尿蛋白电泳及尿本周蛋白检测在肾病中的应用
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血清蛋白电泳及免疫固定电泳 在免疫球蛋白疾病检测中的意义
尿蛋白电泳及尿本周蛋白检测在肾病中的应用
蛋白电泳
电泳技术由于操作方便, 成本低廉, 目前已成为许多实验室进行体液(血 清, 尿液, 脑脊液…)分离、分析的常规方法之一
蛋白电泳是一项用途广泛的检测技术, 可用于多种疾病的检测 (肝硬化, 肾病综合症, 多发性硬化症, 血红蛋白病, 单克隆免疫球蛋白疾病…）
毛细管血清蛋白电泳图谱
a-1 acid glycoprotein a-1 antitrypsin Haptoglobin a-2 macroglobulin
Gammaglobulins C3 complement Transferrin
Hemopexin
血清蛋白电泳可以帮我们解决如下问题
结合其他检测结果, 可以确认炎症、 肝炎、 肝硬化、 肾病等疾病
• 其他需要参考的因素
整体上判断图谱变化 查看血清的颜色和状态 （ 溶血? 凝集? 浑浊?
沉淀？) 总蛋白浓度 患者年龄: 45岁以上人群易出现M蛋白疾病 其他临床信息: 是否有骨痛、 体重降低、 贫血、
血液沉降速度增加、高血钙? 峰值测量和跟踪
如果血清蛋白电泳结果出现下列异常
目前, 尚没有一种方法可以取代电泳技术用于检测多发性骨髓瘤中出现的 单克隆免疫球蛋白(M蛋白)
Capillary electrophoresis
Agarose gel electrophoresis
血清蛋白电泳(SPE)是 多发性骨髓瘤样品中 单克隆免疫球蛋白的 唯一检测方法
使用范围和检测原理
IgG Lambda型M蛋白
Monoclonal IgA Lambda in alpha 2
IgA Lambda型M蛋白
双克隆M蛋白:2组M蛋白
IF
IgG kappa + IgA kappa型M蛋白 IgM kappa + IgM lambda型M蛋 白
寡克隆免疫球蛋白电泳图谱
IF
Ig G型寡克隆电泳图谱
β
Split β- β bridge
+
急性炎症电泳图谱
A1AT HPT ORO
Alb a1 a2 b1 b2
慢性炎症电泳图谱
A1AT
HPT
Increase of polyclonal Ig A
ORO
in beta 2 and G in gamma
症状
出血症 骨痛,骨损伤 反复易感染 贫血 频繁出现无法解释的骨折
多发性骨髓瘤的并发症
易感染: 当某一种Ig异常升高时，会抑制其他类型免疫去蛋白的合成 骨损伤: 骨痛, 骨折 肾功不全 神经症状 (脊髓压迫) 贫血 血小板减少
这种疾病会持续发展，必须及早治疗，否则只能存活 3 - 4年。
对出现临床症状的疑似骨髓瘤患者进行电泳检测单 克隆免疫球蛋白
可以检出早期无症状骨髓瘤患者
对骨髓瘤疾病进行随访, 监测疗效
多种疾病的筛查
急性炎症 慢性炎症 高Ig症
肝病、肝硬化
肾病综合症 蛋白流失,营养不良
自身免疫病 抗胰蛋白酶缺乏 低免疫球蛋白血症 溶血
TP, g/dL
Alb
α-1
α-2
出现的单克隆M蛋白
正常免疫球蛋白 的电泳结果图谱 Normal Proteinogram
单克隆免疫球蛋 白的电泳图谱
Proteinogram showing Monoclonal peak
多发性骨髓瘤
人群分布:
多发性骨髓瘤仅次于白血病, 是目前发病率排第二位 的恶性血液肿瘤
占所有肿瘤的1% (每年超过15 000人死于该疾病) 欧洲目前有60 000患者, 世界范围有250 000 因浆细胞过度增殖,继而影响骨髓
M蛋白出现在Alpha 2 ?
Alb a1 a2 b1 b2
Alpha 2> 参考值, 同时排除炎症的情况下, 建议做免疫分型或免疫固定电泳
单克隆M蛋白定量的两 种方法
Mode ‘’from the top to the
bottom ’’
对患者的M蛋白随访过程 只能使用其中一种方法， 并坚持使用
(12个月内多于2次）
骨髓瘤的诊断标准
国际骨髓瘤基金会
无症状型骨髓瘤
血清 M蛋白浓度 介于 15 - 30 g/L 骨髓浆细胞 > 10% 无骨髓瘤有关的器官或组织受损
意义未明M蛋白疾病 （MGUS）
M蛋白<15g/L, 相对稳定,未出现明显增加 骨髓浆细胞 <10% 无骨髓瘤相关的组织或器官损伤 没有其它B细胞淋巴组织增生性疾病或轻链相关的淀粉样变性的证据
检测意义重大。 用毛细管技术， 成本低, 完全自动化
在法国血清蛋白电泳指导原则
医生开化验单
• 如果怀疑出现骨髓瘤症状 （易疲劳, 体重下降, 贫血,骨痛, 年龄45岁以上, 血沉速度加快, 总蛋白升高…)
低免疫球蛋白血症
如果血清中未见异常,建议 做尿本周氏蛋白检测
原因: 先天免疫缺陷, 免疫抑制治疗过程中, 游离轻链病)
通过对血清蛋白电泳结果中出现的单克隆免疫球蛋白检测, 对免疫球蛋白疾病进行诊断
有症状型性免疫球蛋白疾病: - 多发性骨髓瘤 - 巨球蛋白血症 - 非霍奇金淋巴瘤 - 慢性淋巴细胞白血病 - 重链病 - 淀粉样病变
• 在Gamma区出现明显条带 • 在Alpha2 或Beta区带出现多余条带 • beta条带含量出现单一升高
需要进行完整的血清蛋白 免疫分型（IT）检测
用传统的免疫固定(IF)电泳方法鉴定M蛋白
1) 加样: 同一样品重复加样6次
For serum with 5g/l< [total Ig]<20g/l 1/6 for G track, 20 µl of serum + 100 µL of diluent (provided into the kit) 1/3 for ELP, A, M, K and L tracks, 30 µL of serum + 60 µL of diluent
及早诊断，及早治疗。
骨髓瘤的诊断标准
国际骨髓瘤基金会
有症状型多发性骨髓瘤:
血中或尿液中出现>30g/L的M蛋白
骨髓浆细胞 >10%
骨髓瘤相关的其他器官或组织损伤:
• 血钙浓度增加 > 2.75 mmol/l • 肾损伤 （肌酐浓度 ~ 或 > 20 mg/L） • 贫血: Hb< 100 g/L • 骨病变（溶病变或严重骨质疏松压缩性骨折） • 其他症状: 高血粘度、淀粉样病变、复发性细菌感染
2) 电泳: 高达42 v.h （大约9分钟)
3) 电泳结束后, 加不同类型抗血清:
Track ELP: fixative solution Track G: antiserum anti IgG heavy chain Track A: antiserum anti IgA heavy chain Track M: antiserum anti IgM heavy chain Track K: antiserum anti kappa light chain Track L: antiserum anti lambda light chain incubation time
3• 特异的白细胞 (lymphocytes B) 转化为浆 细胞
4• 浆细胞 合成抗体蛋白,即免疫球蛋白.
Immunoglobulin
5• 免疫球蛋白 在免疫系统中被用来识别和消 灭如细菌或病毒等外源物
正常浆细胞
正常免疫球蛋白的合成 骨髓瘤或其他恶性浆细胞增生
Normal Immunoglobulin
单克隆M蛋白的电泳位置
常见于Gamma球蛋白区域 少数情况下也会出现在其他区域
(Beta1,Beta2 和 Alpha区域)
高浓度的M蛋白
需要做血清免疫固定 (IF) 对M蛋白进行 鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
Alb a1 a2 b1 b2
出现微量的M蛋白
需要做血清免疫固定 (IF) 对M蛋白进行 鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
Alb a1 a2 b1 b2 g
肾病综合症电泳图谱
Hypoalbuminemia
lipoproteins
a2 macroglobulin
Hypogamma
Alb a1 a2 b1 b2 总蛋白浓度出现明显下降,低于60g/L
肝硬化, Beta-gamma桥
Polyclonal increase of Ig A in beta 2 and Ig G in gamma
Mode ‘’from valley to valley’’
M蛋白定量的意义
对M蛋白的定量, 可 以判断患者治疗后的
疗效
药物疗效观察
• 部分缓解（PR): 治疗后 M蛋白峰降低50% • 很好的部分缓解（VGPR):治疗后M蛋白峰降低90% • 完全缓解（CR): 治疗后M蛋白峰消失，免疫固定结果为阴性 • 特效完全缓解（sCR): 治疗后M蛋白完全消失且长时间监控均为阴性)
• 电泳技术就是利用在电场的 作用下, 由于待分离样品中 各种分子带电性质以及分子 本身大小, 形状等性质的差 异, 使带电分子产生不同的 迁移速度, 从而对样品进行 分离, 鉴定或提纯的技术.
• 在生化检测中, 主要用于分 离各类蛋白分子.
正常的电泳图谱
经过毛细管电泳后, 血清蛋白将会被分离成6个条带并同时标注出检测结果
使用常规琼脂糖凝胶电泳方法检测M蛋白
Polyclonal Igs (正常免疫球蛋白)
Monoclonal Ig (单克隆免疫球蛋白的 异常条带)
Polyclonal Igs
Monoclonal Ig (M蛋白)
使用最新的毛细管电泳方法检测M蛋白
(正常血清蛋白电泳图谱)
(出现M蛋白的血清蛋白电泳图谱)
Alb a1 a2 b1 b2
M蛋白出现在Beta1区带
需要做血清免疫固定 (IF) 对M蛋白进行 鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
Alb a1 a2 b1 b2
M蛋白出现在Beta2区带
Alb a1 a2 b1 b2
Beta2 > beta区带, 同时排除炎症或肝病的情况下, 建议做免疫分型或免疫固定电泳
无症状型免疫球蛋白疾病: - 无症状型骨髓瘤 - 意义未明单克隆免疫球蛋白疾病（MGUS)
多发性骨髓瘤和单克隆免疫球蛋白
1• 骨髓 存在于多种骨组织(脊髓,颅骨,盆骨, 肋骨) Plasmocyte
2 • 骨髓主要分化为3类细胞: - 红细胞 : 通过血液循环系统为人体提供氧气 - 白细胞 : 参与人体免疫功能 - 血小板 : 参与血凝
寡克隆免疫球蛋白异常的电泳图谱
需要做血清免疫分型（IT） 或免疫固定 (IF) 对M蛋白进 行鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
临床实例
In conclusion 小结
• 查看电泳结果的每个区带的含量变化和异常条带出现情况
* 区带含量升高 * 区带含量下降 * 出现异常条带或条带形状异常 (某个条带变形）
4) 吸出多余的抗血清, 烘干胶片 5) 清洗胶片, 染色
灵敏度：可达125mg/L，取决于多克隆的背景
ห้องสมุดไป่ตู้
= 出现在gamma区带的M蛋白
IF
出现在gamma区带的IgM L型M蛋 白
出现在gamma区带的IgG K型M蛋白
单克隆M蛋白出现在Alpha2-Beta区带
Monoclonal IgG Lambda between alpha 2 and beta
因此, 对M蛋白的定量非常重要
寡克隆免疫球蛋白
寡克隆免疫球蛋白异常: 出现多个微量的M蛋白电泳条 带. 主要是由于免疫球蛋白的亚型的合成调控异常或受 外界刺激. 寡克隆免疫球蛋白异常不属于恶性疾病
该异常可见于 :
- 自身免疫病 （类风湿关节炎，干燥综合症，红斑狼疮等) - 病毒、细菌和寄生虫引起的感染 - H.I.V. - 病毒C 或 B型肝炎 - 巨细胞病毒感染 - 与移植相关的自身免疫反应 或患者正处于免疫抑制治疗
Ig G型寡克隆电泳图谱
In conclusion 总结
应用Sebia技术进行血清蛋白电泳(SPE)和免疫分型(IT) 检测的意义
可以对多种异常疾病进行诊断，如 炎症, 肝硬化, 肾病综合 症, M蛋白血症
同时做SPE和IT，可以对M蛋白进行定量鉴定, 可以监控 M蛋白血症治疗
同时做SPE和IT，可以对早期的无症状骨髓瘤和意义未明 M蛋白血症进行早期检测和随访，及时掌握患者病情变化
尿蛋白电泳及尿本周蛋白检测在肾病中的应用
蛋白电泳
电泳技术由于操作方便, 成本低廉, 目前已成为许多实验室进行体液(血 清, 尿液, 脑脊液…)分离、分析的常规方法之一
蛋白电泳是一项用途广泛的检测技术, 可用于多种疾病的检测 (肝硬化, 肾病综合症, 多发性硬化症, 血红蛋白病, 单克隆免疫球蛋白疾病…）
毛细管血清蛋白电泳图谱
a-1 acid glycoprotein a-1 antitrypsin Haptoglobin a-2 macroglobulin
Gammaglobulins C3 complement Transferrin
Hemopexin
血清蛋白电泳可以帮我们解决如下问题
结合其他检测结果, 可以确认炎症、 肝炎、 肝硬化、 肾病等疾病
• 其他需要参考的因素
整体上判断图谱变化 查看血清的颜色和状态 （ 溶血? 凝集? 浑浊?
沉淀？) 总蛋白浓度 患者年龄: 45岁以上人群易出现M蛋白疾病 其他临床信息: 是否有骨痛、 体重降低、 贫血、
血液沉降速度增加、高血钙? 峰值测量和跟踪
如果血清蛋白电泳结果出现下列异常
目前, 尚没有一种方法可以取代电泳技术用于检测多发性骨髓瘤中出现的 单克隆免疫球蛋白(M蛋白)
Capillary electrophoresis
Agarose gel electrophoresis
血清蛋白电泳(SPE)是 多发性骨髓瘤样品中 单克隆免疫球蛋白的 唯一检测方法
使用范围和检测原理
IgG Lambda型M蛋白
Monoclonal IgA Lambda in alpha 2
IgA Lambda型M蛋白
双克隆M蛋白:2组M蛋白
IF
IgG kappa + IgA kappa型M蛋白 IgM kappa + IgM lambda型M蛋 白
寡克隆免疫球蛋白电泳图谱
IF
Ig G型寡克隆电泳图谱
β
Split β- β bridge
+
急性炎症电泳图谱
A1AT HPT ORO
Alb a1 a2 b1 b2
慢性炎症电泳图谱
A1AT
HPT
Increase of polyclonal Ig A
ORO
in beta 2 and G in gamma
症状
出血症 骨痛,骨损伤 反复易感染 贫血 频繁出现无法解释的骨折
多发性骨髓瘤的并发症
易感染: 当某一种Ig异常升高时，会抑制其他类型免疫去蛋白的合成 骨损伤: 骨痛, 骨折 肾功不全 神经症状 (脊髓压迫) 贫血 血小板减少
这种疾病会持续发展，必须及早治疗，否则只能存活 3 - 4年。
对出现临床症状的疑似骨髓瘤患者进行电泳检测单 克隆免疫球蛋白
可以检出早期无症状骨髓瘤患者
对骨髓瘤疾病进行随访, 监测疗效
多种疾病的筛查
急性炎症 慢性炎症 高Ig症
肝病、肝硬化
肾病综合症 蛋白流失,营养不良
自身免疫病 抗胰蛋白酶缺乏 低免疫球蛋白血症 溶血
TP, g/dL
Alb
α-1
α-2
出现的单克隆M蛋白
正常免疫球蛋白 的电泳结果图谱 Normal Proteinogram
单克隆免疫球蛋 白的电泳图谱
Proteinogram showing Monoclonal peak
多发性骨髓瘤
人群分布:
多发性骨髓瘤仅次于白血病, 是目前发病率排第二位 的恶性血液肿瘤
占所有肿瘤的1% (每年超过15 000人死于该疾病) 欧洲目前有60 000患者, 世界范围有250 000 因浆细胞过度增殖,继而影响骨髓
M蛋白出现在Alpha 2 ?
Alb a1 a2 b1 b2
Alpha 2> 参考值, 同时排除炎症的情况下, 建议做免疫分型或免疫固定电泳
单克隆M蛋白定量的两 种方法
Mode ‘’from the top to the
bottom ’’
对患者的M蛋白随访过程 只能使用其中一种方法， 并坚持使用
(12个月内多于2次）
骨髓瘤的诊断标准
国际骨髓瘤基金会
无症状型骨髓瘤
血清 M蛋白浓度 介于 15 - 30 g/L 骨髓浆细胞 > 10% 无骨髓瘤有关的器官或组织受损
意义未明M蛋白疾病 （MGUS）
M蛋白<15g/L, 相对稳定,未出现明显增加 骨髓浆细胞 <10% 无骨髓瘤相关的组织或器官损伤 没有其它B细胞淋巴组织增生性疾病或轻链相关的淀粉样变性的证据
检测意义重大。 用毛细管技术， 成本低, 完全自动化
在法国血清蛋白电泳指导原则
医生开化验单
• 如果怀疑出现骨髓瘤症状 （易疲劳, 体重下降, 贫血,骨痛, 年龄45岁以上, 血沉速度加快, 总蛋白升高…)
低免疫球蛋白血症
如果血清中未见异常,建议 做尿本周氏蛋白检测
原因: 先天免疫缺陷, 免疫抑制治疗过程中, 游离轻链病)
通过对血清蛋白电泳结果中出现的单克隆免疫球蛋白检测, 对免疫球蛋白疾病进行诊断
有症状型性免疫球蛋白疾病: - 多发性骨髓瘤 - 巨球蛋白血症 - 非霍奇金淋巴瘤 - 慢性淋巴细胞白血病 - 重链病 - 淀粉样病变
• 在Gamma区出现明显条带 • 在Alpha2 或Beta区带出现多余条带 • beta条带含量出现单一升高
需要进行完整的血清蛋白 免疫分型（IT）检测
用传统的免疫固定(IF)电泳方法鉴定M蛋白
1) 加样: 同一样品重复加样6次
For serum with 5g/l< [total Ig]<20g/l 1/6 for G track, 20 µl of serum + 100 µL of diluent (provided into the kit) 1/3 for ELP, A, M, K and L tracks, 30 µL of serum + 60 µL of diluent
及早诊断，及早治疗。
骨髓瘤的诊断标准
国际骨髓瘤基金会
有症状型多发性骨髓瘤:
血中或尿液中出现>30g/L的M蛋白
骨髓浆细胞 >10%
骨髓瘤相关的其他器官或组织损伤:
• 血钙浓度增加 > 2.75 mmol/l • 肾损伤 （肌酐浓度 ~ 或 > 20 mg/L） • 贫血: Hb< 100 g/L • 骨病变（溶病变或严重骨质疏松压缩性骨折） • 其他症状: 高血粘度、淀粉样病变、复发性细菌感染
2) 电泳: 高达42 v.h （大约9分钟)
3) 电泳结束后, 加不同类型抗血清:
Track ELP: fixative solution Track G: antiserum anti IgG heavy chain Track A: antiserum anti IgA heavy chain Track M: antiserum anti IgM heavy chain Track K: antiserum anti kappa light chain Track L: antiserum anti lambda light chain incubation time
3• 特异的白细胞 (lymphocytes B) 转化为浆 细胞
4• 浆细胞 合成抗体蛋白,即免疫球蛋白.
Immunoglobulin
5• 免疫球蛋白 在免疫系统中被用来识别和消 灭如细菌或病毒等外源物
正常浆细胞
正常免疫球蛋白的合成 骨髓瘤或其他恶性浆细胞增生
Normal Immunoglobulin
单克隆M蛋白的电泳位置
常见于Gamma球蛋白区域 少数情况下也会出现在其他区域
(Beta1,Beta2 和 Alpha区域)
高浓度的M蛋白
需要做血清免疫固定 (IF) 对M蛋白进行 鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
Alb a1 a2 b1 b2
出现微量的M蛋白
需要做血清免疫固定 (IF) 对M蛋白进行 鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
Alb a1 a2 b1 b2 g
肾病综合症电泳图谱
Hypoalbuminemia
lipoproteins
a2 macroglobulin
Hypogamma
Alb a1 a2 b1 b2 总蛋白浓度出现明显下降,低于60g/L
肝硬化, Beta-gamma桥
Polyclonal increase of Ig A in beta 2 and Ig G in gamma
Mode ‘’from valley to valley’’
M蛋白定量的意义
对M蛋白的定量, 可 以判断患者治疗后的
疗效
药物疗效观察
• 部分缓解（PR): 治疗后 M蛋白峰降低50% • 很好的部分缓解（VGPR):治疗后M蛋白峰降低90% • 完全缓解（CR): 治疗后M蛋白峰消失，免疫固定结果为阴性 • 特效完全缓解（sCR): 治疗后M蛋白完全消失且长时间监控均为阴性)
• 电泳技术就是利用在电场的 作用下, 由于待分离样品中 各种分子带电性质以及分子 本身大小, 形状等性质的差 异, 使带电分子产生不同的 迁移速度, 从而对样品进行 分离, 鉴定或提纯的技术.
• 在生化检测中, 主要用于分 离各类蛋白分子.
正常的电泳图谱
经过毛细管电泳后, 血清蛋白将会被分离成6个条带并同时标注出检测结果
使用常规琼脂糖凝胶电泳方法检测M蛋白
Polyclonal Igs (正常免疫球蛋白)
Monoclonal Ig (单克隆免疫球蛋白的 异常条带)
Polyclonal Igs
Monoclonal Ig (M蛋白)
使用最新的毛细管电泳方法检测M蛋白
(正常血清蛋白电泳图谱)
(出现M蛋白的血清蛋白电泳图谱)
Alb a1 a2 b1 b2
M蛋白出现在Beta1区带
需要做血清免疫固定 (IF) 对M蛋白进行 鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
Alb a1 a2 b1 b2
M蛋白出现在Beta2区带
Alb a1 a2 b1 b2
Beta2 > beta区带, 同时排除炎症或肝病的情况下, 建议做免疫分型或免疫固定电泳
无症状型免疫球蛋白疾病: - 无症状型骨髓瘤 - 意义未明单克隆免疫球蛋白疾病（MGUS)
多发性骨髓瘤和单克隆免疫球蛋白
1• 骨髓 存在于多种骨组织(脊髓,颅骨,盆骨, 肋骨) Plasmocyte
2 • 骨髓主要分化为3类细胞: - 红细胞 : 通过血液循环系统为人体提供氧气 - 白细胞 : 参与人体免疫功能 - 血小板 : 参与血凝
寡克隆免疫球蛋白异常的电泳图谱
需要做血清免疫分型（IT） 或免疫固定 (IF) 对M蛋白进 行鉴定 (尿样做本周氏蛋白检测)
临床实例
In conclusion 小结
• 查看电泳结果的每个区带的含量变化和异常条带出现情况
* 区带含量升高 * 区带含量下降 * 出现异常条带或条带形状异常 (某个条带变形）
4) 吸出多余的抗血清, 烘干胶片 5) 清洗胶片, 染色
灵敏度：可达125mg/L，取决于多克隆的背景
ห้องสมุดไป่ตู้
= 出现在gamma区带的M蛋白
IF
出现在gamma区带的IgM L型M蛋 白
出现在gamma区带的IgG K型M蛋白
单克隆M蛋白出现在Alpha2-Beta区带
Monoclonal IgG Lambda between alpha 2 and beta
因此, 对M蛋白的定量非常重要
寡克隆免疫球蛋白
寡克隆免疫球蛋白异常: 出现多个微量的M蛋白电泳条 带. 主要是由于免疫球蛋白的亚型的合成调控异常或受 外界刺激. 寡克隆免疫球蛋白异常不属于恶性疾病
该异常可见于 :
- 自身免疫病 （类风湿关节炎，干燥综合症，红斑狼疮等) - 病毒、细菌和寄生虫引起的感染 - H.I.V. - 病毒C 或 B型肝炎 - 巨细胞病毒感染 - 与移植相关的自身免疫反应 或患者正处于免疫抑制治疗
Ig G型寡克隆电泳图谱
In conclusion 总结
应用Sebia技术进行血清蛋白电泳(SPE)和免疫分型(IT) 检测的意义
可以对多种异常疾病进行诊断，如 炎症, 肝硬化, 肾病综合 症, M蛋白血症
同时做SPE和IT，可以对M蛋白进行定量鉴定, 可以监控 M蛋白血症治疗
同时做SPE和IT，可以对早期的无症状骨髓瘤和意义未明 M蛋白血症进行早期检测和随访，及时掌握患者病情变化