血、尿液尿素氮(BUN)测定作业指导书

血、尿液尿素氮（BUN）测定作业指导书
1.实验原理
Vitros BUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。

水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。

半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。

经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。

测定方式：比色法
波长：670nm
测试时间和温度：37℃约５分钟
反应过程：
尿素酶
非蛋白质成份＋水—————→氨+ 二氧化碳
氨＋氨指示剂—————→呈色剂
2. 标本：
2.1 病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。

定时收集的，稀释后的尿样。

2.3 标本采集与处理：
2.3.1 血清和血浆样品
特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。

样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。

处理样品时要将其当成生物污染品。

2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。

测试前将1份样品加20 份试剂级别的水进行稀释。

将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。

冷藏的样品不能立即测试。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷冻保存可长达6个月。

尿液样品在测试前要冷藏。

4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。

6. 试验材料：
6.1测试BUN所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA
稀释液。

xx厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份有尿素酶和氨指示剂。

其它成份有染色物质，粘合剂，缓冲剂，稳定剂，表面活性剂，螯合剂及交叉连接剂。

干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

6.1.2 试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。

因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。

去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中。

在试剂盒达到室温后24小时内必须将其装入仪器中。

6.1.3 试剂稳定性与贮存
未开封的干片盒：存储在2～8℃或低于该范围。

在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过2周，否则要更换新试剂。

当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。

出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。

如果储藏正确，Vitros GLU干片可保质到包装盒上标明的有效期限。

参见VITROS 250干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件。

6.1.4 变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。

6.1.5 注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。

6.2 校准品：用Vitros化学定标物Kit 1。

血清，尿液和脑脊液都用相同的定标液，不过各自的SAVs值不同。

有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：使用Vitros 特制的质控物品；CSF质控检测用Vitros液体质控。

若使用其它的一些质控物品，当与别的GLU测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。

有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：美国xx厂家VITROS250全自动干式生化分析仪。

具体测试程序请参阅操作手册的介绍。

8. 操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。

具体测试程序请参阅VITROS250操作手册.SOP。

具体定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。

何时进行定标：——在维护和保养时更换了仪器的重要部件。

——质控结果持续超出线性
范围内时，详情参阅操作手册。

——管理条例上指定的时间，在美国，CLIA要求至少每6个月定标一次。

9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。

有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测（IQCT）的内容。

在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以用Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。

12. 参考值范围国际单位(mmol/L)
血清/血浆男性 3.2-7.1
女性 2.5-6.1
尿液24h尿样428-714mmol/day**
此参考范围是测试3160位健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：人体内氮排泄的主要途经是经肝脏合成尿素氮，进入血液后最终由肾脏排出体外，因此当发生肾小球肾炎，休克，尿道阻塞，肾盂肾炎和其它原因引起的急慢性肾病时会导致血清尿素氮浓度升高。

严重充血性心脏病，营养过度，糖尿病型酮酸中毒，脱水和胃肠道出血也会使尿素氮升高。

而怀孕时蛋白质摄入减少以及急性肝炎进行静脉滴注会导致尿素氮下降。

14. 操作性能
14.1 线性范围血清0.71-42.83mmol/L；尿液:：14.91－899.43（乘以稀释倍数21倍的结果）。

14.2 精密度：在Vitros 250生化仪上用质控液来测精密度。

结果反映了该方法的精密度。

当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。

果进行统计计算。

**室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。

14.3 方法学比较：
用Vitros700仪器和尿素酶/GLDH参考方法分别测试相同血清样品，对比结果显示Vitros方法的准确度良好。

用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=1.00X+0.18（r=0.999，N=85，检测范围0.8-41.7mmol/L）；尿液：Y=0.99X+7.14（r=0.999，N=88，检测范围
47.9-440.3mmol/L）。

14.4 灵敏度：试剂检测下限为血清0.71mmol/L，尿液为14.91mmol/L。

14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros BUN/UREA干片法均无干扰（偏差<1.1mg/dL，0.39mmol/L）。

维生素C3mg/dL、胆红素20mg/dL、葡聚糖1000mg/dL、乙醇300mg/dL、泛影钠500mg/dL、眠尔宁（安定药）2 mg/dL、乐疾宁（抗肿瘤药）1.5mg/dL、苯妥因2mg/dL、磺胺噻唑6mg/dL、甲糖宁22mg/dL、总蛋白10g/dL、甘油三酯800mg/dL。

14.6 病人结果可报告范围：血清0.71-42.83mmol/L；尿液:：14.91－899.43（乘以稀释倍数21倍的结果）。

15. 超出范围结果处理：本法线性上限为血清0.71mmol/L，尿液为14.91mmol/L。

如果样品中BUN浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤稀释：血清或血浆用Vitros 7%BSA 稀释。

尿液用生理盐水。

重新测试。

将测试结果乘稀释倍数，就得到原样品BUN的浓度。

16. 病危报警值的处理当尿素氮测定值>36mmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。

17. 方法局限性
17.1本法线性上限血清0.71mmol/L，尿液为14.91mmol/L。

如果样品中BUN浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用Vitros 7%BSA稀释。

尿液用生理盐水。

重新测试。

将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中GLU的浓度。

17.2干扰物质：铵离子会使样品中尿素氮的测定结果升高。

我们对Vitros BUN/UREA方法的干扰物质进行了筛查，以下物质在表中所示浓度会引起一定的偏差。

当血红蛋白为500mg/L,BUN浓度为10mmol/L时可产生+0.4mmol/L的干扰。

有些药物和患者的自身状况也会影响BUN的测试值。

18. 补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，用OLYMPUS
AU1000生化分析仪测定病人标本。

19. 参考文献xx厂家提供的方法学手册
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。