食用菌母种制作实验一

实验一食用菌母种制作

一、目的要求：

1、了解母种培养基制作过程,理解灭菌原理；

2、掌握母种培养基的制备方法；

3、了解无菌操作基本原理,掌握母种的无菌接种培养方法.

4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；

5、熟练分离出栽培用菌种.

二、主要仪器设备及药品材料：

灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管18x180mm、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体.

三、实验步骤与方法:

①培养基的制作

1 PDA培养基配方

马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.

2. 母种培养基的配制

1熬制.马铃薯洗净,挖芽去皮.称取200克,切成玉米大小颗粒或薄片.量筒量取1000毫升水,铝锅中煮沸后记时30分钟.四层纱布过滤于量杯中.滤液倒入锅中文火加热,加

入葡萄糖和琼脂,不断搅拌,直到琼脂溶化.补足水量至1000毫升.

2分装试管.将熬制的培养基用小漏斗趁热分装.培养基高度为试管长度的1/5左右,注意避免培养基沾于试管口外.分装完成后,盖紧硅胶塞.

3捆把.7支试管为一捆,用牛皮纸包裹试管口,用捆扎绳扎紧.贴上标签,准备灭菌.

4灭菌.注意加足水量和排气,灭菌完成后降压不能太快.

5摆斜面,培养基长度约为试管长度的1/2.斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布,防止试管内产生过多的冷凝水.

①菌种分离与培养

1种菇选择.选取无杂菌感染,无病虫害,出菇均匀,适应性强的子实体,要求个体健壮,朵大肉厚,外形规整,出菇早,约七八成熟的新鲜子实体.子实体采收后切去大部分菌柄,放入干净器皿内备用.

2母种分离组织分离法.在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒,在超净工作台内将子实体撕开,用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块绿豆大小移至试管斜面培养基的适当位置,迅速塞上硅胶塞.将分离的试管放在室内避光培养7-8天,检查菌丝生长情况.

四、实验结果

每人制作平菇母种一支.记录母种菌丝的生长情况.

五、作业

1.食用菌菌种分离有哪些方法实际生产中最常用的方法是哪一种该方法有何优点

2.组织分离法制作母种成功的关键是什么在操作中如何避免母种制作失败

实验二食用及药用菌原种制作技术目的要求：

1、了解原种培养基的配制原理及过程；

2、掌握玉米粒原种的制作方法.

重点与难点:

重点: 母种培养基制作过程; 无菌操作; 食用菌组织分离法制作菌种.

难点: 食用菌组织分离法制作菌种.

教学方法与手段:

本次课主要采取讲授法和讨论法,在学生实验过程中辅以个别指导进行教学.

实验内容:

1、按比例计算、称取各组分；

2、添加、混合均匀各组分；

3、培养料水分、pH调节、装袋；

4、原种培养基灭菌；

5、转接、培养原种.

6、原种质量检查

主要仪器设备药品材料：

灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种.

实验步骤

一．原种培养基的制备

1.选定配方.玉米97%,碳酸钙2%,石膏粉1%,.

2.培养基配制.选择无病虫害的的玉米粒,用清水冲洗

干净,浸泡40小时左右.加水超过玉米粒表面,煮

开锅后,小火再煮5-30分钟,使玉米粒充分煮透胀

而不破,切开后无白心.用清水冲洗冷却,淋去谷粒

表面水份.加入碳酸钙和石膏粉,充分搅拌均匀备

用.

3.装瓶封口.将配制好的培养基装入原种瓶中.将玉米

粒培养基装至低于瓶肩处.做到培养基均匀一致,

松紧适度,料面平整,擦净瓶口内外壁.塞上棉塞,

外面用一层牛皮纸包好.

4.灭菌.分装好的原种瓶在当天灭菌,避免培养基发霉

变质.采用高压蒸汽灭菌.灭菌压力.灭菌时间为小

时.冷却至30℃以下待用.

二．接种

1.超净工作台消毒灭菌.将灭菌后的原种瓶及接种用

的所有用具酒精灯,接种铲等放入接种场所,进行

消毒灭菌.

2.接种.将平菇母种试管外壁表面消毒后放入超净工

作台中.点燃酒精灯,用酒精棉球再次对试管外壁

表面消毒,特别是管口处,去下棉塞后,试管口在火

焰上烤一下,然后用经火焰灭菌并已冰凉的接种铲

将母种斜面分成4-6份,将其固定在接种架上,注

意管口始终在酒精灯火焰形成的无菌区内管口离

火焰1-2厘米.然后左手持原种瓶,右手取下棉塞,

瓶口在火焰上烤一下,用接种铲取一份母种迅速准

确的放入料瓶内的接种穴处,棉塞过火后塞好,包

上包头纸.如此反复,每支母种可扩接原种4-6瓶.

三．培养.

将接种后的原种瓶放入消毒过的培养室培养,培养温

度为25℃.定期检查杂菌发生情况,从培养3-5天开

始每天检查一次,当菌丝封住料面并向下深入1-2厘

米时,可改为每周检查一次,发现污染的瓶立即淘汰,

并隔离污染源.

四．原种质量检查

无论麦粒原种还是棉籽壳原种,接种后在25℃左右培

养20-40天,菌种即可长满瓶.品质优良的原种,菌丝

洁白、纯净、有食用菌特有的香味.若出现黄、绿、

黑等颜色的毛状物或菌瓶内有酸臭味道.不能使用,

应将其灭菌后远离培养场地处深埋.

作业

1.食用菌原种培养基主要有哪些

2.制作原种过程中应该注意哪些问题