晚期鼻咽癌治疗中血浆EBV-DNA水平变化及临床意义

晚期鼻咽癌治疗中血浆EBV-DNA水平变化及临床意义
摘要】目的探讨晚期鼻咽癌患者疗血浆EBV DNA水平在监测复发、转移中的临
床意义。

方法 80例鼻咽癌患者分为观察组40例及对照组40例，观察组患者,第
1天应用紫杉醇135mg/m2、草酸铂130mg/m2静脉滴注,口服卡培他滨
1650mg/m2/d,连服1～14 d,每3周为一个周期,连用2～4个周期;对照组40例患者,第1～5天应用DDP 20mg/m2、5-Fu0.5g/m2静脉注射,3周为一个周期,连用
2～4个周期;治疗结束2～4周后评价疗效。

并应用荧光定量PCR技术(real-time PCR),检测两组鼻咽癌患者血浆EBV DNA水平。

结果观察组中位生存时间为10.6个月明显高于,对照组8.6个月(χ2=3.789，P<0.05)；观察组有效率50.0%明显对照
组32.5% (χ2=3.845，P<0.05)；观察组阳性率65.0%与对照组62.5%比较，无显著
性差异(χ2=1.056，P>0.05)；EBV DNA检查敏感性、特异性、准确性分别为72.0%、92%、88%；两组不良反应比较无显著性差异(P均>0.05)。

结论血浆EBV DNA水
平的检测是监测放疗后鼻咽癌患者转移、复发的有效指标。

【关键词】鼻咽癌 EB病毒DNA 荧光定量PCR 血浆
Clinical significance of EBV-DNA in patients with Advanced nasopharyngeal carcinoma Mai Hui1 Ma Huimin 2 Yao Weiqiong3
1Department of Old cadres Division,2Department of Otolaryngology,3Department
of Inspection Center，Huizhou First People's Hospital，Huizhou Guangdong 516 000，China
【Abstract】Objective To investigate the clinical significance of quantitative analysis of EBV DNA in patients with Advanced nasopharyngeal carcinoma.Methods 80 cases with nasopharyngeal carcinoma were divided into observation group(n=40) and the control group(n=40),In the observation group,the patients were treated with paclitaxel
135mg/m2 and oxaliplatin 130mg/m2 by infusion on d1,and oral capecitabine 1650
mg/m2/d from d1 to d14.The treatment was repeated every three weeks for two to four cycles.In the control group,patients received similar cycle of treatment with
DDP20 mg/m2 and 5-Fu 0.5 g/m2 by infusion from d1 to 5.The efficacy was evaluated
at two to four weeks after the completion of chemotherapy.Blood samples were taken, and plasma EBV DNA was analyzed using Real-Time PCR technique.Results The median survival time of 10.6 months in observation group were significantly higher than the
8.6 months in control group(χ2=3.789,P<0.05);The rate of effect of 50%. in observation group were significantly higher than the 32.5% in control group(χ2= 3.845,
P<0.05);The positive rate of 65.0% in observation group with control
group(62.5%)were not significant difference(χ2=1.056,P>0.05);The EBV DNA Examination sensitivity,specificity and accuracy were 72.0%,92%,88%,respect-
tively;The adverse reactions in two groups showed no significant difference (P>0.05). Conclusion Plasma EBV DNA analysis is useful for surveillance of NPC following radiotherapy.
【Key words】Nasopharyngeal neoplasm EBV DNA Fluorescence quantitative
PCR plasma
鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国东南部地区一种高发的恶
性肿瘤，许多研究表明[1]，爱泼斯坦一巴尔病毒（Epstein-Barr virus，EBV）与鼻
咽癌密切相关。

多年来，对EB病毒的检测主要依据血清学方法，其敏感性和特
异性较差。

聚合酶链反应（PCR）技术是一项分子生物学技术，它可在短时间内
选择性扩增特定基因片段数百万倍以上，具有特异、敏感、快速及简便等优点[2]。

1 资料与方法
1.1临床病例收集本院住院治疗的晚期鼻咽癌病人80例(男43例，女37例)，入选标准为：①经病理或细胞学诊断为鼻咽癌患者；②辅助检查确诊有远处转
移病灶；初治或复发患者(患者年龄为27～67岁之间)；③Karnofs ky评分≥70,预
计生存期>3个月；④有客观肿瘤指标可评价疗效；⑤没有化疗禁忌症,可以进行
化疗治疗；⑥估计生存时间超过3个月。

80例患者分为观察组40例(男21例,女19例)，中位年龄46.1岁，中位体表
面积为1.67m2，中位Karnofsky评分80分；对照组40例(男22例，女18例)，
中位年龄48.5岁，中位体表面积为1.70m2，中位Karnofsky评分79分。

1.2治疗方法观察组40例确诊晚期鼻咽癌患者,第1天应用紫杉醇135mg/m2、草酸铂130 mg/m2静脉滴注,口服卡培他滨1650mg/m2/d,连服1～14d,每3周为一个周期,连用2～4个周期;对照组40例确诊晚期鼻咽癌患者,第1～5天应用DDP
20mg/m2、5-Fu 0.5 g/m2静脉注射,3周为一个周期,连用2～4个周期;治疗结束
2～4周后评价疗效。

1.3EBV DNA测定
1.3.1样本DNA提取所有患者取外周血2m,l加入EDTA抗凝管,离心后吸取血浆于-20℃冻存。

冻存的血浆置于4℃解冻,取50μlDNA提取液加入待测标本管中,DNA提取液购自中山大学达安基因股份有限公司,操作方法按试剂盒说明书进行。

1.3.2荧光定量PCR反应EB病毒核酸扩增荧光检测试剂盒购买自中山大学
达安基因股份有限公司,包括DNA提取液、临界阳性质控品、强阳性质控品、阳
性标准品(106copies/μl)、阴性质控品以及PCR反应管等。

结果判断以及质量控制
方法按厂家说明。

检测极限为5×102copies/μl，大于或等于该值为阳性。

1.4疗效及毒性评价依据WHO实体肿瘤疗效评价标准,分为完全缓解(CR),部
分缓解(PR),稳定(SD)和进展(PD),有效(RR)为CR+PR。

毒性作用按WHO急性及亚急
性毒性标准分为0(无)、Ⅰ(轻度)、Ⅱ(中度)、Ⅲ(重度)、Ⅳ(威胁患者生命)五级。

1.5统计学处理所有实验数据应用SPSS11.5统计软件包进行统计分析。

符合
正态分布的计量资料采用方差分析，非正态分布的计量资料采用秩和检验。

计数
资料的分析采用χ2检验。

2 结果
2.1 两组疗效比较观察组中位生存时间为10.6个月明显高于,对照组8.6个月(χ2=
3.789，P<0.05)；观察组有效率50.0%明显对照组32.5% (χ2=3.845，P<0.05)，
见表1。

表1 两组病例疗效比较【n,%】
组别 n 有效无效
观察组 40 20(50.0) 20(50.0)
对照组 40 13(32.5) 27(67.5)
2.2 两组血浆EBV-DNA阳性检出率比较观察组阳性率65.0%与对照组62.5%
比较，无显著性差异(χ2=1.056，P>0.05)，见表2。

表2 两组血浆EBV-DNA检出率比较
组别例数阳性例数阳性率(%)
观察组 40 26 65.0
对照组 40 2 5 62.5
2.3 不同肿瘤控制状态血浆EBV DNA中位拷贝数及检出率比较 80例随访患者中,共有20例(25%)确诊为肿瘤进展,其中肿瘤复发10例、转移10例。

复发患者与转移患者比较、肿瘤进展患者与临床缓解患者比较,阳性率和拷贝数差异均有显著性差异。

(采用χ2检验,和非参数秩和检验,P均=0.000)，见表3。

表3不同肿瘤控制状态血浆EBV DNA中位拷贝数及检出率比较
组别例数中位拷贝数(copies/ml) 阳性率(%)
临床缓解组 60 ≤检测极限 6
肿瘤进展组 20 3.5×104 75
复发组 10 4.3×103 58
转移组 10 4.4×105 90
2.4 血浆EBV DNA检查诊断鼻咽癌的敏感性、特异性、准确性分析 EBV DNA检查诊断鼻咽癌的敏感性、特异性、准确性分别为75%、92%，和88%。

2.5 不良反应观察组主要为手足综合征6例(15.0%)、骨髓抑制3例(7.5%)和消化道毒性3例(7.5%)；对照组主要为消化道毒性6例(15.0%)、骨髓抑制2例(5.0%)。

两组不良反应比较无显著性差异(P均>0.05)。

3 讨论
鼻咽癌是我国常见的头颈部恶性肿瘤,多数患者发现时已进入晚期,有资料显示[3],Ⅲ、Ⅳ期患者占总数的85%左右。

鼻咽癌95 %以上属于低分化癌, 恶性程度高,生长快, 易出现远处转移,远处转移占鼻咽癌的21.2%～41.8%。

卡培他滨可模拟5- Fu持续输注,经小肠吸收后,其作
用主要通过三重酶（TP酶）活化反应完成。

卡培他滨的主要副反应表现为皮肤色素沉着,手
足综合征,厌食,肢端感觉异常、麻木(神经毒性) 等,但停药后均可不同程度缓解, 胃肠道反应不重, 血液学毒性低,不会对日常生活造成大的影响。

相关的临床研究表明[4],卡培他滨在晚期鼻咽癌治疗中不仅有效,且方便、不良反应可以耐受,可避免放置中心静脉导管所致不良反应，
适合作为维持治疗药物。

鼻咽癌是一种与EBV感染密切相关的疾病,这已是一个无可争议的事实。

较多的文献报道了肿瘤患者的血浆中可以检测到肿瘤源性DNA[5]。

采用荧光定量PCR 技术检测鼻咽癌患者血浆EBV-DNA 时发现,不但鼻咽癌患者血浆EBV-DNA 阳性率明显高于正常人群,且其DNA 的拷贝数也明显要高。

并在其随后的研究中又证实,在肿瘤复发的鼻咽癌患者中, EBVDNA 检测的阳性率及其水平都明显高于临床缓解期患者，与传统的PCR 技术相比,荧光定量PCR 不需扩增后处理,具有快速、准确、不容易被污染的特点, 能让我们更好的了解EBV DNA 水平与鼻咽癌的关系,提供了非常可信的手段[6]。

我们的研究表明,放疗后复发和(或)转移患者的EBV DNA阳性率和拷贝数均显著高于肿瘤持续缓解者。

另外我们发现,EBV DNA检测诊断鼻咽癌放疗后肿瘤进展的敏感性为75%,特异性为88%,说明单纯采用该方法漏诊率较高但误诊率较低,联合其它检查方法综合判断有助于降低漏诊率。

总之,我们认为,检测鼻咽癌放疗后患者血浆EBV DNA是监测肿瘤进展的有效方法。

参考文献
[1]谭洁媚,黄河,陈丽昆,等.紫杉醇联合草酸铂、卡培他滨三药方案治疗晚期转移性鼻咽癌的临床研究.热带医学杂志,2008,8(6):556-558.
[2]牛松涛,苏亚丽,周希山.多西紫杉醇联合卡培他滨治疗晚期鼻咽癌的临床观察.肿瘤基础与临床,2009, 22(1):45-46.
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[4]李宇红,邵建永,赵美卿,等. EBV DNA定量分析在监测鼻咽癌转移和复发中的临床意义.癌症, 2003, 22(6): 645-646.
[5]陈向军,余滋中,李国义.血浆EB病毒DNA含量定量检测对鼻咽癌的诊断.中国现代医
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[6]龚晓昌,李金高,袁霞,等.血浆EBV DNA水平测定在监测鼻咽癌放疗后复发、转移中的临床意义.实用癌症杂志,2007,22(2):150-152.。