法有两种, 化学聚合和光聚合。化学聚合通常是加入催化剂过硫酸钱(AP)以及加速剂四甲基乙二胺(TEMED)催化过硫酸钱产生口由基。聚丙烯酰胺凝胶电泳普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广。

琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理、使用方法、适用范围以及它们的相同和不同之处。★ 琼脂糖

凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的区别：

琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范圉较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA 5-500bp效果较好，其分辩力极高，甚至相差lbp的DNA段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快，可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。

凝胶层析又称为凝胶过滤、分子筛层析、凝胶渗透层析等。主要根据混合物中分子的大小和形状不同，在通过凝胶时，分子的扩散速率各异而达到分离目的的技术。

层析流动相：在层析过程屮，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界体等都称为流动相。在柱层析吋，流动相又称洗脱剂(液)；在纸层析和薄层层析时，流动相又称展层剂。